贵州省血液中心病毒核酸检测应用分析

目的：尝试评价贵阳地区无偿献血人群中开展血液病毒核酸检测（NAT ）的必要性和重要性。方法应用 Grifols Procleix Tigris 全自动 NAT 和 Procleix Ulitrio Assay HBV 、HCV 、HIV NAT 联检试剂,对72967例无偿献血者血液标本做HBV 、HCV 、HIV 联检,并对联检阳性标本做鉴别试验;同时对同批标本采用 ELISA 双试剂平行检测。结果 NAT 阳性检出率为0．63％（462／72967）,ELISA 检测阴性标本的 NAT 阳性检出率0．16％（119／72624）;单项核酸阳性标本的鉴别试验阳性率为24．3％（29／119）。结论贵阳地区核酸检测合格血液中存在的输血传播疾病风险主要是输血感染 HBV ,NAT 用于血液筛查能进一步降低输血传播疾病风险。     

ELISA与NAT检测在血液HBV筛查中的关系研究

目的分析ELISA检测与病毒核酸扩增（NAT）检测血液HBV的符合率,探讨这2种方法在血液HBV筛查中的关系。方法选取59483份献血者血液标本,先用国产和进口2种不同的ELISA试剂检测HBsAg,将ELISA检测双试剂阳性、单试剂阳性、阴性的标本进行NAT检测HBVDNA,检测模式为6人份混样检测,混样NAT检测结果阳性的标本再进行单人份拆分NAT检测。观察ELISA与NAT检测血液HBV结果的符合率。结果59483例血液标本中ELISA检测双试剂阳性NAT检测阳性的标本25例,ELISA检测单试剂阳性NAT检测阳性的标本30例,ELISA检测阴性NAT检测阳性120例,ELISA检测双试剂阳性NAT检测阴性的标本6例,ELISA检测单试剂阳性NAT检测阴性的标本38例,ELISA检测阴性NAT检测阴性的标本59264例。ELISA检测双试剂阳性、单试剂阳性与NAT阳性的符合率分别是80.6%和44.1%,总符合率为55.5%。结论在献血者血液HBV筛查中,ELISA检测与NAT检测技术各具优势,互为补充,两者联检对降低HBV输血传播的发生,保障血液安全具有重要作用。     

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

实施核酸检测后献血者丙型肝炎病毒检测模式的探讨

目的 探讨献血者血液筛查中实施核酸检测(NAT)后去掉一次抗-HCV酶联免疫吸附试验(ELISA)检测后抗-HCV漏检的风险.方法 从献血者血样中留取常规抗-HCV ELISA双试剂(国产金伟凯或万泰及进口Ortho)2次筛查中任一试剂筛查不合格的献血者血样,进行NAT检测及重组免疫印迹(RIBA)抗体确证试验,并对ELISA单试剂不合格、NAT阴性但RIBA确证阳性或可疑标本进行追踪研究分析自然转归.分析去掉一次抗-HCV ELISA检测后抗-HCV漏检的风险性.结果 213970人份献血者血样中常规血清学双试剂检测HCV不合格953份(0.445％).该953份不合格标本中,有9份为国产试剂筛查合格NAT阴性但RIBA试验确证阳性,有10份为进口试剂筛查合格NAT阴性但RIBA确证阳性.如果去掉该进口ELISA,采用该国产ELISA试剂和NAT,那么将有4.20/10万(9/213970)的抗-HCV确证阳性血液会被漏检;如果去掉该国产ELISA,采用该进口ELISA试剂和核酸检测,将有4.66例/10万(10/213970)的抗-HCV确证阳性血液会被漏检;进口试剂和国产试剂漏检抗-HCV确证阳性血液的风险差异无统计学意义(P＞0.05).而另一方面,我中心自开展NAT研究及常规NAT检测以来(2007-2013年,约92万人次),尚未从“2次ELISA筛查”合格的血液中检出确证的HCV RNA单独阳性血液,因此“进口ELISA+NAT”或“国产ELISA+NAT”分别比“2次ELISA筛查”少检出4.66/10万及4.20/10万抗-HCV RIBA确证阳性的血液.结论 就献血者血液HCV筛查策略而言,实施NAT检测后,去掉两次ELISA检测中的一次ELISA检测需慎重.     

