α-磷酸三钙骨水泥修复骨缺损及其降解物诱导成骨的实验研究

目的研究α-磷酸三钙骨水泥的成骨特点及其降解物在成骨中的作用。方法在兔颅骨上制造贯通缺损,植入α-磷酸三钙骨水泥。于术后4周、8周、12周作组织学和X线照片观察。同时使用大鼠骨髓基质细胞与不同浓度的α-磷酸三钙骨水泥水降解物共同培养,观察细胞形态和功能的变化。结果12周后见人工骨明显降解,新生骨形成,人工骨颗粒间出现成骨现象。细胞学检测见明显的诱导成骨现象。结论α-磷酸三钙具有良好的生物相容性、骨诱导性和可降解性,是口腔骨重建的理想材料之一。     

多孔磷酸三钙与自体红骨髓复合移植修复骨缺损的临床应用

应用多孔磷酸三钙（ＴＣＰ）与自体红骨髓（ＢＭ）复合移植，修复骨缺损２１例。随访１－３年，结果显示植入材料成骨作用确实。效果满意。本文对ＴＣＰ－ＢＭ的成骨机理，影响成骨的因素及ＴＣＰ的降解性能进行了讨论。     

负载BMP-2组织工程骨修复骨缺损的研究进展

组织工程骨修复骨缺损是当前研究的热点。骨形态发生蛋白(BMP)具有强大的促成骨活性,能够诱导间充质细胞不可逆地分化为骨、软骨组织;BMP-2是成骨能力最强的BMP之一,目前已被广泛应用于骨组织工程领域,并且展现出良好的应用前景。在此分析了近年来BMP-2在骨组织工程中应用研究的文献,概述国际上关于负载BMP-2组织工程骨研究现状及临床应用进展。     

异体脱钙骨基质复合bBMP修复兔桡骨骨缺损

目的：探讨异体脱钙骨基质复合BMP修复节段性骨缺损的能力。方法：64只新西兰大白兔采用桡骨15mm节段性骨缺损模型，随机分为4组，A组植入异体脱钙骨基质(Demineralized Bone Matrix,DBM)与牛骨形态发生蛋白(Bovine Bone Morphogentic Protein,bBMP)复合材料，B组植入异体DBIM，C组植入异体骨粒，D组为空白对照组。术后4、8、12、16w，进行放射学检查、病理组织学检查和计算机图像分析新生骨面积。结果：异体DBM与bBMP复合材料组骨生成、新骨面积和骨连接情况明显优于异体DBM组、异体骨粒组和空白对照组。结论：异体DBM复合BMP材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损，是一种较为理想、具有高效成骨活性的植骨材料。     

骨形态发生蛋白及多孔复合陶瓷人工骨修复长骨大段骨缺损的实验研究

目的：为研制理想的、能较快修复长骨大段骨缺损的人工骨材料。方法：将骨形态发生蛋白（BMP）和多孔复合陶瓷（PCC）结合研制成BMP／PCC人工骨,并将BMP／PCC和PCC人工骨进行兔桡骨大段骨缺损修复的对比研究。术后2、4、8、12周时取材,分别作大体、组织形态学、新骨形成定量分析及生物力学测试。结果：BMP／PCC人工骨内新骨形成量明显多于PCC人工骨、术后12周时,BMP／PCC侧植入部位的抗折强度明显高于PCC侧。结论：BMP／PCC人工骨能更快促进长骨大段骨缺损的修复,是一种较理想的人工骨材料。     

