雷帕霉素抑制人脐静脉内皮细胞增殖与迁移

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移的抑制作用。方法应用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞仪、迁移实验研究不同浓度雷帕霉素对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖、迁移的影响。结果雷帕霉素浓度大于10ng/ml、作用48h以上可以明显抑制VEGF诱导的HUVECs的增殖(P<0.05),呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞被阻滞在G0/G1期,并诱发了细胞凋亡;利用Transwell装置证实雷帕霉素浓度大于10ng/ml时抑制了HUVECs的迁移。结论雷帕霉素可通过抑制血管内皮细胞的增殖与迁移抑制血管生成。     

雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的:观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法:将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24 h后,用MTT法测定细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果:用含10、20、40、80和160 ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时,细胞增殖抑制率分别为9.32%,22.55%,41.42%,42.25%,43.57%。细胞周期分析显示,雷帕霉素(40 ng/ml)作用后,G0/G1期细胞较对照组增多(41.76%vs 44.19%,P<0.05),S期细胞较对照组减少(45.42%vs 40.18%,P<0.05)。结论:雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果,且随浓度增加抑制作用增强,并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

雷帕霉素／雌二醇复合洗脱支架的制备及其对猪球囊损伤冠状动脉的影响

目的探索雷帕霉素／雌二醇复合洗脱支架的制备方法,并考察其体外释放度研究以及体内抑制猪冠状动脉内膜增殖的初步效果。方法采用CCK法考察不同浓度雌二醇对雷帕霉素对内皮细胞增殖行为的影响,以气体雾化喷涂法制备雷帕霉素-雌二醇复合洗脱支架并在37℃以20％甲醇为介质在100 r／min水浴振荡器中进行体外释放度考察,在猪冠状动脉球囊扩张损伤模型中考察该复合洗脱支架的抗内膜增生及再内皮化的效果。结果雌二醇在10-8mol/L能够显著减弱雷帕霉素对血管内皮细胞的抑制,制备的复合洗脱支架在体外可持续释放30 d以上,在体内显著抑制猪冠状动脉内膜增生,并有完全的支架再内皮化。结论雷帕霉素-雌二醇复合洗脱支架有改善雷帕霉素洗脱支架内皮化延迟的临床前景。     

雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的：观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法：将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后, 用MTT法测定细胞的增殖情况，用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果：用含10、20、40、80和160ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时，细胞增殖抑制率分别为9.32%，22.55%，41.42%，42.25%，43.57%。细胞周期分析显示，雷帕霉素(40ng/ml)作用后，G0/G1期细胞较对照组增多(41.76% vs 44.19%，P＜0.05)，S期细胞较对照组减少(45.42%　vs　40.18%，P＜0.05)。结论：雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果，且随浓度增加抑制作用增强，并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

紫杉醇与mTOR抑制剂雷帕霉素联合抑制非小细胞肺癌增殖

目的研究紫杉醇对非小细胞肺癌A549细胞mTOR信号通路的影响,以及紫杉醇与mTOR抑制剂雷帕霉素的联合作用。方法在紫杉醇和／或雷帕霉素处理细胞后,采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡;免疫印迹技术分析信号分子表达与磷酸化;采用细胞计数法检测细胞增殖。结果（5×10^-6）g/L紫杉醇作用24h可诱导（31．26±2．52）％细胞发生凋亡;但随紫杉醇浓度增加,细胞凋亡率下降而G2／M期阻滞效应增加。紫杉醇对mTOR分子的表达无影响,但与其结合的raptor和rictor,以及抗凋亡分子survivin表达随浓度增加而增加,mTOR下游分子S6K1磷酸化也被上调。雷帕霉素与紫杉醇同时或在紫杉醇作用后加入培养体系可增强其对肿瘤增殖的抑制作用,并促进紫杉醇诱导细胞凋亡。结论紫杉醇对A549细胞mTOR信号通路的活化有上调作用,mTOR抑制剂与雷帕霉素可协同抑制非小细胞肺癌增殖。     

雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法 5637细胞贴壁培养于含10%胎牛血清、100 U/m L青霉素、100μg/m L链霉素的RPMI 1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。处理组加入50、100、200和400 nmol/L的雷帕霉素,对照组不加药物,每天更换RPMI 1640培养液。MTT法检测处理组的生长抑制率,流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对5637细胞增殖周期的影响。结果与对照组相比,雷帕霉素对5637细胞有明显抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。雷帕霉素可以将5637细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞的增殖,且未见明显的凋亡情况。结论雷帕霉素使5637细胞阻滞在G0/G1期,抑制了膀胱癌5637细胞的增殖,说明雷帕霉素的作用靶点参与了5637的增殖过程,其有望成为膀胱癌治疗的新靶点。     

雷帕霉素抑制人结肠癌细胞体外增殖及其机制研究

目的 研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTTOR特异性抑制荆雷帕霉素(Rapamycin)对体外培养的人结肠癌Lovo细胞生长的抑制作用,并初步探讨其机制.方法 分别用0.5、1.0、2.5和5.0ug/mL雷帕霉素对Lovo细胞进行干预,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达.结果 雷帕霉素对Lovo细胞表现出明显的增殖抑制作用,细胞增殖活性随浓度增加、时间延长逐渐降低,呈现量-效、对-效关系.雷帕霉素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,并明显降低Lovo细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平.结论 雷帕霉素通过下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,诱导结肠癌Lovo细胞凋亡,从而抑制其增殖及生长.     

雷帕霉素对慢性排斥治疗研究进展

目的：雷帕霉素（RAPA）是一种新型大环内酯类免疫抑制剂，主要是阻断T淋巴细胞及其他细胞由G1期至S期的进程，有很较的免疫抑制作用，与环孢素A（CsA)合用能产生协同作用，从目前的基础与临床研究看，RAPA能抑制生长因子介导的细胞增生及血管内皮细胞的增生，在预防与治疗慢性排斥中有可能发挥极其重要的作用，是一种前途广阔的新型免疫抑制剂。     

浅谈化疗药物引起静脉炎及药物外渗的护理体会

化疗是治疗人体恶性肿瘤的主要手段之一。但使用不当可外渗到皮下组织，轻者可引起红斑、局部肿胀、缺血，广泛炎症／重者可损伤神经、肌腱甚至组织坏死致使肢体功能丧失。因此，在使用化疗药物时应尽可能保护血管，减少静脉炎与渗漏性损伤的发生。现将临床护理体会总结如下。1常用化疗药物的性质及副作用1．1直接毒性作用化疗药物有与细胞的DNA结合、于扰细胞功能、造成细胞死亡的作用。如阿霉素常在渗出后l～2周出现温性反应，疼痛，形成溃疡。博莱霉素损伤血管内皮细胞引起静脉炎。1．2高浓度化疗药物的副作用高浓度化疗药物易引起静脉…     

羊栖菜多糖对血管内皮细胞增殖活性的影响

目的研究羊栖菜多糖（SFPS）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖活性的直接作用及其对氧化损伤的内皮细胞增殖活性的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（Mar）比色法检测羊栖菜多糖对内皮细胞增殖活性的影响。结果SFPS在较低浓度（10mg／L～300mg／L）时，对HUVECs增殖活性具有促进作用；而当浓度过高（达到1000mg/L）时，则反而抑制细胞的增殖活性。10mg／L～100mg／L的SFPS对H2O2引起的内皮细胞增殖率下降可起到明显的保护和修复作用。结论一定浓度的羊栖菜多糖可增强血管内皮细胞增殖活性，并可对抗H2O2对此活性的抑制作用。高浓度的羊栖菜多糖抑制血管内皮细胞增殖活性。     

益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究

目的　探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理。方法　用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4缺氧 1.5小时 ,然后以含糖培养基 ,在 5 % CO2 和 37℃条件下给氧培养 5小时 ,建立内皮细胞缺氧再给氧模型 ,以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤 ,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程 ,荧光染色显示胞内钙离子与线粒体 ,细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (L DH)活性 ,并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)和一氧化氮 (NO)浓度。结果　缺氧再给氧使 ECV30 4细胞变圆、收缩、脱落 ,细胞内钙离子含量增高 ,线粒体膜电位减弱 ,SDH活性下降 ,L DH活性增高 ,培养液中 SOD与 NO含量减少 ,而 MDA浓度增高 ;用益生注射液干预后 ,ECV30 4细胞形态基本恢复正常 ,上述多项检测指标的改变得以逆转。结论　缺氧再给氧导致 ECV30 4细胞发生脂质过氧化 ,胞内钙离子超载、SOD活性及 NO水平降低、线粒体功能受损 ,益生注射液可使上述变化得以逆转 ,从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤     

