P2受体介导对大鼠三叉神经节神经元电压门控性钙离子通道的作用

目的应用全细胞膜片钳研究P2受体介导对大鼠的三叉神经节(TG)神经元上电压门控性钙离子通道(VGCC)的作用。方法急性分离大鼠TG神经元细胞,通过全细胞膜片钳记录电压门控性钙离子通道电流,分别灌流腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)及P2X、P2Y受体的激动剂,观察其对VGCC电流的作用。结果 ATP对大鼠TG神经元细胞的VGCC电流有可逆的抑制作用(P<0.05),P2X受体激动剂αβ-meATP能够显著抑制TG神经元的VGCC电流(P<0.05),而P2Y受体激动剂2-MeSADP对VGCC电流无明显作用。结论 P2受体介导对大鼠的TG神经元上VGCC电流有抑制作用。     

卡马西平对三叉神经痛大鼠三叉神经节及血清中BDNF表达变化的影响

目的：三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)是一种严重的慢性神经病理性疼痛,主要影响三叉神经分布区域,临床治疗效果不佳。TN的治疗方法众多,但目前临床上主要是通过服用卡马西平(carbamazepine,CBZ)来抑制疼痛。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和慢性痛密切相关。本研究通过慢性压迫性损伤眶下神经(chronic constriction injury of the infraorbital nerve,ION-CCI)大鼠模型观察CBZ处理对TN大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)和血清中BDNF表达的影响。方法：建立雄性SD大鼠ION-CCI模型,并将其随机分为假手术(sham)组、TN组、TN+低剂量(20 mg/kg)CBZ处理组、TN+中剂量(40 mg/kg)CBZ处理组、TN+高剂量(80 mg/kg)CBZ处理组。在手术前后定时测量各组大鼠的面部机械痛阈(mechanical pain threshold)。使用实时聚合酶链反应技术测定各组大鼠TG中...     

电针深刺对三叉神经痛大鼠ERK蛋白表达及Kv3.4、Kv4.3基因表达的影响

目的 观察电针深刺对三叉神经痛(TN)大鼠神经节中p-ERK蛋白及Kv3.4、Kv4.3基因表达的影响及作用机制.方法 2019年1月—2020年1月在首都医科大学实验中心进行实验.雄性SD大鼠48只,按简单随机数字表法分成假手术组、模型组、电针组,每组16只.模型组、电针组采用眶下神经慢性缩窄环术建立TN模型,电针组...     

P2Y及P2Y2受体的研究进展

嘌呤P2受体家族是比较复杂的受体家族之一,可分为门控离子通道P2X受体和G蛋白偶联P2Y受体,目前已有7种P2X受体和8种P2Y受体被克隆。随着分子生物技术的发展,P2Y受体的研究取得了明显的进展,P2Y受体在体内分布广泛,功能复杂,迄今为止已从人体组织细胞克隆出的P2Y受体分别为P2Y1,2,4,6,11,12,13．14。P2Y2受体作为P2Y受体的一个重要亚型,与诸多生理功能密切相关,日趋受到人们的重视。本文针对P2Y受体和P2Y2受体的分子结构特征,分类和生理功能等方面进行综述。     

ATP对大鼠三叉神经节神经元瞬时外向钾电流(IA)的快速作用

目的 通过大鼠三叉神经节(TG)神经元体外培养及全细胞膜片钳技术, 观察ATP对大鼠TG神经元上电压敏感性钾离子电流IA的调节及可能的机制。方法 雄性SD大鼠TG神经元急性分离,体外培养4 h后进行全细胞膜片钳记录。结果 在TG神经元上ATP可以诱导三种型式的电流, 即T型、S型和B型。ATP可以抑制T型神经元IA(P<0.05),这种作用可以被P2X3受体拮抗剂TNP-ATP拮抗, 在S型神经元上ATP对IA无作用。在ATP未能诱导出内向电流的TG神经元, ATP仍然对IA有抑制作用, 而且这一作用可以被P2Y受体的拮抗剂suramin拮抗。结论 ATP对分离培养的TG神经元上IA可以起到抑制作用, 这一作用可能通过P2X3受体或P2Y受体来完成, 但ATP对IA电流的作用机制目前尚不十分清楚。这一研究将为进一步阐明神经病理性痛的发生机制提供实验依据, 为临床治疗提供理论基础。     

