致敏树突状细胞抗乳腺癌作用的实验研究

目的 探讨负载肿瘤抗原DC诱导的CTLs对乳腺癌细胞的杀伤作用.方法 以负载肿瘤细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平,用LDH法检测CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用.结果 负载肿瘤抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P＜0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单个核细胞组(P＜0.01)及对照的HT-29组(P＜0.01).结论 采用乳腺癌细胞冻融抗原体外致敏DC,诱导产生肿瘤抗原特异性CTLs具有显著的抑瘤效应,实验证明致敏DC治疗乳腺癌是一种有效的方法 ,有望成为乳腺癌免疫治疗的新疗法.     

当归多糖对树突状细胞成熟和功能的影响

目的:探讨当归多糖对外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外分化、成熟和功能的影响。方法:以外周血单个核细胞为来源,联合应用 GM-CSF、IL-4及 TNF-α,在体外诱导培养 DC。采用 MTT 法测定 DC 诱导的混合淋巴细胞反应分析 APS-3对 DC 刺激淋巴细胞增殖功能的影响;采用流式细胞术检测细胞表面标志 CD1a,HLA-DR,CD86的表达,来评价 APS-3对 DC 分化的作用;RT-PCR 技术研究 DC IL-12p40mRNA 的表达,探讨 APS-3对 DC 分泌 Th1型细胞因子 IL-12的影响。结果:人 PBMC 在体外可诱导培养出具有典型形态、表型及免疫活性的 DC。采用不同浓度APS-3(0.1、0.3、1.0μg/mL)处理培养的 DC 表面标志 CD1a、CD86、HLA-DR 及 IL-12mRNA 表达量均呈上升趋势。经不同浓度 APS-3处理的 DC 诱导的 MLR,在小剂量范围(0.01-1μg/mL)是剂量依赖性的增强作用,在高剂量范围(30-100μg/mL)表现为抑制效应;常规培养8天生成的 DC 与淋巴细胞共培养后,加入不同浓度 APS...     

卵蛋白对致敏及哮喘小鼠树突状细胞功能的影响

目的:研究树突状细胞(DC)在哮喘发病中的作用.方法:用卵蛋白(OVA)腹腔注射和雾化吸入复制致敏组和哮喘组小鼠模型,采用流式细胞技术测定脾脏DC的表达.结果:致敏组DC的百分率明显高于对照组,而哮喘组与对照组相比差别无统计意义.结论:致敏小鼠脾DC表达明显增加,但哮喘小鼠DC表达不明显.     

卵蛋白对致敏及哮喘小鼠树突状细胞功能的影响

目的：研究树突状细胞（DC）在哮喘发病中的作用。方法：用卵蛋白（OVA）腹腔注射和雾化吸入复制致敏组和哮喘组小鼠模型，采用流式细胞技术测定脾脏DC的表达。结果：致敏组DC的百分率明显高于对照组，而哮喘组与对照组相比差别无统计意义。结论：致敏小鼠脾DC表达明显增加，但哮喘小鼠DC表达不明显。     

复方扶正中药含药血清对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞来源树突状细胞影响

目的:研究复方扶正中药对急性髓细胞白血病完全缓解期(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMNC)来源树突状细胞(DC)的影响。方法:分离培养AML-CR患者的BMNC,用不同浓度复方扶正中药含药血清与之进行体外培养,倒置显微镜下观察诱导转化的DC形态学特征,流式细胞术检测DC表面分子CD86、CD-1a、HLA-DR的表达。以诱导转化的DC分别与异体T细胞、自体T细胞共同培养,以激发T细胞,MTT法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人白血病细胞株K562的杀伤作用。结果:复方扶正中药含药血清与AML-CR患者BMNC培养能促进BMNC分化为形态特征典型的DC,高表达成熟DC的特异性标记(CD86、CD-1a和HLA-DR),并激发T细胞杀伤K562细胞。结论:复方扶正中药对AML-CR患者BMNC来源DC具有明显的促进作用。     

