温度和二甲亚砜对放射诱导哺乳动物DNA双链断裂的影响

目的 :研究放射引起人乳腺癌细胞株 (MCF- 7)和完整细胞的染色体 DNA双链断裂 (DSB)时 ,亚生理辐射温度 (2℃～ 2 8℃ )的效应和自由基清除剂二甲亚砜 (DMSO)的影响 ,以及细胞在 2℃或 37℃照射后 DSB的重接。方法 :1MCF- 7细胞用含 10 %胎牛血清的 EME培养液于 37℃、5 % CO2 培养 ,传 12～ 2 0代后用 1 4 C胸腺嘧啶核苷(1k Bq/ m L )标记 DNA 7d;2染色体 DNA制备 :制细胞数为0 .5× 10 6 / m L～ 1.0× 10 6 / m L的琼脂糖凝胶块 ,EDTA- NL S-蛋白酶 K缓冲液于 37℃裂解凝胶块中的细胞 48h,冷藏10 d;3染色体 DNA照射 :…     

儿茶素提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对牙龈卟啉单胞菌体外抑菌活性研究

目的探讨儿茶素提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对牙龈卟啉单胞菌的体外抑菌活性。方法检测EGCG对牙龈卟啉单胞菌的最小抑菌浓度值(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)。配制浓度分别为1/4 MIC值、1/2 MIC值、MIC值的EGCG溶液,检测其对牙龈卟啉单胞菌生长的影响,并绘制生长曲线。配制浓度分别为1/2 MIC、MIC、2 MIC、4 MIC、8 MIC、16 MIC的EGCG,检测不同浓度EGCG对牙龈卟啉单胞菌生物膜的抑制率,并计算最低清除浓度(MBRC) 50。结果 EGCG对牙龈卟啉单胞菌的MIC值为0. 250 0 mol/L,MBC值为1. 000 0 mol/L。各实验组在0～12 h为生长迟缓期,12 h后进入对数生长期,0. 250 0 mol/L EGCG组在24 h后进入平台期,而0. 125 0 mol/L EGCG组、0. 062 5 mol/L EGCG组则处于缓慢增长状态。MBRC50为4. 0 mol/L。EGCG浓度分别为0. 5、1. 0、2. 0、4. 0 mol/L时对P. gingivalis生物膜的抑制率组间两两比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)结论儿茶素提取物EGCG是一种安全、无耐药性的天然药物,体外研究证实其对牙龈卟啉单胞菌有明显的抑制作用。     

通过诱导胞核金属硫蛋白保护辐射所致的DNA单链断裂

目的 :研究在有氧和乏氧状态下胞核金属硫蛋白 (MT)对辐射诱导的 DNA损伤的保护程度。方法 ;1选用 ME180和 Si Ha鳞状宫颈癌细胞株 ,均培养于含 10 %新生牛血清和 0 .1mg/ m L 卡那霉素的最低必需培养基中。 2在照前 2 4h向培养瓶中加乙酸锌 (终浓度10 0 μL/ L) ,照前再将 10 0 μL 细胞悬液加至预气化 (5 % CO2的空气 )的培养基中 (10 5细胞 / m L) ,6 0 Co照射 ,剂量率为 1.1Gy/ min。 3应用半定量荧光图像分析法检测两种细胞株在正常生长条件及乙酸锌诱导后胞核 MT含量。4应用流式细胞术检测细胞总 MT含量。5以高效液相色谱为…     

Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞凋亡在慢性肾炎中的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (Ox-LDL)诱导肾小球系膜细胞凋亡的调控机制及其在慢性肾炎中的作用。方法 :通过人肾小球系膜细胞体外培养 ,采用原位末端标记和DNA凝胶电泳检测低浓度的Ox -LDL (0、 2 5、 5 0、10 0 μg/ml)对系膜细胞凋亡的影响 ,免疫组化维生素E干预前后Ox-LDL对系膜细胞Bax/Bcl- 2表达的影响 ;按血浆LDL水平 ,把有不同程度肾小球硬化的慢性肾炎患者肾标本分为LDL正常组和LDL升高组 ,分别采用DNA原位末端标记和免疫组化 ,检测肾小球细胞凋亡及Bax/Bcl- 2蛋白表达。结果 :低浓度Ox-LDL (0～ 10 0 μg/ml)以剂量依赖方式促进肾小球系膜细胞凋亡 ,并使肾小球系膜细胞Bax的蛋白表达呈时间 -剂量依赖性增加 ,P <0 0 1,Bcl- 2的蛋白表达轻度升高后呈时间 -剂量依赖性下降 ,P <0 0 1,导致Bax/Bcl- 2比值增大 ;维生素E干预后这种变化不明显 ,P >0 0 5。LDL升高组肾小球凋亡和Bax蛋白表达明显增加 ,P <0 0 1;Bcl- 2变化不明显 ,P >0 0 5 ,血LDL水平与肾小球硬化指数、凋亡指数、Bax/Bcl- 2比值有显著正相关关系。结论 :Ox -LDL能诱导肾小球系膜细胞凋亡 ;Bax/Bcl- 2比值上升可能是Ox -LDL诱导肾小球系膜细胞凋亡的重要机制 ;脂质异常可能是导致肾小球硬化中细胞减少的重要原因     

