小鼠胸腺基质区对裂变中子或X射线分割照射的剂量效应

为评价胸腺基质细胞区的辐射效应,作者以平均能量1MeV裂变中子或300kVP X线分割全身照射新出生的CBA/H小鼠,剂量分别为6.88和15.00Gy。照后20min内取出胸腺,分二叶分别移植于C3H裸鼠肾被膜下。移植后1～2个月,再取出该胸腺移植物,计量其体积,然后以免疫细胞化学法观察移植物内T细胞和基质细胞的分布及结构,并以流动细胞荧光计分析实验动物脾细胞的T细胞亚群。     

~(238)Puα粒子诱发C3H10T1/2转化细胞的成瘤性能力弱于X射线

C3H10T1/2细胞转化后失去接触抑制,并形成多层生长,易与接触抑制的单层细胞相互区别。用C3H10T1/2小鼠细胞经238　Puα粒子或X射线照射后的转化试验比较二者诱发C3H10T1/2细胞转化的成瘤性。方法:α粒子的照射能量为3.26±0.22MeV,在水中的LET值为121keV/μm。X射线照射条件为420kVp,电压250kV,电流15mA。5GyX射线照后C3H10T1/2细胞的存活率为0.2±0.02,转化率为(8.3±1.4)×10-4/存活细胞,1Gyα粒子照后细胞存活率为0.25±0.03,转化率为(11.1±1.6)×10-4/存活细胞。照射后挑取复层生长的细胞集落(α粒子诱导的集落58个,X射线…     

野生型TP53对Bowman-Birk蛋白酶抑制剂在正常成纤维细胞中辐射防护作用的必要性

方法:正常成纤维细胞HSF6和自发转化的正常细胞系HH4dd经Bowman-Birk蛋白酶抑制剂(BBI)处理16小时后照射,用流式细胞仪测定细胞周期,细胞裂解液免疫沉淀作WesternBlotting检测,对TP53外显子5～8作PCR-SSCP分析,对外显子5测序。核提取液,用电泳移动性变位分析(EMSA)法测定。作CDKN1A(p21/WAF1/Cip1)的Northern印迹杂交。对HSF6用TP53反义寡核苷酸即寡聚体KD2或对照寡聚体KD3处理,再经BBI处理16小时后4Gy照射,继续培养进行克隆计数。结果:用BBI预处理对辐射诱导的HSF6克隆存活有明显保护作用,而对HH4dd则无显著影响。B…     

生血管生长因子对C3H小鼠小肠的体内辐射防护效果

目的:评价生血管生长因子(成纤维细胞生长因子FGF1、FGF2及血管内皮生长因子VEGF)能否改变全身照射后C3H小鼠小肠的辐射效应。方法:18～10周龄雌性C3H/He小鼠,体重为21～25g,用137Csγ射线全身照射,剂量率为1Gy/min。生血管生长因子通过静脉给予,静脉注射无菌生理盐水的小鼠和假照射的小鼠作为对照。2经14Gy照后1小时的小鼠给予生血管生长因子3～12μg/小鼠,3.5天测定其小肠每横断面的隐窝数。3经7～16Gy照前24小时或照后1小时的小鼠给予生血管生长因子6μg/小鼠,测定LD50/30和LD50/6。4经12～18Gy照前24小时或照后1小时的小鼠给…     

~(99)Tc~m-annexinV细胞凋亡显像

目的 :用 99Tcm 标记的人体内蛋白 annexin V进行凋亡细胞的体外检测和体内显像。方法 :1Jurkat T原始淋巴细胞采用无血清培养基培养0～ 4天 ( n=10 )、阿霉素 0～ 2 0 0 ng/ml孵育 48小时 ( n=10 )和 CHll Fas抗体 0～ 2 5 ng/ml孵育 2 4小时 ( n=8)等方法处理 (诱导细胞凋亡 ) ,用 6 0℃加热 10和 30分钟 ( n=4) (引起细胞坏死 ) ;Balb/c小鼠 ( n=3)腹膜内注射地塞米松 10 mg/kg(诱导胸腺细胞凋亡 ) ,8小时后处死并制备胸腺单细胞悬液。在各组细胞 ( 10 6 个 )中分别加入 99Tcm-肼基烟酰胺( HYNIC) - annexin V 370～ 740 k Bq( 10…     