中药多糖与过继免疫联合治疗卵巢癌

目的:观察比较中药多糖干预后的多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞在不同条件下特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的效果,探讨中药与过继免疫联合治疗卵巢癌的可行性。方法:实验分4组,CIK组、PBOC-CIK组、SKOV3Ag-PBDC-CIK组及SKOV3Ag-ADC-CIK组。联合猪苓多糖(100 mg.L-1)、茯苓多糖(100 mg.L-1)、黄芪多糖(100 mg.L-1)及多种细胞因子对卵巢癌患者外周血CIK细胞进行体外诱导和扩增,以卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原致敏外周血与腹水来源的DC细胞,比较单纯CIK、未经抗原负载的外周血树突状细胞(DC)活化的CIK、经抗原负载的外周血DC活化的CIK、经抗原负载的腹水DC活化的CIK对SKOV3细胞的杀伤作用,并动态观察CIK细胞的增殖情况。结果:①CIK与DC共培养可显著增加CIK增殖倍数(P<0.01);②中药多糖干预后CIK对SKOV3卵巢癌细胞株有明显杀伤作用,且杀伤率随效靶比增加而提高,细胞杀伤率分别为(9.12±0.21)%,(10.15±0.27)%,(11.20±0.34)%和(12.73±0.43)%(P<0.05);③SKVO3冻融抗原负载的外周血DC可显著增加CIK特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的能力,杀伤率显著高于未负载抗原外周血DC活化的CIK细胞和单纯CIK细胞(P<0.05或P<0.01);④腹水来源DC负载抗原后所活化的CIK细胞对SKOV3细胞杀伤率,与负载抗原的外周血来源DC活化的CIK无明显差异。结论:经SKOV3肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏的DC,可促进中药多糖干预后CIK细胞扩增,增强CIK细胞对SKOV3卵巢癌细胞的杀伤作用,且卵巢癌腹水可作为过继免疫治疗中效应细胞的一个重要来源。     

G-CSF和GM-CSF对完全缓解AML患者树突状细胞亚群影响的体内外研究

目的研究细胞因子干预下树突状细胞(DC)功能及其分化亚群。方法获取完全缓解的AML患者DC细胞,流式细胞学和形态学方法进行鉴定。MTT法检测其增殖活性和促淋巴细胞增殖活性。ELISA法和PCR技术检测IL-12的水平。结果在G-CSF和GM-CSF干预后,DC细胞高表达HLA-DR(67±5)%、CD11c(58±9)%,其促淋巴细胞增殖能力活性增高,且呈时间依赖性。G-CSF干预组移植物抗宿主病(GVHD)轻于GM-CSF组。结论G-CSF和GM-CSF联合干预后DC细胞的增殖及促增殖活性增强,但G-CSF可减轻小鼠GVHD的发生,可能与G-CSF、GM-CSF可以调节DC细胞的分化亚群相关。     

树突状细胞亚群在慢性移植物抗宿主病中的作用研究

目的：探讨树突状细胞亚群在慢性移植物抗宿主病中的作用。方法：通过三色流式细胞仪检测8例慢性移植物抗宿主病病人治疗前后外周血DC1、DC2变化。结果：慢性移植物抗宿主病病人DC1、DC2明显增高，而治疗好转后DC1、DC2又显著降低。结论：DC1、DC2在cGVHD发病中起着重要作用。     

中药多糖抗肿瘤免疫研究的新视角——对树突状细胞的影响

树突状细胞 (DC)的发现和研究进展为中药多糖抗肿瘤免疫药理研究提供了新的视角 ,本文阐述了DC的生物学特性及抗肿瘤反应、肿瘤宿主DC表型改变与肿瘤免疫抑制、中药多糖抗肿瘤免疫药理研究进展以及从DC探讨中药多糖抗肿瘤免疫药理研究的初步思路。     

姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤作用的影响

目的:研究姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤功能的影响,为临床应用提供理论依据。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC,加入ABP溶液,流式细胞仪检测DC表面CD86和CD11a的表达,混合淋巴细胞反应检测ABP对DC抗原提呈能力的影响,MTT法检测ABP对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对H22肝癌细胞杀伤功能的影响。结果:中剂量ABP组(100μg/mL)DC表面CD86、CD11a表达上调;CTL对肿瘤细胞的杀伤率升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:适当浓度的ABP能促进DC分化成熟,增强DC的抗肿瘤作用。     

人参皂苷Rb1对氧化型低密度脂蛋白诱导的人单核细胞源树突状细胞免疫成熟的影响

目的 研究中药单体人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1, GRb1)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, OX-LDL)诱导的人单核细胞源树突状细胞(dendritic cells, DCs)免疫成熟的影响。     

黄芪对过敏性紫癜患儿急性期外周血树突状细胞分泌细胞因子水平的影响

目的 探讨黄芪（astragalus membranaceus,AM）对过敏性紫癜（henoch schonlein purpura,HSP）患儿急性期外周血树突状细胞（dendritic cells,DC）分泌白细胞介素-10、 12、 18（IL-10、IL-12、IL-18）的影响及其免疫调节机制。     

黄芪多糖诱导成熟的树突状细胞肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨经黄芪多糖（astragalus polysacharin,APS）诱导成熟的树突状细胞（dendritic cell,DC）肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用及其机制。方法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,制备DC细胞,加入营养液体外诱导为未成熟的DC细胞,培养第5天,黄芪多糖组加入终浓度为100μg/mL的黄芪多糖,细胞因子组加入终浓度为20 ng/mL重组人肿瘤坏死因子（rhTNF）-α诱导DC成熟,观察树突状细胞形态及表型变化;成熟DC以SGC-7901肿瘤抗原致敏,与同种异体T细胞共培养,采用MTT法检测T淋巴细胞增殖功能,E LISA法检测共培养上清IL-12、IFN-γ水平;经DC激活的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte,CTL）细胞与SGC-7901肿瘤细胞共培养,采用LDH释放法检测CLT对靶细胞特异性杀伤能力。结果黄芪多糖诱导的DC经形态学观察和表型鉴定,符合成熟DC的特征。黄芪多糖诱导成熟的DC能刺激同种异体T淋巴细胞增殖,T细胞增殖指数随刺激细胞与效应细胞比值的增加而增加（P〈0.05）;DC与T细胞共培养上清IL-12、IFN-γ的水平显著增加且呈时间依赖性（P〈0.05）;经致敏DC激活的CTL能显著杀伤肿瘤细胞,随着效靶比的增加,杀伤作用增强。结论黄芪多糖可在体外诱导DC成熟,并促进其抗原递呈能力,有效活化CTL,增强机体抗肿瘤功能。     

大黄素联合吉西他滨对体外人胰腺癌细胞株BxPC-3生长及凋亡的影响

目的 探讨大黄素(emodin)联合吉西他滨（gemcitabine）对人胰腺癌细胞株BxPC-3的影响。 方法 人胰腺癌细胞株BxPC-3经不同浓度大黄素(0、10、 20、40、80、160 μmol/L)分别作用 24、48、72 h;及大黄素(40 μmol/L) 联合吉西他滨(20 μmol/L)作用72 h。应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测大黄素及大黄素联合吉西他滨对BxPC-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测BxPC-3细胞凋亡情况。 结果 大黄素对BxPC-3细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性,40 μmol/L大黄素作用于BxPC-3细胞24、48、72 h后的细胞存活率分别为79.39%、46.35%、45.44%;大黄素(40 μmol/L) 联合协同吉西他滨(20 μmol/L)作用72 h后胰腺癌BxPC-3细胞的存活率仅为26.62%,与吉西他滨组（42.78 %）及大黄素组（47.18%)比较,差异有统计学意义（P<0.05）。大黄素(40 μmol/L)和吉西他滨(20 μmol/L)单独作用于BxPC-3细胞24 h后,诱导胰腺癌细胞早期凋亡率分别为（4.70±1.54）%和（11.20±1.41）%,与联合组［细胞凋亡率为（20.60±3.23）%］比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 大黄素可显著抑制人胰腺癌BxPC-3细胞生长;大黄素有效增强吉西他滨对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用;其协同作用以诱导胰腺癌细胞凋亡方式为主。     