~3H-Tdr掺入人造血细胞株诱导细胞死亡和细胞周期阻滞

目的 :研究 3H-胸苷 (3H- Tdr)掺入人造血细胞株对其细胞周期变化的影响及细胞死亡的机制。方法 :1采用 5种人白血病 HL - 6 0、Molt- 4、Jurkat、Raji和 SKW6 - CL 4细胞。 2将浓度分别为 7.4、74和 185 k Bq/ m l的 3H- Tdr与细胞共培养 1～ 4d。 3提取 DNA,2 %琼脂糖凝胶电泳分离 ,紫外灯下观察 DNA裂解率。 4台盼蓝染色 ,光镜下观察细胞存活和细胞增殖。 5 Western印迹分析与凋亡相关蛋白 (Bcl- 2、Bad和 Bax)、蛋白酶 caspase- 3前体蛋白及caspase- 3作用靶蛋白的降解产物 (DNA- PKcs和 PARP)。 6流式细胞术检测细胞周期…     

PPARγ依赖和非依赖途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的增殖抑制作用

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）特异性外源配体吡格列酮（Pio）对体外培养的HepG2细胞增殖作用的影响,并探讨其是否通过PPARγ依赖途径发挥作用。方法将不同浓度的Pio作用于体外培养HepG2细胞,MTT比色法检测HepG2细胞增殖情况,3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成速率,采用RT-PCR和Western印迹检测PPARγmRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期;同时观察PPARγ特异性拮抗剂GW9662和（或）瞬时转染pSG5-PPARγ真核表达质粒、PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒稳定转染对Pio细胞增殖作用的影响。结果 Pio作用于HepG2细胞后,导致HepG2细胞的增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,呈一定的剂量依赖关系;在此过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;GW9662可以部分拮抗Pio的增殖抑制效应,但转染pSG5-PPARγ真核表达质粒可以逆转GW9662的作用;利用pGCsi-PPARγ表达质粒将PPARγ基因沉默后,Pio在高浓度（20μmol/L）时亦表现出细胞增殖抑制作用。结论 Pio能够抑制HepG2细胞的增殖,该作用与其诱导细胞G0/Gl期的停滞有关,PPARγ依赖和非依赖途径参与上述过程。     

人肿瘤细胞低剂量高辐射敏感性与DNA-PK活性下降

目的 :低剂量高辐射敏感性 (HRS)的分子水平机制目前尚不清楚。本研究探讨了在体外条件下 HRS与细胞内重要的 DNA修复因子之一 DNA- PK复合体活性下降的相关性。方法 :选出 10组人类肿瘤细胞系 ,其中 6组显示 HRS阳性 ,4组为 HRS阴性。在体外培养条件下 ,用 1 3 7　 Cs源在细胞对数生长期分别行吸收剂量为 0 .2、 0 .5和 1.0 Gy的照射后 0、1、2和 6 h将各组细胞裂解 ,抽提、纯化其中的 DNA- PK复合体蛋白 ,分别经 SDS- PAGE蛋白电泳和 Western杂交对不同吸收剂量组的 DNA- PK复合体活性及其时间效应进行分析。结果 :1在给…     

