临床依赖利福平分支杆菌的初步研究

目的 研究依赖利福平分支杆菌^[1]（依R菌）菌株的依R程度、菌落及菌体的形态特点,以期为依R菌的定义和鉴定提供依据。方法 从分支杆菌菌株库中选出在含R培养基中生长更旺盛的22株菌株,用L-J氏培养基复苏培养。选取单个菌落接种不同R浓度的培养基中培养;对不同实验管（对照管、R管）中的菌落进行计数、称重、形态观察,并作抗酸染色观察菌体形态。结果 22株依R菌经菌种鉴定为结核分支杆菌。依R菌对R的依赖性仅限于某个浓度范围（R:5～600ug/ml);不同的菌株其依赖范围不同,但大都在R100～300ug/ml范围内生长最旺盛。依R管与非依R管（对照管）中菌落（菌体）形态均有明显的差异,其菌落重量差为2.2～5倍。结论 目前我们所发现的依R菌株均为结核分支杆菌。依R菌对R的依赖为相对依赖。分支杆菌在含R培养基中菌落生长更旺盛和菌体粗大、浓染的特征,可作为依R菌初步鉴定的依据。     

分支杆菌鉴定方法的比较研究

比较了微菌落法、多重聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法和传统法用于分支杆菌临床分离物菌种鉴定的效果 ,现报告如下。材料与方法 :试验菌株 :(1)标准菌株 :结核分支杆菌Ｈ37ＲＶ、牛分支杆菌、鸟分支杆菌、胞内分支杆菌、堪萨斯分支杆菌、瘰疬分支杆菌、偶然分支杆菌和耻垢分支杆菌标准株 ,均购自北京结核病胸部肿瘤研究所。 (2 )临床分离株 :来自我院结核病住院患者的痰、胸液和脑脊液。传统分型鉴定试验 :(1)培养鉴定试验 :按常规制备对硝基苯甲酸 (ＰＮＢ)和噻吩 2 羧酸肼 (ＴＣＨ)培养基 ,取试验菌株菌悬液 (10 -2 /ｍｌ) 0 1ｍｌ接种 ,37℃…     

结核分支杆菌利福平及利福喷丁平行药敏测试87株结果分析

1　材料和方法1 1　菌株来源　 87株菌株均为本院肺结核病人痰分支杆菌培养所获。药敏接种菌液质量浓度为 (分数 ) 10 4 ｍｇ/Ｌ。1 2　试验药　利福平 (ＲＦＰ)原药由卫生部结核病控制中心参比实验室提供 ,利福喷丁 (ＲＦＴ)原药由中国国家医药管理局四川抗菌素工业研究所制药厂提供。试验药物质量浓度 (ｍｇ/Ｌ) :ＲＦＰ :5 0、2 5 0 ;ＲＦＴ :2 5、12 5。1 3　质控菌株　 1998年ＷＨＯ药敏质控敏感菌株 (卫生部结核病控制中心参比室提供 ,菌株号 9814)。1 4　方法　罗氏绝对浓度间接法 ,其培养基制作、操作及结果判断均按中国防痨协会编…     

采用16S rRNA序列分析法鉴定非结核分支杆菌

对第四次全国结核病流行病学抽样调查获得的经生化鉴定为非结核分支杆菌的 49株菌株进行了 16ＳｒＲＮＡ序列分析法鉴定 ,并与生化法进行了比较。材料与方法　菌株 :牛分支杆菌 (ＡＴＣＣ 192 10 ) ,偶然分支杆菌 (ＡＴＣＣ6841) ,标准菌株胞内分支杆菌 (ＡＴＣＣ 3 5 772 ) ,不产色分支杆菌 (ＤＳＭ 44 164 ) ,瘰疬分支杆菌 (ＤＳＭ 43 992 )均由国家结核病参比实验室提供。获取方法 :参照《第四次全国结核病流行病学抽样调查工作手册 (修订本 )》。聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增 16ＳｒＲＮＡ的片段 :取罗氏培养基培养的非结核分支杆菌 ,灭活…     

利福平耐药性发生过程中,结核分支杆菌DNA指纹图谱无改变

耐药性结核病已成为一个严重的公共卫生问题。利福平耐药性可能是由于分支杆菌RNA聚合酶突变所致。病人获得利福平耐药性的机理可能有三种:(1)由耐药菌引起的感染;(2) 在毒力较强的野生型菌存在的同时,一小群仍处于遏制中的耐药菌的选择;(3)原来感染菌群内的突变。本研究连续收集治疗过程中发生利福平耐药性的2例病人的结核分支杆菌分离菌株。一例病人由于HIV感染而免疫抑制,另一例病人原来分离菌株对异烟肼也耐药。应用DNA指纹技术对分离菌株分型,显示耐药性发生前后的分离菌株之间DNA图谱无差别。这些资料表明,这2例病人获得利福平耐药性是由于上述第三机理。     

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系，这有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究     

