宫颈癌细胞株和正常间质细胞株受X线照射后的辐射效应

目的用宫颈癌、正常血管内皮和正常成纤维细胞株体外模拟宫颈癌实质和间质组织,研究其受到不同剂量放射线照射后的辐射效应。方法采用宫颈腺癌细胞株HeLa,宫颈鳞癌细胞株SiHa、C33A、Caski,人脐静脉内皮细胞株ECV304,及小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,分别用6MV的X线（300cGy/min）照射6和10Gy,24和48h后收集细胞,行PI染色,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化。结果细胞株受到照射后,C33A凋亡率最高,而SiHa凋亡率最低,其余细胞株（包括ECV304与NIH/3T3细胞）均介于两者之间;各宫颈癌细胞株及NIH/3T3照射10Gy后48h的凋亡率较6Gy稍高（P〉0.05）,而ECV304照射10Gy后48h的凋亡率（13.04%±1.08%）比照射6Gy（6.51%±0.61%）明显升高（P=0.001）;各细胞株受到不同剂量照射后,均表现出明显的G2/M期阻滞,且阻滞细胞百分比随照射剂量增加而增加;受到照射后一般在24-48hG2/M期阻滞细胞百分比最高。结论高剂量照射可以提高血管内皮细胞的凋亡率,并导致剂量依赖性的G2/M期阻滞,为预测宫颈癌的高剂量放疗提供理论依据。     

G_1期人淋巴细胞的细胞遗传学与存活适应性反应

用T细胞克隆法分析了用低剂量和高剂量X射线照射PHA刺激后处于第1个G_1期人淋巴细胞的染色体畸变和细胞致死效应,以检验D_1期细胞遗传学适应性反应是否能导致存活适应性反应.血样来自6名献血员,分离并培养单核细胞层,加PHA 12和18小时后,分别以5cGy(20cGy/min)和200cGy或400cGy(1Gy/min)X射线照射培养物.观察细胞存活和染色体畸变情况.对5人的细胞遗传学分析表明,在5cGy+400cGy组均存在适应性反应,其中3人双着丝粒及环以及2人的缺失显著减少;在5cGy+200cGy组,     

优化胞质分裂阻滞实验方案用于核质桥分析的可行性

目的:探索优化胞质分裂阻滞实验方案用于辐射诱导核质桥分析的可行性,为以核质桥为指标进行生物剂量估算提供科学依据。方法:用2 Gy 60Co γ 射线(剂量率为1 Gy/min)照射人离体外周血(设0 Gy对照),照射后28 h在细胞样品中加入终浓度为6 μg/ml的松胞素B,培养48、56、68和72 h...     

125I粒子持续低剂量率照射对人前列腺癌细胞的抑制作用

目的探讨^125I粒子持续低剂量率照射对人前列腺癌细胞株（PC3）增殖抑制以及对细胞周期的影响。方法^125I粒子（初始剂量率2.77cGy/h）和^60Coγ射线（吸收剂量率2.215Gy/min）对体外培养的PC3细胞进行0、0.5、1、1.5、2、4、6和8Gy照射,用细胞计数、锥虫蓝染色和集落形成法检测细胞增殖、细胞活力和细胞存活率的情况;用单击多靶模型拟合剂量存活曲线;用流式细胞仪检测细胞周期。结果随着照射剂量的增加,^125I粒子照射组的细胞生长比^60Coγ射线组更加明显地受到抑制（P〈0.05）。^125I粒子照射PC3细胞D0值为2.243,Dq为0.87,N为1.618,SF2为0.5。^60Co照射组PC3细胞放射生物学参数D0值为2.824,Dq为1.08,N为1.587,SF2为0.7。^60Co和125I粒子的RBE比值为1.4。与空白对照组相比,^125I粒子组和^60Co组4Gy照射细胞24h后均出现G2期阻滞。结论^125I粒子照射能抑制人前列腺癌细胞的增殖并能使PC3细胞阻滞于G2期。     