雌激素对软骨细胞蛋白多糖表型表达的影响

目的 :观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞蛋白多糖表型表达的影响。方法 :体外培养雌兔关节软骨细胞 ,随机分为A、B两组 ,A组中加入 1 7β-雌二醇 0mol/L、1 0 -6mol/L、1 0 -7mol/L、1 0 -8mol/L、1 0 -9mol/L、1 0 -10 mol/L、1 0 -11mol/L、1 0 -12 mol/L干预 72小时 ;B组先用 1 0ng/mlIL-1 β干预 2 4小时 ,随后分别加入 0mol/L、1 0 -6mol/L～ 1 0 -12 mol/L 1 7β-雌二醇作用 72小时。采用RT-PCR方法观察软骨细胞核心蛋白、Decorin、BiglycanmRNA的表达。结果 :A组中 ,1 0 -6mol/L雌二醇组不表达Decorin,1 0 -9～1 0 -11mol/L雌二醇组Decorin表达量较正常对照减少 ;BiglycanmRNA表达量与空白对照无明显差异。B组中 ,IL -1 β +1 0 -7、1 0 -8mol/L雌二醇组核心蛋白mRNA表达量较空白对照明显减少 ;IL -1 β +1 0 -7～ -11mol/L雌二醇组DecorinmRNA表达量较单用IL -1 β组有所增加 ;除IL -1 β +1 0 -12 mol/L组外 ,其余各组表达BiglycanmRNA明显减少。结论 :雌激素对关节软骨细胞蛋白多糖表型表达的调控作用随其浓度变化而不同。高浓度雌激素 (1 0 -6mol/L)抑制正常软骨细胞蛋白多糖合成。对变性软骨细胞而言 ,低于生理浓度的雌激素对维持其蛋白多糖表型较适宜。     

骨生长相关因子对兔骨膜细胞生长分化的量效作用

目的　研究地塞米松 (dexamethasone)、重组人碱性成纤维细胞生长因子 (recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfator,rhFGF)、重组人骨形态发生蛋白 -2 (recombinanthumanbonemorpho geneticprotein -2 ,rhBMP -2 )三种骨生长相关因子对兔骨膜细胞生长及分化的量效作用 ,为其在骨组织工程中的应用提供实验基础。　方法　体外分离培养兔骨膜细胞 ,分别与终浓度为 10 - 8,10 - 7,10 - 6 mol/L的地塞米松 ;终浓度为 50 ,2 0 0 ,50 0ng/ml的rhFGF ;终浓度为 50 ,50 0 ,10 0 0ng/ml的rhBMP -2共培养。分别于 4,7d后终止培养并测定细胞生长及分化指标。　结果 10 - 6 mol/L地塞米松显著抑制细胞蛋白合成 ,且对骨膜细胞碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase ,ALP)表达无明显影响。各浓度组rhFGF显著促进了细胞蛋白合成量 ,而表现出明显的ALP活性抑制。各浓度组rhBMP -2对细胞增殖无明显影响 ;50ng/ml的rhBMP -2不影响骨膜细胞的ALP活性 ;当浓度增加到 50 0ng/ml与 10 0 0ng/ml时 ,ALP活性显著增加 (P <0 .0 1)。　结论　rhBMP -2在不影响骨膜细胞增殖的前提下 ,适当的浓度能够显著促进骨膜细胞向成骨细胞转化 ,在骨组织工程的研究中有重要的应用价值     

甘遂提取物对肿瘤瘤株Hep、S180的抑制作用观察

目的观察甘遂提取物作用于小鼠移植瘤细胞Hep、S180后的抑制作用。方法模型组、5-Fu组、甘遂提取物组（E）、5-Fu＋E组,每组10只小鼠分别于右前肢腋皮下接种瘤中注射Tween80溶液、5-Fu、甘遂提取物、甘遂提取物＋5-Fu。免疫组化检测Bcl-2表达。体外培养S180细胞,加入药物浓度为50μg/ml、10μg/ml、1μg/ml,培养48h,流式细胞仪测细胞凋亡率。结果模型组与各实验组移植癌和移植癌组织与药物注射引起肿瘤坏死的Bcl-2蛋白表达,在统计学上有显著差别（P〈0.05）。加入药物浓度为50μg/ml、10μg/ml、1μg/ml,流式细胞仪测定凋亡率分别为33.9%、28.8%和23.3%。结论中药甘遂对Hep、S180有明显的抑制作用。     