健脾方对脾虚型慢性乙型肝炎患者树突细胞功能的影响

目的研究健脾方对慢性乙型肝炎（简称慢乙肝）患者树突细胞（DC）功能的影响。方法筛选慢乙肝脾虚证患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例。对照组给予干扰素（赛诺金500万U,肌肉注射,每周3次）,治疗组在此基础上加用健脾方（每日1剂,分2次服用）,用药6个月。分离培养外周血DC,流式细胞仪测定DC表面HLA-DR、CD86、cD80、CD40、CD14、CD11c的表达,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能,治疗前后各检测1次。结果治疗组DC表面的CD86、CD80、CD40、CD11c明显高于对照组（P〈0．01或P〈0．05）。刺激指数、IFN-γ、IL-12的变化亦显著优于对照组（P〈0．05）。结论健脾方明显改善DC的功能,调节免疫功能可能是其提高临床疗效的机理之一。     

加味青蒿鳖甲汤对髓系MRD-L患者CD_(34)~+细胞源DC诱导过程中IL-12的影响

目的:探讨加味青蒿鳖甲汤对树突细胞(DC)诱导和对IL-12分泌的影响。方法:本研究采用体外培养的方法,用含不同剂量(高、中、低)加味青蒿鳖甲汤动物血清联合细胞因子、不含药血清联合细胞因子及单纯用细胞因子,共同培养缓解期急性髓系白血病(AML-CR)患者骨髓中分离提取的CD+34细胞,诱导其成为DC,观察各组在不同阶段对DC成熟的影响,以及各组血清中IL-12的分泌变化。结果:含药血清均能上调DC表面特征性分子及共刺激分子CD80、CD83、CD86表达水平,较单纯细胞因子组比较有显著性差异(P<0.01),且含中剂量药血清更能促进DC分泌IL-12(P<0.01)。结论:联合细胞因子的含加味青蒿鳖甲汤的血清,可使来源AML-CR骨髓的CD+34,在体外比单纯用细胞因子诱导培养DC能够更好地促进DC的生长、成熟和分化,并能促进DC分泌IL-12,增加抗肿瘤作用。     

雷公藤多苷对白塞病患者血清白细胞介素-1β、白细胞介素-2、肿瘤坏死因子-α及干扰素-γ的影响

目的观察雷公藤多苷对白塞病(Behcet′s disease,BD)患者血清白细胞介素(IL)-1β、IL-2,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)的影响,探讨雷公藤多苷治疗白塞病可能的机制。方法初治BD患者30例(BD组),给予雷公藤多苷片30mg/d,疗程3个月;另设对照组30例,均为健康体检者。采用放免法测定BD组治疗前后及对照组的血清IL-1β、IL-2、TNF-α及IFN-γ的水平。并结合血沉、C-反应蛋白及临床表现等情况进行分析。结果 (1)BD组患者治疗前血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平明显高于对照组(P0.05),IL-2水平亦较对照组升高,但差异无统计学意义(P0.05)。(2)BD组雷公藤多苷治疗3个月后血清IL-1β[(5.71±1.04)μg/L]、TNF-α[(4.27±0.76)μg/L]及IFN-γ[(3.44±0.72)μg/L]水平较治疗前[(10.72±1.84)μg/L、(6.64±1.05)μg/L]及[(8.93±1.23)μg/L]均明显降低(P0.05);IL-2水平与治疗前比较,差异无统计学意义(P0.05)。(3)BD组30例,显效10例,有效16例,无效4例,有效率86.6%;治疗3个月后患者血沉、C-反应蛋白水平均较治疗前明显降低(P0.05)。结论雷公藤多苷可能是通过降低血清IL-1β、TNF-α及IFN-γ水平而达到治疗作用。     

