三氧化二砷对胃癌细胞凋亡与自噬的影响北大核心CSCD

目的探讨三氧化二砷对HGC-27胃癌细胞凋亡与自噬的影响,联用自噬抑制剂氯喹后进一步观察三氧化二砷的抗癌作用。方法取对数生长期的HGC-27胃癌细胞,分为对照组(正常培养的细胞)、不同浓度实验组(三氧化二砷浓度为2,4,8,16μmol·L-1)、氯喹组(氯喹6.25μg·ml-1)、联合用药组(三氧化二砷4μmol·L-1+氯喹6.25μg·mL-1)。以噻唑蓝(MTT)法检测三氧化二砷对HGC-27胃癌细胞的影响,以Annexin V-FITC/PI双染法检测药物对胃癌细胞凋亡的影响,以透视电镜观察胃癌细胞的结构,以Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,以蛋白质印迹(Western Blot)法检测凋亡与自噬相关蛋白。结果药物干预48 h, 2,4,8,16μmol·L-1实验组HGC-27胃癌细胞抑制率分别为(68.40±0.18)%,(61.33±0.39)%,(29.35±1.28)%,(6.00±0.72)%,氯喹组与联合用药组细胞抑制率分别为(87.57±4.22)%,(31.13±1.39)%;药物干预48 h,对照组和2,4,8,16μmol·L-1实验组细胞凋亡率分别为(6.23±1.45)%,(8.97±1.44)%,(14.50±1.39)%,(34.23±2.85)%,(69.07±1.27)%,氯喹组与联合用药组细胞凋亡率为(5.43±1.33)%,(28.33±0.50)%;药物干预48 h,对照组、氯喹组、4μmol·L-1实验组与联合用药组穿过Transwell小室的细胞数分别为60.00±8.04,33.25±3.86,24.00±1.83,6.00±2.16。药物干预48 h,与对照组相比,三氧化二砷能增加细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ的表达量,降低p62蛋白的表达量;增加细胞中凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Cleaved-PARP及Bax的表达,减少PARP及Bcl-2蛋白表达;与对照组和4μmol·L-1实验组相比,联用自噬抑制剂氯喹后,胃癌细胞中自噬相关蛋白p62及LC3B-Ⅱ表达量显著增加,凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Cleaved-PARP及Bax表达明显增加,而PARP及Bcl-2蛋白表达显著减少(均P<0.05)。结论三氧化二砷通过降低胃癌细胞的增殖活性,增加胃癌细胞的凋亡率,抑制胃癌侵袭力来发挥抗肿瘤作用,同时三氧化二砷能诱导胃癌细胞产生自噬,而抑制自噬能进一步增强三氧化二砷对胃癌细胞的抗癌作用。     

过氧化氢诱导血管平滑肌细胞内质网应激及其自噬作用

目的观察过氧化氢(H_2O_2)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激及其自噬的作用机制。方法体外培养VSMC细胞,加入H_2O_250,100,200,400,600,800,1200和1600μmol·L~(-1)分别作用12和24 h后,MTT法检测H_2O_2对VSMC的抑制率;倒置相差显微镜观察H_2O_2对VSMC细胞形态的影响;采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和泛素结合蛋白p62的表达,采用Western蛋白印迹法检测自噬相关蛋白人卷曲螺旋肌球蛋白样BCL2相互作用蛋白/自噬基因(Beclin-1)和LC3、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及自噬上游信号通路哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(m TOR)的表达。结果 MTT结果显示,H_2O_250~1600μmol·L~(-1)作用VSMC细胞12和24 h,VSMC细胞存活率明显降低,12和24 h的IC50分别为(597.2±2.3)和(447.4±1.7)μmol·L~(-1)。倒置相差显微镜观察可见H_2O_2400μmol·L~(-1)组VSMC收缩变圆。H_2O_2400μmol·L~(-1)作用VSMC 12 h时,细胞存活率由(97.5±0.1)%下降至(74.4±1.0)%;作用VSMC 24 h,下降至(56.8±0.9)%(P<0.01)。激光共聚焦显微镜检测发现,H_2O_2400μmol·L~(-1)作用VSMC 8 h,细胞浆中LC3和p62蛋白随H_2O_2作用时间的延长表达增加。LC3与p62的共定位显示,H_2O_2400μmol·L~(-1)作用8 h最明显。Western蛋白印迹结果表明,H_2O_2诱导内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP和自噬相关蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著增加(P<0.01),m TOR的表达显著降低(P<0.01)。结论 H_2O_2可能通过诱导VSMC内质网应激激活自噬。     

