日本血吸虫尾蚴经口腔粘膜感染小鼠的可行性研究

在寄生虫学与寄生虫病的科学研究与教学活动中 ,经常使用家兔和小鼠作为血吸虫病的动物模型 ,过去通常用经腹壁皮肤或经腹腔注射尾蚴的方法感染动物。经查阅NationalLibraryofMedicine、中国期刊网CNKI数字图书馆及维普资讯镜像站中刊数据库检索系统 ,尚未见尾蚴经口腔粘膜感染动物方法的相关文献报道。本实验进行了经口腔粘膜感染的可行性研究。1　材料与方法1.1　日本血吸虫尾蚴　阳性钉螺由湖南省寄生虫病防治研究所提供 ,以 2～ 4只 /管分别放入指管内 ,管内注满冷开水 ,置于2 5℃有光照的温箱内孵育 4～ 8h ,待尾蚴逸出后备用。1.2…     

南京市大规模灭螺后长江水体血吸虫尾蚴监测

目的 通过投放哨鼠监测长江南京段水体血吸虫尾蚴情况,对南京市经过3年大规模灭螺后的效果进行评价.方法 在长江南京段的上、中、下游各选择4个点,每1个点投放哨鼠30只,在7、8、9三个月的大潮时各投放1次.投放后,次日收回,饲养35d后解剖观察感染血吸虫情况.结果 3次共投放哨鼠1 080只,收回623只,解剖502只,均为阴性.结论 在全程督导下的大规模灭螺效果明显,对血吸虫病的疫情控制有促进作用.     

珊瑚姜霜防止日本血吸虫尾蚴感染的实验研究

目的 观察珊瑚姜霜阻止日本血吸虫尾蚴侵入皮肤的效果。方法 在小鼠裸腹上涂不同浓度珊瑚姜霜后，先在泥水中爬8h模拟下水作业，然后再经腹部感染日本血吸虫尾蚴，35d后剖杀，用灌注法加撕碎法查找成虫，计算减虫率。结果 5％珊瑚姜霜减虫率为91％，与对照组相比差异有显著性（P＜0．01）。结论 珊瑚姜是一种可预防血吸虫尾蚴感染的中草药。     

致弱尾蚴感染血清对日本血吸虫尾蚴和成虫抗原免疫识别初步研究

<正> 众所周知,血吸虫减毒尾蚴可诱导宿主产生较高免疫保护力,但是,刺激宿主免疫系统的究竟是哪些目标抗原,目前仍未定论。血清被动转移实验证明减毒尾坳多次免疫后血清可诱导宿主产生针对幼虫期的免疫保护,因此我们用多次免疫兔血清初步筛选日本血吸虫可溶性尾蚴中的保护性抗原,以期为血吸虫疫苗的研制提供一些新的线索。     

水温对日本血吸虫尾蚴的逸出及其感染力的影响

目的实验观察水温对日本血吸虫尾蚴的逸出及其感染力的影响.方法将一定量感染性钉螺分别置于1、5、10、15、20、25、30、35℃和40℃水中逸蚴4 h,观察各水温组钉螺逸蚴率和逸蚴量;将一定量尾蚴分别移入1、10、20、30℃和40℃水中,后采用接触法感染小鼠30 min,观察各水温组鼠感染率和虫负荷.结果在温度为1～40℃的水体中,云南和江苏感染性钉螺均能逸出尾蚴,其中云南螺逸蚴的最适水温为20～35℃,江苏钉螺则为15～35℃.在温度为1～40℃水中,江苏虫株尾蚴对各水温组鼠的感染率均为100.0%,云南虫株尾蚴对各水温组鼠的感染率均＞83.3%.结论在温度为1～40℃的水体中,日本血吸虫尾蚴均能从感染性钉螺中逸出并能感染终宿主;提示冬季人畜接触有感染性钉螺存在的滩块附近的水体仍有被血吸虫感染的危险.     

