内耳转基因表达的实验研究

目的 了解内耳转基因表达的可行性。方法 将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses，Ad，含大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因LacZ基因，Ad5．LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后，观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达(X-Gal染色)及Ad对豚鼠声反应(听性脑干反应)、听毛细胞(扫描电镜)的影响。结果 Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续4周，其中在螺旋神经节细胞表达稳定，Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应(≤8000Hz)造成明显的损伤，除耳蜗底回外，其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论 腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中，并且未对豚鼠声反应(低、中频)及听毛细胞造成明显损伤，这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。     

荧光测钙技术及其在内耳毛细胞研究中的应用

荧光测钙技术及其在内耳毛细胞研究中的应用韩维举１综述张素珍１苏振伦１审校钙离子在细胞的生命活动中起着重要的作用，它参与调节细胞功能，如肌肉收缩、细胞运动、递质合成与释放、信息传递、物质代谢等。Ｃａ２＋也是感觉细胞换能过程所必须的，在声刺激反应中，Ｃａ...     

内耳畸形的影像分类及相关基因研究北大核心CSCD

本文系统地综述了各种不同的内耳畸形分类方法,通过内耳畸形分类标准化的探索,完成对内耳畸形较为精准的分类,以准确有效地指导听觉植入实践。针对具有独特表型特征的内耳畸形耳聋亚群,综述了相关的耳聋基因检测和遗传学研究,为阐述各种内耳畸形的发生、发展和内在规律提供了一定的理论基础。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠内耳损伤的保护作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨白藜芦醇对糖尿病大鼠内耳损伤的保护作用及可能机制。方法健康SD大鼠60只,随机分成对照组、模型组、高剂量治疗组、低剂量治疗组,每组15只。模型组及高、低剂量治疗组大鼠先采用股静脉注射链脲佐菌素和高脂饮食建立糖尿病模型;然后高、低剂量治疗组大鼠分别给予100mg·kg^(-1)·d^(-1)、50mg·kg^(-1)·d^(-1)白藜芦醇灌胃,其余组均给予等量生理盐水灌胃,连续4个月;检测各组空腹血糖、血浆胆固醇及甘油三酯水平;检测内耳组织中超氧化物歧化酶、过氧化氢、丙二醛及过氧化氢酶等氧化应激指标水平;利用伊凡思蓝检测内耳血管通透性;免疫组化法和Western blot观察内耳组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)及耳蜗组织凋亡促进因子caspase-3、Bax及凋亡抑制因子Bcl-2等蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠内耳血管通透性明显增强,血糖、血脂水平显著上升,内耳组织超氧化物歧化酶和过氧化氢酶表达下降、而丙二醛及过氧化氢表达增加,VEGF、ICAM-1、caspase-3、Bax蛋白表达水平显著上调,Bcl-2表达水平明显下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与模型组比较,高、低剂量治疗组大鼠经白藜芦醇干预后,血管通透性明显减弱,血糖、血脂水平明显下降,内耳组织超氧化物歧化酶和过氧化氢酶表达上升,而丙二醛及过氧化氢表达减少,VEGF、ICAM-1、caspase-3、Bax蛋白表达水平显著下调,Bcl-2表达水平则明显上升,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论白藜芦醇可通过抗氧化应激、抑制VEGF和ICAM-1表达、抑制细胞凋亡等,对糖尿病大鼠内耳损伤起保护作用。     

褪黑激素对内耳损伤的保护作用及其机制

自然衰老、感染、过度声刺激(噪声、爆震声)、放射性损害以及耳毒性药物应用导致的内耳损伤均可引起不同程度的感音神经性听力下降.目前该机制尚不明确,可能与过度产生的氧自由基损伤耳蜗毛细胞致其凋亡有关.褪黑激素(melatonin,MLT)作为体内最强的抗氧化剂,在保护内耳损伤方面具有不可忽视的作用.本文将从MLT合成、分布及代谢、MLT在内耳损伤中的保护作用、MLT保护内耳损伤的机制、MLT疗效与剂量相关性及MLT的安全性等方面进行综述,希望为更多内耳损伤的治疗提供参考.     