核酸检测与酶免检测平行筛查血液的效果评价

目的：初步了解本站采取核酸检测与酶免检测平行筛查血液的效果。方法：对2011年6月15日～2014年6月底共计39236份献血者标本的 ELISA 检测结果（HBsAg、抗－HCV、抗－HIV）和 NAT 检测结果进行比较分析。结果：39236份标本中 NAT 阳性220份,阳性率为0．56％;ELISA阳性（HBsAg、抗－HCV、抗－HIV 3项）199份,阳性率为0．51％;NAT、ELISA 阳性157份,占0．40％;ELISA 阴性 NAT 阳性63份,占0．16％,鉴别出27例 HBV －DNA 和1例 HCV －RNA;NAT 阴性 ELISA 阳性42份,占0．11％,ELISA 双试剂检测阳性与 NAT 阳性符合率为78．9％,HBsAg、抗－HCV、抗－HIV 双试剂阳性与 NAT 阳性符合率分别为80．3％、66％、100％。结论：NAT 与 ELISA 平行检测血液筛查模式既能够防漏互补,同时也可以缩短血液检测周期,保障血液的及时安全供应。     

病毒核酸检测在血液筛查中的应用

目的:探讨病毒核酸检测技术在血液筛查中的应用效果。方法:选择血清学检测为阴性的献血者为研究对象,选择PCR-微流芯片、ROC HE PCR-ELISA、实时荧光PCR方法、转录依赖的扩增技术(CHIRON TMA)等多种方法对研究对象进行HCV RNA、HBV DAN、HIV-1 RAN检测,如果献血者的乙肝为阳性,则应进行乙肝两对半标志物和ALT追踪检测,如果献血者为丙肝核酸阳性,则应进行HBV DNA、HCV RNA、抗-HCV和ALT病毒载量的追踪检测。结果:共检测血液样本4521份,其中HBS AG(-)、HBV DNA阳性共2例,总阳性率为0.047%;未检出HIV-1 RNA阳性,追踪检测2例HBS AG(-)、HBV DNA阳性样本显示,1例表现为窗口期特征,1例存在血清转换现象;HBV DNA阳性者进行追踪检查发现,ALT正常。追踪检测1例ANTI-HCV(-)、HCV RNA阳性者,结果显示ALT上升明显,为典型窗口期献血。结论:在血液筛查中应用病毒核酸检测技术,能让血液安全性得以有效提升。     

核酸检测方法在献血员肝炎筛查中的初步应用

目的 将核酸检测方法应用于献血员肝炎筛查，了解某地区血液安全水平和常规血液筛检中两次酶免检测方式的可靠性。方法44份Murex-abbott抗-HCV阳性标本经科华酶免试剂复检后，使用罗氏COBAS Ampliscreen单独检测HCV RNA；486份来自某地区的合格献血标本采用24份标本混合检测的方法，用罗氏COBAS AmpliScreen检测HBV DNA和HCV RNA。结果44份标本用科华酶免试剂复检，结果只有13份标本呈抗-HCV阳性；3份HCVRNA阳性标本中1份为科华试剂检测抗-HCV阴性。486份合格献血标本进行罗氏COBAS AmpliScreen 24份混合形式筛检后，发现3例HBV DNA阳性标本，阳性率为0．62％，未发现其他核酸标记物阳性的标本。结论我国血液筛查的HBsAg检测存在漏检的现象，在常规血液筛检中，NAT检测只能作为酶免抗体检测的一种补充手段，如果NAT能取代我国血液二次酶免筛检中的一次，则能在最大程度上保障血液安全。     

惠州市无偿献血者HCV感染情况调查及输血残余风险评估

目的调查惠州市无偿献血者HCV的感染情况并评估经EIASA筛查抗-HCV后经血传播感染HCV的残余风险。方法采用2种抗-HCV试剂对每份献血者标本进行检测,2种试剂均无反应判阴性,任1种试剂有反应标为结果待定。待定标本进行HCV确诊实验。阴性标本进行HCV病毒核酸检测。结果 2013年8月至2014年8月共检测无偿献血者标本103 197人份,确认阳性151份,初次献血者阳性率高于再次献血者;酶免阴性标本中核酸检出2份阳性,经抗-HCV筛选后的阴性血传播HCV的总残余危险度为1/51 600。结论结合本地区献血者的特点和HCV流行情况,有必要增加NAT方法对无偿献血者血液进行筛查,减少输血传播HCV病毒的风险。     