BMP-2修饰掺锶磷酸钙修复去卵巢大鼠股骨干骺端骨缺损实验研究

目的:探索骨形态发生蛋白2(BMP-2)修饰掺锶磷酸钙(CPC)修复去卵巢大鼠股骨干骺端骨缺损疗效及可能的机制。方法:3月龄雌性Sprague Dawley大鼠去卵巢术后12周后OVX组大鼠随机分为对照组(Con组)、CPC组(CPC组)、BMP-2/CPC组(BCPC组)和BMP-2/Sr/CPC组(BSCPC组),随后制作缺损模型并植入相应材料治疗。8周后取双侧股骨进行微型计算机断层扫描(Micro-CT)和组织学检测。同时蛋白印迹(Western blot)检测各组大鼠缺损部位Notch 1、CBF 1、Jagged 1和RUNX-2的蛋白表达改变。结果:Micro-CT和HE切片显示,与Con组相比,BSCPC组和BCPC组缺损部位较多的新形成骨组织充填,缺损区被修复较多,但是可见较多的生物材料残留。与CPC组或BCPC组相比,BSCPC组缺损部位从缺损边缘到中心均可见大量的骨组织形成,可见较多成熟骨组织,只有较少的生物材料残留。定量结果显示CPC组、BCPC组和BSCPC组微结构参数BV/TV、Tb.Th、Tb.N高于Con组,而Tb.Sp低于Con组(P<0.05)。Western blot检测结果显示与Con组比较,CPC组、BCPC组和BSCPC组Notch 1、CBF 1、Jagged 1和RUNX-2蛋白表达上调。结论:BMP-2修饰CPC能有效修复去卵巢大鼠股骨干骺端骨缺损,且可能通过Notch信号通路激活和RUNX-2表达上调来实现的。     

HIF-1α介导BMSCs复合PLGA修复大鼠颅骨标准骨缺损的研究

目的 构建低氧诱导因子(HIF)-1α介导骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)支架材料血管化组织工程骨,观察其在大鼠颅骨标准骨缺损中的修复效果.方法 将目的基因HIF-1 α转染至BMSCs后,与支架材料PLGA复合,修复SD大鼠颅骨双侧直径5 mm的标准骨缺损(n=18),随机分为3组:实验组植入HIF-1 α-BM-SCs/PLGA复合体(n=6),对照组植入BMSCs/PLGA复合体(n=6),材料组仅植入PLGA支架材料(n=6).术后8周处死大鼠取材,分别行大体观察、X线片检查和HE染色观察缺损区骨形成情况.结果 大体观察、X线片检查和HE染色均显示实验组缺损区新骨形成量明显大于对照组及材料组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体内研究表明HIF-1α能够介导BMSCs促进骨组织形成,PLGA是理想的支架材料,用其构建的血管化工程骨能够有效修复骨缺损.     

骨形态发生蛋白-2复合纤维蛋白缓释胶修复骨缺损的实验研究

［摘要］目的　探讨纤维蛋白胶作为骨形态发生蛋白-2（BMP-2）的缓释载体修复骨缺损,促进早期成骨的作用,为临床应用提供实验依据．方法　实验制备纤维蛋白胶/ BMP-2复合物,BMP-2在复合物中的浓度为1 μg/mL．将36只健康成年家兔随机分成3组,均造成双侧桡骨外侧中1/3段长8 mm,宽2 mm,深1 mm的骨缺损．实验组:植入纤维蛋白胶与BMP-2的复合物对骨缺损进行修复;对照组:在骨缺损区单独植入纤维蛋白胶进行修复;空白组:骨缺损区不植入任何材料,骨缺损自然愈合．于术后 2周、4周、8周分期处死动物,每个时间点每组取样本4只,采用X线检查、组织学观察、骨钙素（OC）免疫组化检测骨缺损部位成骨情况．结果　X线检查显示,实验组术后4周,骨痂形成的量较对照组和空白组明显增多．Masson染色显示,实验组术后2周有少量骨基质沉积．对照组骨小梁稀疏．空白组骨缺损区由纤维组织充填,未见新骨形成．术后4周,实验组骨缺损区有较多的新骨形成,骨小梁排列规则,连成网格状．对照组骨小梁仍较稀疏．空白组仅见少量稀疏的骨小梁,小梁间有较多纤维组织充填．骨钙素（OC）免疫组化结果显示:术后第2周,实验组、对照组和空白组OC表达分别达到高峰,其中实验组表达量大于对照组和空白组（P＜0.01）．术后第4周,实验组、对照组和空白组OC表达均明显下降（P＜0.01）,但实验组表达量大于对照组和空白组（P＜0.01）．术后8周3组的OC表达无明显差异（P＞0.05）．结论　纤维蛋白胶/BMP-2复合物具有缓慢释放BMP-2的作用,能够持续促进骨缺损区骨组织的再生和钙化,加速骨缺损的愈合,为临床提供一种有效促进骨愈合的方法．     