microRNA-129-5p对脂多糖致小鼠肺上皮细胞损伤的影响北大核心CSCD

目的研究microRNA-129-5p(miR-129-5p)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法取小鼠肺上皮细胞MLE-12,分别转染miR-129-5p模拟物(设为miR-129-5p mi组)和阴性对照寡核苷酸(设为miR-NC组),随后用500 ng·mL^(-1)LPS处理MLE-12细胞。用细胞计数法-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖能力;用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;用蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中自噬相关蛋白P62和Bec-lin-1的表达水平。结果miR-NC组和miR-129-5p mi组细胞在24 h的细胞存活率分别为(52.73±1.41)%,(68.70±3.55)%,在48 h的细胞存活率分别为(48.75±7.22)%,(69.24±3.05)%,在72 h的细胞存活率分别为(48.22±4.28)%,(65.61±2.53)%;细胞凋亡率分别为(28.46±2.51)%,(17.24±2.06)%;P62蛋白的表达水平分别为1.01±0.03和1.54±0.07,Beclin-1蛋白的表达水平分别为0.98±0.09和0.52±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-129-5p可显著促进LPS诱导小鼠肺上皮细胞MLE-12增殖,并抑制细胞凋亡和自噬,从而改善LPS诱导的急性肺损伤。     

乏氧环境对子宫肌瘤细胞增殖及自噬相关蛋白表达的影响

目的 探究乏氧环境对子宫肌瘤细胞增殖和自噬相关蛋白表达的影响.方法 选取成都市第三人民医院2017年11月至2018年11月行子宫肌瘤手术治疗的20例病人的子宫肌瘤组织样本(观察组)及周围正常组织(对照组)进行乏氧(1％氧)培养,培养48 h检测两组细胞增殖及自噬相关蛋白的表达差异.结果 培养12 h开始至48 h,两组细胞增值率明显下降,并且观察组下降更加显著(P<0.05).随着缺氧时间增长,两组凋亡细胞比例均显著增加(P<0.05),且观察组细胞凋亡比例更高于对照组(P<0.05).培养0 h,观察组子宫肌瘤细胞孕激素受体A/B(PR-A/B)(0.436±0.027)/(0.459±0.033)、孕激素受体M(PR-M)(0.121±0.013)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)(0.541±0.032)及孔蛋白(porin蛋白)(3.261±0.857)表达水平明显低于对照组PR-A/B(0.225±0.022,0.245±0.029)、PR-M(0.084±0.009)、HIF-1α(0.233±0.070)及porin蛋白(0.205±0.027)表达水平(P<0.05).培养48 h后,观察组PR-A/B、PR-M、HIF-1α及porin蛋白水平显著降低(P<0.05),而对照组各蛋白水平无明显变化(P>0.05).培养0 h,观察组酵母自噬相关基因(Beclin-1)(0.77±0.08)、选择性自噬接头蛋白(P62)(0.44±0.08)及自噬相关蛋白Ⅱ型微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)(0.55±0.13)显著低于对照组Beclin-1(1.25±0.12)、P62(0.95±0.15)及LC3-Ⅱ(0.81±0.09)表达水平(P<0.05),培养48 h后,观察组各蛋白水平明显升高(P<0.05),而对照组无明显变化(P>0.05).结论 子宫肌瘤细胞增殖及自噬相关蛋白存在明显异常,乏氧环境促进了子宫肌瘤细胞的凋亡和自噬作用.     

