急性T淋巴细胞白血病中SIL－TAL－1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患者该基因５’端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５’端相融合，形成ＳｉＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显子拼接而成。对该法的敏感度测定显示，可从１０￣６个正常细胞中检测出１个肿瘤细胞，并在２例缓解期标本中检测到微量残留白血病（ＭＲＤ）。此外，对３例有融合转录本患者的ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测发现，其ＴＡＬ－１基因５’端丢失的位点相同，均为Ｔａｌ￣（ｄ１）重组。可见，ＴＡＬ－１基因的改变是Ｔ－ＡＬＬ一个有用的克隆标志，为其诊断和残留白血病检测提供了十分重要的依据。     

急性淋巴细胞白血病基因重排及其用于微量残留白血病检测的研究

应用多种分子生物学技术，对急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿６５例进行抗原受体（ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ）基因重排和肿瘤融合基因（ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ｂｃｒ／ａｂｌ、ＨＲＸ）转录本的研究，发现９６％的患者存在至少一种上述基因标记，对其中２３例具有连续３次以上送检骨髓标本的患者进行微量残留病（ＭＲＤ）检测。杂交试验显示，ＭＲＤ可检出的敏感度在以肿瘤融合基因为标记的患者为１０－４～１０－６，在以抗原受体Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部顺序为探针的患者为１０－２～１０－５。文中就选用多种基因标记，对ＡＬＬ患儿进行有步骤、多方位筛查特异标记基因，并对同一患儿采用不同基因标记作ＭＲＤ跟踪检测的方法学评价和临床意义予以讨论。     

急性髓细胞白血病M2b型AML1—ETO融合基因转录本的检测

急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）－Ｍ２ｂ患者约９０％有ｔ（８；２１）。已经证明它导致ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因。我们应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测了２２例ＡＭＬ－Ｍ２ｂ，其中ｔ（８；２１）阳性１６例，阴性２例，不能确定有无ｔ（８；２１）的４例，发现全部２２例患者均可检出ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本。同时在５例ｔ（８；２１）阴性的ＡＭＬ中，包括Ｍ２ａ例，Ｍ3 １例，均未检出上述融合基因转录本     

儿童急性淋巴细胞白血病 TEL／AML1融合基因的检测及其临床意义

目的 研究我国儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中伴有ｔ（１２；２１）易位的发生率及其临床预后特征。方法 采用套式逆转录聚合酶链反应（ＰＴ－ＰＣＲ）技术检测ＴＥＬ－ＡＭＬ１融合基因转录本。结果 在６０例儿童（Ｂ系４５例，Ｔ系１３例，Ｔ、Ｂ系双表达２例）中共发现８例Ｂ系ＡＬＬ中有ＴＥＬ－ＡＭＬ１融合基因转录本，治疗后８例均获得完全缓解（ＣＲ）。结论 ｔ（１２；２１）Ｂ系ＡＬＬ是儿童ＡＬＬ中最多见且预后     

急性髓细胞白血病M_（2b）型AML_1－ETO融合基因转录本的检测

急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）－Ｍ＿（２ｂ）患者约９０％有ｔ（８；２１）。已经证明它导致ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因。我们应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测了２２例ＡＭＬ＿１－Ｍ＿（２ｂ）其中ｔ（８；２１）阳性１６例，阴性２例，不能确定有无ｔ（８；２１）的４例，发现全部２２例患者均可检出ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因转录本。同时在５例ｔ（８；２１）阴性的ＡＭＬ中，包括Ｍ＿（２ａ）２例，Ｍ＿４２例，Ｍ＿３１例，均未检出上述融合基因转录本。我们的初步结果提示ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因可以作为ＡＭＬ－Ｍ＿（２ｂ）的基因标志。     