糖尿病对大鼠骨缺损愈合影响的实验研究

目的初步探讨糖尿病对大鼠骨缺损愈合的影响。方法雄性Wistar大鼠90只随机分为实验组(n=54)和正常对照组(n=36)。实验组腹腔注射四氧嘧啶建立糖尿病动物模型,然后在各组鼠胫骨处用手术方法制成骨缺损模型,每周分别处死4只大鼠,取出骨标本,脱钙后制成切片,采用免疫组化方法进行染色,光镜下观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的表达强度。并于术后4周、5周、6周进行生物力学检测。结果糖尿病组与正常组相比,糖尿病鼠骨缺损处机械力量降低。免疫组化显示:在骨缺损愈合早期,BMP-2在骨痂内广泛表达,而糖尿病组骨痂组织中表达比正常组低得多。结论实验结果表明糖尿病明显影响大鼠骨缺损处骨痂形成,降低BMP-2表达,糖尿病可能通过降低骨缺损处细胞因子的合成,影响骨缺损的愈合。     

BMP和VEC复合磷酸钙陶瓷人工骨修复大段骨缺损的研究

目的 探讨骨形态发生蛋白(BMP)结合血管内皮细胞(VEC)修复兔桡骨大段骨缺损的效果.方法 将BMP/VEC/β-TCP和BMP/β-TCP两种复合材料分别植入到兔桡骨15mm大段骨缺损模型中,以单纯植入β-TCP材料作对照.在术后2,4,8,16周,通过大体解剖、X线片、病理组织切片、扫描电镜及荧光标记等方法观察各组材料血管化、骨愈合及降解性.结果 在术后2,4,8,16周,病理组织切片及X线片显示BMP/VEC/β-TCP组骨缺损修复及血管化程度优于BME/β-TCP组和单纯材料组.结论 BMP和VEC联用有明显促进材料血管化及骨缺损修复的作用,效果明显优于单纯应用BMP和单纯植入磷酸钙生物陶瓷人工骨支架.     

大段骨与大面积皮肤复合缺损的显微外科修复

总结用于一期修复肢体大段骨与大面积软组织复合缺损的显微外科技术及其临床应用效果。方法１９例用背阔肌肌皮瓣与腓骨组合移植,２例用双侧背阔肌肌皮瓣与腓骨组织移植来修复下肢和上肢的骨与皮肤复合缺损,其中１６例采用桥式交叉吻合血管的方式重建移植组织的血液循环。     

去势大鼠骨中BMP-2, BMP-7基因表达

0 引言 BMP-2有很强的诱导及促进成骨细胞分化和诱导体外成骨能力.许多实验表明BMP-2基因表达是成骨细胞分化必不可少的因素.     

可长时间缓释骨形态发生蛋白2的聚己内酯复合支架的制备及应用

目的 制备一种可长时间缓释骨形态发生蛋2(BMP-2)的聚己内酯(PCL)复合支架,并通过检测其对人源骨髓间充质于细胞(BMSC)成骨分化的影响探讨其在骨组织工程中的应用.方法 将磷脂(PL)和BMP-2混合形成的BMP-2/PL混合物(B/P)分散在二氯甲烷中,与PCL混合后,采用相分离法制备负载BMP-2的三维PCL-B/P复合支架和PCL-B传统支架,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种支架的BMP-2缓释效果.将BMSC种植在PCL-B传统支架和PCL-B/P复合支架中,分别采用CCK-8法和实时定量PCR(qPCR)检测两种支架上BMSC的增殖和成骨分化能力.结果 与PCL-B传统支架对比,PCL-B/P复合支架对BMP-2缓释效果更佳,缓释时间更长,可达22 d.在BMSC培养的第7、14和21天,PCL-B/P复合支架上BMSC的增殖能力均优于PCL-B传统支架(P＜0.05),且PCL-B/P复合支架上BMSC中碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白、骨钙、骨桥蛋白3种成骨基因mRNA的表达均高于PCL-B传统支架(P＜0.05,P＜0.01).结论 成功地制备出一种可长时间缓释BMP-2的高分子三维PCL-B/P复合支架,其较PCL-B传统支架能更好地诱导BMSC的增殖和成骨分化.     