阻断血管内皮生长因子应激反应增强电离辐射的抗肿瘤作用

目的:研究放疗后血清血管内皮生长因子(VEGF)的变化及其生物学意义。方法:分别用C57BL/6雌性小鼠和无胸腺小鼠建立鼠和人的移植瘤模型,肿瘤长到350～450mm3进行肿瘤局部照射。X射线剂量率为188cGy/min,分割照射,总剂量为20～40Gy。VEGF抗体按每只鼠10μg于每次分割照射前3h腹腔注射。肿瘤匀浆上清和培养上清中的VEGF含量用酶联免疫吸附法测定。VEGF信使核糖核酸水平用Northern检测。用四唑盐比色法和集落培养法测定人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖能力。结果:在体和离体的Lewis肺癌(LLC)以及离体的人肿瘤细胞株Seg-1、SQ20B、…     

体外雌激素代谢物2-甲氧雌二醇增强辐射效应

目的 :2 -甲氧雌二醇 (2 - ME)是一种内源性雌二醇代谢物 ,具有破坏微管、抑制小鼠肿瘤和血管生成功能。由于某些微管抑制剂可改变辐射敏感性 ,因而对 2 - ME在体外作为辐射增强剂进行评价。方法 :1选用 H46 0人肺癌细胞株、MCF- 7乳房癌细胞株和 4种小鼠 SCID免疫缺陷细胞株 (SCID、CB- 17、10 0 E和5 0 D)。 2细胞贴壁后 ,加 2 - ME或β-雌二醇培养 2 4h,6 0 Coγ射线照射 (2～ 5 Gy,1.18Gy/ min) ,再培养 7～ 10 d,观察其克隆的存活率。 3分裂剂量恢复 ,即细胞分 2次照射 ,每次3Gy,照后观察其克隆细胞亚致死性损伤 (SL D)的…     

用X射线转化的C3H10T1/2小鼠细胞和诱导的小鼠肉瘤细胞的癌基因

电离辐射可引起DNA的多种损伤,并导致癌基因的激活。为了阐明辐射诱发细胞转化及肉瘤发生,对辐射诱导不同癌基因的转录进行了分析,并探讨了这些基因在早期被激活的可能性。利用分子杂交方法研究了X射线转化的C3H10T1/2(XTD)及诱发的小鼠肉瘤(RIF-1)细胞中不同癌基因的表达、扩增和重排的变异。Northern杂     

用小鼠模型研究辐射诱发白血病的遗传不稳定性

方法:用3GyX射线单次全身照射CBA/H小鼠制成小鼠急性白血病(AML)模型,用单次和分次X射线照射C57BL/6小鼠制成小鼠胸腺淋巴瘤白血病(TLL)模型,研究遗传不稳定性在辐射诱发小鼠白血病过程中的作用。结果:13GyX射线单次全身照射CBA/H小鼠后,25%小鼠发生AML,平均潜伏期为18个月,80%以上的AML在2号染色体末端或中间缺失。2C57BL/6小鼠经单次或分次X射线照射诱发小鼠TLL,遗传学特征是15号染色体的三倍性和4号染色体上TLS及TLSR2区域的等位丢失。350%左右辐射诱发的小鼠AML和TLL出现性染色体不稳定性,主要表现在Y染色体的非整…     