用多种特异性基因标志跟踪检测儿童微量残留白血病的研究

用多聚酶链反应技术，以Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ基因的Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部Ｎ顺序三种克隆特异基因标志；ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ＨＲＸ基因相关的融合基因和ｂｃｒ／ａｂ１融合基因作为肿瘤特异标志，对２３例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿完全缓解后的微量残留病（ＭＲＤ）作系统的跟踪检测。结果表明，所有小儿ＡＬＬ缓解后均存在ＭＲＤ。６个月内复查的１２例ＡＬＬ中６例（５０％）在缓解６个月内ＭＲＤ测定阴性，１８例（７８．３％）在１２个月内、１９例（８２．６％）在２４个月内ＭＲＤ测定阴性。若持续ＭＲＤ检测阳性或由阴性转阳性则提示将发生骨髓复发。检测的灵敏度是１０－２～１０－６。提示白血病ＭＲＤ的跟踪检测有重要的临床意义。     

用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病AML_1－ETO融合转录产物

应用一对引物（ＥＴＯＵ＿１／ＥＴＯＤ＿１）通过逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）扩增１７例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者的ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合转录本，１２例初治患者（Ｍ＿１１１例、Ｍ＿４１例）中一致性扩增到预期的２００ｂｐ大小的片段，其中７例证实有典型ｔ（８；２１）或其变异型。扩增片段大小及其限制性内切醇谱提示ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ＿１和ＥＴＯ基因断裂点局限于一个内含子。５例Ｍ＿２已完全经解２～３８个月仍检测到相同的ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合ｍＲＮＡ，提示体内仍残存少量ｔ（８；２１）异常克隆。ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合转录本的检测是诊断和监测ｔ（８；２１）ＡＭＬ的有力手段。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

儿童B系急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的研究

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系,并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣＲ和双标记ＦＩＳＨ技术检测ＴＥＬＡＭＬ１融合基因。结果和结论ＲＴＰＣＲ检测发现儿童Ｂ系急淋中２２．５％（４０例中９例）的患者有ＴＥＬＡＭＬ１融合基因转录本,这类患者预后较好,完全缓解率达１００％。ＲＴＰＣＲ和ＦＩＳＨ技术是检测ＴＥＬＡＭＬ１的有效方法,并为临床诊断和预后估计提供了有一定价值的手段。     

用逆转录酶／聚合链反应方法检测急性粒细胞白血病AML1—ETO副合基因

用筑巢式逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测伴ｔ（８；２１）染色体易位的Ｍ２ｂ型白血病ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本，该方法具有高度敏感性，可以从１０＾４－１０＾５个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞，对于Ｍ２ｂ型白血病的诊断及监测是一种快速，灵敏，特异的方法。我们研究的１１例Ｍ２ｂ型白血病中有１例未检测到的ＰＣＲ产物，可能与该型患中基因重组的分子异质性有关。     

用逆转录酶／聚合酶链反应方法检测急性粒细胞白血病（M_（2b））AML_1－E

用筑巢式逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测伴ｔ（８：２１）染色体易位的Ｍ＿（２ｂ）型白血病ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因转录本，该方法具有高度敏感性，可以从１０￣４～１０￣５个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞，对于Ｍ＿（２ｂ）型白血病的诊断及监测是一种快速、灵敏、特异的方法。我们研究的１１例Ｍ＿（２ｂ）型白血病中有１例未检测到ＰＣＲ产物，可能与该型患者中基因重组的分子异质性有关。     

JAKs—STATs信号传导途径与白血病

在急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中，不同类型均可见ＪＡＫｓ和ＳＴＡＴｓ表达，但表达及活化种类不同，多未达成共识。急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中也有ＪＡＫｓ及ＳＴＡＴｓ表达及活化；慢性髓系白血病（ＣＭＬ）存在ＪＡＫ２的表达及ＳＴＡＴ５的活化，ＳＴＡＴｓ活化可能与ＣＭＬ发生密切相关。ＡＧ－４９０为ＪＡＫ激酶抑制剂，在体内外均可选择性阻断白血病细胞生长和诱导细胞程序死亡，对正常造血无影响。ＪＡＫｓ－Ｓ     