超速离心浓缩对提高血液NAT筛查不确定标本鉴别率的临床研究

目的探讨超速离心浓缩（简称超浓缩）血液标本中的病毒对提高三联检核酸筛查阳性、病毒含量低不能常规鉴别标本的可鉴别率。方法30份Roche COBAS s201核酸扩增检测系统筛选出的COBAS TaqScreen MPX HIV、HCV、HBV三项联检核酸阳性,但COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV、HCV及HBV定量试剂原倍鉴别结果均阴性的标本,进行4℃、24600g超速离心1h,浓缩富集病毒后,使用Roche公司的COBASAmpliPrep/COBASTaq-ManHIV、HCV及HBV定量试剂盒进行HIV、HCV及HBV鉴别试验,鉴别阳性的标本,超浓缩处理后用Novartis（原Chiron）公司的PROCLEIX ULTRIO试剂进行相应病毒的鉴别试验加以确证。结果30份RocheMPX核酸筛查阳性、鉴别阴性的标本,经4～10倍超浓缩处理后有23份标本被鉴别为HBV阳性,可鉴别率为76.7%。结论超浓缩处理可解决绝大部分核酸检测三联检阳性但鉴别未果的标本的病毒鉴别问题。     

献血者HCV检测模式的初步探讨

目的 探讨核酸扩增技术(NAT)检测后进行一次酶联免疫吸附试验(ELISA)检测的可能风险.方法 收集双试剂(金伟凯及Ortho)HCV ELISA筛查判为不合格的献血者血液291份,进行核酸检测及血清学确证试验.分析单试剂检测漏检的情况.结果 选用金伟觊anti-HCV ELISA作为单次ELISA检测,291份不合格血标本中97份被判为ELISA检测合格(S/CO＜0.7)同时NAT检测合格,其中3份(1.0％)重组免疫印迹(RIBA)确证试验阳性的血液被NAT和ELISA漏检;选用Ortho anti-HCV ELISA作为单次ELISA检测.291份不合格血标本中88份被判为ELISA检测合格(S/CO＜0.7)同时NAT检测合格,其中2份(0.7％)RIBA确证试验阳性的血液被漏检.结论 NAT检测后去掉两次ELISA检测中的一次检测模式暂时尚需慎重,需加大样本量迸一步分析研究.     

血清学检测联合核酸检测在血液中心的应用价值

目的探讨在血液中心应用血清学检测联合核酸检测的价值,以提高输血的安全性,降低输血感染风险。方法以我血液中心于2015年1月至2015年12月期间大约共计3000份献血者血液标本作为本组研究的观察对象,所有血液标本均经血清学检测包括HbsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体(以下简称酶免),与谷丙转氨酶;并行HBV/HCV/HIV3联检核酸定性检测。对于单纯核酸检测反应性的标本需进行鉴别试验,其中鉴别阴性的献血者进行跟踪检测,并将HbsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体三项酶联免疫检测结果与核酸检测结果进行对比分析。结果本组大约3000份血液标本中,经酶联免疫检测单试剂不合格331份,不合格率为1.35%;其中经酶联免疫检测双试剂反应性且经核酸检测无反应性的不合格标本共31份,其中HbsAg反应性11份,HCV抗体反应性20份;单纯核酸检测反应性标本共43份,经跟踪检测确认其中HBV13例、HIV窗口期感染2例,末检出HCV献血者。结论核酸检测与血清学检测的结果存在一定差别,核酸检测虽然对血清学阴性的HBV感染检出效果明显,但对于感染HBV但病毒载量极低者,其漏检的可能性较高;需要经跟踪检测与实验室检测以进一步确认。     

酶联免疫吸附试验对乙型肝炎表面抗原阴性献血者核酸筛查及降低输血传播乙型肝炎病毒效果分析

目的了解本地区酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBs Ag)结果呈阴性献血者经核酸检测技术(NAT)复检情况及对降低输血传播乙型肝炎病毒(HBV)的效果。方法应用两种不同厂家ELISA检测试剂对36 459例献血者标本进行HBs Ag筛查,ELISA检测结果呈阴性标本应用上海浩源血液筛查系统行核酸检测,对NAT结果为阳性的标本行乙肝两对半检测。结果采用ELISA法检测36 459例标本中,HBs Ag阳性112例;36 347例阴性样本经NAT检测,检出阳性39例,阳性检出率为0.11%;39例阳性患者中成功随访9例,其中乙型肝炎窗口期感染2例,隐匿性感染7例。结论血站应用ELISA联合NAT开展血液筛查检测,能有效降低HBV经输血传播的风险,提高血液安全性。     