体外雌激素代谢物2-甲氧雌二醇增强辐射效应

目的 :2 -甲氧雌二醇 (2 - ME)是一种内源性雌二醇代谢物 ,具有破坏微管、抑制小鼠肿瘤和血管生成功能。由于某些微管抑制剂可改变辐射敏感性 ,因而对 2 - ME在体外作为辐射增强剂进行评价。方法 :1选用 H46 0人肺癌细胞株、MCF- 7乳房癌细胞株和 4种小鼠 SCID免疫缺陷细胞株 (SCID、CB- 17、10 0 E和5 0 D)。 2细胞贴壁后 ,加 2 - ME或β-雌二醇培养 2 4h,6 0 Coγ射线照射 (2～ 5 Gy,1.18Gy/ min) ,再培养 7～ 10 d,观察其克隆的存活率。 3分裂剂量恢复 ,即细胞分 2次照射 ,每次3Gy,照后观察其克隆细胞亚致死性损伤 (SL D)的…     

p~(53)依赖途径的辐射诱导潜在致死损伤的研究

目的 :研究潜在致死损伤 (PL D)是否与 p5 3有关。方法 :采用 12种肿瘤细胞株和 3种人二倍体纤维原细胞株分析辐射敏感性、DNA双链断裂重连接、PL D表达及修复 (PL DR)。其中 7种细胞株 p5 3正常表达 ,8种 p5 3功能缺陷 (6种基因突变 ,2种 HPV 16 E6转染 p5 3表达正常的细胞株 )。取指数生长期 (辐射前低密度培养 18h)和高峰生长期细胞 (待细胞长满后继续培养 3 d以上 ) ,1 3 7　 Csγ射线或 X射线 (剂量率为 1Gy/ min,剂量为 7Gy)照射后立即或于 2 4h以后消化成单细胞悬液 ,培养 2～ 3周 ,固定 ,0 .2 5 %结晶紫染色 ,观察细胞克隆…     

低剂量X射线照射选择性诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的 研究低剂量X射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法 昆明雄性小鼠接受诱导剂量(D1，75mGy)和攻击剂量(D2，1．0，2．0和3．0Gy)全身照射。通过不连续泛影葡胺密度梯度离心法分离小鼠睾丸组织不同种类生精细胞，流式细胞术(FCM)检测各类生精细胞凋亡。结果 当D2照射前6h给予D1预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的损伤作用，而对精子细胞和精子影响不明显。当D1和D2间隔3，6，12和24h，发现D2剂量较小(1．0和2．0Gy)时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早、较明显，而且持续时间较长；反之，D2剂量较大(3．0Gy)时，精原细胞和精母细胞凋亡百分率变化不明显。结论 低剂量X射线照射可以选择性诱导小鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。     

电离辐射及顺铂对人肺癌细胞中TOB1基因表达的影响

目的 探讨电离辐射及其联合顺铂对人肺腺癌细胞株SPCA-1、LTEP-α-2中TOB1基因表达的影响.方法 体外培养人肺腺癌SPCA-1、LTEP-α-2细胞,用X射线一次性照射,细胞吸收剂量为2、4、6、8和10 Gy,源靶距为100 cm,吸收剂量率为200 cGy/min,在6GyX射线照射后6、12、18和24 h取样;X射线和顺铂联合对TOB1表达的研究设立单纯照射组(6 Gy)、顺铂处理组(20 mol/L顺铂)和联合处理组(6 Gy +20 mol/L顺铂);上述实验同时设立未处理的对照组.采用RT-PCR和Western blot法检测TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 SPCA-1、LTEP-α-2细胞在不同剂量的X射线照射后24 h,其TOB1蛋白及mRNA表达量均明显增加(t=8.25 ～24.48,P ＜0.05);不同时间检测提示,细胞在X射线照射后6h,TOB1蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h(t=14.23 ～15.82,P＜0.05);联合处理组TOB1的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=4.67 ～ 13.67,P＜0.05).结论 TOB1基因有可能作为临床肺癌放化疗靶基因,对临床放化疗疗效的判断具有一定的应用潜力.     

