LiCl对人脐血细胞及小鼠骨髓细胞DNA合成代谢的影响

目的 观察LiCl对脐血细胞及小鼠骨髓细胞DNA合成代谢的影响。方法 采用~3H—TdR掺入法测定二者DNA合成代谢情况。结果 随着时间变化(～—5周)二者DNA合成代谢变化不一。结论 LiCl存在的条件下,淋巴细胞上清对人脐血和小鼠骨髓细胞DNA合成代谢均有正向调节作用。     

淫羊藿苷促进脐血来源树突状细胞的分化与成熟

目的：研究淫羊藿苷（icariin,ICA）体外对脐血单个核细胞来源树突状细胞的分化、成熟及免疫活性的影响。方法：无菌条件下采集脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,用GMCSF、IL4诱导树突状细胞（dendritic cells, DCs）,第5天后将DCs分为3组（ICA组、TNFα组和阴性对照组）并作相应处理。倒置显微镜和透射电镜下观察DCs形态,流式细胞术检测DCs表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况,ELISA法检测DCs培养上清中IL12和IFNγ的水平,MTT法检测DCs刺激T细胞增殖的能力。结果：ICA刺激后,脐血单个核细胞来源DCs呈现典型的成熟DCs形态学特征。ICA组DCs表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较对照组均明显上调（P<0.05）,且CD86的表达水平显著高于TNFα组（P<0.05）。ICA组DCs上清中IL12、IFNγ的水平及诱导T细胞增殖的能力较对照组DCs明显增高（P<0.05）,但与TNFα组DCs无显著差异。结论：ICA可刺激脐血单个核细胞来源DCs的分化和成熟,增强DCs的免疫学活性。     

人肺癌抗原对脐血有核细胞凋亡、细胞周期及集落形成的作用研究

目的研究人肺癌抗原(Ag自提)对脐血有核细胞(CBNC)凋亡、细胞周期及集落形成的作用.方法用流式细胞计数仪检测并进行分析.结果单纯人肺癌抗原对CBNC凋亡、细胞周期及集落形成均无明显影响.与IL-2联合应用2周可显著降低CBNC的凋亡率,提高合成分裂期细胞百分率,培养21天时形成的集落数明显升高.结论单纯抗原刺激对脐血有核细胞凋亡、细胞周期及集落形成均无任何副作用,而抗原与IL-2联合应用可显著降低CBNC凋亡率,提高合成分裂期细胞百分率及集落形成率,可以临床试用.     

人类脐血与正常骨髓CFU-F特性的比较研究

用液体培养法对１４份人类脐血和１０份正常骨髓ＣＦＵ－Ｆ的生长特性、形态学、细胞化学及超微结构等进行了比较研究，结果除生长特性及集落数不同外，两者无明显差异。说明脐血含有基质细胞。在脐血ＣＦＵ－Ｆ培养中，还发现一种来源、性质不明的细胞，提示脐血具有不同于骨髓之处     

不同照射剂量对脐血贴壁层细胞功能的影响

目的了解不同剂量照射后,脐血贴壁层细胞的吞噬功能及肿瘤坏死因子(TNF)表达水平的变化.方法不同剂量60Co照射脐血贴壁层细胞,采用酶联法测定其吞噬功能及肿瘤坏死因子(TNF)表达.结果脐血贴壁层细胞在接受7.5 Gy 60Co照射后其吞噬功能最强,而肿瘤坏死因子(TNF)表达水平则在接受2.5 Gy～5.0 Gy 60Co照射时达高峰.结论脐血贴壁层细胞对照射抵抗力较强,可促进放疗患者机能恢复.     

脐血辅助化疗治疗急性淋巴细胞白血病临床研究

有关脐血细胞生物学性质的研究进展迅速，临床上用脐血移植代替骨髓移植的成功，使人们对脐血的应用有了新的认识，但脐血辅助治疗ＡＬＬ文献报告较少。我们通过吸收国内外治疗ＡＬＬ的经验，采用了脐血输注与强化疗综合措施，其目的在于探讨脐血辅助的治疗机制及应用价值...     