西罗莫司抗缺血性脑卒中的自噬机制

目的观察神经元氧糖剥夺(OGD)后自噬的动态变化,并探讨西罗莫司对缺血性脑卒中的保护作用及自噬机制。方法利用OGD神经元,观察神经元氧糖剥夺后不同时间点自噬蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和β-arrestin的变化,并观察10-6 mol·L-1西罗莫司对正常对照或OGD 6h后神经元LC3-Ⅱ的影响及抗凋亡作用。30只小鼠随机分为模型组、西罗莫司1μg·kg-1组和10μg·kg-1组(均n=10),观察西罗莫司对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型小鼠半暗带脑组织LC3-Ⅱ和脑梗死面积的影响。结果神经元OGD 2 h后,自噬蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和β-arrestin表达均减少,随OGD时间延长,LC3-Ⅱ和Beclin-1表达呈明显下降趋势(P<0.01);西罗莫司能促进神经元OGD 6h后LC3-Ⅱ的表达,并明显减少神经元的凋亡(P<0.01)。MCAO小鼠脑缺血6 h后,西罗莫司10μg·kg-1组梗死面积百分比(37.8±6.3)%显著小于模型组的(48.0±6.7)%(P<0.05)。结论西罗莫司对缺血性脑卒中有保护作用,其机制可能与促进自噬有关。     

白花丹素通过下调微小RNA-21的表达诱导自噬促进子宫肌瘤细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的观察白花丹素对子宫肌瘤细胞自噬和细胞凋亡的影响,并探讨其调控机制。方法子宫肌瘤细胞分为4组:空白对照组(常规培养)、PB组(5μmol·L^(-1)白花丹素处理)、PB+miR-NC mimic组(5μmol·L^(-1)白花丹素处理+miR-NC mimic处理)、PB+miR-21 mimic(5μmol·L^(-1)白花丹素处理+miR-21 mimic处理);四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活力变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测LC3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3Ⅱ)、自噬体吞噬蛋白Beclin-1、p62以及裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平的变化情况;流式细胞术检测子宫肌瘤细胞凋亡率的变化情况;实时荧光定量聚合酶链反应法检测微小RNA-21(miR-21)的表达情况。结果空白对照组、PB组、PB+miR-NC mimic组、PB+miR-21 mimic组的miR-21表达水平分别为1.00±0.14、0.43±0.06、0.39±0.05、0.68±0.09;细胞活力分别为(100.00±8.76)%、(49.67±5.98)%,(50.39±7.06)%、(72.39±9.01)%;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平分别为0.33±0.05、0.88±0.12、0.83±0.09、0.51±0.08;Beclin-1蛋白表达水平分别为0.25±0.04、0.75±0.09、0.71±0.10、0.42±0.06;p62蛋白水平分别为0.91±0.14、0.46±0.06、0.41±0.08、0.79±0.09;凋亡率分别为(6.21±0.69)%、(20.71±3.11)%、(23.06±3.04)%、(10.42±2.11)%;Cleaved-caspase-3蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.76±0.09、0.80±0.12、0.52±0.07;Bax蛋白表达水平分别为0.35±0.05、0.83±0.13、0.79±0.09、0.42±0.07;空白对照组的上述指标与PB组比较,PB+miR-NC mimic组的上述指标与PB+miR-21 mimic组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论白花丹素可通过下调miR-21的表达促进子宫肌瘤细胞自噬并诱导凋亡。     

二氢杨梅素通过上调自噬活性抑制MPP~+诱导的PC12细胞损伤

目的观察二氢杨梅素(DMY)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响并探讨其可能的机制。方法含DMY 5,10,20,40和80μmol·L~(-1)的培养液预处理PC12细胞0.5 h,培养液中加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)10 mmol·L~(-1),再加入MPP+500μmol·L~(-1)培养48 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活,丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,透射电镜观察细胞的超微结构,Western蛋白质印迹法检测细胞中自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达。结果与细胞对照组比较,MPP+组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著增加(P<0.05),细胞中自噬体的数量明显减少,自噬泡占胞质总面积的百分率显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著降低(均P<0.05),P62的表达显著升高(P<0.05)。与MPP+组比较,MPP++DMY 10~80μmol·L~(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著降低(P<0.05)。与MPP+组比较,MPP++DMY 20μmol·L~(-1)组细胞中自噬体数量明显增加,自噬泡占胞质总面积的百分率显著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(P<0.05),P62的表达显著降低(P<0.05)。与MPP++DMY 20μmol·L~(-1)组比较,MPP++DMY+3-MA组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞上清液中LDH水平显著增加(P<0.05)。结论 DMY抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调细胞自噬活性有关。     

