中波紫外线通过EGFR／P13K／AKT途径上调HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达

目的探讨中波紫外线辐射对HaCaT转铁蛋白受体表达的影响及其信号途径。方法流式细胞仪检测HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达。实时PCR检测转铁蛋白受体mRNA表达。结果UVB辐射可上调HaCaT细胞转铁蛋白受体mRNA及其蛋白的表达，并在一定范围内（10mJ／cm^2-30mJ／cm^2）呈剂量依赖性。表皮生长因子受体（EGFR）抑制因子PD153035、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）抑制因子LY294002和渥曼青霉素（Wortmannin）均可显著抑制UVB辐射对转铁蛋白受体的上调作用（P〈0．01）。结论紫外线可通过EGFR／P13K／AKT途径上调HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达。     

EGFR通路在相关皮肤病发病机制中的研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）是一种受体酪氨酸激酶，存在于几乎所有上皮细胞和多种间充质细胞的细胞膜上，EGFR通路的失调可能导致细胞增殖、血管生成、细胞凋亡受损、细胞侵袭性增强，影响银屑病、特应性皮炎等炎症性皮肤病和皮肤鳞状细胞癌、黑素瘤等肿瘤性皮肤病的发生与发展，本文综述了EGFR通路在相关皮肤病发病机制中的研究进展。     

中波紫外线通过EGFR/PI3K/AKT途径上调HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达

目的 探讨中波紫外线辐射对HaCaT转铁蛋白受体表达的影响及其信号途径。方法 流式细胞仪检测HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达。实时PCR检测转铁蛋白受体mRNA表达。结果 UVB辐射可上调HaCaT细胞转铁蛋白受体mRNA及其蛋白的表达，并在一定范围内（10 mJ/cm2 ~ 30 mJ/cm2）呈剂量依赖性。表皮生长因子受体（EGFR）抑制因子PD153035、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制因子LY294002和渥曼青霉素（wortmannin）均可显著抑制UVB辐射对转铁蛋白受体的上调作用（P < 0.01）。结论 紫外线可通过EGFR/PI3K/AKT途径上调HaCaT 细胞转铁蛋白受体的表达。     

检测子宫内膜异位症中PI3K/Akt通路和VEGF的临床意义

目的:探讨子宫内膜异位症患者中血管内皮生长因子(VEGF)、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)表达水平及其与血管生成的关系,并且探讨VEGF与PI3K在调控血管生成过程中的相互关系。方法:利用S-P方法对32例EM手术标本和30例子宫肌瘤中VEGF、Akt及微血管密度(MVD)的表达进行检测。结果:EM中正常内膜、在位内膜和异位内膜Akt、VEGF阳性表达率分别为20.0%(6/30)、37.5%(12/32)、84.4%(27/32)、60.0%(18/30)、75.0%(24/32)、87.5%(28/32);EM中正常内膜、在位内膜和异位内膜MVD分别是(10.37±5.24)、(19.14±7.10)、(48.24±10.54)。Akt、VEGF和血管密度在EM中异位内膜较正常内膜组高表达,在调控血管生成过程中,Akt与VEGF呈正相关。结论:PI3K/Akt、VEGF均参与EM的发生发展,在EM血管生成中发挥关键作用,共同参与EM过程。     

PI3K/AKT信号转导通路和VEGF在子宫内膜异位症中的表达

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)患者中磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。方法:采用EMs患者32例,取在位子宫内膜和异位内膜,无EMs患者34例,取子宫内膜,作为对照组。采用半定量RT-PCR法检测PI3K/AKT与VEGFmRNA表达,ELISA法检测PI3K/AKT蛋白和VEGF蛋白表达。结果:正常子宫内膜、异位子宫内膜和在位子宫内膜PI3K、AKT和VEGF mRNA和蛋白表达水平差异有统计学意义(P0.01)。异位内膜PI3K、AKT和VEGF的mRNA和蛋白的表达均高于在位内膜及正常内膜(P0.01)。EMs中,Ⅰ、Ⅱ期PI3K、AKT和VEGF mRNA和蛋白的表达与Ⅲ、Ⅳ期异位内膜相比,均无显著性差异(P0.05)。结论:PI3K/AKT信号转导通路和VEGF共同参与EMs的发生和发展。     