用染色体畸变研究AT细胞系辐射敏感性和适应性反应

目的探讨毛细血管扩张运动共济失调症(ataxiatelangiectasia,AT)细胞系的辐射敏感性和对低剂量辐射能否诱导细胞遗传学适应性反应。方法用2cGy60Coγ射线预先照射进入G1期的AT5B1VA(AT)细胞和GM0639(GM)细胞,培养6h后再照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线,分析染色体畸变。结果G1期的GM细胞在预照射2cGy60Coγ射线的诱导剂量后能非常显著地降低随后照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发的染色体畸变率,染色体畸变的观察值非常显著地低于预期值(P<0.001),而对AT细胞则没有观察到这种现象,染色体畸变的观察值与预期值差异无统计学意义(P>0.05);另外,1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发AT细胞的各种畸变率(包括着丝粒畸变、无着丝粒畸变和染色单体型畸变)均显著地高于GM细胞(P<0.001)。结论低剂量电离辐射不能诱导AT细胞产生细胞遗传学适应性反应;AT细胞对电离辐射诱发染色体畸变高度敏感,可能是由于不能正确修复DNA双链断裂的结果。     

低剂量照射TK6和U937细胞的效应:诱导p53及其对细胞周期延迟和适应性反应的作用

目的 :研究小剂量辐射对 TK6 (含有野生型 p5 3的淋巴母细胞 )和 U937(p5 3突变的单核粒细胞白血病细胞 )细胞周期的影响和诱导对随后大剂量的适应性反应。方法 :TK6和 U 937细胞系在 RPMI 16 40培养液中悬浮培养。所有实验接种密度为 2× 10 5 / ml的细胞悬液 ,在实验前 2 0 h照射 ,用剂量率为 0 .75和 0 .88Gy min- 1 的 6 0 Coγ射线 ,第一次照射诱导剂量 ,随后在不同时间给与攻击剂量。细胞周期分布和周期素用双色流式细胞仪测定。用 Western-blot方法测量 p5 3和 p2 1。用胞质分裂阻滞技术测定微核。按核质破碎和浓缩等核形态学…     

低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的：研究低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法：应用原位末端标记（TUNEL）和常规HE染色法分别结合光镜定量地观察75mGyX射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞在生精周期中凋亡的适应性反应。结果：当1．0、2．0或3．0Gy（攻击剂量，D2）X射线照射前6h给予75mGy（诱导剂量，D1）预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用，而对精子细胞影响不明显，当1．0、1．5、2．0、2．5、3．0Gy（D2）X射线照射前3、6、12、24h给予75mGy（D1）预照射时，发现当D2剂量较小（1．0、1．5、2．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早，较明显，而且持续时间较长；反之，当D2剂量较大（2．5和3．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少只有照后6h）出现，而且不显著。结论：低剂量电离辐射可以诱导精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。     

低剂量电离辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：观察低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的基本规律。方法：实验用X射线照射昆明雄性小鼠,其诱导剂量（D1）及其后攻击剂量（D2）分别是75mGy和1．5Gy。D1和D2间隔时间分别是3、6、12、24和60h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔3、6和12h ,D1 D2组胸腺细胞凋亡百发数明显低于D2组（P＜0．05）,G0／G1和G2＋M期细胞百分数也不同程度地低于D2组,而S期是分数却明显高于D2组（P＜0．0．5或P＜0．01）。结论上述结果指出,D1在75mGy,吸收剂量率为12．5mGy／min,D2在1．5Gy,吸收剂量率为0．287Gy／min;D1和D2间隔3－12h,可在全身照射条件下诱导小鼠胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