P2Y6受体在慢性癫痫发作大鼠海马组织中的表达及对Ca~(2+)的影响

目的:建立慢性癫痫发作SD大鼠模型并检测海马组织P2Y6受体表达改变,研究P2Y6受体-Ca2+信号通路改变。方法:采用氯化锂和匹罗卡品腹腔注射建立SD大鼠慢性癫痫发作模型(EPI组)并检测其脑电图,以腹腔注射生理盐水SD大鼠为对照(CON组)。采用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot检测EPI组和CON组SD大鼠海马组织P2Y6受体mRNA和蛋白质表达并比较其差异。采用Fura-2/AM检测EPI组和CON组SD大鼠新鲜海马组织细胞内Ca2+浓度并对比其差异。结果:CON组正常SD大鼠脑电图波形主要以α波为主,并伴有低幅度的β波及少量的δ波,几乎未捕捉到棘波发放;EPI组SD大鼠的脑电图出现较为规律的棘波发放,其频率多集中于28Hz,波幅不高于200μV。EPI组慢性癫痫发作SD大鼠海马组织P2Y6受体表达、mRNA、蛋白质和细胞内Ca2+显著高于CON组正常SD大鼠(均P<0.05)。结论:P2Y6受体在慢性癫痫发作大鼠海马组织表达显著升高,激活下游信号传导通路导致细胞内Ca2+水平升高,可能在慢性癫痫发作的发病机制中具有重要作用。     

吗啡精神依赖对大鼠消化道嘌呤受体亚型P2Y2mRNA表达的影响

目的 观察吗啡条件性位置偏爱(CPP)大鼠消化系统食道、胃、十二指肠P2Y2受体mRNA表达的变化,探讨阿片类精神依赖下消化系统异常的分子机制。方法 吗啡剂量递增颈背部皮下注射建立大鼠吗啡CPP模型,实时荧光定量RT-PCR分别检测其食道、胃、十二指肠P2Y2受体mRNA的表达水平,采用2-( △△Ct) 方法进行比较分析。结果 与生理盐水对照组比较,模型组大鼠在白箱的停留时间明显延长(P＜0.01);食道、胃、十二指肠P2Y2受体mRNA表达水平下调,分别仅为NS对照组的0.53、0.14和0.26倍。结论 P2Y2受体mRNA表达下调可能与吗啡精神依赖过程胃肠道功能的失调有关。     

大鼠坐骨神经损伤后嘌呤P 2Y 4受体表达变化的实验探究

目的 探讨大鼠坐骨神经受损是否会影响嘌呤P2Y4受体表现,对三磷酸腺苷/三磷酸鸟苷(ATP/UTP)对周围受损神经起到的积极作用进行研究.方法 取36只SD大鼠作为研究对象,将36只大鼠随机均分为正常组、对照组以及观察组.对观察组大鼠行一侧坐骨神经切断修复模型,分别在术后1d、1、2、3、4周后处死大鼠,取出部分坐骨神经,脊髓以及神经节.对照组大鼠仅做切口,不进行其他手术;正常组为正常参照对象,同时检测RT-PCR(半定量逆转录-聚合酶链式反应)产物的序列.结果 正常组大鼠与对照组大鼠脊髓与坐骨神经均发现P2Y4mRNA表达[正常组脊髓:(0.215±0.032),坐骨神经:(0.643±0.011);对照组脊髓:(0.221±0.027),坐骨神经:(0.653±0.012)];2组对比差异无统计学意义.观察组大鼠坐骨神经切断后,吻合口远端P2Y4mRNA表达呈逐渐变强现象.结论 观察组大鼠坐骨神经切断后,吻合口远端P2Y4mRNA表达呈逐渐变强现象,近端呈逐渐减弱现象.     