窄谱中波紫外线对银屑病患者皮损中微血管密度和血清血管内皮生长因子水平的影响

目的探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)对银屑病患者皮损中微血管密度(MVD)和血清血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法用血管内皮细胞特异性标志物CD34抗体免疫组化法检测银屑病患者NB-UVB治疗前后皮损中的MVD,用ELISA方法检测患者NB-UVB治疗前后血清VEGF的水平。结果银屑病患者NB-UVB治疗前的MVD明显高于治疗后及正常对照组(P均<0.01)。银屑病患者NB-UVB治疗前的血清VEGF水平明显高于治疗后及正常对照组(P均<0.01)。结论NB-UVB可能通过抗血管新生作用来治疗银屑病。     

PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣皮损中的表达

目的:检测PI3K/Akt信号转导通路中PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣皮损中的表达.方法:采用免疫组化和蛋白印迹法检测30例尖锐湿疣皮损及15例正常对照者皮肤活检组织中PI3K和磷酸化Akt的表达,并利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化结果进行平均吸光度(A值)测定和对免疫印迹测定结果进行灰度扫描.结果:尖锐湿疣皮损中PI3K和磷酸化Akt的表达明显高于正常皮肤.蛋白印迹结果与免疫组化检测一致(两组比较,均P＜ 0.01).结论:PI3K/Akt信号通路异常激活可能参与了尖锐湿疣的发病.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线诱导的角质形成细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的：研究绿茶中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞HaCaT株（简称HaCaT细胞）分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法：试验共设立空白对照组、单纯加药组、单纯照光组和加药照光组4组,以15mJ/cm^2 UVB的剂量照射细胞,酶联免疫吸附试验（EUSA）方法检测不同时间细胞上清液中VEGF含量。反转录（RT）-PCR测定VEGFmRNA表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞分泌的VEGF在照光后12h开始明显增加,随时间延长。VEGF水平逐渐增加。EGCG对UVB诱导的VEGF升高有明显抑制作用。在12、18、24h3个时间点．EGCG明显抑制VEGF水平的升高。结论：EGCG可以抑制紫外线诱导的HaCaT细胞分泌VEGF。     

窄谱中波紫外线对寻常性银屑病血管调节因子的作用机制研究

目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）对寻常性银屑病患者皮损中微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）以及血清中VEGF的影响。方法 采用葡聚糖聚合物标记免疫组化法对15例寻常性银屑病患者NB-UVB治疗前后的皮损标本中MVD以及VEGF、MMP-2的表达水平进行测定,采用ELISA法测定血清VEGF水平,以10份正常人皮肤标本和15份正常人血清作为对照;在NB-UVB治疗前后对银屑病皮损进行PASI评分。结果 寻常性银屑病患者治疗前皮损组织中MVD为20.52 ± 5.02（单位：个/400倍镜下）,明显高于治疗后（7.33 ± 1.24）和正常人对照组皮肤组织（4.26 ± 0.79）（F = 97.57,P < 0.05）,且治疗后PASI评分较治疗前显著降低（t = 13.35,P < 0.01）;治疗前血清中VEGF表达水平为307.55 ± 121.65 ng/L,明显高于治疗后（163.92 ± 95.57 ng/L）和正常人对照组（139.78 ± 79.06 ng/L）（F = 9.903,P < 0.05）,而治疗后VEGF表达水平与正常人对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05 ）;银屑病皮损中MMP-2阳性表达在治疗前、后以及和正常人对照组之间的差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。银屑病患者PASI评分、MVD、皮损及血清中的VEGF表达四者互为正相关关系（P < 0.05）;皮损中的MVD、VEGF表达、MMP-2表达互为正相关关系（P < 0.05）;皮损中的MMP-2与PASI评分、血清中VEGF表达无相关关系（P ＞ 0.05）。结论 NB-UVB可以降低寻常性银屑病患者血清中VEGF的表达水平及其皮损中真皮浅层微血管增生状态;组织中VEGF、MMP-2可能共同参与了微血管的增生过程,但MMP-2没有参与NB-UVB对寻常性银屑病的治疗机制。     