核酸检测在血液传染病筛查的应用价值

目的 探讨核酸检测在血液传染病筛查[乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)]的应用价值.方法 选取2018-2019年在该院住院因手术或输血需要检测乙肝五项和抗HCV、HIV抗原抗体的500例患者血清标本.化学发光法检测乙肝五项、抗HCV、HIV抗原抗体,提取核酸定性检测HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA.比较两种方法的检测结果,不一致的标本检测病毒载量确认最终结果.结果 检测出11例HBV化学发光与核酸定性结果不一致标本,未检出HCV和HIV化学发光与核酸定性结果不一致标本.2例HBsAg阳性HBV DNA定性阴性检测标本检测载量均小于20 IU/mL.9例HB-sAg阴性HBV DNA定性阳性样品中2例未检测到HBV DNA载量,6例标本检测到HBV DNA载量小于20 IU/mL,1例标本HBV DNA载量为23.6 IU/mL.结论 HBV、HCV、HIV病原体核酸检测有利于检测出窗口期和免疫状态异常的感染者.     

核酸扩增技术(NAT)在血液HBV DNA筛查中的应用研究

输血相关传染病的预防和控制已成为全社会关注的焦点,随着检测技术的不断进步,输血传播相关病毒的危险性大大降低,目前酶免疫检测(ELTSA)技术已经广泛应用于血液筛查,但每年仍有少量新发输血后肝火病例报道,如美国无偿献血者每单位供血传播HBV的危险性为1/6.3万.这些危险主要来自病毒感染者"窗口期"献血、病毒变异、低病毒载量感染及人工操作失误等,其中"窗口期"漏检是影响血液安全性的主要问题.核酸扩增技术(NAT)可直接检测病毒核酸,大大缩短病毒ELISA检测的窗口期及检出变异株,发达国家已陆续将其纳入献血者的常规筛查项目,并取得一定的成效.但由于进口 NAT试剂成本很高,取制了该技术在我国血液常规筛查中的推广应用.为了进一步提高血液的安全性,降低血液核酸筛查的成本,笔者尝试将国产NAT试剂应用到血液HBV DNA筛查中,并对在献血者HBV DNA检测中建立一套适合中国国情的筛查检测体系的可行性进行了探讨.     

仪征市4382份献血者血样核酸检测结果报道

目的探讨缩短病毒检测“窗口期”的检测方法,保证临床输血安全。方法将经常规检测方法检测合格的献血者的血样在加样仪上进行样本汇集,用核酸提取仪提取样本核酸,用核酸扩增仪对HBV、HCV、HIV做扩增检测。结果4382份经常规检测方法检测合格的献血者血样中,发现2份HBV DNA阳性（漏检率为4．65‰）,未发现HCV和HIV RNA阳性。结论经二次ELISA法检测都合格的血液,并非绝对安全,还存在HBV漏检。因此,在献血员筛查中应尽快开展NAT技术以缩短病毒检测的“窗口期”,进一步提高血液安全性。     

病毒核酸检测对降低输血传播疾病残余风险的分析研究

目的：探讨核酸扩增技术（NAT）对降低输血传播疾病残余风险的可行性。方法（1）采用2种不同厂家的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂同时对无偿献血者血液乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、丙肝抗体（抗-HCV）、艾滋病抗体（抗-HIV）进行检测;（2）采用血筛系统检测单人份 HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA;（3）对 ELISA 检测阴性、NAT 检测阳性的标本定期进行追踪分析,观察有无血清学转换,以确定感染状态。结果共筛查2011年3月-10月乌鲁木齐地区无偿献血者14696例,其中 ELISA 检测阳性共152例（其中2份标本 HBsAg、抗-HCV 同时阳性）：HBsAg 阳性率为0．52％（76/14696）,抗-HCV 阳性率为0．37％（55/14696）,抗-HIV 阳性率为0．16％（23/14696）;NAT 检测阳性共71例：HBV DNA 阳性率为0．22％（32/14696）,HCV RNA 阳性率为0．17％（25/14696）,HIV RNA 阳性率为0．10％（14/14696）;14544例 ELISA 阴性标本经 NAT 检测没有检出 HCV RNA、HIV RNA 阳性标本,检出2例 HBV DNA 阳性标本,经过追踪分析,第1例发生了血清学转换,为“窗口期”感染,第2例无血清学转换,但乙肝核心抗体持续阳性,为隐匿性乙型肝炎。结论ELISA 检测后血液安全性有了很好的保障,但是依然存在输血传播疾病残余风险,NAT 检测可降低输血残余风险,提高输血安全。     