两亲性光敏剂血卟啉单甲醚在不同溶液体系中的存在状态

目的测定血卟啉单甲醚(HMME)在不同浓度、不同溶液体系中的存在状态,以分析其对HMME-光动力学疗法(PDT)的影响。方法按所用溶剂实验分为以下4种溶液体系:HMME-磷酸盐缓冲液(PBS)、HMME-二甲基亚砜(DMSO)、HMME-白蛋白缓冲液和HMME-细胞悬液,每种溶液配成2、4、8、10、20、40、60、80和100μmol/L等9个浓度。首先分别测定其吸收光谱和荧光激发光谱,根据光谱形态特征定性分析HMME在前述9个浓度的4种溶液体系中的存在状态,然后对形成聚集体的溶液利用公式定量分析HMME的缔合数、聚集平衡常数及各浓度下的缔合度。结果通过光谱特征的定性分析发现,浓度为2~10μmol/L时,HMME在DMSO、白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中均以单体为主;浓度为20~100μmol/L时,除DMSO溶液外在其他3种溶液中都有HMME聚集体出现。通过绘制浓度为20~100μmol/L的HMME在PBS、白蛋白缓冲液和细胞悬液中的状态图,聚集数取2时,状态图线性关系较好,HMME在此3种溶液中形成二聚体。缔合度计算结果显示:浓度为20μmol/L的PBS、细胞悬液和白蛋白缓冲液中部分HMME分子开始形成聚集体,但整个溶液仍以单体为主(HMME单体百分数分别为92·3%、90·7%和95·5%);40~100μmol/L溶液中HMME单体含量随浓度增加而减少,100μmol/L的PBS溶液和细胞悬液中70%~75%HMME为单体,近30%的HMME分子发生了聚集,而白蛋白缓冲液中83%的HMME为单体,20%的HMME分子发生了聚集。HMME在PBS和细胞悬液中的聚集平衡常数近似,而且大于在白蛋白缓冲液中的聚集平衡常数,说明HMME的聚集程度在PBS溶液和细胞悬液中比在白蛋白缓冲液中大。与疏水性血卟啉衍生物(HpD)比较结果显示,在PBS溶液中HMME在60μmol/L开始出现明显聚集,而疏水性HpD在20μmol/L即开始出现明显聚集;定量比较各溶液体系中HpD的聚集平衡常数均明显大于HMME,且各浓度时的单体含量明显小于HMME,说明HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中的聚集趋势明显小于HpD。结论两亲性光敏剂HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中聚集性显著低于疏水性的HpD。浓度低于20μmol/LHMME在4种溶液中均以单体为主,HMME在40~100μmol/L的白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中都有不同比例HMME分子发生聚集,且都形成二聚体。HMME在不同溶液中的聚集程度不同,按由难到易依次为:DMSO、白蛋白缓冲液、PBS≈细胞悬液。在常规给药条件下,HMME在体液中的存在形式以单体为主,但在高浓度给药时,部分HMME会聚合成聚集体,应注意聚集对HMME-PDT的影响。     

AMPKα信号途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的凋亡诱导作用

目的观察吡格列酮干预对体外培养的HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其药理作用机制。方法以不同浓度的吡格列酮干预体外培养HepG2细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期以及激活的胱天蛋白酶（Caspase）3蛋白表达,RT-PCR检测PPARγmRNA的表达,Western印迹检测PPARγ蛋白、磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPKα）蛋白和磷酸化AMPKα（p-AMPKα）蛋白的表达;并将PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒转染HepG2细胞,观察PPARγ基因沉默后吡格列酮对细胞凋亡作用的影响。结果不同浓度的吡格列酮干预HepG2细胞后,诱导细胞的凋亡,在此过程中G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,并呈一定的剂量依赖关系;但在上述过程中,PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;吡格列酮在高浓度（20μmol/L）时对pGCsi-PPARγ表达质粒转染的HepG2细胞仍表现出凋亡诱导作用。不同浓度的吡格列酮干预后未见激活的caspase 3表达峰,对NF-κB的DNA结合活性也无明显影响,但其在高浓度（20μmol/L）时明显增加对照组和pGCsi-PPARγ转染组p-AMPKα的表达,而总AMPKα则无明显变化。结论吡格列酮能够干扰细胞周期、诱导其凋亡,这种作用不是完全通过PPARγ依赖途径实现的,AMPKα信号途径参与上述过程。     

甲基转移酶抑制剂对Raji细胞系增殖抑制的实验研究

 目的探索不同浓度甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)对甲基化细胞系Raji细胞的生长抑制效应,为临床应用提供实验依据.方法对5-Aza-CdR体外处理高甲基化致P15基因失活的淋巴肉瘤白血病细胞株Raji细胞,经流式细胞术、细胞生物学特征观察细胞的生长抑制效应.结果在(10-7～10-6)mol/L的范围内,随着药物浓度的升高,Raji细胞生长受到抑制,并表现出剂量时间依赖关系.5-Aza-CdR诱导细胞分化,阻滞于G0/G1期.结论甲基转移酶抑制剂抗DNA甲基化的白血病是可行的,值得进一步探索.     