益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究

目的 探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理。方法 用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧1.5小时，然后以含糖培养基，在5%CO2和37℃条件下给氧培养5小时，建立内皮细胞缺氧再给氧模型，以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤，并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程，荧光染色显示胞内钙离子与线粒体，细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶（SDH）和乳酸脱氢酶（LDH）活性，并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）浓度。结果 缺氧再给氧使ECV304细胞变圆，收缩、脱落，细胞内钙离子含量增高，线粒体膜电位减弱，SDH活性下降，LDH活性增高，培养液中SOD与NO含量减少，而MDA浓度增高；用益生注射液干预后，ECV304细胞形态基本恢复正常，上述多项检测指标的改变得以逆转。结论 缺氧再给氧导致ECV304细胞发生脂质过氧化，胞内钙离子超载，SOD活性及NO水平降低，线粒体功能受损，益生注射液可使上述变化得意以逆转，从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸体外抑制皮肤血管瘤内皮细胞的增殖

目的 观察血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸对皮肤血管瘤内皮细胞体外增殖及生物学特性的影响,并探讨其机制。方法 体外培养皮肤血管瘤内皮细胞;脂质体介导VEGF反义寡核苷酸进行转染;MTT法观察其对内皮细胞生长的抑制;免疫细胞化学技术检测VEGF的蛋白表达;流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 VEGF反义寡核苷酸作用后的内皮细胞生长明显受到抑制,作用后48hVEGF蛋白表达明显下降,细胞周期中S期细胞数明显减少,并于72h后抑制效应逐渐减弱。结论 VEGF反义寡核苷酸能显著抑制皮肤血管瘤内皮细胞的生长,其机制是抑制细胞的增殖,而不是促进其凋亡。     

重组人内皮抑素诱导人脐带静脉血管内皮细胞凋亡

目的观察人内皮抑素重组蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞增殖的影响。方法采用细胞凋亡的荧光检测法检测对内皮细胞凋亡的影响。MTT法观察不同浓度的重组人内皮抑素对人脐带静脉血管内皮细胞（ECV304）增殖的抑制作用。结果重组人内皮抑素具有明显的抑制内皮细胞增殖的作用，ED50=550ng／ml，随重组蛋白浓度的增加抑制作用更为明显。结论重组人内皮抑素对细胞增殖的抑制与其浓度呈正相关，存在剂量效应关系；内皮抑素抗血管生成的机制与其抑制内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

水蛭素对体外培养的兔血管内皮细胞及平滑肌细胞生长的影响

目的探讨水蛭素对体外培养的兔血管内皮细胞及平滑肌细胞生长的影响及剂量依赖关系。方法用体外培养兔血管内皮细胞及平滑肌细胞第3~5代,加入96孔细胞培养板,同时加入不同浓度的水蛭素0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25 mg/L,每6孔为一个浓度组,1640培养液为空白对照组,共7组,培养48 h后用噻唑蓝比色试验(MTT法)测定各孔贴壁细胞的吸光值(OD)。结果与空白对照组相比,低、中、高浓度水蛭素作用于体外培养的兔血管内皮细胞后,细胞形态无明显改变,贴壁良好,生长无明显抑制作用(P>0.05);而水蛭素作用于兔血管平滑肌细胞后,与空白对照组相比,低浓度水蛭素对平滑肌细胞形态无明显改变,中、高浓度水蛭素作用于平滑肌细胞后,细胞密度有所减小、排列松散,OD值下降,呈现抑制平滑肌细胞的生长(P<0.05)。结论不同浓度水蛭素对体外培养兔血管内皮细胞生长无显著抑制作用;低浓度水蛭素对体外培养兔血管平滑肌细胞生长无明显抑制作用,中、高浓度水蛭素可抑制兔血管平滑肌细胞的生长。     

紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞生长及其claudin-7表达的影响

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌HeLa细胞增殖及claudin-7蛋白表达水平的影响.方法 体外培养人宫颈癌 HeLa细胞,采用 MTT法观察不同浓度紫杉醇脂质体（0.01、0.1、1、10、100 μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测HeLa细胞claudin-7蛋白表达水平在不同浓度紫杉醇脂质体作用下的变化.结果 5个浓度的紫杉醇脂质体均能显著抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;Western blot显示HeLa细胞经不同浓度紫杉醇脂质体处理48 h后,随着紫杉醇脂质体浓度的增高,claudin-7蛋白表达逐渐减弱.结论 紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,HeLa细胞claudin-7蛋白的表达在紫杉醇脂质体影响下是下调的.     

紫杉醇、顺铂对绒癌耐药细胞抑制作用的观察

目的：探讨紫杉醇（Paclitaxel)、顺铂（Cisplatin)对耐药人绒毛膜癌细胞株JAR／KSM的体外抑制作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，观察不同浓度的紫杉醇、顺铂对人绒癌JAR细胞株和耐药人绒癌JAR／KSM细胞株的抑制作用， 分析耐药株和非耐药株对紫杉醇和顺铂的敏感性。结果：JAR细胞和JAR／KSM细胞对紫杉醇和顺铂均敏感，两药单独使用时，随着药物浓度增加其抑制作用也增加。耐药细胞株和非耐药细胞株对两药的敏感性无显著性差异。结论：对KSM耐药的人绒毛膜癌细胞株和非耐药人绒毛膜癌细胞株对化疗药物紫杉醇、顺铂均具有敏感性。     

脱甲氧基姜黄素对血管生成影响的实验研究

目的：从脱甲氧基姜黄素对内皮细胞增殖和迁移的影响角度，探讨脱甲氧基姜黄素抗血管生成的作用机制。方法：用MTT法检测脱甲氧基姜黄素对牛主动脉内皮细胞及人胃腺癌细胞系SGC-7901细胞增殖的影响；用琼脂糖刮除法检测脱甲氧基姜黄素对牛内皮细胞迁移的影响。结果：脱甲氧基姜黄素能明显抑制牛内皮细胞增殖，对非内皮细胞与肿瘤细胞也有抑制作用，但与前者相比，差异有统计学意义。脱甲氧基姜黄素能显著抑制牛内皮细胞迁移，在实验浓度范围内，其抑制作用呈明显量效关系。结论：脱甲氧基姜黄素是一种特异性血管生成抑制剂。抑制内皮细胞增殖和迁移可能是脱甲氧基姜黄素抑制血管生成的机制之一。     

薯蓣皂苷元体内外抑制胃癌增殖的机制

目的: 研究薯蓣皂苷元抑制胃癌增殖及转移的主要途径及其机制。方法: 分别使用1,10,100 μg/mL浓度薯蓣皂苷元处理人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和胃癌BGC 823细胞,制作细胞生长曲线,观察薯蓣皂苷元对细胞增殖能力的影响;选取一定浓度的薯蓣皂苷元处理HUVEC和BGC 823细胞,体外成管实验和划线法分别检测药物处理对血管内皮细胞成管能力及肿瘤细胞迁移能力的影响。将BGC 823细胞接种到裸鼠制作皮下肿瘤模型,连续静脉注射薯蓣皂苷元,分析比较其对皮下肿瘤的抑制效果。结果： 与对照组比较,薯蓣皂苷元可明显抑制内皮细胞增殖活性（P＜0.05）,且具有浓度依赖性;而相同处理方式对BGC 823细胞的增殖活性基本无影响;10 μg/mL的薯蓣皂苷元对BGC 823细胞的迁移能力具有明显的抑制作用,能够明显抑制HUVEC细胞体外成管能力;与模型组比较,薯蓣皂苷元给药组肿瘤抑制率明显增高（达38.2%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论： 薯蓣皂苷元可以通过抑制内皮细胞增殖活性影响肿瘤血供,并最终抑制皮下肿瘤模型的增殖,同时,其可通过直接的作用抑制胃癌的迁移。