电离辐射剂量率、照后培养时间和生长因子对人外周血淋巴细胞克隆存活和以凋亡为特征的分裂间期细胞死亡的影响

目的 :通过人外周血淋巴细胞凋亡和增殖细胞死亡观察剂量率、照后恒温培养时间和生长因子对电离辐射诱导的分裂间期细胞死亡的作用。方法 :将健康成人静脉血淋巴细胞在 RPMI 16 40培养基中培养 16 d。开始培养 6 d换半液 ,随后每隔 2 d换液 1次 ,经流式细胞仪检测 96 %～ 97%的细胞处于 G0 期。用高剂量率 (HDR,45 Gy/ h)或低剂量率 (L DR,0 .0 2 4Gy/ h)的 1～3Gy1 3 7　 Csγ射线照射 G0 期淋巴细胞。在 3Gy L DR组开始照射的第 1天 ,同时进行 HDR组照射 (HDR1) ,并在 3Gy L DR组结束照射的第 6天进行另一组 HDR照射 (HDR6…     

高LET辐射诱导共济失调性毛细血管扩张症患者成淋巴类细胞凋亡的研究

目的 :探讨和比较共济失调性毛细血管扩张症 (A- T)患者和正常人 E- B病毒转化成淋巴类细胞 (L CL )在高传能线密度 (L ET)照射后所致细胞凋亡的特性。方法 :1细胞株 :采用 4种 A- T患者 L CL (ARO、BMA、CSA和 RJO)及 2种正常人 L CL (JAC和 KKB3)株。 2照射条件 :采用 32～ 45 Me V/u(8～ 12 Gy/min)快中子照射 ,并以低 L ET1.36 Gy/min的 X射线照射作比较 ,照射剂量为 1～4Gy。 3在照射后 0～ 48h,采用倒转脉冲电场凝胶电泳(FIGE)及荧光染色两种方法检测 L CL 凋亡。 4应用流式细胞仪测定细胞周期分布。 5 Western…     

18F-FLT细胞摄取率评价结直肠癌HCT116细胞早期放射反应

目的 观察不同剂量6MVX射线照射人结直肠癌细胞株HCT116后,体外细胞摄取18F-FLT的变化,分析18F-FLT用于早期预测肿瘤放射反应性的可行性.方法 测定1.0×105 ～1.5×106个细胞、培养36、60、84 h条件下,结直肠癌细胞株HCT116的18F-FLT摄取率.测定细胞经0、2、4、6、8 Gy6 MVX射线照射后,不同时间点(24、48、72 h)18F-FLT的细胞摄取率及细胞摄取抑制率;同时测定不同剂量照射后的细胞生长曲线、细胞增殖及细胞周期情况.结果 HCT116细胞对18F-FLT摄取率达(18.97 ±1.16)％.18F-FLT细胞摄取抑制率在照射2、4、6、8 Gy后24 h分别为(32.10±0.02)％、(54.46±0.04)％、(62.74±0.04)％和(65.81±4.81)％;18F-FLT细胞摄取抑制率与照射剂量呈正相关. 18F-FLT细胞摄取率与细胞周期S期比例呈正相关.结论 18F-FLT细胞摄取率可以早期反映人结直肠癌HCT116细胞株对放射的反应性.     

低剂量X射线照射的人淋巴细胞对再次辐射的致突变作用不敏感

人T淋巴细胞用低剂量的X射线处理后,可以抵抗大剂量X射线引起的细胞突变反应.研究中使用的T细胞是从外周血分离出来的,进行体外培养.培养液RPMI 1640含有2mmol的谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和20%的HL-1培养液.细胞浓度为10~5/ml,用PHA刺激细胞有丝分裂.在PHA作用24小时后实验组给以1cGy的X线照射,在PHA作用24小时后,用300cGy的X射线照射,细胞培养液加入20%的T细胞生长因子(淋巴因子作用于K细胞后的上清液)培养6～8天,使HPRT~-突     