生长因子在内耳发育中的作用

生长因子(growthfactor,GF)是体内一种与 细胞生长、分化、胚胎发育、炎症及组织修复有关的 多肽,它可由体内许多细胞产生,与细胞表面受体 结合最终导致细胞内RNA和蛋白质合成方式的改 变,具有重要的生理、病理及治疗作用。本文就GF 在内耳发育中的作用作一综述。 1　碱性成纤维细胞GF与内耳发育 碱性成纤维细胞GF(basicfibroblastgrowth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子(FGF)家族 的主要成员,在中胚层和神经外胚层的许多组织和 细胞中广泛分布着bFGF受体,bFGF与受体结合 后进行一系列生理调控:促血管生成、组织修复、神 …     

L型电压门控钙通道α1D亚基在内耳毛细胞的分布及在听力中的作用

目的探讨L型电压门控钙通道α1D亚基在内耳毛细胞的分布及在听力中的作用。方法应用免疫细胞化学荧光标记观察L型电压门控钙通道α1D亚基在牛蛙毛细胞上的分布;利用听性脑干反应(ABR)检测携带不同L型电压门控钙通道α1D基因型(α1D / 、α1D /-和α1D-/-)小鼠的听力。结果L型电压门控钙通道α1D亚基主要密集分布于毛细胞侧膜和顶膜,在毛细胞的胞核区域和纤毛丛处没有阳性荧光染色。三种α1D基因型小鼠的ABR检测结果显示,α1D / 野生型小鼠的短声反应阈正常,为34.8±5.7dBSPL;α1D /-杂合子小鼠反应阈高于同窝生α1D / 野生型小鼠,为54.4±12.4dBSPL;α1D-/-小鼠呈现全聋,ABR在100dBSPL时仍无反应。结论L型电压门控钙通道的α1D亚基分布在牛蛙毛细胞的侧膜和顶膜,在内耳的听觉生理中具有重要作用。L型电压门控钙通道α1D亚基缺失或是数量的减少均可以影响小鼠听力。     

碱性成纤维细胞生长因子在内耳的生物学作用

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是多种细胞的促分裂剂，具有广泛的生理功能。bFGF对耳毒性药物或噪声引起的耳蜗毛细胞损伤具有保护作用，还能促进内耳损伤神经元的修复。本就bFGF的生化特性及作用机制，在内耳中的分布，以及在内耳发育、毛细胞再生等方面的作用加以综述。     

阿米卡星对小鼠内耳水通道蛋白4表达的影响北大核心CSCD

目的观察阿米卡星对小鼠内耳水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)表达的影响,探讨AQP4在阿米卡星耳毒性机制中的可能作用。方法 60只CBA/CaJ小鼠随机分为实验组和对照组,每组30只,实验组小鼠皮下注射阿米卡星450mg·kg-1·d-1,每天1次,共14d,对照组小鼠皮下注射等量生理盐水。注射4天后应用免疫组化染色分别检测两组小鼠耳蜗AQP4的表达及定位情况,应用蛋白免疫印迹技术及RT-PCR技术检测两组小鼠内耳AQP4表达水平的变化。结果 AQP4在小鼠内耳表达于Corti器的支持细胞。对照组和实验组的AQP4蛋白相对含量分别为0.672±0.074、0.479±0.108,AQP4mRNA相对含量分别为0.701±0.107、0.460±0.080,实验组AQP4的蛋白及mRNA的相对含量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿米卡星可导致小鼠内耳AQP4蛋白及基因表达的下调,这可能是阿米卡星耳毒性的机制之一。     