P2Y2受体对支气管哮喘豚鼠α防御素表达的调控

目的研究支气管哮喘豚鼠α防御素（RNP）的表达及P2Y2受体对其的影响。方法72只成年雄性豚鼠随机分为正常组（A组）和哮喘组（B组）,以腹腔内注射联合雾化吸入卵白蛋白（OVA）复制哮喘模型。将A组及B组分为生理盐水组（A1/B1组）、ATP干预组（A2/B2组）、苏拉明干预组（A3/B3组）,分别对豚鼠腹腔内注射生理盐水、ATP及苏拉明。检测豚鼠气道外周阻力（RL）、肺泡灌洗液（BALF）细胞总数及中性粒细胞（PMN）计数;HE染色显示炎性细胞浸润情况;ELISA法检测血浆RNP和白细胞介素8（IL-8）表达含量;免疫组化和RT-PCR方法检测肺组织中RNP蛋白和mRNA以及P2Y2 mRNA的表达情况。结果哮喘组及其干预组豚鼠RL上升幅度较A组及其干预组增加10%（P〈0.05）。HE染色证实哮喘组豚鼠支气管管腔变窄,炎性细胞浸润。B1组BALF中细胞总数及PMN计数高于A1组和B3组,低于B2组（P〈0.05）;A组间比较,差异无统计学意义。B1组血浆和肺组织中RNP表达较A1组和B3组增高,较B2组表达减低（P〈0.05）;A1组较A2组表达减低,与A3组比较增高（P〈0.05）。B1组血浆中IL-8表达较A1组和B3组增高,较B2组减低（P〈0.05）;A组及其干预组比较,无明显差别（P〉0.05）。RNP主要表达于细支气管中,尤其PMN浸润部位。RNP mRNA表达结果与肺组织中RNP表达趋势一致。A1组P2Y2 mRNA较A2组表达降低,与A3组比较增高（P〈0.05）;B1组P2Y2 mRNA表达较B2组降低,与B3组比较增高（P〈0.05）。直线相关分析显示A组及其干预组RNP与PMN、IL-8无明显相关性,RNP与P2Y2mRNA呈正相关;B组及其干预组RNP与PMN、IL-8、P2Y2 mRNA呈正相关。结论α防御素在支气管哮喘豚鼠中表达增高;豚鼠α防御素表达可能与P2Y2受体有关。     

正天丸对偏头痛模型大鼠三叉神经二级神经元P2X3受体表达的影响研究

目的 探究正天丸对偏头痛模型大鼠三叉神经二级神经元P2X3受体表达的影响。方法 2014年9-10月选取SPF级SD雄性大鼠30只,采用随机数字表法分为3组,分别为对照组、模型组、正天丸组,每组10只。正天丸组大鼠给予1.62 g·kg-1·d-1正天丸灌胃,对照组和模型组大鼠给予1 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃,各组大鼠连续给药 7 d。模型组、正天丸组大鼠末次灌胃30 min后左侧肩部皮下注射10 mg/kg硝酸甘油注射液,制备实验性偏头痛动物模型,对照组大鼠同期左侧肩部皮下注射0.5 ml 0.9%氯化钠溶液。观察各组大鼠耳红出现、消失时间及挠头开始、结束时间等行为学表现,采用免疫荧光、Western blotting法、实时荧光定量PCR法检测各组大鼠三叉神经颈髓复合体（TCC）中P2X3受体及其mRNA表达水平。结果 模型组和正天丸组大鼠耳红出现时间、挠头开始时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);正天丸组大鼠耳红消失时间和挠头结束时间均较模型组提前(P＜0.05)。免疫荧光结果显示,对照组、模型组和正天丸组大鼠三叉神经TCC中均有P2X3受体阳性表达,主要分布在三叉神经脊束核尾部（TNC）和C1、C2颈髓背侧核浅层（Ⅰ、Ⅱ层）,模型组表达亮度较对照组升高,正天丸组表达亮度较模型组降低。模型组和正天丸组大鼠三叉神经TCC中P2X3受体及其mRNA表达水平较对照组升高（P＜0.05）;正天丸组大鼠三叉神经TCC中P2X3受体及其mRNA表达水平较模型组降低（P＜0.05）。结论 正天丸对偏头痛的治疗作用可能与其可以抑制三叉神经二级神经元P2X3受体表达上调有关。     

实验性牙齿移动中TG内P2X3受体的表达变化

目的: 研究正畸牙移动中加力后P2X3受体在三叉神经节的表达变化规律,以探讨P2X3受体在正畸牙移动疼痛机制中的作用. 方法: 以雄性SD大鼠为实验对象,模拟临床矫治的牙移动过程,应用免疫组织化学手段进行研究. 结果: 大鼠牙齿加力后,观察到三叉神经节神经元P2X3受体免疫反应阳性率增高,并呈现一定的时间规律:实验后1 d开始出现变化,实验后3 d达高峰,14 d后下降至与对照组基本一致. 结论: 大鼠牙移动过程中,三叉神经节内(TG)的P2X3受体表达变化是一过性变化,呈现短时上调的规律,时间与正畸牙移动疼痛时间一致.     