反义PKCξ对角质形成细胞增殖的调节

目的：探讨角质形成细胞中，反义蛋白激酶Cξ与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外信号调节激酶ERK1／2信号转导网络以及与核因子NF-kB的相互作用关系。方法：通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法，研究反义PKCξ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果：表达反义PKCξ的角质形成细胞中，PI3K的基因表达显著下调，ERK1／2和NF-kB的核内表达水平以及ERK1／2的激酶活性明显降低。结论：表达反义PKCξ可通过下调PI3K和ERK1／2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

窄谱中波紫外线治疗寻常性银屑病疗效观察及血清细胞因子变化

目的：研究窄谱中波紫外线治疗寻常性银屑病的疗程、近期不良反应及预后；观察照射前后血清细胞因子浓度改变．探讨治疗机制。方法：给予86例寻常性银屑病患者窄谱中波紫外线(NB-UVB)照射，每周3次，共267次，用酶联免疫吸附试验检测32例患者治疗前后血清白介素-8(1L-8)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平。结果：86例患者治疗后15例痊愈，临床有效率为93．2％，32例患者治疗前血清IL-8水平较健康对照者水平高，照射后显著下降。治疗前仪斑块状银屑病患血清清VEGF水平较正常人为高，照射后显著下降：结论：NB-UVB治疗银屑病疗效高、不良反应少，复发率低、IL-8水平升高可能为寻常性银屑病的发病机制之一。VEGF水平升高可能是斑块状银屑病致病的因素之一。     

强脉冲光对成纤维细胞及血管内皮细胞增殖活性及血管内皮细胞生长因子分泌水平的影响

目的:研究强脉冲光照射对皮肤成纤维细胞、血管内皮细胞的生长增殖状态及两种细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌水平的影响。方法:分离培养原代成纤维细胞和复苏血管内皮细胞株(ECV034),分别采用波长为590～1200nm和520～1200nm的能量密度为29J/cm2强脉冲光照射上述培养细胞。在照射结束后1、12、24及48h,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性情况,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种细胞培养上清液中VEGF的分泌情况。结果:成纤维细胞经强脉冲光照射24h及48h后,细胞增殖活性增强(P<0.05),而血管内皮细胞增殖活性无明显改变。强脉冲光照射对成纤维细胞及血管内皮细胞VEGF的分泌无影响。结论:强脉冲光能增强成纤维细胞增殖活性,但不影响成纤维细胞及血管内皮细胞VEGF的分泌。     

组织工程皮肤分泌血管内皮细胞生长因子的初步研究

目的：研究组织工程皮肤培养液中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的分泌情况。方法：收集不同时相的单层成纤维细胞培养液、胶原凝胶真皮替代物（胶原凝胶DE）、胶原凝胶皮肤替代物（胶原凝胶SE）、复方壳多糖真皮替代物（复方壳多糖DE）、复方壳多糖皮肤替代物（复方壳多糖SE）培养液样本,双抗体夹心EUSA法测定其中VEGF分泌量。结果：成纤维细胞（FB）在三维培养时分泌的VEGF明显高于其单层培养时的分泌量。复方壳多糖组织工程皮肤VEGF的分泌量又高于胶原凝胶组织工程皮肤。大多数培养液中VEGF含量在48h内增长最快。结论：壳多糖组织工程真皮和皮肤能分泌较多的VEGF,有利于伤口的血管化,加速伤口愈合。     

Serum vascular endothelial growth factor receptor 3 as a potential biomarker in psoriasis

To discover novel biomarkers of psoriasis, a target‐specific antibody array screening of serum samples from psoriasis patients was initially performed. The results revealed that vascular endothelial growth factor receptor 3 (VEGFR‐3) was significantly elevated in the sera of psoriasis patients, compared to healthy controls. Next, ELISA validation studies in a larger cohort of psoriasis patients (N = 73) were conducted, which confirmed that serum VEGFR‐3 was indeed significantly increased in patients with psoriasis compared to healthy controls (P < 0.001). Furthermore, receiver operating characteristic curve analysis demonstrated that serum VEGFR‐3 exhibited potential in distinguishing healthy controls from psoriasis patients: area under the curve = 0.85, P < 0.001. In addition, serum levels of VEGFR‐3 were correlated with Psoriasis Area Severity Index scores (R = 0.32, P = 0.008) in psoriasis patients. Interestingly, serum VEGFR‐3 levels were significantly elevated in psoriatic arthritis compared to non‐psoriatic arthritis (P = 0.026). A pilot longitudinal study demonstrated that serum levels of VEGFR‐3 could reflect disease progression in psoriasis. Collectively, serum VEGFR‐3 may have a clinical value in monitoring disease activity of psoriasis.     