曼氏血吸虫尾蚴存活率和感染力与尾蚴蚴龄的关系

实验研究发现血吸虫尾蚴白天从螺逸出，中午是高峰，晚上没有明显的逸出，尾蚴的存活率和感染率呈进行性下降。这一发现有助于了解一天(24小时)中人接触疫水受感染的危险度，为更贴近自然感染环境，研究人员对曼氏血吸虫尾蚴逸出后感染人类皮肤的情况进行了研究。     

日本血吸虫尾蚴体表扫描电镜观察

目的观察日本血吸虫尾蚴体表结构.方法阳性钉螺逸出的尾蚴固定在4%戊二醛溶液中1～3 d.固定的标本按扫描电镜（SEM）要求,清洗、固定、脱水、干燥、镀金,用SX-40型SEM进行观察.结果尾蚴小棘几乎布满全身.尾体顶端的头器有两排隆起的围褶,中央为钻腺开口.围褶外围有无鞘的单纤毛乳突.腹吸盘位于体部的后1/3处,有尖刀状棘.尾干小棘比体部小棘长、少且不均匀.尾叉的棘较少,分布不均匀.尾叉的末端各有一个长约3.6 μm、直径3.2 μm的圆柱状尾突,中央均可见一个近似圆形、孔径约0.8 μm的排泄孔.结论观察到了小棘几乎布满全身的日本血吸虫尾蚴体表结构.观察并测量了尾叉末端尾突排泄孔.     

日本血吸虫尾蚴经不同途径和方式感染的研究

目的探讨尾蚴经IMDM悬液皮下注射和肌肉注射感染动物建立动物模型的可行性.方法22只昆明小鼠随机分为3组:A组经IMDM悬液皮下注射感染尾蚴,B组经IMDM悬液肌肉注射感染尾蚴,C组经典玻片贴皮感染尾蚴.45 d后剖杀检查成虫数目,并用间接ELISA法测定小鼠感染后第15、45天体内的抗血吸虫IgG抗体水平.结果45 d杀鼠后,A组成虫回收率为39.2%(P＜0.05),B组为32.3%(P＜0.05),C组为72.8%.感染后第45天A、B两组与C组小鼠体内IgG水平差异无显著性(P＞0.05).结论尾蚴经皮下、肌肉注射感染小鼠成功,其感染率均为100%.但与经典玻片贴皮感染动物在回收率方面仍有一定差距.     

日本血吸虫尾蚴不同途径感染家兔的实验观察

将血吸虫尾蚴经兔腹背部皮肤和眼睑结膜感染家兔，获虫率分别为59．60％、58．40％和55．20％。     

日本血吸虫尾蚴细胞的传代培养及抗原性检测

目的 探索体外培养日本血吸虫尾蚴细胞的增殖与传代技术。 方法 无菌收集日本血吸虫活尾蚴5 000～10 000条,置于含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中,用组织刀快速割切尾蚴使成组织碎裂物,加入250 U蟹胶原酶在26℃下孵育30 min,然后离心去酶,加入含有青霉素(100 U/ml)、链霉素(O.1 mg/ml)、两性霉素B(0.25μg/ml)和适量促细胞生长物的RPMI 1640改良培养基中作原代培养,当贴壁细胞增殖长满瓶底时,以1:2的接种率进行传代培养;获取第5代培养细胞作ELISA检测血吸虫病患者血清中抗体。 结果 在原代培养的第3天可见尾蚴组织的周围有呈单个存在或索状排列的发亮细胞,第10天可见单层细胞形成,第14天贴壁细胞长满瓶底并作传代培养;在传代培养中可见细胞呈均匀生长,每7～14 d传代一次;用第5代培养细胞作抗原,检测31例患者的阳性率为90.3％,检测30名正常人血清的假阳性率为6.7％。 结论 日本血吸虫尾蚴细胞体外传代培养至第5代,可用于免疫学研究。     

不同工艺提取麻疯树籽油及其杀灭血吸虫尾蚴效果

目的 目的 观察不同工艺提取的麻疯树籽油杀灭血吸虫尾蚴的效果, 以筛选制备麻疯树籽油的最佳工艺及配方。方 方 法 法 采用6种不同工艺提取的麻疯树籽油, 进行杀灭血吸虫尾蚴即时接触试验。采用麻疯树籽油及其与不同添加剂制成 的制剂, 进行昆明小鼠血吸虫尾蚴即时接触感染试验, 观察其抗血吸虫感染的减虫率。结果 结果 95%乙醇回流、 料液比1∶8、 2 h提取工艺出油率达30.7%。即时接触试验6种麻疯树籽油30 min内将尾蚴全部杀灭。即时接触感染试验麻风树籽油原 液减虫率达70.97%, 添加苯甲酸苄酯减虫率为58.87%, 单一添加月桂氮酮减虫率达77.42%, 添加苯甲酸苄酯、 邻苯二甲酸 二丁酯、 月桂氮酮减虫率达100%。结论 结论 95%乙醇回流、 料液比1∶8、 2 h提取工艺为麻疯树籽油最佳提取工艺。麻疯树籽 油有较好的血吸虫尾蚴杀灭作用。     