国产两种HBsAg ELISA诊断试剂在血液筛查中的应用

目的:探究国产两种HBsAg ELISA诊断试剂在血液筛查中的应用。方法:应用两个不同厂家ELISA试剂对29874份献血标本进行筛查,对筛查为HBsAg阳性的样本进行聚合酶链反应(PCR)确证实验,同时做HBsAg滴度分析,评估试剂灵敏度及特异性。结果:29 874份标本中共捡出HBsAg阳性241份,确证阳性为122份,阳性率为0.81%。在241份初筛阳性标本中,国产A试剂检出HBsAg阳性213份,国产B的HBsAg阳性为172份。国产A、国产B最低检出量分别为0.32ng/ml和0.45ng/ml。结论:不同厂家ELISA试剂的检出率存在差异,为降低经输血传播HBV的风险,血液筛查HBsAg要采用高灵敏度、特异性强的进口试剂或核酸进行筛查。     

HBsAg阴性HBV DNA阳性献血者HBV感染类型的相关研究

目的分析化学发光法和PCR技术检测无偿献血者乙肝表面抗原(HBsAg)阴性HBV DNA阳性样本的感染类型。方法选取邯郸市中心血站2019年1-6月留取的HBsAg阴性或单试剂阳性合并华益美核酸定性检测(nucleic acid qualitative detection, NAT)阳性的献血者样本39份,进行罗氏核酸定性、化学发光(Chemiluminescence analysis, CLIA)及核酸定量补充实验,并对实验结果进行分析。结果在53 489份献血者样本中,经ELISA初筛检测后,去除双试剂HBsAg阳性20份之后,双试剂HBsAg阴性和单试剂HBsAg阳性的共计53 469份(占比99.96%)样本进入核酸检测流程,得到华益美检测HBV DNA阳性39份。其中含有乙肝核心抗体(HBcAb)的血清学模式为29份,占比74.36%,核酸定量结果均小于200 IU/ml,为隐匿性感染;仅乙肝表面抗体(HBsAb)阳性的血清学模式有2份,核酸定量结果均小于200 IU/ml为携带HBsAb隐匿性HBV感染的特殊形式;全阴的血清学模式有8份,成功追踪4份,Z1/Z2和Z4均发生血清学指标转阳,判定为窗口期感染,Z3样本HBsAb转阳核酸转阴,提示为窗口期感染转为急性感染恢复期。结论 PCR技术在保障血液安全上突显了较好的检测效能,检出的NAT阳性样本大多是OBI和窗口期感染。     

核酸检测与ELISA检测在无偿献血血液标本乙型肝炎病毒(HBV)筛查中的应用效果比较

目的 探究核酸检测(NAT)和ELISA检测对无偿献血血液标本中乙型肝炎病毒(HBV)的筛查作用.方法 选取本中心2017年1月至2019年12月无偿献血者150名作为研究对象,其血液样本均行NAT和ELISA检测,以电化学发光免疫分析(ECLIA)作为金标准,比较两种检测方法HBV检出率、准确率、灵敏度、特异性.结果 ECLIA检测中,血液样本HBV阳性37份,阴性113份,阳性率为24.67％.NAT检测准确度为97.30％(36/37),灵敏度为100.00％(10/10),特异度为96.30％(26/27);ELISA法准确度为75.68％(28/37),灵敏度为60.00％(6/10),特异度为77.78％(21/27);两种检测方法准确度、灵敏度、特异度比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 无偿献血血液标本HBV筛查中,NAT检测价值高于ELISA,可提高HBV检出率,且特异性强、灵敏度高,值得临床推广应用.     

杭州地区无偿献血者血液筛查中丙型肝炎病毒残余风险的评估

目的 评估杭州地区无偿献血者血液筛查过程中丙型肝炎病毒(Hepatitis c virus,HCV)的残余风险。方法回顾分析本中心2016年1月～2017年12月无偿捐献全血者284 691例次,HCV血液筛查流程采用两次酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和一次核酸检测(Nucleic acid test,NAT)模式。利用流行率-窗口期残余风险模型对初次献血者和重复献血者进行HCV残留风险评估。结果 杭州地区捐献全血的初次献血者HCV检测阳性率显著高于重复献血者(P0.01)。初次献血者HCV流行率为每10万4.530(95%CI:2.712～5.211),ELISA检测残余风险为每百万7.446 (95%CI:4.458～8.565), NAT检测残余风险每百万0.621 (95%CI:0.372～0.714)。重复献血者HCV流行率为每10万1.510(95%CI:0.904～1.737),ELISA检测残余风险为每百万2.482(95%CI:1.486～2.855), NAT检测残余风险每百万0.207(95%CI:0.124～0.238)。结论 开展血液核酸检测可明显降低HCV血液筛查的残余风险,杭州地区输血传播HCV的残留风险处于非常安全水平。