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1.
应用Bolton-Hunter法标记重组人粒-巨集落刺激因子(rhGM-CSF),并以此检测了髓细胞白血病(AML)细胞受体,发现该类细胞膜表面有高低两种亲和力不同的GM-CSF受体,前者缔和常数(kd_1)为12~71pmol/L,受体数为174~602/cell;后者缔和常数(kd_2)为0.5~2.7nmol/L,受体数为1137~6020/cell。分子量分别为150000,115000和95000,推测150000带为高亲和力受体带,115000和95000带为低亲和力受体带。观察了rhGM-CSF对24例AML患者白血病细胞体外原代培养的影响及16例膜表面受体数与增殖效应的相关性研究,发现8例体外原代培养中rhGM-CSF加入与否没有或极少有集落形成,但rhGM-csF促使14例白血病细胞体外增殖,集落数增加,增殖效应与细胞表面GM-CSF受体数无相关性。 相似文献
2.
慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞 总被引:1,自引:0,他引:1
陈勤奋 《国外医学:输血及血液学分册》2000,23(3):187-189
慢性髓系白血病(CML)细胞起源于CML多能造血干细胞,树突状细胞(dendritic cell,DC)是功能强大的抗原提呈细胞。CML细胞在GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成CML-DC,在自体或异体条件下均能刺激T细胞的显增殖,发挥特异性的抗CML细胞毒效应。 相似文献
3.
为建立以腺病毒为载体的GM-CSF基因转染瘤苗,并研究其体内抗肿瘤作用,应用携带有人GM-CSF基因的重组腺病毒(R-Ad5)载体转染BALB/c小鼠肝癌细胞株(H22),体外应用酶联免疫吸附试验(ELISA法),检测GM-CSF表达水平,以GM-CSF基因转染的H22细胞进行致瘤性研究。结果:(1)重组腺病毒载体能成功地介导GM-CSF基因转染H22细胞并能持续有效表达26 ̄31天,瘤苗的辐照处 相似文献
4.
慢性髓性白血病来源的树突状细胞的功能研究 总被引:12,自引:1,他引:12
为研究慢性髓性白血病(CML)来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能,将CML骨髓和外周血单个核细胞在含GM-CSF,IL-4,TNF-α的培养基中培养7-14天。利用流式细胞术对培养细胞进行表型鉴定,通过FITC-DX(FITC标记的葡聚糖)摄入实验,^3H-TdR掺入和MTT实验,以及LDH释放试验,分别检测不成熟DC对外源抗原的摄入能力,成熟DC对外源和内源抗原的呈递能 相似文献
5.
作者通过体外骨髓半固体和长期液体培养(LTBMC),研究了干扰素-a(IFN-a)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞的作用。在半固体琼脂培养体系中,IFN-a能抑制正常对照和CML患者7天和10天CFU-GM,而不抑制14天及其后的CFU-GM。在LTBMC中,于培养开始只加一次IFN-a(10 ̄2U/ml,10 ̄3U/ml,10 ̄4U/ml),对非贴壁层细胞数和基质细胞层的形成均无明显影响,但大剂量IFN-a(10 ̄3U/ml和10 ̄4U/ml组)对非贴壁层的CFU-GM抑制明显;每周连续加用IFN-a(10U/ml,10 ̄2U/ml,10 ̄3U/ml),对非贴壁层细胞数和CFU-GM均有抑制作用,而且IFN-a浓度愈高,贴壁层的形成愈少。上述结果表明:IFN-a优先抑制晚期CFU-GM,对基质细胞也有一定抑制作用。 相似文献
6.
目的:获得具有天然糖基化结构的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)。方法:采用含sRα启动子和新霉素抗性基因的真核细胞表达载体pMEneo,接上XhoI接头,与XhoI酶切hGM-CSFcDNA片段连接,构建了可在哺乳动物细胞中稳定表达的pMEneo-hGM-CSF质粒。结果:22个pMEneo重构载体克隆中,8个含有hGM-CSFcDNA片段,酶切鉴定插入方向为5个顺式,1个顺式串珠,2个反式。结论:将上述各式以DEAE法转染COS细胞,瞬时表达鉴定,用TF1细胞MTT法测定培养液上清的hGM-CSF活性,顺式和顺式串珠培养上清活性为1×(103~104)U/ml,反式插入方向培养上清没有活性 相似文献
7.