日本血吸虫尾蚴弹性蛋白酶结构的生物信息学分析

目的分析日本血吸虫尾蚴弹性蛋白酶（SjCE）的结构,为药物靶标、疫苗研究提供参考。方法用Prot-param、SignalP、DNAMAN、SOSUI、Emini、BepiPred、MLRC、Geno3d等软件对SjCE的蛋白质理化参数、亲水性、可溶性、表面可及性、二级结构、三级结构、抗原表位等进行分析及预测。结果 SjCE由263个氨基酸残基组成,理论分子质量单位为28.5 ku,等电点为6.94,属于可溶蛋白;有6个表面可及性区域;BepiPred 1.0 Server预测有7个抗原表位;二级结构以无规则卷曲为主;三级结构分子建模显示,该蛋白含有丝氨酸蛋白酶活性部位,位于裂隙区的中间。结论 SjCE具有丝氨酸蛋白酶活性位点,是可溶性蛋白。该蛋白有6个潜在的抗原表位,是潜在的疫苗候选分子和药物作用靶标。     

血水草生物碱杀螺、灭蚴作用的研究

目的研究血水草生物碱(ECA)杀灭钉螺及日本血吸虫尾蚴的作用。方法观察实验室及现场浸泡杀螺效果;钉螺接触药物上爬情况;浸泡杀螺卵效果;浸杀尾蚴防护血吸虫感染的作用。结果浸泡72h钉螺死亡率100％的血水草生物碱溶液的浓度及温度分别为:1.25mg/L,30℃;2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L均为25℃。水温 26℃～28℃现场灭螺10mg/L,72h钉螺死亡率84％;20 mg/L,72h死亡率达92％。5mg/L溶液螺卵浸泡72h孵出率为0％～10％。5mg/L ECA溶液明显抑制钉螺上爬,20mg/L时钉螺静止不动。结论血水草有杀灭钉螺、螺卵及日本血吸虫尾蚴的作用,是一种有研究前景的植物杀螺、灭蚴剂。     

照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库

目的从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中获得日本血吸虫新的蛋白编码基因,为防治血吸虫病提供候选疫苗和治疗药物靶点.方法制备致弱尾蚴免疫兔血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,挑取阳性克隆,测序并进行生物信息学分析.结果共筛选出8个阳性克隆,长度分布于0.6～3.0kb.随机选取4个阳性克隆进行PCR扩增及测序,获得2个日本血吸虫新基因:整合酶相似蛋白编码基因和蛋白磷酸酶1催化亚单位编码基因.前者长度为636 bp,含一个462 bp完整开放阅读框(ORF);后者1 879 bp,含一个984 bp完整ORF.两者GenBank的登录号分别为:AY855919、AY879341.结论致弱尾蚴免疫兔血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针;发现了2个日本血吸虫新基因.     

防蚴润肤霜防御日本血吸虫尾蚴感染的研究

目的：实验评价新型少肤防护剂一防蚴润夫霜防御日本血吸虫尾蚴感染的效果，并了解其对皮肤的急性刺激反应。方法：采用模拟现场试验方法，分别在小白鼠腹部和尾部涂布防蚴润肤霜，并经泥水浸泡洗刷4-8h后接种日本血吸虫尾蚴，饲养40d解剖小鼠观察感染情况。以小鼠感染率、平均虫荷数和减虫率为评价指标，同时进行皮肤急性刺激试验。结果：防蚴润肤霜涂布小鼠腹部、尾部后减虫率达100％；家兔皮肤急性刺激试验结果为阴性。结论：防蚴润肤霜涂布皮肤后4-8h具有完全防御日本血吸虫尾蚴感染的作用，对皮肤无刺激作用。     

血吸虫尾蚴鉴定与检测技术研究现状

在血吸虫病监测与预警等防治工作中开展血吸虫感染性水体的测定与识别研究,能够早发现、提示或预测血吸虫病流行区及潜在的感染高风险环境,最大程度防止人或动物感染,从而减少血吸虫病的发生。该文就血吸虫尾蚴鉴定与检测技术研究现状进行了综述。     