辐射对PHA诱导的T淋巴细胞集落形成的效应:不同照射时间产生不同效应

研究分裂期T淋巴细胞的辐射效应常用~3H-胸腺嘧啶核苷掺入法,但该方法有不足之处,因为放射本身可促使~8H-胸腺嘧啶核苷掺入DNA;另外,细胞进入S期和合成DNA后并不一定经历细胞分裂。本文报道了用集落形成方法分析T淋巴细胞辐射效应的实验结果。材料和方法:取正常人血标本,密度梯度法分离淋巴细胞,进行X线照射,剂量为0～4戈瑞,剂量率0.68戈瑞/分。受照细胞用PHA丝裂原刺激(最终浓度为20μg/ml),于琼脂培养基37℃中生长七天后光镜下计数,凡大于50个细胞相聚为一个集落。按加入PHA和照射时间不同分4个实验组。1,细胞于液体     

mTOR复合物在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用研究

目的:通过研究8周有氧运动对高脂饮食诱导胰岛素抵抗C57BL/6小鼠肝脏m TOR复合物1/2(m TOR Complex 1/2)以及胰岛素信号相关蛋白的影响,分析有氧运动/高脂饮食与m TORC1/C2和胰岛素信号通路蛋白磷酸化活性之间的关系,为全面理解有氧运动改善高脂饮食诱导机体胰岛素抵抗的机制提供理论依据。方法:选取50只4周龄、雄性C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组(C组,n=10)和高脂饮食组(H组,n=40)。高脂饮食组小鼠饲以高脂饮食6周以建立胰岛素抵抗模型,6周后通过口服葡萄糖耐量实验(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT)鉴定胰岛素抵抗成模小鼠。随后将胰岛素抵抗小鼠再次随机分为安静组(H组,n=10)和运动组(HE组,n=15),此两组小鼠继续饲以高脂饮食,同时对HE组施以8周、强度为75%VO2max的有氧跑台运动干预。实验结束后,采用OGTT检测小鼠葡萄糖耐量,ELISA法测定空腹血清胰岛素水平,Western Blot检测肝脏Akt/m TOR信号通路相关蛋白磷酸化水平,并通过免疫共沉淀方法检测小鼠肝脏Raptor-m TOR及Rictor-m TOR结合水平。结果:与C组相比,H组小鼠体重、血清胰岛素水平均显著升高,口服葡萄糖耐量下降,肝脏胰岛素信号通路相关蛋白p Akt S473、p Akt T308、p IRS1S307、p AMPKαT172磷酸化水平下降,p S6K1T389磷酸化水平升高。免疫共沉淀检测发现Raptor-m TOR结合水平上升,Rictor-m TOR结合水平下降,即m TORC1蛋白表达水平升高,m TORC2蛋白表达水平减低;与H组相比,HE组小鼠体重、血清胰岛素水平均显著降低,口服葡萄糖耐量增高,肝脏胰岛素信号通路相关蛋白p AktS473、p AktT308、p IRS1S307、p AMPKαT172磷酸化水平有所提高,p S6K1T389磷酸化水平降低。Raptor-m TOR结合减少,Rictor-m TOR结合增多,即m TORC1蛋白表达水平降低,m TORC2蛋白表达水平增高。结论:8周有氧运动可改善高脂饮食诱导小鼠胰岛素敏感性,其机制可能与有氧运动激活小鼠肝脏Akt/m TORC2信号通路、抑制Akt/m TORC1信号通路,增强小鼠肝细胞胰岛素信号敏感性、改善胰岛素抵抗有关。     

低剂量辐射对小鼠胸腺细胞浆和细胞核蛋白质表达的影响

目的　研究低剂量电离辐射对昆明小鼠胸腺细胞浆和细胞核蛋白质表达的影响。方法　在分离 75mGy照射组和假照射组小鼠胸腺细胞浆和细胞核的基础上 ,采用SephadexG 10 0凝胶过滤和高效液相分析两组小鼠胸腺细胞蛋白质的表达 ,通过小鼠脾淋巴细胞转化和人外周血淋巴细胞染色体畸变检测这些蛋白质表达的生物活性。结果　胸腺细胞浆相对分子质量为 6 1 4× 10 3的蛋白质和胸腺细胞核相对分子质量 30 4× 10 3的蛋白质照射组比假照射组明显增加。并且这些增加的蛋白质组分对ConA刺激正常小鼠脾淋巴细胞转化和X射线损伤人外周血淋巴细胞所致染色体畸变具有刺激和保护作用。结论　低剂量辐射兴奋效应可能与胸腺细胞浆 6 1 4× 10 3的蛋白质和胸腺细胞核 30 4× 10 3的蛋白质表达增高有关。     