橘红素对人胃癌AGS细胞自噬的作用及其机制研究

目的探讨橘红素(Tangeretin, Tan)对人胃癌AGS细胞自噬的作用及其机制。方法 Western blot检测Tan对LC3II、p62及p-Akt蛋白表达的影响,以及自噬抑制剂CQ和促进剂Rapa干预后,LC3II和p62蛋白表达的变化。Annexin V/PI双染,流式细胞术检测CQ对Tan诱导细胞凋亡作用的影响。结果作用24 h,Tan可呈剂量依赖地增强LC3II蛋白(P<0.05,P<0.01)和p62蛋白(P<0.05)的表达;作用48 h,Tan可呈剂量依赖地增强p62蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。作用24 h和48 h,与Tan单独处理组比较,CQ与Tan联合处理可明显增强LC3Ⅱ和p62蛋白的表达(P<0.01),而Rapa和Tan联合处理则下调LC3Ⅱ和p62蛋白的表达(P<0.05)。10μmol·L~(-1) CQ与60μmol·L~(-1) Tan联合作用48 h,CQ+Tan组与Tan组比较,细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。Tan作用24 h和48 h,p-Akt蛋白的表达均呈剂量依赖地下降(P<0.05,P<0.01)。结论橘红素可以抑制人胃癌AGS细胞的自噬流,造成自噬体的堆积,促进AGS细胞凋亡,Akt蛋白的磷酸化可能参与其中。     

活血定眩胶囊对椎动脉型颈椎病大鼠椎动脉自噬相关蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的观察活血定眩胶囊对椎动脉型颈椎病(CSA)大鼠椎动脉自噬相关蛋白表达的影响。方法按照体重将Wistar雄性大鼠随机分为8组:正常组、假手术组、模型组、氟桂利嗪组、颈复康组和高、中、低3个剂量实验组,每组10只。用植骨压迫联合力学失衡法建立大鼠CSA模型。高、中、低3个剂量实验组给予活血定眩胶囊1.26,0.63,0.32 g·kg^(-1),氟桂利嗪组给予氟桂利嗪1.5 mg·kg^(-1),颈复康组给予颈复康颗粒1.5g·kg^(-1),其他3组灌胃等量生理盐水。均制成混悬液,按照等效剂量折算稀释后灌胃,连续给药6周。动物麻醉心脏釆血,颈部剥离取出椎动脉。用分光光度法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组化检测椎动脉血管内皮组织酵母自噬基因(Beclin-1)蛋白表达水平(灰度值面积比),蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平(灰度值)。结果正常组、模型组、高剂量实验组、氟桂利嗪组和颈复康组的SOD活性分别为(88.11±5.39),(70.12±6.35),(81.34±4.98),(77.24±5.98)和(80.35±4.12)×10^(3)U·g^(-1);这5组的Beclin-1表达分别是(0.85±0.12)×10^(-3),(14.81±1.32)×10^(-3),(1.29±0.45)×10^(-3),(2.97±0.69)×10^(-3)和(3.01±0.25)×10^(-3);这5组的的LC3-Ⅱ蛋白表达分别为2.57±0.43,5.39±1.01,3.20±0.61,3.28±0.71和4.07±0.92。模型组与正常组相比,或高剂量实验组与模型相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);氟桂利嗪组、颈复康组与高剂量实验组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论活血定眩胶囊可抑制血管内皮细胞自噬相关蛋白表达,这可能是其防治CSA的机制之一。     

动脉平滑肌细胞的钙池操纵钙通道对细胞自噬的调节

目的探讨大鼠动脉平滑肌细胞A7R5上钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)对细胞自噬的影响。方法在293T细胞中包装含有STIM1、Orai1基因的慢病毒,将获得的慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1感染大鼠A7R5细胞,Western blot检测感染前后STIM1、Orai1蛋白表达及细胞自噬调节蛋白Beclin-1的表达。慢病毒感染A7R5后饥饿处理6 h或雷帕霉素处理24 h,Western blot检测处理后各组自噬相关蛋白LC3的蛋白表达量。结果重组载体p LV-STIM1、p LV-Orai1经双酶切鉴定正确。在293T成功包装慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1。病毒感染A7R5后,与对照组相比,STIM1、Orai1蛋白表达量分别上调96%和163%,而自噬调节蛋白Beclin 1下调64%。饥饿或雷帕霉素处理可明显增加细胞自噬水平,体现为自噬标志蛋白LC3-Ⅱ含量增加,而慢病毒感染STIM1、Orai1可明显抑制饥饿或雷帕霉素诱导的细胞自噬。结论在大鼠动脉平滑肌A7R5细胞过表达钙池操纵钙通道分子STIM1和Orai1可使细胞自噬水平降低。这一分子机制可能与肺动脉高压发病相关。     