经鼓阶胚胎干细胞内耳导入的初步观察

目的观察未经体外诱导的胚胎十细胞（embyonic stem cells,ESC）导入听力正常大鼠内耳的可行性以及导入后的存活和分布情况,为ESC内耳移植治疗由毛细胞缺失导致的感音神经性耳聋提供实验基础和理论依据。方法5—6周龄Wistar大鼠,10只,右耳为实验耳：经鼓阶打孔法植入带有绿色荧光蛋白（EGFP）的ESCs;左耳为对照组,不实施手术。术前1周与术后即刻行听性脑干反应（ABR）检查,取双侧耳蜗做冰冻切片,观察ESCs植入内耳后存活和分布情况。结果术后动物存活8只,麻醉效果好无干扰完整测完ABR动物5只。鼓阶打孔途径导入耳蜗的ESCs大部分于鼓阶聚集悬浮,少数可在鼓阶基底膜嵴和鼓阶外侧壁处贴壁;未在柯替器等中阶部位巾发现有ESCs的分布。ABR检测结果显示鼓阶打孔途径导入方法对大鼠听力影响较小。结论胚胎干细胞可经耳蜗底转鼓阶打孔途径导入耳蜗。干细胞在内耳成功存活,并且对内耳损伤小,因此。它可以作为内耳细胞移植的重要方式。     

哺乳类内耳毛细胞的发育和再生研究的最新进展

哺乳类内耳的形态生成和毛细胞的产生是由局部的细胞问相互影响及特异的基因所调控。尤其是特别的“碱性螺旋-环-螺旋”(basic helix—loop-helix，bHLH)基因转录调控因子对于毛细胞的分化是至关重要的。例如果蝇atonal的鼠类同源基因Mathl已被证明是毛细胞分化的一个正向调控因子，而Hes1和Hes5则起着负向调控的作用。这些bHLH     

鸡内耳毛细胞标志物的比较研究

目的：为研究内耳毛细胞发育和再生提供有价值的标志物。方法：新生鸡内耳冷冻切片,间接免疫荧光细胞化学技术染色毛细胞抗原（HCA）、Espin和肌浆球蛋白7a基因,观察上述基因在毛细胞中的表达部位和强度。结果：HCA、Espin和肌浆球蛋白7a在听毛细胞和前庭毛细胞均表达;HCA染色毛细胞顶部和纤毛,Espin染色毛细胞纤毛和皮板,肌浆球蛋白7a为典型的细胞质染色。结论：HCA、Espin和肌浆球蛋白7a基因是研究毛细胞发育和再生的理想标志物,结合肌动蛋白-F染色毛细胞纤毛可以更好地定性和定量研究内耳毛细胞发育和再生。     

巨噬细胞在正常及受损耳蜗中的表型研究综述北大核心CSCD

临床上已经有文献报道,噪音暴露、耳毒性药物、人工耳蜗植入、衰老等因素会引起耳蜗的急性炎症或慢性退化。巨噬细胞作为耳蜗内主要的免疫细胞,参与耳蜗的发育成熟过程,并在耳蜗急慢性损伤后发挥它的免疫功能。本文主要综述耳蜗巨噬细胞在急性炎症和衰老状态下的分布表型,并分析其在耳蜗急慢性炎症中动态变化,为临床耳蜗炎症治疗提供一种新思路。     

鼻息肉基因芯片检测及其基因表达谱的研究

目的:运用基因芯片技术检测鼻息肉组织的基因表达谱,并通过分析基因的差异表达探讨相关基因在鼻息肉发病机制中的作用.方法:抽提6组鼻息肉和下鼻甲组织的总RNA,逆转录成cDNA,并分别用cy5和cy3标记制备成杂交探针,每组杂交探针与含有人类常见基因的BiostarH-40 s基因芯片杂交,用扫描仪扫描芯片荧光信号图像,并用软件对扫描图像进行数字化处理和分析.结果:鼻息肉组织基因表达谱中差异表达的基因共1887条,其中上调基因1099条,下调基因788条;6张芯片共同的差异基因6条,其中上调基因4条,下调基因2条.在差异表达的基因中,主要包括编码横跨膜4超家族蛋白、IFN-γ诱导蛋白IP-30前体、补体因子前体、胰岛素生长因子结合蛋白的基因.结论:检测鼻息肉基因表达谱中差异表达基因为研究鼻息肉的发病机制提供了分子生物学的线索和方法,鼻息肉为多基因调控,其中IFN-γ诱导蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白等基因可能在鼻息肉发病中起重要作用.     