Enhancement of Extracts from Celastrus orbiculatus on Maturation and Function of Dendritic Cells in vitro and in vivo

Objective To examine the immunoregulation of Celastrus orbiculatus extracts (COE), a traditional Chinese medicine, on maturation and function of dendritic cells (DCs) in vitro and in vivo. Methods In vitro, after treated with COE in different nontoxic concentrations (0, 10, 20, 40, 80, and 160 μg/mL) for 5 d, the surface immunological molecules and cytokine secretion of mice bone marrow-derived DCs in response to COE were analyzed by flow cytometric analysis (FACS) and enzyme linked immunosorbent assay (ELI...     

宫颈阴道分泌液中IL-8、铜、锌含量与胎膜早破关系的研究

目的：对胎膜早破（PROM）孕妇宫颈阴道分泌液中基质金属白介素-8（IL-8）、微量元素（铜、锌）的含量与PROM的关系进行探讨。方法：选择足月初产胎膜早破孕妇40例（PROM组）和正常足月初产孕妇未破膜者40例（对照组）,分别用双抗体夹心ELISA法和溶出电极法测定阴道分泌液中IL-8和铜、锌的含量。结果：PROM组阴道分泌液中IL-8水平平均为657．20±83．33μg／ml,明显高于对照组421．54±22．35pg／ml,差异有显著性（P〈0．01）;PROM阴道分泌液中铜、锌的含量分别为2．18±1．57μg／L,0．45±0．17μg／L,均明显低于对照组3．67±2．07μg／L,0．72±0．36μg／L,差异有显著性（P〈0．01）。结论：PROM组孕妇阴道分泌液中IL-8含量明显升高,而铜、锌含量明显降低,对胎膜早破的早期诊断有一定帮助。     

温阳补肾方对哮喘小鼠脾脏树突细胞的免疫调控机制研究

目的通过观察哮喘小鼠脾脏中树突细胞（Dc）表面共刺激分子CD80、CD86的表达变化,探讨温阳补肾方对哮喘小鼠脾脏树突细胞的免疫调控机制。方法30只BALB／c小鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药结合组,每组6只。除正常组外,余组建立小鼠哮喘模型,并予以相应的干预措施。各组小鼠肺组织切片进行苏木精-伊红染色后观察炎症反应;采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中IL-4、IFN-γ、ECP的含量;取各组小鼠脾脏组织分离树突细胞,经过DC培养,扫描电镜观察DC形态,用流式细胞仪（FACS）分析各组小鼠脾脏DC表面共刺激分子CD80、CD86的表达量。结果模型组小鼠气道上皮损伤、脱落,嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润。与正常对照组比较,模型组小鼠IL-4、ECP水平上调,INF-γ水平下调,CD80、CD86阳性表达率上调,差异均有统计学意义（P〈0．05）。与模型组比较,各治疗组可下调血清IL-4、ECP的水平（P〈0．01）;与中药组和西药组比较,中西医结合组疗效最佳,IL-4、ECP差异有统计学意义（P〈0．05）。中药组和中西医结合组可上调INF-γ表达水平（P〈0．01）;各治疗组可下调树突细胞表面CD80、CD86的表达水平（P〈0．05）;与中药组和西药组比较,中西医结合组疗效最佳,其CD80、CD86的表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）。结论温阳补肾方可以抑制哮喘小鼠气道的炎症反应,调节Th1及Th2免疫失衡,与地塞米松有协同效应,其下调脾脏树突细胞的表达是温阳补肾方治疗哮喘的一个重要机制。