用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病AML_1－ETO融合转录产物

应用一对引物（ＥＴＯＵ＿１／ＥＴＯＤ＿１）通过逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）扩增１７例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者的ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合转录本，１２例初治患者（Ｍ＿１１１例、Ｍ＿４１例）中一致性扩增到预期的２００ｂｐ大小的片段，其中７例证实有典型ｔ（８；２１）或其变异型。扩增片段大小及其限制性内切醇谱提示ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ＿１和ＥＴＯ基因断裂点局限于一个内含子。５例Ｍ＿２已完全经解２～３８个月仍检测到相同的ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合ｍＲＮＡ，提示体内仍残存少量ｔ（８；２１）异常克隆。ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合转录本的检测是诊断和监测ｔ（８；２１）ＡＭＬ的有力手段。     

用聚合酶链反应检测急性非淋巴细胞白血病微量残留细胞

目的：探讨用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测急性非淋巴细胞白血病微小残留病的意义。方法：利用ＰＣＲ扩增降钙素（ＣＴ）基因５＇端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶消化，检测２５例初治或复发的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ），１０例完全缓解期患者。细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，正常对照组１０例。结果：２５例ＡＮＬＬ中，１７例阳性（６４％），１０例缓解期骨髓标本，４     

巢式聚合酶链反应对231例白血病融合基因的检测

目的:探讨巢式逆转录聚合酶链反应(巢式RT-PCR)动态检测白血病bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因在白血病诊断、治疗、预后判断的价值。方法:应用巢式PCR法对231例急慢性白血病患者bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因作检测,同时结合患者细胞形态学及临床转归予以分析。结果:94例慢性粒细胞白血病患者中,79例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为84.0%;55例急性淋巴细胞白血病患者中,20例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为36.4%;50例急性早幼粒细胞白血病患者中,29例PML/RARa融合基因阳性,阳性率为58.0%;32例急性粒细胞白血病M2患者中,9例AML/ETO融合基因阳性,阳性率为28.2%。结论:巢式PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法,可为白血病患者提供分子生物学的诊断依据,并可作为微小残留病的监测指标之一。     

用聚合酶链反应检测急性非淋巴细胞白血病微量残留细胞

目的：探讨用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测急性非淋巴细胞白血病微小残留病的意义。方法：利用ＰＣＲ扩增降钙素（ＣＴ）基因５′端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶消化，检测２５例初治或复发的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ），１０例完全缓解期患者。细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，正常对照组１０例。结果：２５例ＡＮＬＬ中，１７例阳性（６４％），１０例缓解期骨髓标本，４例可检测到残留的白血病克隆，有１例在复发前２个月出现持续的残留白血病克隆。结论：用ＰＣＲ方法检测ＣＴ基因甲基化是非常有潜力的检测ＡＮＬＬＭＲＤ的方法，对预测复发有重要临床意义。     

急性髓细胞白血病M2b型AML1—ETO融合基因转录本的检测

急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）－Ｍ２ｂ患者约９０％有ｔ（８；２１）。已经证明它导致ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因。我们应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测了２２例ＡＭＬ－Ｍ２ｂ，其中ｔ（８；２１）阳性１６例，阴性２例，不能确定有无ｔ（８；２１）的４例，发现全部２２例患者均可检出ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本。同时在５例ｔ（８；２１）阴性的ＡＭＬ中，包括Ｍ２ａ例，Ｍ3 １例，均未检出上述融合基因转录本     

聚合酶链反应方法检测急性白血病p15基因高度甲基化

目的 探讨ｐ１５基因高度甲基化在急性白血病发病中的作用。方法 用甲基化敏感的限制性核酸内切酶消化结合聚合酶链反应技术。结果 在３６例急性白血病患中有２２例（６１．１％）存在ｐ１５基因高度甲基化,其中２６例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）有１７（６５．４％）,１０例急性淋巴细胞白血病有５例（５０．０％）存在ｐ１５基因高度甲基化。结合临床资料分析,有ｐ１５基因甲基化的ＡＮＬＬ患有较高的外周血白细胞     

急性白血病耐药基因的聚合酶链反应研究

ＭＤＲ可能导致ＡＭＬ化疗失败，本文应用ＰＣＲ技术，从基因水平，结合细胞遗传学分析，对ＡＭＬ病人进行ＭＤＲ基因表达与化疗疗效的动态观察。发现２０例初、复诊患者有１５例ＭＤＲ表达，但后者与ＣＲ无线性关系，年龄、性别、ＦＡＨ各亚型、染色体异常与否均与ＭＤＲ表达、ＣＲ取得不相关。单凭ＭＤＲ基因表达难以估计ＡＭＬ病人的预后。     

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法，对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测，取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数，对临床治疗、预防复发、延长患者生存期，最终治愈白血病具有重要的指导意义。     