脱钙骨颗粒骨水泥骨形成蛋白复合材料配方优化研究

目的 探讨脱钙骨基质颗粒（DBM）、骨水泥（BC）、牛骨形成蛋白（bBMP)的最佳比例和最方便的复合方法。方法 提取bBMP,制备狗DBM,二者按1：25的质量比用直接掺合法和吸附法复合后,再用BC按不同的质量比复合,将复合后的材料行体外生物力学测定和扫描电镜观察,体内成骨诱导活性测定和植入实验。结果 bBMP与DBM直接掺合和吸附法复合后,所得材料的成骨诱导活性无差别。复合材料中DBM的质量比≤40%时,材料内部的大部分间隙＜100μm,空隙率＜20％,不利于新生血管长入和新骨形成。DBM的质量比≥80％时,DBM和BC不能复合在一起,从而失去塑形性,DBM的质量比在50％－75％的范围内,随DBM质量比的增加生物力学强度逐渐降低而成骨诱导和血运重建的质量越好。结论 bBMP与DBM复合以直接掺合法最方便而不影响复合材料的成骨诱导活性。DBM的质量比为50％－60％时,复合材料既具有相当的生物力学强度,又利于诱导新骨形成和血运重建,适宜于修复承重部位的骨缺损,比例为75％时可用于修复非承重部位的骨缺损。     

骨折延迟愈合患者外周血骨形态发生蛋白-2水平的检测

目的:探讨骨折延迟愈合患者外周血骨形态发生蛋白-2(BMP-2)水平的变化与其临床特征之间的关系。方法:73例骨折患者应用ELISA方法对其骨折后l、2、4、8、12、24、36、48、60周进行外周血的BMP-2检测,检测结果按照骨折延期愈合与正常愈合,延期愈合组中又按照骨折部位、对常规治疗的反应效果进一步分组,统计这些组别外周血中BMP-2的不同表达水平。结果:骨延迟愈合患者外周血BMP-2在创伤后第一周内迅速升高,第2周内迅速回落,而后维持在比正常人群还低的水平;骨正常愈合患者中第1~2周缓慢升高,至第8周才开始回落。将骨延迟愈合患者细分化后发现四肢骨近端部位外周血BMP-2表达规律接近于总骨延迟愈合患者外周血BMP-2随时间表达规律。而四肢骨远端包括掌指骨外周血BMP-2在骨折后一直未见增高。常规治疗48周后临床愈合的患者其外周血BMP-2时间表达规律与正常对照组相似,而有效和无效组外周血BMP-2时间表达规律则与总骨延迟愈合患者外周血BMP-2时间表达规律。结论:骨折后外周血中BMP-2表达水平与骨折愈合情况及骨折部位有关。     

同种异体骨脱钙骨基质联合BMP修复兔桡骨骨缺损的实验研究

目的：探讨异体脱钙骨基质（DBM）骨泥复合骨形态发生蛋白（BMP）修复家兔桡骨节段性骨缺损的作用。方法：日本大耳白兔54只,雌雄不限,随机分为3组,A组：空白组（缺损区不植入任何材料）,B组：对照组（缺损区植入金世植骨灵）,C组：实验组（缺损区植入DBM骨泥）。建立家兔单侧桡骨骨缺损模型,采用同种异体骨DBM骨泥复合BMP进行修复,复合骨泥中加入骨胶原作为塑形剂,术后4、8、12周观察新骨生成情况,通过形态学、X线、组织学及计算机图像分析等观察指标,并与对照组及空白组进行比较,客观评价骨泥诱导成骨及骨缺损修复能力。结果：DBM与BMP复合骨泥易根据骨缺损大小塑形,术中操作简单。术后A组骨缺损未获骨性修复,B、C组骨缺损均获得骨性愈合,且新骨面积测定显示B、C组间成骨速度无明显差异（P〉0．05）,比A组快（P〈O．01）。结论：异体DBM骨泥复合BMP具有良好的骨修复作用。     