日本血吸虫保护性抗原模拟表位的筛选及其免疫保护作用的研究

目的在前期已建立日本血吸虫感染兔新模型的基础上,用该血清从噬菌体随机12肽库中筛选阳性单克隆噬菌体,并鉴定其诱导小鼠的免疫保护效果。方法通过给感染日本血吸虫家兔注射酚氧化酶抑制剂,抑制其体内日本血吸虫雌虫产卵,建立无虫卵肉芽肿的日本血吸虫感染动物新模型,用其血清筛选出阳性多克隆噬菌体,经与可溶性虫卵抗原(SEA)免疫兔血清充分吸附后,从中随机挑取14个单克隆分别纯化、扩增,用常规ELISA法检测阳性单克隆噬菌体的抗原性;挑选出与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性或弱阳性反应的单克隆噬菌体,按1×1015pfu/次剂量,0-2-4周方案,皮下多点注射免疫小鼠。末次免疫4周后,每鼠经腹部皮肤攻击感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染42d后观察减虫率及减卵率。结果所选14个单克隆噬菌体均能与新模型兔血清和常规感染模型兔血清反应,尤其是第8号和第13号2个克隆与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性反应;8号、13号单克隆噬菌体及原始噬菌体肽库免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为35.81%和63.32%、32.09%和52.02%、14.90%和30.64%。结论阳性多克隆噬菌体与SEA免疫兔血清免疫吸附后能去除大部分表达SEA抗原模拟表位的克隆,所选14个单克隆噬菌体均表达     

氯硝柳胺悬浮剂灭蚴和预防血吸虫感染的研究

目的了解氯硝柳胺悬浮剂(SCN)杀灭日本血吸虫尾蚴效果,寻找适宜杀蚴剂量,为制定预防血吸虫感染的防治策略提供依据。方法将SCN配制成氯硝柳胺有效浓度(W/W)分别为1×10-5、0.5×10-5、1×10-6、0.5×10-6、1×10-7、0.5×10-7溶液,测定SCN杀尾蚴的效果;配制氯硝柳胺有效浓度为1.2×10-5、1.2×10-6、1.2×10-7、1.2×10-8、1.2×10-9、1.2×10-10溶液,用接种环取日本血吸虫尾蚴200条,加入上述浓度的药液中,分别于0、10、30min后投入小鼠,感染30 min,感染后饲养45 d,解剖,观察小鼠感染情况;用SCN 0.02 g/m2分别喷入水体表面,1 h后用哨鼠法测定水体感染性。结果尾蚴接触氯硝柳胺有效浓度≥0.5×10-61 min 100%死亡,≥0.5×10-72 min100%死亡,≥1×10-830 min 100%死亡,<0.5×10-860 min全部存活。尾蚴接触氯硝柳胺有效浓度1.2×10-5,10、30min后小鼠无感染;接触1.2×10-6,10 min后小鼠80%感染,虫负荷为3.2条/只,接触30 min后鼠无感...     

日本血吸虫糖基诱导抗体类型与感染状态的关系研究

目的以日本血吸虫感染猪为模型,研究不同感染状态下针对糖基产生的抗体在宿主免疫应答中的作用。方法建立日本血吸虫感染猪模型,分别检测不同感染状态下猪血清中针对LNFPIII、N-糖苷水解酶F(PNGaseF)处理可溶性虫卵抗原(SEA)前后及过碘酸处理SEA前后的抗体水平。结果辐照致弱尾蚴单纯免疫组、正常尾蚴单纯感染组和免疫后予以感染的免疫攻击组的猪均针对LNFPIII产生了相应的IgM抗体应答。3组猪血清中针对PNGaseF处理SEA的特异性抗体IgG、IgM水平较未处理组略低,但抗体IgG和IgM水平差异均无统计学意义(P均0.05)。在单纯免疫组,猪血清中针对过碘酸处理SEA的特异性IgG、IgM、IgA抗体水平均较未处理组有所下降,差异有统计学意义(P均0.01),但辐照致弱日本血吸虫糖基成分所诱导的抗体水平均较低。在单纯感染组,猪血清中针对过碘酸处理SEA的抗体IgG、IgM水平在感染后第8周下降极为显著,抗体水平差异有统计学意义(P均0.01),其中糖基所诱导的抗体亚型以IgG1为主。此时,在虫负荷显著降低的免疫攻击组,日本血吸虫糖基成分能够显著增强IgG、IgM、IgA,特别是IgG2的表达。结论日本血吸虫糖基成分能够诱导宿主产生多种类型的抗体应答;且抗体亚型的表达与宿主的感染状态相关,即IgG1亚型的表达与日本血吸虫急性感染期的虫负荷和卵负荷一致;而具有免疫保护力的宿主能够针对日本血吸虫糖基成分产生IgG2应答。