雌激素对直肠炎大鼠背根神经节P2X3受体mRNA表达的影响

目的:观察结直肠三硝基苯磺酸(TNBS)致炎条件下,改变大鼠体内雌激素和孕激素水平对背根神经节(DRG)中P2X3和P2X2 mRNA表达的影响。方法:SD大鼠分为4组:假手术组、去卵巢组、去卵巢加雌激素替代组、去卵巢加雌孕激素替代组,每组手术完成后饲养5周,再行TNBS致炎,5~7 d后用于实验。实时定量RT-PCR法检测各组P2X3 和P2X2 mRNA的表达。结果:去卵巢组大鼠DRG中P2X3 mRNA表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(1.08±0.35 vs 1.66±0.66,P<0.05,n=4),雌激素替代组有明显上升(2.06±0.58),明显高于去卵巢组(P<0.01,n=5),而雌孕激素同时替代组明显低于单独添加雌激素组(2.06±0.58 vs 0.87±0.28,P<0.01,n=5)。各组大鼠DRG中P2X2 mRNA表达无统计学差异。结论:结直肠TNBS致炎条件下,雌激素可促进大鼠DRG中P2X3 mRNA表达,但对P2X2 mRNA无明显影响;孕激素的作用可能与雌激素正好相反。炎性条件下,雌孕激素可能通过影响P2X3受体的表达发挥调节炎性痛作用。     

不同留针时间针刺治疗带状疱疹后遗神经痛疗效观察

目的观察不同留针时间针刺治疗带状疱疹后遗神经痛(PHN)的疗效,探讨最佳留针时间。方法将78例PHN患者分为10(17例)、20(20例)、30(22例)和40 min组(19例),4组患者均取夹脊穴、人中、肾俞、手背腰痛点、大肠俞,用电针治疗仪连续波进行留针。采用六点行为评分法进行疼痛积分评定。结果 4组治疗前患者疼痛评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。4组患者治疗后与治疗前比较疼痛评分均显著降低(P<0.01)。治疗后10 min组与20 min组疼痛评分比较差异无统计学意义(P>0.05),30和40 min组疼痛评分显著低于10和20 min组(P<0.01),30 min组与40 min组疼痛评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。10 min组与20 min组、30 min组与40 min组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05);30和40 min组总有效率显著高于10和20 min组(P<0.05)。结论针刺治疗PHN时留针30 min可获得满意疗效。     

三叉神经痛大鼠三叉神经节内谷氨酸表达分布的研究

目的研究三叉神经痛(TN)大鼠时其三叉神经节(TG)内谷氨酸(Glu)表达与分布的关系。方法皮下注射硝酸甘油构建三叉神经痛大鼠模型;应用免疫组化技术检测大鼠三叉神经节Glu含量与分布。结果皮下注射硝酸甘油构建三叉神经痛大鼠的三叉神经节内Glu含量增多且其主要分布在三叉神经节表层。结论 Glu可能与三叉神经痛发生有密切关系。     

三叉神经痛大鼠半月神经节内PPTA mRNA及其相应蛋白的表达研究

目的探讨P物质（substanceP,SP）在三叉神经痛发病机理中的作用。方法雄性Wister大鼠40只随机分为4个实验组及相应的对照组,每组5只。实验组大鼠在左侧三叉神经分支眶下神经行慢性缩窄环术。观察术后大鼠对机械刺激的反应阈值,三叉神经节（trigeminal gangila,TG）切片行SP免疫组织化学反应（SABC法）和原位杂交反应。光镜观察摄片,并用HPIAS-1000病理图文分析系统软件进行测定。SPSS13．0软件包对数据进行统计学分析。结果术后2周到8周,实验组大鼠手术侧疼痛阈值较对侧及对照组同侧显著降低（P〈0．01）,手术侧TG内SP及PPTAmRNA的表达较对侧及对照组同侧显著升高（P〈0．01）。术后12周比较均无统计学差异（P〉O．05）。结论SP在三叉神经痛的发病机理中发挥重要的作用。     

神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达及电生理学特性的改变

目的 观察坐骨神经缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛后大鼠背根节神经元P2X3受体的表达和电生理学特性的变化.方法 应用免疫组化技术观察CCI后不同时间相应节段(L4、L5、L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化;全细胞膜片钳技术观察CCI后不同时间L4、L5、L6节段背根节神经元ATP反应电流的变化.结果 CCI后7、14 d,损伤同侧L4、L5、L6节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加,而且染色加深,相应节段的脊髓背角浅层P2X3免疫反应性亦明显增加.CCI后7、14 d,损伤同侧相应节段背根节产生ATP快反应电流的细胞数量明显增加,电流幅度亦增强.应用非选择性P2X受体拮抗剂Suramin能明显抑制ATP反应电流.结论 坐骨神经缩窄性损伤致神经痛后同侧对应节段的背根节神经元P2X3受体表达明显增加,ATP快反应电流明显增强.     