新型精胺氧化酶抑制药对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响北大核心CSCD

目的研究新型精胺氧化酶抑制药SI-4650对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法将SGC-7901细胞分为空白组(正常培养)、低、高剂量实验组(40、80μmol·L^(-1)SI-4650)、自噬抑制药3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA)、3-MA+低、高剂量实验组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA+40、80μmol·L^(-1)SI-4650),均处理48 h。用化学发光法检测细胞中精胺氧化酶(SMO)活性,用细胞计数8(CCK8)法和流式细胞术检测细胞增殖和周期,用碘化丙啶(PI)/异硫氰酸荧光素(FITC)-Annexin V双染法检测凋亡细胞情况,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管结合蛋白轻链-3Ⅰ/Ⅱ(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达水平。结果空白组与低、高剂量实验组中人胃癌SGC-7901细胞中相对SMO酶活性分别为(7293±195)、(4506±195)、(989±115)RLU·(mg·s)^(-1),S期细胞比例分别为(28.83±1.17)%、(32.23±1.21)%、(36.50±0.73)%,低、高剂量实验组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白组与低、高剂量实验组以及3-MA组与3-MA+低剂量实验组、3-MA+高剂量实验组中可见,细胞生长抑制率分别为(0.00±2.09)%、(43.61±2.29)%、(52.16±2.49)%、(1.81±4.43)%、(27.50±1.88)%、(34.22±1.07)%,细胞凋亡率分别为(7.01±2.09)%、(13.16±1.59)%、(25.35±2.32)%、(7.13±2.09)%、(8.61±1.59)%、(11.35±2.32)%,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.01±0.03、0.58±0.04、2.73±0.03、0.03±0.01、0.06±0.02、0.23±0.03。低、高剂量实验组与空白组相比,低、高剂量实验组与对应浓度3-MA+低、高剂量实验组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论SI-4650能高效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,机制可能与干扰多胺代谢、阻滞细胞周期S期和诱导细胞自噬、凋亡相关。     

胰高血糖素样肽-1对AGEs诱导H9C2心肌细胞自噬的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导H9C2心肌细胞自噬(Autophagy)的影响,初步探讨GLP-1心肌细胞保护作用与自噬活性关系。方法将传代培养H9C2心肌细胞随机分4组:(1)Control组:加入0.9%生理盐水;(2)AGEs组:加入100 mg·L~(-1)AGEs;(3)AGEs+GLP-1组:同时加入100 mg·L~(-1)AGEs和10 nmol·L~(-1)GLP-1;(4)AGEs+GLP-1+Rapamycin组:同时加入100 mg·L~(-1)AGEs、10 nmol·L~(-1)GLP-1及5μmol·L~(-1)Rapamycin(自噬诱导剂)。各组在经上述预处理24 h后,分别用CCK-8法检测细胞存活率Hoechst 33258试剂盒检测细胞的凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞自噬溶酶体形成,Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3Ⅱ,Beclin-1)表达。结果 (1)与Control组相比,AGEs组细胞生存率明显减少,细胞内ROS水平明显增高,细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达均明显增加;(2)与AGEs组相比,AGEs+GLP-1组细胞生存率明显增高,细胞内ROS水平、细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达均明显下降;(3)与AGEs组相比,AGEs+GLP-1+rapamycin组中细胞内ROS水平降低,而细胞生存率、细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达未见差异。结论 (1)AGEs可导致H9C2心肌细胞内ROS升高,诱导细胞损伤并激活细胞自噬;(2)GLP-1对AGEs诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其保护机制可能与抑制细胞自噬活性有关。     