35例急性白血病细胞IL—2受体α的基因表达的检测分析

为研究ＩＬ－２受体α链基因在急性白血病（ＡＬ）细胞的表达，对１９例ＡＬＬ和１６例ＡＭＬ患者治前白血病细胞用逆转录＝聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及芝光素标记单抗ＩＬ－２Ｒ１流式细胞分析，分别进行了ＩＬ－２Ｒα基因ｍＲＮＡ和蛋白质水平表达的检测。３５例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和Ｐ阳性表达者分别为５例和１４例，前者阳性表达明显高于后者，１４例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ表达阳性，     

白细胞介素8及其受体在急性白血病的表达及其意义

目的探讨白细胞介素８（ＩＬ８）及其Ａ、Ｂ受体（ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ）的表达与急性白血病（ＡＬ）的分型、疗效及并发症的关系。方法用酶联免疫夹心法检测７７例初诊ＡＬ患者外周血ＩＬ８含量,用间接免疫荧光及流式细胞术检测骨髓单个核细胞（ＭＮＣｓ）表达ＩＬ８Ｒ,并检测了１５例ＡＬ完全缓解（ＣＲ）期脑脊液（ＣＳＦ）中ＩＬ８水平。结果ＡＬ患者外周血ＩＬ８水平高于正常人,其中急性髓系白血病（ＡＭＬ）高于急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）,Ｍ４、Ｍ５高于Ｍ１～Ｍ３,ＢＡＬＬ高于ＴＡＬＬ（Ｐ＜０．０５）。ＡＬＬ中ＩＬ８＞１００ｎｇ／Ｌ组比≤１００ｎｇ／Ｌ组疗效差（Ｐ＜０．０５）;约３６．３６％的ＡＬ患者ＩＬ８Ｒ（＋）,ＩＬ８Ｒ（＋）者的外周血白细胞计数及幼稚细胞比例显著高于ＩＬ８Ｒ（－）者（Ｐ＜０．０５）;ＣＲ期患者ＣＳＦ中ＩＬ８水平与治疗前比较,差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,合并中枢神经系统白血病（ＣＮＳＬ）时明显升高。结论外周血和ＣＳＦ中ＩＬ８水平的检测及检测骨髓ＭＮＣｓ膜ＩＬ８Ｒ的表达有助于ＡＬ各亚型的鉴别及预后判断;ＣＮＳＬ发生时ＣＳＦ中ＩＬ８增高。     

用逆转录－多聚酶链反应监测急性髓系白血病M_（2b）微量残留白血病

急性髓系白血病（ＡＭＬ）Ｍ＿（２ｂ）常伴有ｔ（８：２１）染色体易位，两个染色体重排导致形成ＡＭＬＩ／ＭＴＧ８融合基因，并持续产生融合基因转录本。作者利用逆转录。多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增ＡＭＬ１／ＭＴＧ８融合基因转录本进行ＡＭＬ－Ｍ＿（２ｂ）微量残留白血病的监测，在１３例完全缓解的患者中，１２例可检出残留白血病细胞。经随诊这１２例中，２例已复发，１例死于强化治疗骨髓抑制期，９例仍持续完全缓解。     

用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病

应用一对引物通过逆转录酶／聚合酶链反应扩增１７例急性髓细胞白血病患的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合转录本，１２例初治患中一致性扩增到预期的２００ｂｐ大小的片段，其中７例证实有典型ｔ（８；２１）易其变异型。扩增片段大小及其限制性内切酶谱提示ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ１和ＥＴＯ基因断裂点局限于一个内含子。５例Ｍ２已完全缓解２－３８个月仍检测到相同的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合ｍＲＮＡ，提示体内仍残存少量ｔ（８；２１     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