目的:获得带糖链、近天然的重组人粒系巨噬系克隆刺激因子(hGM-CSF),以期为临床提供更安全、稳定的细胞因子。方法:采用基因重组技术,构建编码hGM-CSF的稳转载体pMEneo-hGM-CSF,以酶切和猴肾细胞COS瞬时转染鉴定后,用磷酸钙-DNA共沉淀法将重组质粒导入中国仓鼠卵细胞(CHO)。结果:经G418加压筛选(800μg/ml~1mg/ml),获得可表达hGM-CSF的细胞株。常规或载体培养CHO-hGM-CSF细胞株上清可直接刺激hGM-CSF依赖细胞株的增殖,MTT测定活性单位可达1×107u/L原液。SDS-PAGE及Westernblot分析显示rhGM-CSF主带在28KD位左右,为2N糖链型。结论:此CHO-hGM-CSF细胞株表达稳定,活性较高,具有开发价值。 相似文献
8.
目的:探讨再生障碍性贫血(再障)患者CD8+细胞的组胺H2受体在造血抑制中的作用。方法:在17例正常人粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)培养体系中分别加入17例再障患者外周血CD8+细胞,再障患者外周血CD8+细胞+甲氰咪胍和单加甲氰咪胍。结果:再障患者外周血CD8+细胞在体外能抑制正常人骨髓细胞CFU-GM的生长,0.5×10-5mol/L和1.0×10-5mol/L的甲氰咪胍均能解除这种抑制作用。1.0×10-5mol/L甲氰咪胍本身可使正常人骨髓细胞CFU-GM的产率有所下降,但0.5×10-5mol/L甲氰咪胍对正常人骨髓细胞CFU-GM的生长无抑制作用。结论:组胺H2受体阻滞剂甲氰咪胍在体外能解除再障患者CD8+细胞对正常CFU-GM生长的抑制作用。 相似文献
9.
三氧化二砷对骨髓增生异常综合征粒单系细胞体外作用的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
为了探讨三氧化二砷(As2O3)对骨髓增生异常综合征(MDS)粒单系细胞的体外作用,用半固体、液体培养及APAAP法检测不同浓度As2O3对24例MDS患CFU-GM和CD33,CD15,bcl-2表达的影响,结果发现,As2O3随着浓度的增加对CFU-GM的抑制作用增强;0.388μmol/L时对丛的抑制大于集落,其中低危组70.78%对34.05%,高危组86.76%对65.86%(P〈0.01);0.194μmol-L时使低危组丛减少,而使集落增加,高危组丛减少,集落不变。高浓度(1.94μmol/L)时CD33与CD15表达降低,bcl-2表达减少,细胞出现核染色质固缩,低浓度(0.194μmol/L)时低危组CD33减少,CD15增加,高危组CD33减少,CD15不变,bcl-2减少,且出现上述细胞 相似文献
10.
粒—巨噬细胞集落刺激因子对Vp16诱导白血病细胞凋亡的调控作用 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:探讨粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对Vp16诱导白血病细胞凋亡的调控作用,指导白血病临床治疗中正确使用GM-CSF。方法:在构建高效表达GM-CSF的逆转录载体N2A/CMV/GM-CSF表达系统的基础上,对转GM-CSF基因和未转GM-CSF基因的白血病HL-60细胞进行研究。结果:未转GM-CSF基因及转空载体N2A的HL-60细胞经Vp16处理后均出现凋亡的特征性表现:DNA电泳呈梯状;流式细胞仪DNA直方图上呈现特征性的亚二倍体(亚G1)峰;透射电镜观察细胞形态可见凋亡的特征性改变。结论:Vp16具有诱导白血病细胞发生凋亡的作用,而GM-CSF能够抑制Vp16诱导的细胞凋亡。以上结果表明,白血病临床治疗中为预防和改善化疗所致骨髓抑制而应用GM-CSF时,应谨慎地选择时机,在化疗前和化疗期间不宜使用,以避免白血病细胞对抗癌药物诱导的凋亡产生抵抗而导致耐药。 相似文献
11.
应用平方波脉冲电转法将编码人IL-6受体的cDNA转入不表达IL-6R的BNML大鼠急性早幼粒细胞白血病IL12细胞中,转染细胞经含600μg/ml的G418半固体-液体二步法培养,筛出G418抗性细胞;FACS检测显示该细胞与FITC标记的抗IL-6R单抗呈显的荧光强度,^125I-IL-6受体结合实验表明,kd=4.7nm,每个细胞IL-6R数为4000左右,Northern-Blot发现该 相似文献
12.