黑素瘤细胞生长因子表达及微血管密度研究

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人黑素瘤中的表达和微血管密度(MVD)的关系。方法:采用免疫组化方法检测42例黑素瘤组织中的VEGF、bFGF的表达;利用第Ⅷ因子相关抗原(FⅧ-RAg)血管内皮细胞特异性染色,对肿瘤MVD进行计数和分析。结果:42例黑素瘤组织中,表达VEGF32例,bFGF29例,两指标均表达25例,VEGF与bFGF的表达呈正相关,VEGF、bFGF表达与淋巴结转移有关;色素痣组织不表达VEGF、bFGF;黑素瘤MVD明显高于色素痣。结论:MVD随着VEGF、bFGF表达的增强而增加,VEGF和bFGF在促进黑素瘤血管形成和促进肿瘤转移方面起协同作用。     

VEGF-C及其受体在皮肤恶性黑素瘤中的表达及其临床意义

目的：研究皮肤恶性黑素瘤（MM）组织中血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）及其受体VEGFR-3（flt-4）的表达情况,分析其在肿瘤淋巴管的生长及淋巴转移中的作用。方法：采用免疫组化SP法分析29例MM石蜡标本中VEGF-C/flt-4蛋白的表达情况,并与20例色素痣石蜡标本中VEGF-C/flt-4蛋白表达情况相对比,统计分析其与临床病理特点之间的关系。结果：VEGF-C蛋白的阳性率为96.6%（28/29）,flt-4的阳性率为86.2%（25/29）,明显高于色素痣（P〈0.01）,与肿瘤的病理分级、临床分期和肿瘤的淋巴转移显著相关（P〈0.05）;VEGF-C和flt-4的阳性表达相一致。结论：VEGF-C/flt-4在皮肤恶性黑素瘤中的表达明显高于色素痣,与肿瘤的预后密切相关,在肿瘤淋巴转移中可能有重要作用。     

Cross-talk between epidermal growth factor receptor and protein kinase C during calcium-induced differentiation of keratinocytes

The induction of epidermal differentiation by extracellular Ca2+ involves activation of both tyrosine kinase and protein kinase C (PKC) signaling cascades. To determine if the differentiation-dependent activation of tyrosine kinase signaling can influence the PKC pathway, we examined the tyrosine phosphorylation status of PKC isoforms in primary mouse keratinocytes stimulated to terminally differentiate with Ca2+. Elevation of extracellular Ca2+ induced tyrosine phosphorylation of PKC-delta, but not the other keratinocyte PKC isoforms (alpha, epsilon, eta, zeta). We have previously demonstrated that activation of the epidermal growth factor receptor (EGFR) pathway induces PKC-delta tyrosine phosphorylation in basal keratinocytes (Denning M F, Dlugosz A A, Threadgill D W, Magnuson T, Yuspa S H (1996) J Biol Chem 271: 5325-5331). When basal keratinocytes were stimulated to differentiate by Ca2+, the level of cell-associated transforming growth factor-alpha (TGF-alpha) increased 30-fold, while no increase in secreted TGF-alpha was detected. Furthermore, Ca2+-induced tyrosine phosphorylation of PKC-delta and phosphotyrosine-association of the receptor adapter protein Shc was diminished in EGFR -/- keratinocytes, suggesting that EGFR activation may occur during keratinocyte differentiation. Tyrosine phosphorylated PKC-delta was also detected in mouse epidermis, suggesting that this differentiation-associated signaling pathway is physiological. These results establish a requirement for the EGFR in Ca2+-induced tyrosine phosphorylation of PKC-delta, and document the production of cell-associated TGF-alpha in differentiated keratinocytes which may function independent of its usual mitogenic effects.