用^3H—TdR释放法测定小鼠NK细胞的辐射敏感性

用~3H—TdR释放法测定C_(57)BL/6小鼠脾细胞对YAC-1细胞林的NK活性,首次将该法应用于研究NK细胞对γ线的辐射敏感性,得出如下结论:(1)小鼠整体照射后24h脾脏NK活性的D_(37)约为17Gy,D_0约为11Gy;在24～32Gy范围内仍保留着30%的NK活性,存活曲线为反“S”形,验证了NK细胞总体对辐射的相对耐受性。(2)脾细胞离体或整体照射1～2Gy后即刻NK活性均迅速下降,在2～24Gy内,离体和整体照射组的NK活性分别维持在40%～80%和50%,前者高于后者,说明NK细胞对离体照射比对整体照射更不敏感。(3)小鼠整体照射后24h,全脾细胞数在较小剂量(<4Gy)内急剧下降,然后随剂量增大变化平缓。可以推测NK活性的变化与脾细胞总数的改变有一定关系。(4)综合分析本实验结果,可以设想NK细胞本身可能存在着辐射敏感性不同的亚群。(5)用~3H—TdR释放法测定NK细胞的辐射敏感性,自然释放率低,重复性好,可靠易行。     

辐射防护药降低骨髓氧分压

本研究利用氚标记辐射增敏剂Miso与骨髓细胞结合数和其氧分压成反比的特性,来测定几种防护药引起骨髓氧分压下降的程度.方法:将6～12周C57/Bl 10J雌性小鼠,处死后用冰冷的含10%胎牛血清的F_(12)营养液冲出骨髓细胞,先后将2×10~6个/ml×1ml细胞和~3H-Miso置于培养皿中,将其放入带通气管并抽空的铝室内,通入含氧0.01～18%的空气,当达到所需氧浓度后,把铝室放在37℃水浴震动器上2～4小时.用氧极普电极在特制的抽样室内进行检测.最后,打开铝室,测定~3H-Miso与酸性沉淀细胞部分的结合量.     

角质细胞生长因子减轻一次辐射照射引起的口腔粘膜炎

目的 :确定重组人角质细胞生长因子 (rh KGF)对模拟的事故性一次辐射剂量诱发的急性口腔炎的作用。方法 :用 2 5 k V X射线一次照射 C3H/ Neu小鼠舌下端中间表面上皮 (3× 3mm2 )。实验分组 :A,单独给予 KGF连续7d;B,单独一次照射 6～ 15 Gy;C,一次照射 7.5～ 2 6 Gy加KGF处理 ,并按 KGF给予时间不同分为 :1照前 4～ 2 d;2照前 3～ 1d;3照射当天至照后第 2天 ;4照射当天至照后第5天 ;5照前第 3天至照射当天及照后第 1天。每个实验用10只小鼠。KGF:临用前新鲜配制为 1mg/ m L ,每日一次皮下注射 5 mg/ kg体重。观察小鼠舌粘膜溃疡…     

~(111)In标记人单克隆抗体H11 scFv片段用于人黑素瘤异种移植模型的快速显像

目的 :评价 1 1 1　 In标记人单克隆抗体 H11sc Fv片段在无胸腺小鼠异种移植人黑素瘤模型中的生物分布和显像效果 ,并预测相应的人辐射吸收剂量。方法 :H 11sc Fv片段通过编码 VH、VL 和多肽接头的表达性载体在大肠杆菌中分泌表达 ,与二乙撑三胺五乙酸(DTPA)双酐室温反应后 ,经过葡聚糖凝胶 G- 2 5微柱纯化。DTPA- H11sc Fv片段的免疫反应性采用人黑素瘤细胞A375进行流式细胞分析或固定细胞酶联免疫吸附 (EL ISA)测定 ,并与 H 11sc Fv片段结果比较。 1 1 1 　 In室温标记 DTPA-H11sc Fv片段 ,葡聚糖凝胶 G- 2 5微柱纯化 ,快…     