依达拉奉对帕金森病小鼠模型中脑细胞自噬相关蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的研究依达拉奉对帕金森病(PD)小鼠模型中脑细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法将42只C57BL/6雄性小鼠被随机分为对照组、模型组及实验组,各14只。模型组及实验组小鼠均腹腔注射25 mg·kg^(-1)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD小鼠模型,对照组则腹腔注射等量生理盐水;建模成功后实验组腹腔注射3 mg·kg^(-1)依达拉奉,对照组及模型组则腹腔注射等量生理盐水,连续干预2周。以爬杆实验及悬挂实验对比小鼠行为学变化;用免疫组化法检测中脑黑质脑组织自噬相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠干预后1,2周爬杆时间均延长,悬挂实验评分降低(P<0.01);与模型组比较,实验组小鼠干预后1,2周爬杆时间均缩短,悬挂实验评分升高(P<0.01)。免疫组化显示,干预后2周,对照组、模型组及实验组小鼠中脑黑质脑组织Beclin1阳性细胞比例分别为(7.04±1.98)%,(27.05±2.01)%,(16.46±1.87)%;微管相关蛋白轻链3(LC3)阳性细胞比例分别为(5.41±1.67)%,(21.26±1.51)%,(14.86±1.49)%。与对照组比较,干预后1,2周模型组小鼠中脑黑质脑组织Beclin1及LC3阳性细胞比例明显增多(P<0.01);而实验组Beclin1及LC3阳性细胞比例较模型组明显降低(P<0.01)。结论依达拉奉可有效抑制PD小鼠中脑黑质脑组织细胞自噬相关蛋白Beclin1及LC3表达,改善PD小鼠异常行为。     

当归芍药散通过AMPK/mTOR通路对高糖诱导的足细胞损伤的影响

目的:探讨当归芍药散是否可以通过AMPK/mTOR信号通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。方法:分别将足细胞分为正常对照组、模型组、当归芍药散含药血清组、自噬抑制剂组、当归芍药散含药血清加自噬抑制剂组、自噬激动剂、AMPK抑制剂、当归芍药散含药血清加AMPK抑制剂组和AMPK激动剂，并观察各组的自噬相关蛋白、细胞活性和细胞凋亡率。结果:与对照组相比，高糖组足细胞活力和Beclin-1/LC3/p-AMPK蛋白表达均降低，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01);和高糖组相比，当归芍药散含药血清组、自噬激动组、AMPK激动剂组的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均提高，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均降低(P<0.01);与高糖组相比，自噬抑制剂组、AMPK抑制剂组足细胞的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均降低，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01)。结论:当归芍药散可以通过AMPK/mTOR通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。     

紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响

目的:研究紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)和自噬相关蛋白Beclin-1、p62的mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照比较,10、20、40μg/mL紫草素作用48 h后HCT116细胞的增殖抑制率和凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01)。10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后均可不同程度地升高细胞中LC3、Beclin-1、p62 mRNA及其蛋白的表达水平,除10μg/mL紫草素作用后细胞中LC3 m RNA表达水平升高不显著外,其余指标水平与空白对照比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草素可诱导人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,并激活其自噬途径。     

自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用

目的 研究自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用。方法 以人肝癌细胞Huh7为对象,采用低浓度逐渐递增联合长期给药的方式构建仑伐替尼耐药细胞模型Huh7-LR,以CCK-8实验和流式细胞术检测亲本细胞Huh7及耐药细胞Huh7-LR对仑伐替尼的敏感性,以Western blot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中自噬效应蛋白Beclin-1、自噬接头蛋白sequestosome 1（又名p62）、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平和细胞自噬水平。通过饥饿诱导构建自噬激活细胞模型,以Western blot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中p62蛋白表达水平和细胞自噬水平,以流式细胞术检测自噬激活对仑伐替尼敏感性的影响。结果 与亲本细胞相比,Huh7-LR细胞的耐药指数为6.2,其p62蛋白的表达水平显著升高,凋亡率、Beclin-1蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著降低（P<0.05或P<0.01）,自噬水平有所下降。自噬激活可显著升高Huh7-LR细胞中p62蛋白的表达水平（P<0.0...     