~(60)Coγ射线照射诱导人卵巢癌细胞凋亡及细胞周期的改变

目的　探讨6 0 Coγ射线照射对人卵巢癌细胞株A2 780及其顺铂耐药株A2 780 CP体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法　采用四甲基偶唑蓝 (MTT)比色法分析不同辐照剂量 (1～10Gy)对A2 780及A2 780 CP两种细胞株体外生长的影响 ,用流式细胞术 (FCM)比较两者辐照后凋亡及细胞周期的变化。结果　 (1) 1～ 10Gy6 0 Coγ射线照射引起A2 780细胞株明显的生长抑制和凋亡 ,而A2 780 CP细胞则表现出明显的辐照抗性 .(2 ) 6Gy6 0 Coγ射线照射后 6～ 48hA2 780细胞呈现G1 期细胞阻滞和S期细胞比例下降 ,A2 780 CP细胞则呈G1 期细胞比例减少和S期细胞比例增加。结论卵巢癌耐药细胞具有辐射抗性和特征性的细胞周期变化 ,流式细胞术测定辐照诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化可预测恶性肿瘤细胞的辐射敏感性。     

在抗辐射的人胶质瘤细胞中Fas信号转导通路未受损害

目的:肿瘤细胞对放疗的抗辐射性常与凋亡通路障碍有关。因此,探讨了Fas信号转导通路是否在高度耐受辐射的人胶质细胞瘤中诱导细胞凋亡。方法:1将携带有荧光素酶基因和突变型p53cDNA(在175bp位点)的逆转录病毒载体转染至无p53基因突变的胶质瘤细胞株U-87MG中。培养细胞经剂量率为1.2Gy/min的X射线照射后,加入0.01ng/mlFas单抗和10μg/ml环己酰亚胺(抗真菌药),同时加入IL-1β转化酶(ICE)抑制剂或加入神经酰胺孵育5h。2Fas单抗介导的细胞毒性和凋亡实验。3采用流式细胞仪分析凋亡。结果:1经20Gy照射的U-87MG培养细胞数量没有明显增加,…     

60Coγ线超大剂量照射人离体血早熟凝集染色体环的剂量-效应曲线

目的 建立超大剂量γ线离体照射后人血淋巴细胞早熟凝集染色体环(PCC-R)的剂量-效应曲线。方法 外周静脉血样采自3名健康男性,经⁶⁰Coγ线(剂量率2.35Gy/min)照射0、1、3、5、8、10、13、16、20、26和30Gy。于37℃恒温箱培养48h,收获前1h加入冈田酸以诱导产生早熟凝集染色体(PCC),计数PCC细胞中的PCC-R频率,拟合剂量-效应曲线。结果 PCC指数随照射剂量增加而逐渐减少;每细胞PCC-R频率随照射剂量增加而增加直到20Gy,＞20Gy后趋于饱和。对所获数据进行回归分析,所拟合的曲线符合线性模型(上限剂量到20Gy):y=-0.020+0.052D(y为每细胞PCC-R频率,D为剂量,Gy)。结论 本研究用药物诱导PCC-R法所建立的剂量-效应曲线可估计的上限剂量达20Gy,它的可靠性和实用性还有待于在今后的辐射事故中实际应用加以验证。     

电离辐射对EL-4细胞凋亡与坏死的影响

目的 研究不同剂量电离辐射对EL－4细胞凋亡和细胞坏死的影响。方法 采用PI和Hoechst 33342双染、流式细胞术检测。结果 实验结果表明：给予50－200mGy低剂量照射后6h,EL－4细胞凋亡和坏死较对照组没有升高,而给予1．0－8．0Gy大剂量X射线照射后6h,细胞凋亡较对照组有明显升高,4．0Gy以上剂量,细胞坏死显著升高。结论 一定剂量的电离辐射不仅可以诱导凋亡的产生,而且可直接导致细胞坏死,即细胞的死亡模式与受照剂量有关。