SOX10基因在内耳发育中的作用

SOX10基因(性别决定区盒基因,SRY-box 10)是调控神经嵴发育的关键转录因子。人类SOX10基因突变会导致神经嵴性疾病,如以耳聋及色素异常为主要表型的Waardenburg综合征。近年来发现SOX10在内耳发育早期即广泛表达于耳板及耳囊,且其突变可导致不同程度内耳畸形。本文重点讨论SOX10基因在内耳发育时期的动态表达,及其在内耳发育中的重要作用。     

几种神经肽在内耳中的分布和作用

血管活性肠肽（VIP）、神经性一氧化氮合酶(nNOS）、神经肽Y（NPY）、P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）等神经肽物质具有血管收缩、舒张或者神经调质作用。近年来，对神经肽与内耳的关系有了深入研究，本文就神经肽的结构和作用以及在内耳中的分布和作用予以综述。     

前庭神经炎患者内耳3D-FLAIR MRI特点与前庭功能相关性分析北大核心CSCD

目的初步研究前庭神经炎(VN)患者内耳三维快速液体衰减反转恢复磁共振成像(3D-FLAIR MRI)特点,探讨VN可能的发病部位,同时与前庭功能结合进行相关性分析。方法收集山东大学山东省耳鼻喉医院眩晕疾病科2019年12月至2020年10月收治的36例VN患者的临床资料,其中男18例,女18例;年龄25~71岁,平均44.1岁;均为单侧发病,患侧为左耳17例,右耳19例。根据内耳3D-FLAIR MRI结果分为强化组及非强化组(健侧作为正常对照组),比较2组患者前庭功能检查结果,应用SPSS 19.0软件进行统计学处理,分析患者前庭功能与内耳3D-FLAIR特点的关系。结果36例中发现3D-FLAIR异常强化31例(86.1%),其中前庭神经及前庭终器同时强化14例,单纯前庭上神经强化8例,单纯前庭终器强化7例,单纯耳蜗强化2例。观察前庭神经异常强化显示:前庭上神经强化21例,前庭上、下神经强化1例。5例内耳3D-FLAIR未见异常。根据前庭功能结果分析显示全前庭神经受累19例(52.8%),单纯前庭上神经受累16例(44.4%),单纯前庭下神经受累1例(2.8%)。内耳3D-FLAIR强化组31例患者半规管轻瘫值60.81±3.49,非强化组5例患者半规管轻瘫值34.12±7.37,差异有统计学意义(t=-2.898,P<0.01)。结论内耳3D-FLAIR MRI可以为临床提供可视的影像证据,考虑VN的病变部位不仅在前庭神经,还包括前庭终器。内耳3D FLAIR异常强化的患者其前庭功能损伤更显著。     

人脂肪源性间充质干细胞向内耳毛细胞定向诱导分化的实验研究

目的 验证在体外将人脂肪源性间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymalstem cells,hAD-MSC)定向分化为内耳毛细胞的可行性.方法 用特定的培养体系配合多种细胞因子定向诱导hAD-MSC向神经干/祖细胞样细胞分化,而后进一步将诱导后细胞与发育期鸡胚听泡细胞在体外进行共培养,以促使其向内耳毛细胞分化,通过免疫组化等方法对分化不同阶段的细胞特异性指标进行鉴定.结果 hAD-MSC诱导后呈现神经干/祖细胞样的形态并表达其特异性标志,与发育期鸡胚听泡细胞共培养后表达内耳毛细胞特异性标志.结论 hAD-MSC在体外可定向诱导分化为具有内耳毛细胞特异性标志的毛细胞样细胞.     

粘附分子在内耳的分布与作用

粘附分子是一种有重要功能的膜表面蛋白,是近年来细胞生物学研究的一个热点。本文较详实地复习了各种粘附分子在内耳中的分布与可能的功能。