133株分支杆菌Ⅰ级分型结果报告

分支杆菌菌型鉴定方法甚多,一般采用几种试验结果综合分析,我们采用以TCH为主,结合PNB、硝酸还原试验等,可同时完成分支杆菌的Ⅰ级分型,结果满意。一、材料和方法 1.分型菌株为本省1990年流调所分离的133株,标准菌株由北京市结核病研究所提供。 2.试验方法及培养基的制备,按《结核病试验操作规程》。二、结果和分析应用TCH、PNB等试验对133株分支杆菌Ⅰ级分型,结果人型结核菌107株     

耐多药结核病的研究及进展

发现结核病已经 10 0多年 ,对其研究、控制、治疗的成功使人们曾乐观地预言本世纪末即将消灭结核病。近 2 0年在美国及工业化国家结核病曾平均以每年 6 %速度下降[1] ,使之成为罕见病。但是 80年代末期艾滋病 (ＡＩＤＳ)的流行使结核病猛然复活 ,如今世界上有 1/ 3的人感染了结核分支杆菌 ,每年有 80 0万新患者出现 ,30 0万人死于结核病 ,同时结核分支杆菌耐药菌株持续增加。据统计 ,世界上有 5 0 0 0万人携带结核分支杆菌耐药菌株 ,美国约有 13%的新患者至少耐受 1种以上抗结核药 ,3 2 %耐异烟肼 (ＩＮＨ)和利福平(ＲＦＰ) ,后者即为耐多药…     

DNA序列分析与PCR—SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的 了解DNA序列分析与PCR—SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR—SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株25株、耐药株41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变，41株耐利福平株中38株发生突变，突变率为92．7％(38／41)；25株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR—SSCP带型与对照H37Rv株相同，41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株，提示有突变存在。与DNA序列分析相比，PCR—SSCP检测准确率为93．9％(62／66)，敏感度为92．1％(35／38)；特异度是96．4％(27／28)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值；PCR—SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。     

DNA序列分析与PCR-SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的　了解DNA序列分析与PCR-SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR-SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株 25株、耐药株 41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。 结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变,41株耐利福平株中 38株发生突变,突变率为 92.7% (38/41);25株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR-SSCP带型与对照H₃₇R_v株相同,41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株,提示有突变存在。与DNA序列分析相比,PCR-SSCP检测准确率为 93.9% (62/66),敏感度为 92.1% (35/38);特异度是 96.4% (27/28)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值;PCR-SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。     

DNA序列分析与PCR—SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的 了解DNA序列分析与PCR－SSCP两种方法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR－SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株25株，耐药株41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变，41株耐利福平株中38株发生突变，突变率为92.7%(38/41)；25株利平敏感的结核分支杆菌菌株PCR－SSCP带型与对照H37Rv相同，41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP型带不同对照株，提示有突变存在。与DNA序列分析相比，PCR－SSCP检测准确率为93.9%（62／66），敏感度为92.1%(35/38)，特异度是96.4%(27/28)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值。PCR－SSCP可用于初步筛选对利福平耐药的结核分支杆菌。     

应用多重聚合酶链反应技术快速鉴定牛分支杆菌卡介苗株

目的 建立快速鉴定牛分支杆菌卡介苗(BCG)菌株的方法。方法 依据最近研究发现的牛分支杆菌BCG菌株不存在命名为缺失区1(deleted region 1，RD1)的基因区，而其他牛分支杆菌菌株和其他结核分支杆菌复合群(MTC)菌种(结核分支杆菌、非洲分支杆菌和田鼠分支杆菌)存在RD1基因区的遗传学信息，应用多重聚合酶链反应(PCR)检测RD1基因区存在与否，以鉴别BCG菌株与其他牛分支杆菌菌株及其他MTC菌种。结果 所试5株BCG疫苗生产用标准菌株和近期国内发生的1例小儿BCG接种后全身播散性感染致死病例的2株BCG分离菌株，均缺失RD1基因区；其他牛分支杆菌菌株，包括3株牛分支杆菌标准菌株、5株分别从结核病牛或鹿分离的牛分支杆菌菌株，1株从结核病患痰标本分离的牛分支杆菌菌株，以及其他MTC菌种，包括结核分支杆菌H37Rv和H37Ra标准菌株、48株从结核病患痰标本分离的结核分支杆菌菌株、3株非洲分支杆菌标准菌株，均存在RD1区。结论子多重PCR技术用于牛分支杆菌BCG菌株的鉴定简便、快速、特异，适于在临床实验室应用。     