镍和亚砷酸盐抑制辐射诱发DNA双链断裂的修复

目的 :研究环境有毒物质镍和亚砷酸盐对辐射引起的DNA双链断裂 (dsb)修复的影响。方法 :取 3× 10 5 中国地鼠卵细胞在 6 0 mm组织培养皿中 (5 m L Ham′s F- 12培养液 )于 37℃培养 4d,另取 1.5× 10 5细胞在 35 m m组织培养皿中加 2 m L培养液和 0 .74k Bq/ m L1 4 C-胸苷培养 2 4～ 2 8h,之后加 1m L新鲜培养液和 0 .1m L不同浓度的氯化镍或亚砷酸钠溶液 ,2 h后用 1 37　 Cs源照射 40 Gy(剂量率 10 .2 Gy/ min)。照射后未修复组立即用胰蛋白酶消化 1.5～ 2 min,用脉冲场凝胶电泳分析 DNA dsb;修复组继续在 37℃培养 30 m in使 ds…     

二氢卟吩e6光动力学疗法对人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用。方法将体外培养的人黑素瘤A-375细胞加入Ce6,浓度分别为2、4、7·5、15、30和60μmol/L,孵育12h,予波长652nm半导体激光照射,照射的功率密度为15·6mW/cm2,能量密度分别为2、5、10和20J/cm2,继续孵育12h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。结果(1)Ce6与细胞共同培养而不受光照的条件下对细胞的毒性较小,其浓度小于15μmol/L时各浓度组间细胞存活率差异无显著意义(P>0·05);浓度较高(>15μmol/L)对细胞的存活率影响较大(P<0·01)。(2)Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量成正相关(P<0·01)。结论Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性。     

信号因子对辐射诱导胸腺淋巴细胞凋亡的影响

目的　观察信号因子皮质酮 (CS)、cAMP、cGMP、Ca2 和蛋白激酶C(PKC)对体外 4GyX射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的影响。方法　应用荧光发光分光光度仪检测胸腺淋巴细胞DNA裂解率。结果　 2～ 8Gy照射后 4～ 8h ,胸腺淋巴细胞DNA裂解率均明显高于对照组 (P <0 0 1)。与对照组比较 ,加入 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 0 5～ 0 4 μg mlCa2 结合载体离子霉素(Iono)和 0 0 5～ 0 4ng mlPKC激活剂豆蔻酰佛波醇乙酯 (PMA)均明显增加淋巴细胞DNA裂解率 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而加入 5 0ng mlcGMP与对照组比较 ,无明显作用。对 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 2和 0 4 μg mlIono及 0 2和 0 4ng mlPMA分别加 4Gy照射 ,其DNA裂解率均明显高于单纯 4Gy照射组 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而 5 0ng mlcGMP加 4Gy照射与单纯 4Gy照射组比较无明显差异。结论　在一定剂量范围内 ,信号因子CS、cAMP、Ca2 和PKC对大剂量X射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡具有促进作用     

TNF-α对人牙囊细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响及其信号传导通路

目的研究不同浓度肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养人牙囊细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响及其信号传导通路。方法取第5代人牙囊细胞,分别与浓度为0(对照组)5、1、02、55、0、100ng/ml的TNF-α共孵育6h,夹心ELISA法检测上清液中MCP-1的含量,RT-PCR法检测MCP-1 mRNA表达的变化。另取第5代人牙囊细胞,分别加入25μmol/L SB203580、50μmol/L PD98059、15μmol/L SP600125,以阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MARK)、细胞外信号调节激酶(ERK)J、un氨基端激酶(JNK),培养30min后加入10ng/ml TNF-α,孵育6h后,RT-PCR检测MCP-1 mRNA含量。结果 ELISA结果显示,与对照组比较,TNF-α浓度为10～100ng/ml时,可显著增强MCP-1的分泌(P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组比较,TNF-α浓度为10～50ng/ml时,MCP-1表达增强,且此作用可被阻滞剂SP600125阻断。结论 TNF-α可增强MCP-1的基因表达、蛋白合成和分泌,此作用通过JNK信号转导途径实现。     