阳离子脂质体介导hGM-CSF真核表达载体在骨髓基质细胞系中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 构建人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)真核表达载体pIRES1neo/hGM-CSF,并观察其在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达,方法 用DNA重组技术,将hGM-CSF cDNA插入到真核表达载体pIRES1neo的多砍隆位点中,获得阳性重组载体pIRES1neo/hGM-CSF。以脂质体介导法转染人骨髓基质细胞系HFCL细胞筛选获得的阳性细胞用Southern blot和Northern blot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录,用ELISA及依赖株(TF-1)法检测其蛋白表达量和活性。结果 酶切鉴定表明成功地构建了重组真核表达载体pIRES1neo/hGM-CSF;hGM-CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中,在mRNA和蛋白质水平上均可检测到其表达;hGM-CSF的表 相似文献
13.
应用平方波脉冲电转法将编码人IL-6受体的cDNA转入不表达IL-6R的BNML大鼠急性早幼粒细胞白血病LT12细胞中,转染细胞经含600μg/ml的G418半固体。液体二步法培养,筛出G418抗性细胞;FACS检测显示该细胞与FITC标记的抗IL-6R单抗呈显著的荧光强度; ̄(125)I-IL-6受体结合实验表明,kd=4.7nm,每个细胞IL-6R数为4000左右;Northern-Blot发现该细胞的RNA与 ̄(32)P标记的1.5kb的IL-6RcDNA探针呈明显的杂交信号,证明我们已成功地建立了高表达人IL-6R的LT12-IL-6R ̄+的大鼠急性白血病细胞模型。 相似文献
14.
慢性再生障碍性贫血患者血清粒细胞集落刺激因子水平的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:从粒系角度探讨再生障碍性贫血的发病机制与治疗。方法:通过自行制备抗rhG-CSF单克隆抗体,建立ELISA法,对54例慢性再生障碍性贫血(CAA)患者(男31例,女23例,平均年龄36岁)进行血清G-CSF测定与研究。结果:70.4%CAA患者血清G-CSF水平升高(272.76±58.39ng/L),其血清G-CSF水平与白细胞计数呈负相关(r=-0.535,P<0.01),对其中的12例患者进行了CFU-GM的测定,结果CFU-GM较正常对照明显降低(为17.92±10.28/2×105有核细胞)。结论:CAA患者粒系造血祖细胞受损,G-CSF靶细胞及靶细胞受体受损;部分患者白细胞降低G-CSF并不升高,可能是由于微环境中内皮、成纤维细胞受损,或由于免疫缺陷产生某些因子抑制内皮、成纤维细胞的上调作用,因此对于这类患者的治疗除应用G-CSF外,尚可应用免疫抑制剂及改善微环境的治疗。 相似文献
15.
目的 研究短波紫外线照射对恶性肿瘤患者粒-单造血祖细胞集落形成和细胞活力的影响。方法 应用0.50、100,300、400,800mJ/cm^2的UVC照射应用干细胞生长因子动员后白细胞外周血单个核细胞(PBMNC),观察7d后粒-单系造血祖细胞集落(CFU-GM)以及于UVC照射后1,3,5,7d观察细胞活力。结果 50,100,200,400,800mJ/cm^2UVC照射后CFU-GM集落个 相似文献
16.
用氩离子激光(波长514nm)照射,部花青(MC540)介导的光敏作用对白血病细胞系HL-60、K562,急性髓细胞白血病原代祖细胞(CFU-L)以及正常骨髓CFU-GM的杀伤敏感性作了比较;用电镜观察处理前后K562细胞的超微结构变化。单纯激光照射或仅有MC540而不照光,对HL-60细胞集落产率及CFU-GM产率无明显影响。当MC540浓度为25μg/ml、激光照射能量密度为79.51/cm ̄2的条件处理,HL-60集落产率下降2.8个对数级、CFU-L减少2.2个对数级,而骨贿CFU-GM尚能保留64.0±7.0%;含1%K562细胞的模拟白血病骨贿经同样处理,K562集落产率能下降1.36对数级,而CFU-GM尚存74.0±19.0%。电镜观察发现处理后的K562细胞体积增大,肿胀,胞膜洞孔样破坏。结果提示,氩离子激光照射,MC540介导的光敏作用能选择性杀伤白血病细胞系,原代白血病祖细胞同样敏感。其对细胞的杀伤作用可能主要因直接造成胞膜破坏。该方法将可能成为一种有前途的自体骨髓移植物体外净化手段。 相似文献
17.