PCR检测急性淋巴细胞白血病脑脊液中白血病细胞

白血病细胞可侵脑脑组织和脑膜，继发中枢神经系统白血病。涂片染色法检测脑脊液中白血病细胞缺乏敏感性。近年来聚合链反应技术已成功地用于检测急性淋巴细胞白血病残留白血病细胞。     

荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测白血病bcr/abl mRNA

目的　建立荧光定量RT PCR法检测白血病融合基因bcr ablmRNA的方法 ,为白血病临床诊断及微量残留病监测提供有用工具。方法　RT PCR扩增培养的K5 6 2细胞bcr abl融合基因 ,A T载体克隆法构建定量标准模板 ,用PE770 0型检测仪 ,建立荧光定量RT PCR方法 ,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定 ;定量检测 14例慢性髓细胞白血病 (CML)患者和 4例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血样本。结果　建立的荧光定量RT PCR方法 ,可检测出约 10 - 5μgK5 6 2总RNA中的bcr abl融合基因和 10个bcr abl重组质粒拷贝 ,重复性的CT值 (Cyclethreshold)管间、批间变异系数 (CV)分别为 :2 0 % ,3.7%。 14例CML患者bcr abl融合基因表达量中位数为 5 .15× 10 4 拷贝 μgRNA ,产物经电泳分析 ,其中 11例为b2a2 ,3例为b3a2 ,1例 12× 10 4 拷贝 μgRNA的CML患者 ,骨髓移植后 1个月变为 0 .2 3× 10 4 拷贝 μgRNA。 4例ALL患者中 1例有bcr abl融合基因的表达 ,为b2a2 ,表达量为 8.2×10 5拷贝 μgRNA。 结论　建立的荧光定量RT PCR方法灵敏、特异、重复性好 ,结果用拷贝数表示 ,准确可靠 ,利于统一标准。该方法能检测出b2a2、b3a2两种类型的融合基因 ,可广泛用于CML的诊断和微量残留病的检测     

实时定量聚合酶链反应在急性早幼粒细胞白血病融合基因检测中的临床应用

目的 比较不同类型的逆转录荧光实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）检测急性早幼粒细胞白血病（APL）PML-RARα融合基因的方法.方法 建立荧光染料SYBR Green Ⅰ和Eva GreenRQ-PCR技术,同时检测56例APL融合基因PML-RARα的表达水平,并且与传统巢式PCR方法进行敏感度比较.选择10例初诊患者随机分为两组,分别给予维甲酸（ATRA）加化疗或ATRA加三氧化二砷治疗.每3周抽取骨髓标本,检测治疗后PML-RARα表达的变化.结果 两种RQ-PCR的灵敏度均可达到50拷贝,稍低于巢式PCR,但RQ-PCR定量准确,不易污染.分别取10^3拷贝和10^7拷贝的PML-RARα质粒以及患者cDNA同时做8次SYBR-Green Ⅰ平行扩增,批内变异系数分别为7.31%、8.26%和5.02%.不同APL患者PML-RARα表达水平有较大差异,初诊患者PML-RARα/GAPDH比值介于0.018～0.799,中位值为0.070;使用这两种染料建立的RQ-PCR方法进行定量检测,荧光染料Eva-Green荧光强度高于SYBR GreenⅠ 4倍.对接受ATRA加化疗或ATRA加三氧化二砷治疗两种不同治疗方案的APL患者动态观察发现,2～4周PML-RARα转录本均迅速减少,2个月后80%PML-RARα转阴,但两种治疗方式无明显差异.结论 RQ-PCR可以准确检测微小残留病（MRD）融合基因表达水平;Eva Green和SYBR Green Ⅰ都可以用于RQ-PCR,但是Eva Green更敏感高效;监测融合基因表达可以有效观察不同治疗方法的治疗效果.     

聚合酶链反应在白血病诊疗中的应用

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种模拟天然ＤＮＡ复制过程的体外基因扩增特异性ＤＮＡ片段的新技术。它能高效扩增目的ＤＮＡ片段，在数小时内完成２０－５０个循环，使目的ＤＮＡ扩增数百万倍。该技术具有快速、敏感、特异性强等优点，目前已广泛用于传染病和遗传病的诊断，并在血液病的研究中取得了重大进展。本文在ＰＣＲ在白血病诊疗中的应用概述如下。     

聚合酶链反应在白血病诊疗中的应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程的体外基因扩增特异性DNA片段的新技术。它能高效扩增目的DNA片段,在数小时内完成20～50个循环,使目的DNA扩增数百万倍。该技术具有快速、敏感、特异性强等优点,目前已广泛用于传染病和遗传病的诊断,并在血液病的研究中取得了重大进展。本文就PCR在白血病诊疗中的应用概述如下。