川陈皮素对脂多糖诱导的牙周膜细胞损伤和NOD样受体蛋白3炎性通路的影响

目的 探讨川陈皮素(NOB)对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的影响及其机制。方法 将体外培养的hPDLCs分为对照组(不做处理)、模型组(10μg·mL^-1 LPS处理24 h)和低、中、高剂量实验组(模型组的基础上分别使用5,10和20μmol·L^-1 NOB处理24 h),采用流式细胞术和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测各组细胞凋亡率和细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6含量,以蛋白质印迹法检测细胞中微管相关蛋白1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶(caspase)-1和IL-1β蛋白表达水平。结果 对照组、模型组和低、中、高剂量实验组细胞存活率分别为(96.13±5.33)%,(62.47±4.19)%,(68.25±4.83)%,(75.77±5.07)%和(83.60±5.88)%,凋亡率分别为(5.05±1.31)%,(33.86±2.27)%,(28.63±2.22)%,(2...     

小檗碱通过诱导细胞抑制性自噬发挥抗胃癌作用

目的探讨中药黄连活性成分小檗碱抗胃癌作用及相关机制。方法用MTT法检测小檗碱对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用;用MDC染色结合流式细胞术及GFP-LC3质粒转染法检测小檗碱引起BGC-823细胞发生自噬;用Western印迹法检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1表达水平;引入自噬抑制剂3-MA和CQ,用MTT法检测小檗碱诱导的自噬与细胞存活之间的关系;建立人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤模型,评价小檗碱在体内抑制人胃癌细胞移植瘤的生长作用,用免疫组化法和Western印迹法检测肿瘤组织中自噬相关蛋白的表达水平。结果小檗碱呈时间-剂量依赖性的诱导BGC-823细胞死亡,其48 h的IC50值为24μmol·L~(-1)。与对照组相比,小檗碱处理后细胞中自噬小体的数目及自噬标志蛋白LC3及Beclin-1的表达水平皆随时间依赖性增加,且抑制自噬后小檗碱引起的细胞死亡率下降,提示小檗碱诱导的自噬发挥抑制细胞生长的作用。裸鼠移植瘤实验表明,5、10及20 mg·kg~(-1)的小檗碱均对裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用,且抑制作用与剂量成正比。其中小檗碱高剂量组的相对肿瘤增殖率为28%,优于阳性对照药物5-FU(31%)。同时,小檗碱不影响裸鼠的体重,裸鼠生长状态良好,说明其毒性较小。进一步发现小檗碱能够呈剂量依赖性的增加肿瘤组织中自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结论小檗碱在体内和体外通过诱导细胞抑制性自噬而发挥抗胃癌作用。     

Nod1受体激活对腹膜间皮细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨Nod1受体激活对腹膜间皮细胞自噬的影响。方法 Nod1受体激动剂iE-DAP作用大鼠原代培养腹膜间皮细胞0、1、2h,Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1的表达。结果随刺激时间延长,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达比值增加,Beclin-1蛋白表达亦增加。结论 Nod1受体激活可诱导腹膜间皮细胞自噬的发生,这有可能发挥清除细胞内细菌感染的作用。     

罗格列酮对前列腺癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROZ)对前列腺癌细胞系PC3增殖、凋亡及自噬的作用及其可能机制。方法 用不同浓度ROZ 50、100、200、400μmol/L处理PC3细胞,采用CCK-8法检测24、48、72、96 h后细胞增殖情况。随后进一步将细胞分为A组(DMSO对照组)、B组(ROZ 50μmol/L处理组)和C组(PPARγ拮抗剂GW9662 25μmol/L+ROZ 50μmol/L处理组),采用TUNEL法和细胞划痕实验分别观察细胞凋亡和迁移情况,免疫荧光检测PPARγ定位分布,Western blot法检测细胞中PPARγ、Bcl-2、Bax、Beclin-1、微管相关蛋白轻链3A/B(LC3A/B)、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 ROZ作用24、48、72、96 h时,PC3细胞增殖率均呈浓度依赖性地降低(P<0.05)。与A组相比,B组细胞凋亡率以及PPARγ、PTEN、LC3A/B、Beclin-1和Bax蛋白表达增加,细胞划痕愈合率以及Bcl-2和p-Akt蛋...