bFGF与VEGF复合磷酸钙骨水泥修复 兔桡骨缺损的实验研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与血管内皮生长因子(VEGF)促进骨生长是否具有协同作用。方法：36只家兔的双侧桡骨均建立1.0 cm的骨缺损实验模型后随机分为A,B,C,D组。其中A组为对照组,于骨缺损部位植入单纯磷酸钙骨水泥(CPC);B组植入复合bFGF的CPC,C组植入复合VEGF的CPC,D组植入联合应用bFGF和VEGF的CPC。分别于术后3,6,12周切取标本,通过X线摄片、骨密度测量、生物力学测试、组织形态学观察等手段,观察各个时期新骨形成的情况。结果：X线摄片显示12周时D组骨缺损完全修复,材料基本降解;B,C组骨缺损基本修复。骨密度测量显示术后12周时D组骨密度明显高于B,C两组(P＜0.05)。生物力学测试(12周时)显示D组最大抗折载荷明显高于B,C两组(P＜0.05)。组织形态学观察显示12周时,编织骨改建为成熟的板层骨,D组中皮质骨和髓腔的正常关系以及骨小梁正常的排列结构重新恢复,B和C组则未见骨髓腔再通。 结论：CPC/bFGF,CPC/VEGF和CPC/bFGF+VEGF 3组复合物均能促进骨组织生长及加速骨缺损的修复;CPC/bFGF+VEGF复合物促进骨组织生长的能力明显优于CPC/bFGF和CPC/VEGF复合物,说明bFGF与VEGF促进骨生长具有协同作用。     

骨形态发生蛋白2对体外培养结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨形态发生蛋白2对体外培养的结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法重组人骨形态发生蛋白（rhBMP-2）不同浓度（分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml）、不同时间干预细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）检测rhBMP-2对细胞增殖的影响;Hoechest 33342染色观察细胞形态变化;An-nexinV/PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡。结果BMP-2对HT-29细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性,100 ng/ml浓度24 h内抑制作用最强。随时间延长抑制作用无显著性差异。BMP-2作用24 h后Hoe-chest 33342染色可见核固缩、核碎裂等细胞凋亡表现增加明显。AnnexinV/PI染色流式细胞仪分析显示作用24 h后细胞凋亡较对照组有显著性差异。结论BMP-2在一定作用时间、浓度条件下对结肠癌HT-29细胞有明确的抗增殖促凋亡作用。     

重组人骨形成蛋白2基因在大肠杆菌中的克隆

目的：在大肠杆菌中克隆人骨形成蛋白2基因,方法：由人成骨细胞中提取细胞总RNA,利用逆转录PCR方法扩增获得人骨形成蛋白2基因cDNA;将获得基因片段重组到pCI质粒中,转化到大肠杆菌Top10后挑选克隆,利用限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定重组质粒。结果：质粒DNA酶切分析及核酸序列分析证实,获得的基因片段为人BMP2全编码序列,结论：克隆获得人骨形成蛋白2基因,为表达骨形成蛋白2奠定了基础。     

组织工程化磷酸钙骨水泥修复兔股骨远端骨缺损的评价

背景：磷酸钙骨水泥是一种良好的骨移植替代材料,具有优异的组织相容性和骨引导性能。但是骨诱导性能不佳限制了其广泛应用。本研究目的是评价具有骨诱导活性的组织工程化磷酸钙骨水泥修复骨缺损的效果,并观察了种子细胞在体内的增殖、分化和转归情况。 方法：通过将微囊化rhBMP-2基因修饰的骨髓间充质干细胞种植入磷酸钙骨水泥中来制备组织工程化磷酸钙骨水泥。rhBMP-2基因修饰的骨髓间充质干细胞可以共表达绿色荧光蛋白（GFP）与重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）。制备兔双侧股骨髁骨缺损模型,将组织工程化磷酸钙骨水泥随机植入一侧骨缺损中,单纯磷酸钙骨水泥植入对侧骨缺损中,做自身对照。12w后取材,进行X线片检查、组织形态学观察、骨计量学评价和种子细胞体内示踪观察。 结果：X线片显示两种骨水泥对骨缺损填充良好,组织工程化磷酸钙骨水泥吸收速度和新骨形成速度较快。组织学观察与骨计量学评价结果示组织工程化磷酸钙骨水泥被分解成无数个小块,可以看到活动动性骨吸收和骨重建现象,单纯骨水泥组中残余骨水泥面积相对较大。体内示踪结果显示,术后12w组织工程化磷酸钙骨水泥组中仍有大量的细胞同时表达GFP和rhBMP-2,这些细胞不仅分布于髓腔中,也分布于骨表面。 结论：组织工程化磷酸骨水泥可以有效地修复骨缺损,同种异体移植种子细胞可以在体内存活并分化。