PI3K/AKT/mTOR信号传导通路在姜黄素抑制人肝癌细胞Cox-2表达中的作用

目的探讨MAPK和PI3K信号传导通路在姜黄素调节的环氧合酶2(Cox-2)表达中的作用。方法分别加入25、50μmol/L LY294002,10、20μmol/L U0126,5、10ng/ml西罗莫司(雷帕霉素,rapamycin)处理人肝癌细胞BEL-7402,30min后加入10μmol/L姜黄素,对照组单独加入0、10μmol/L姜黄素,培养6h后,采用RT-PCR和Western blotting方法检测BEL-7402细胞中Cox-2 mRNA和蛋白的表达。以不同浓度(0、2.5、5、10、15、20μmol/L)姜黄素或25μmol/L LY294002处理BEL-7402细胞,培养6h后,采用Western blotting检测总AKT蛋白和磷酸化AKT蛋白的表达;以不同浓度(0、2.5、5、10、15、20μmol/L)姜黄素或10μmol/L U0126处理BEL-7402细胞,培养6h后,采用Western blotting检测总ERK蛋白和磷酸化ERK蛋白的表达。结果与仅加入10μmol/L姜黄素的BEL-7402细胞比较,分别加入25、50μmol/L LY294002,5、10ng/ml西罗莫司后,BEL-7402细胞中的Cox-2 mRNA和蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),而加入10、20μmol/L U0126后表达无明显变化(P>0.05)。采用不同浓度姜黄素或25μmol/L LY294002处理后,BEL-7402细胞磷酸化AKT蛋白表达逐渐降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),但总AKT蛋白表达与对照组相比无明显变化(P>0.05)。不同浓度姜黄素或10μmol/L U0126处理后,BEL-7402细胞磷酸化ERK蛋白和总ERK蛋白表达与对照组相比均无明显变化(P>0.05)。结论姜黄素可能通过PI3K/AKT/mTOR信号传导通路抑制人肝癌细胞BEL-7402中Cox-2的表达。     

高糖对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

目的　观察高糖对外周血内皮祖细胞(EPCs)数量和功能的影响。方法　密度梯度离心法获取外周血单个核细胞 ,培养 7天后 ,收集贴壁细胞并加入不同浓度葡萄糖使培养液终浓度分别为 1 5、2 5、35和 4 5mmol/L ,并干预一定时间 (6、1 2、2 4和 4 8h)。多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC UEA Ⅰ和DiI acLDL双染色细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。然后 ,分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的增殖、迁移、黏附和体外血管生成能力。结果　高糖呈量效和时效地减少外周血EPCs数量 ,4 5mmol/L浓度高糖作用 2 4h对EPCs数量的影响最为显著 (较对照组减少了近 1 / 2 ,P <0 0 1 )。高糖也显著抑制外周血EPCs的黏附、迁移、增殖和体外血管生成能力。结论　高糖可减少EPCs数量、抑制其功能 ,并呈浓度和时间依赖性     

钠依赖二羧酸转运蛋白3和葡萄糖对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响

目的　探讨钠离子依赖的二羧酸转运蛋白 3(NaDC3)对细胞能量代谢的作用以及NaDC3不同表达和不同葡萄糖浓度对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响。方法　应用Westernblot明确正义转染、反义转染、空质粒转染 (pcDNA3)及未转染的人近曲肾小管上皮细胞 (HKC)中细胞hNaDC3蛋白表达的差异 ,用毛细管电泳技术测定不同时间点或同一时间不同葡萄糖浓度时细胞摄取缓冲液中琥珀酸的量。结果　正义转染细胞hNaDC3蛋白表达增强 ,约是未转染HKC细胞的 1 5倍 ,缓冲液中琥珀酸含量下降较快 ,琥珀酸摄取增快。反义转染细胞hNaDC3蛋白表达下降 ,约是未转染HKC细胞的 2 / 3,但两者缓冲液中琥珀酸含量下降差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。空质粒转染对hNaDC3蛋白表达和琥珀酸摄取无明显影响。随葡萄糖浓度增加 ,缓冲液中琥珀酸含量下降增快。结论　hNaDC3蛋白过表达可加速三羧酸循环中间代谢产物的转运 ,葡萄糖对hNaDC3底物的转运有促进作用