筑巢式RT—PCR对急性早幼粒细胞白血病融合基因的初步检测与分析

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测了３０例急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）中因染色体易位ｔ（１５：１７）所形成的早幼粒白血病维甲酸受体α（ＰＭＬ－ＲＡＲα）融合基因转录本,结果发现：１００％的Ｍ患者均有ＰＭＬ／ＲＡＲα;两种亚型Ｍ３ａ和Ｍ３ｂ其ＰＭＬ／ＲＡＲα的转录本不同,Ｍ３ａ９４％为Ｌ型,Ｍ３ｂ８４％为Ｓ型。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测融合基因是一种特异性强、灵敏度高的新诊断手段,还可用于预后判断和病情随访。     

急性早幼粒细胞白血病基因分析

目的：分析急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）联合细胞毒药物及异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）治疗后融合基因的变化。方法：采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对２２例ＡＰＬ患者治疗前后ＲＡＲα／ＰＭＬ融合基因进行检测。其中１２例患者为单纯化疗，１０例接受了ａｌｏ－ＢＭＴ，９例患者于第１次完全缓解（ＣＲ１）期、１例于第１次复发（ＲＲ１）期接受了ａｌｏ－ＢＭＴ。结果：单纯维甲酸诱导完全缓解时，７５％ＡＰＬ患者融合基因仍然阳性；继用强化疗后８３％患者融合基因转为阴性，ＲＴ－ＰＣＲ转阴时间为发病后１～３９个月；ａｌｏ－ＢＭＴ后４个月内及４个月后，分别有６２．５％及８５．７％患者融合基因转阴。结论：化疗及ＢＭＴ均可使患者融合基因转阴，ａｌｏ－ＢＭＴ似乎能更快地清除体内白血病细胞     

长非编码 ＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 在成人急性 Ｔ 淋巴细胞白血病 中的表达特征及预后相关性

摘要：目的 探讨长非编码 ＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 在成人急性 Ｔ 淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义。方法 采用实时定量荧光 ＰＣＲ 检测长非编码 ＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 在 ２５ 例健康人对照组、３４ 例初治 Ｔ ＡＬＬ 组和 １９ 例 Ｔ ＡＬＬ 治疗缓解后复发患者组骨髓内淋 巴细胞中的表达水平；采用流式细胞术（Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ ＰＩ 双染法）检测经过柔红霉素分别处理且 ＬＵＮＡＲ１ 基因呈高、低表达的 ２ 例复发 Ｔ ＡＬＬ 患者的肿瘤细胞凋亡情况；通过 ＮＣＢＩ 数据库获取 Ｔ ＡＬＬ 患者中预后资料与 ＬＵＮＡＲ１ 基因表达数据，ＣＯＸ 回归 分析高表达 ＬＵＮＡＲ１ 基因与临床预后不良的相关性。结果 与健康人对照组相比，ＬｎｃＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 在初治 Ｔ ＡＬＬ 组患者骨 髓内淋巴细胞中高表达（５．６１±２．７５ ｖｓ ０．３５±０．２７，ｔ ＝ ６．９３，Ｐ＜０．００１），且复发患者骨髓内淋巴细胞中的 ＬｎｃＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 基因的 表达水平显著高于初发患者（２３．９５±９．７９ ｖｓ ５．６１±２．７５，ｔ ＝ ７．５２，Ｐ＜０．００１）；使用柔红霉素处理复发 Ｔ ＡＬＬ 患者肿瘤细胞后，高 表达 ＬｎｃＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 基因的 Ｔ ＡＬＬ 细胞凋亡情况显著低于 ＬｎｃＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 基因低表达的细胞（４． ０６％ ｖｓ １０． ７０％，Ｐ＜ ０．０５）。Ｃｏｘ 比例风险模型显示，Ｔ ＡＬＬ 患者 ＬｎｃＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 基因高表达与临床预后不良相关（ＨＲ＝ １．８６，Ｐ＝ ０．００２）。结论 成人 Ｔ ＡＬＬ 中异常高表达的长非编码 ＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１ 基因与 Ｔ ＡＬＬ 的发病及复发密切相关，可预示疾病的预后及转归。 ＬｎｃＲＮＡ ＬＵＮＡＲ１有望成为潜在检测的 Ｔ ＡＬＬ 发病及复发的分子靶标。