结核分支村菌耐药分子机制及快速检测的研究

目的：研究结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药的分子机制，探索快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性的分子生物学方法。方法：应用聚合酶反应－单链构象多态性（PCR-SSCP）检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药株与katG基因、rpoB基因突变。结果：46株结核分支杆菌临床分离株均未发现katG基因序列的缺失，30株异烟肼耐药株中，17株检测到katG基因突变，耐药株中katG基因的突变率为57％；87株结核分支杆菌利福平耐药临床分离株的PCR－SSCP结果显示，所有39株利福平敏感菌无突变检出，48株利福平耐药菌中，36株高度利福平耐药菌和7株低度利福平耐药菌检测量到rpoB基因突变；利福平耐药株中rpoB基因的突变检出率为89．6％。结论：证实katG和rpoB基因突变分别是结核分支杆菌异烟肼和利福平耐的主要分子机制。应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）可快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性。     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

青海省200株分支杆菌菌株的菌型鉴定

鉴于青海省未报道过任何有关分支杆菌菌型鉴定的资料,我们先后在西宁地区、民和、乐部、循化、化隆、湟中、湟源等县收集痰标本进行培养,对分离到的200株分支杆菌菌株进行了菌型鉴定。我们按1984年全国结核菌检验规程的方法,选择了以下12个项目综合分析进行鉴定:①生长温度。②生长速度。③菌落形态。④照光试验。⑤鉴别培养基:     

结核分支杆菌利用福平药物敏感性的直接快速检测

探讨利用分子生物 学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段）,运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法,检测４５株结核分支杆菌临床分离株,对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析,运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患痰标本进行直接快速检测,并与药敏试验结果做对照分     

依赖利福平结核分支杆菌在无利福平条件下的生长情况研究

目的 探讨依赖利福平结核分支杆菌（依R菌）在无R条件下的生长情况。方法 取初步研究的典型依R菌株，挑取最佳R浓度管中的单个菌落，制备10^-4mg/ml菌液，分别接种于L－J和12B液体培养基，37℃培养；对比观察不同试验管细菌的生长速度、特点以及光镜、电镜下的菌体形态。结果 L－J培养有R管2周可见菌落，无R管3周才见到细小菌落；12B液体培养，前者9天获得阳性指数，后者需13天。有R管中菌落生长粗大、凸起、花菜样、易刮取和乳化；无R管中菌落生长细小、扁平、荷包蛋样、不易刮取和乳化。光镜下有R管菌体粗大、深染；无R管菌体细小、浅染，且大小不等。透射电镜下有R管菌体细胞壁完整，无R管菌体细胞壁缺陷。结论 依R菌在无R条件下可呈细胞L型样改变。     

耐利福平核分支杆菌耐药分子机制的研究

目的 研究中国五省、市部分耐利福平（ＲＦＰ）或含ＲＦＰ的耐多药结核分支杆菌临床分离株ｒｐｏＢ基因突变的情况及抽提鉴定是否含有质粒,为评价耐ＲＦＰ的分子机制,进而为结核病基础和临床研究提供分子遗传学依据。方法 采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,对来自河南省、河北省、安徽省、北京市、上海市２６２株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株７４株,耐ＲＦＰ或含ＲＦＰ耐多药株１８８株）ｒｐｏＢ基因突变的发生率进行研究;同时,对７６株结核发支杆菌临床分离株按碱性溶菌法抽提分离并鉴定是否含有质粒。结果中国五省、市的部分耐ＲＦＰ或含ＲＦＰ耐多药结核分支杆菌临床分离株ｒｐｏＢ基因突变的发生率平均为９２％,而各地分别为：河南省９０％,河北省９１％,北京市９１％,上海市９２％,经统计学处理,五省、市之间差异无显性意义（ｘ＾２＝０．４２,Ｐ〉０     

吉林省结核分枝杆菌对利福平耐药状况分析

目的完善吉林省结核病耐药监测网络,获得国际可比性的结核病耐利福平资料,评价现行结核病控制策略的效果。方法按照WHO/IUATLD的标准,采用100%诊断中心抽样方法,对所分离培养阳性菌株进行菌型鉴定及利福平(RFP)药物敏感性测试。结果收集到可供分析的结核分枝杆菌分离株1 772株,利福平的耐药率为16.70%;其中来自初治涂阳肺结核患者的菌株为1 175株(66.14%),利福平耐药率为10.47%;来自复治涂阳肺结核患者的菌株597株(33.69%),利福平耐药率为16.70%。结论吉林省结核病利福平耐药率高于全国平均水平,今后要进一步加强耐药结核病的防治工作。     

结核分支杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的测序分析

乙胺丁醇 (EMB)是具有广谱抗分支杆菌活性的一线抗结核合成药物 ,被广泛应用于结核分支杆菌、鸟分支杆菌和堪萨斯分支杆菌等多种非结核分支杆菌的治疗。近年来 ,EMB在原发和复发结核病患者中的耐药率有上升趋势[1],我们应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)银染技术和PCR 自动测序法对结核分支杆菌embB基因进行了检测 ,以探讨建立直接快速检测结核分支杆菌EMB药物敏感性的实验方法。材料与方法　结核分支杆菌H3 7Rv标准株来源于中国药品生物制品鉴定所 ;48株结核分支杆菌分离株来源于河南省结核病耐药检测收集的菌株 ,其中…