血小板第4因子造血保护作用的实验研究

目的 :研究血小板第 4因子 (PF4)对环磷酰胺 (CTX)处理小鼠体内造血系统的保护作用。方法 :实验鼠用PF4注射 2次 ,间隔 6h ,第二次注射后 2 0h给予CTX 2 0 0mg·kg- 1 。动态观察小鼠外周血白细胞数以及不同时期外周血T细胞亚群 ,骨髓粒-巨噬系集落形成单位 (CFU -GM)、细胞周期和小鼠脾脏、胸腺的变化。结果 :PF4能增加CTX处理小鼠骨髓CFU -GM的产率 ,加速体内CFU -GM的恢复 ;短时增加CTX处理小鼠骨髓G0 /G1 期细胞 ,减少骨髓细胞的坏死和凋亡 ;增加胸体比和脾体比。但是PF4对小鼠外周血白细胞数和T细胞亚群未见明显影响。结论 :PF4能保护小鼠骨髓及胸腺、脾脏等器官组织免受CTX损伤 ,增加骨髓CFU -GM的形成能力     

BALB／c被毛突变无毛小鼠T细胞亚群的比例

目的　研究BALB/c被毛突变无毛小鼠脾脏T细胞亚群数目及比例 ,并与BALB/c裸鼠及BALB/c正常小鼠进行比较。方法　应用荧光素标记的单克隆抗体反应及流式细胞仪测定T细胞亚群数目及比例。结果　BALB/c被毛突变无毛小鼠、稀毛小鼠的L3T4+ 、Ly - 2 + T细胞亚群比例分别为 2 3.41± 1.73、6 .4± 1.5 1和 2 6 .6± 2 .79、6 .7± 0 .74,BALB/c正常小鼠的L3T4+ 、Ly - 2 + T细胞亚群比例为 31.5± 3.14、8.6± 1.0 5。结论　不同于BALB/c裸鼠 ,BALB/c被毛突变无毛小鼠、稀毛小鼠由于有胸腺 ,其脾脏L3T4+ 与Ly - 2 + T细胞亚群比例接近于正常BALB/c鼠 ,提示其具有基本正常的细胞免疫功能。     

植物多糖对正常及肿瘤小鼠T和B淋巴细胞的影响

本文用细胞化学方法,观察了24种植物多糖对正常小鼠外周血T和B淋巴细胞,胸腺T淋巴细胞及肿瘤小鼠外周血T淋巴细胞的影响。结果指出,上述多糖可分为三类:(1)可使外周血T和B淋巴细胞及胸腺T淋巴细胞增加;(2)可使外周血T和B淋巴细胞及胸腺T淋巴细胞降低,(3)不引起外周血T和B淋巴细胞及胸腺T淋巴细胞明显的增减。文中初步讨论了使正常小鼠外周血和胸腺T淋巴细胞增减的多糖、正常小鼠胸腺重量与胸腺T淋巴细胞百分数以及肿瘤小鼠外周血T淋巴细胞增减与抑瘤效应的关系。     

X射线照射对人细胞系延迟的细胞毒和基因毒效应

目的:为了澄清迟发增殖死亡(DRD)与辐射诱发基因组不稳定性之间的关系,检查了照射的人鳞状上皮癌细胞(SCL-)的集落形成率和后代细胞中微核(MN)的着丝粒阳性和阴性。方法:1X射线治疗机照射SCL-细胞,剂量率为0.4Gy/min。2用集落形成培养法检测细胞存活。为了测定DRD,照后细胞分别培养7、10及14d,测定其培养细胞总数及集落生成能力。3用胞质分裂阻滞法测定细胞MN,其鉴定按Countryman和Heddle的标准进行。以人α-随体着丝粒探针用荧光原位杂交技术检测微核的着丝粒阳性(MNC )和阴性(MNC-)。结果:1SCL-细胞对X射线较敏感,D0(37%细胞…