半月神经节射频热凝治疗不同程度血管关联性三叉神经痛的效果分析

目的 观察三叉神经射频热凝治疗不同程度血管关联性三叉神经痛的临床疗效。方法 采用回顾性分析纳入2015年9月—2020年11月安徽医科大学第一附属医院101例三叉神经痛患者,包括32例三叉神经与周围血管无关联患者(A组),40例三叉神经与周围血管密切相关患者(B组)和29例血管压迫三叉神经患者(C组)。3组均行CT引导半月神经节射频热凝术,观察并比较3组术前及术后1、3、6、12个月的VAS评分、生活质量、卡马西平使用剂量、治疗优良率。结果 3组患者VAS评分比较差异有统计学意义,组间及组内不同时间点两两比较差异有统计学意义(F_{组间/时间/交互}=125.402,261.255,20.994;均P<0.05);3组患者卡马西平使用剂量比较差异有统计学意义,组间及组内不同时间点两两比较差异有统计学意义(F_{组间/时间/交互}=126.065,266.616,15.125;均P<0.05)。A组VAS评分和卡马西平使用剂量低于B组、C组(均P<0.05),B组与C组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。3组患者手术后VAS评分...     

CT引导半月神经节射频热凝治疗血管神经关系密切型三叉神经痛的疗效

目的 探讨CT引导半月神经节射频热凝治疗血管神经关系密切型三叉神经痛的临床疗效.方法 选取安徽医科大学第一附属医院疼痛科2015年8月至2019年3月收治的血管神经关系密切型三叉神经痛患者95例,均给予CT引导半月神经节射频热凝治疗.分别于术前及术后1、3、6、12个月,记录患者的视觉模拟评分(VAS),评价患者睡眠质量,统计患者每周卡马西平使用剂量.结果 患者各时间点VAS评分、卡马西平使用剂量及睡眠质量评分进行比较,差异均有统计学意义(P<0.05);患者术后1、3、6、12个月的VAS评分、卡马西平使用剂量及睡眠质量评分均低于术前,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CT引导半月神经节射频热凝适用于血管神经关系密切型三叉神经痛的治疗,可改善患者疼痛,提高患者生活质量,手术方法 较为安全.     

低频电针对2型糖尿病神经痛大鼠DRG P2X3受体的抑制作用

目的 观察低频电针（electroacupuncture,EA）对2型糖尿病神经痛（diabetic neuropathic pain,DNP）模型大鼠的痛阈以及L5背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）的P2X3受体表达的影响。方法 实验一：将50只SD大鼠随机分为对照组8只和造模组42只。造模组给予高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ,35 mg/kg）腹腔注射建立大鼠DNP模型,对照组以常规饲料喂养并给予相同剂量的柠檬酸缓冲液注射。造模组中模型成功的大鼠进一步分为模型组（DNP group）与低频电针治疗组（DNP+EA group）。电针治疗选用双侧“足三里”、“昆仑”穴,频率2 Hz,强度1 mA治疗15 min,后2 mA治疗15 min,每日1次,共治疗7次。观察大鼠高脂高糖饲养0、5周的胰岛素敏感指数（insulin sensitivity index,ISI）及0、5、7周空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）水平变化;采用动态足底触觉仪检测大鼠高脂高糖饲养0、5、7周及电针3、5、7 d 6个时间点双后足缩腿阈（paw withdrawal thresholds,PWTs）的变化;采用免疫荧光法测定L5 DRG P2X3受体表达。实验二：将DNP造模成功的大鼠分为电针组（EA+Vehicle group）和P2X3激动剂组（EA+αβ-meATP group）。电针干预同上。EA+αβ-meATP group于每次电针干预前在大鼠足趾下注射αβ-meATP（0.6 μmol/L,100 μL）。EA+vehicle group大鼠注射等剂量的PBS缓冲液,其余干预相同。检测机械痛阈。结果 ①与对照组大鼠比较,模型组大鼠高脂高糖饲养5周后ISI均明显降低（P<0.01）,高脂高糖饲养7周后FPG明显升高（P<0.01）,说明成功建立2型糖尿病模型（造模成功率为69.04%）;②PWTs：与对照组比较,模型组大鼠双侧PWTs明显降低（P<0.01）,说明2型DNP造模成功;与模型组比较,低频电针治疗组大鼠在治疗后各时点均出现双侧PWTs的显著增加（P<0.01）;而与电针组比较,P2X3激动剂组双侧PWTs均明显降低（P<0.01）。③免疫荧光法检测结果显示：与对照组比较,模型组大鼠L5 DRG P2X3阳性细胞表达明显增加（P<0.01）;与模型组比较,低频电针治疗组大鼠L5 DRG P2X3阳性细胞表达均明显减少（P<0.01）。结论 低频电针能通过下调L5 DRG P2X3受体有效改善2型DNP。