为深入研究造血干细胞(HSC)的生物学功能,根据表面标志,采用流式细胞仪分离和富集了小鼠骨髓中两类不同特征的HSC亚群c-kit+Sca-1+和c-kit+Sca-1-细胞。体外集落培养表明c-kit+Sca-1+细胞对IL-3或GM-CSF单独刺激无反应,而c-kit+Sca-1-细胞则可形成大小不等的细胞集落。多种造血生长因子[IL-3+IL-6+GM-CSF+G-CSF+Epo+干细胞生长因子(SCF)]联合可诱导c-kit+Sca-1+细胞形成大的细胞集落,但在培养12天时尚无BFU-E和粒、单核、红和巨核系细胞集落(CFU-GEMM)形成;而同样条件下,c-kit+Sca-1-细胞可形成BFU-E和CFU-GEMM以及其它各类集落。体内实验表明c-kit+Sca-1+细胞在培养8天时无脾集落(CFU-S)形成,与c-kit+Sca-1-细胞显著不同(P<0.01)。相反,c-kit+Sca-1+细胞包含了骨髓造血重建活性细胞,而c-kit+Sca-1-细胞则缺乏。结果提示c-kit+Sca-1+细胞为早期的具重建长期造血功能的干细胞,而c-kit+Sca-1-细胞则为相对分化后期的造血祖细胞。 相似文献
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GM—CSF基因修饰,抗原预激的树突状细胞体内诱导白血病细胞分化?… 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨树突状细胞在肿瘤治疗过程中的作用及机制。方法:以小鼠FBL-3红白血病细胞皮下接种C57BL/6小鼠建立荷瘤模型,采用流式细胞仪分析和透射电镜等技术,观察了粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的抗原预激的树突状细胞体内治疗作用。结果:采用GM-CSF基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗,可以明显抑制白血病细胞生长;白血病细胞表达CD34水平增加,同时MHC-Ⅱ,B7-1,B7- 相似文献
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紫外线波段B对脐血免疫活性和造血活性抑制的体外研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨紫外线波段B(UVB)对脐血淋巴细胞和造血细胞的作用差别。方法:选择0,5,10,20,50mJ/cm2等不同剂量UVB照射脐血单个核细胞(MNC),分别进行活力检测,混合淋巴细胞培养(MLC),粒-单系祖细胞集落(CFU-GM)培养和CD34+细胞比率检测。结果:脐血细胞MLC的免疫增殖反应活性、免疫激活能力及CFU-GM数均呈照射剂量依赖性下降(P<0.01),但在10mJ/cm2照射范围内脐血免疫活性下降幅度显著高于CFU-GM。在脐血MNC悬液内加入20%小牛血清后不仅使UVB的作用减弱,还加大了UVB对脐血淋巴细胞和造血细胞失活作用的差别。UVB照射前后CD34+细胞比率无明显变化。结论:小剂量UVB照射可选择性降低脐血淋巴细胞的增殖反应活性,而对造血细胞活性影响少,提示运用UVB预防脐血移植引起的移植物抗宿主病是可能的。 相似文献
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人粒-巨噬细胞集落刺激因子受体在NIH3T3细胞中的功能表达 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 探讨人类粒巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF) 受体(GMR) 在NIH3T3 细胞中表达的功能特性。方法 将编码人GMRα和β亚单位的cDNA 转染到无人GMR表达的小鼠NIH3T3 细胞中,并检测其阳性转染子在配体刺激后的增殖信号传导与酪氨酸磷酸化。结果 重建的功能性GMRα/β可以介导细胞增殖与细胞集落形成,并诱导βc、Jak2、Shc 及Shc 相关蛋白P145(SHIP) 酪氨酸磷酸化,然而,人GMCSF并不能激活仅含GMRα的NIH3T3 细胞出现有丝分裂信号表达。结论 人GMRα与β亚单位同时转染入NIH3T3 细胞后,可通过βc 磷酸化,激活Jak2 、Shc 和SHIP信号传导途径,而导致配体依赖性细胞生长与集落形成 相似文献