脐血CD+34细胞扩增前后端粒酶活性及微卫星遗传稳定性的研究

目的：通过检测脐血CD^ 34细胞扩增前后端粒酶活性及微卫星DNA序列，探讨其遗传稳定性。方法：用Mini MACS磁分离技术分离脐血CD^ 34细胞．体外扩增2周．PCR-ELISA方法检测扩增前后细胞的端粒酶活性；用PCR银染方法对脐血CD五细胞扩增前后5个微卫星序列进行比较分析。结果：脐血CD去细胞体外扩增过程中，端粒酶活性呈现先升后降的趋势,0天时。端粒酶活性相对值的中位数为14％，第7天明显增高，达57％，第14天回落至29％；扩增前后，BAT-25、Mfd41、D5S436、D5S396、D2S123 5个微卫星位点未见改变。结论：脐血CD^ 34细胞扩增过程中，端粒酶活性会暂时性升高，所测的微卫星位点未见改变。     

人类脐血与正常骨髓CFU—F特性的比较研究

用液体培养法对１４份人类脐血和１０份正常骨髓ＣＦＵ－Ｆ的生长特必，形态学，细胞化学及超微结构等进行了研究，结果除生长特性及集落数不同外，两者无明显差异。说明脐血含有基质细胞，在脐血ＣＦＵ－Ｆ培养中，还发现一种来源，性质不明的细胞，提示脐血具有不同于骨髓之处。     

抗原冲击致敏的脐血有核细胞体外诱导特异性CTL的实验研究

目的研究抗原(Ag)冲击致敏的脐血有核细胞的抗肿瘤作用.方法用密度梯度离心法提取人肺癌组织抗原,并与IL-2协同刺激脐血有核细胞,测定不同时间CTL和NK活性.结果脐血中NK活性变化不明显,但CTL于第7天增强至最高值.结论抗原与IL-2联合应用可明显提高脐血CTL活性.     

脐血CIK细胞的体外扩增特性研究

目的动态观察脐血CIK细胞体外扩增特性及其表面抗原变化,并对其细胞毒活性进行检测。方法提取健康足月产妇的胎儿脐带血单个核细胞,第0天加入rh-IFN-γ,第1天加入rhIL-2、抗CD3单克隆抗体来诱导培养CIK细胞,以后每3d更换培养液1次,并补加rhIL-2及抗CD3McAb。用流式细胞仪动态检测培养物的免疫表型变化,同时进行细胞计数,并使用MTT法检测各阶段脐血CIK细胞的细胞毒活性。结果脐血CIK细胞在培养2￣3周后大量增生,扩增约(64.4±16)倍,其中CD3+CD5+6细胞扩增约900倍,是CIK的主要效应细胞,且CD+3CD+8的T细胞达(74.7±10.42)%,CD2+5细胞比例也明显增加,而CD3+4细胞比例却减少。另外CD+3CD1+6CD5+6细胞比例升高最显著;脐血CIK细胞对白血病细胞株K562,HL-60及原代白血病细胞有较高的杀伤活性。结论脐血单个核细胞在体外可以被培养为CIK细胞,且扩增潜能极大,扩增倍数极高,细胞毒活性强,脐血CIK细胞有望应用于恶性肿瘤的生物免疫治疗。     

X射线照射对脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响

[目的]观察x射线照射对脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响.[方法]①采用3H-TdR掺入法检测不同剂量(0.25Gy～16Gy)X射线辐射对脐血淋巴细胞增殖活性的影响.②采用3H-TdR释放法检测不同剂量(0.25Gy～16Gy)x射线照射对脐血NK细胞活性的影响.[结果]0.25Gy～16Gy剂量范围X射线照射抑制淋巴细胞增殖活性,抑制程度与辐照剂量呈正相关(r=0.839,P＜0.05),其中4Gy～16Gy X射线照射未发现其明显的增殖活性;0.25Gy～2Gy X射线可引起脐血NK细胞活性的显著增高,4Gy x射线保持NK细胞活性,6Gy～16Gy X射线可引起脐血NK细胞活性显著性降低.[结论]4Gy x射线照射完全抑制脐血淋巴细胞的增殖的同时仍呈现脐血NK细胞抗肿瘤活性.因此,在进行供者淋巴细胞输注或混合脐血移植时,应用4Gy X射线照射脐血细胞,再进行过继性细胞免疫治疗可能降低移植物抗宿主病效应,同时不影响移植物抗白血病效应.     

脐血单个核细胞的抗肿瘤细胞活性

目的 :探讨脐血单个核细胞对HO9810肿瘤细胞株的杀伤活性 ,并观察重组人干扰素α 2b(rhIFNα 2b)的调节作用。方法 :采集脐血及成人周围血 ,将分离所得的单个核细胞按是否添加处理因素分组进行培养 ,2 4h后用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测对HO9810细胞的杀伤作用。结果 :静止脐血单个核细胞对HO9810肿瘤细胞的杀伤活性较弱 ,经rhIFNα 2b激活后显著增强 ,P <0 0 5 ,与成人外周血单个核细胞的杀伤活性差异无显著意义 ,P >0 0 5。结论 :脐血单个核细胞能被rhIFNα 2b激活为杀伤细胞 ,激活后对HO9810细胞株有较强的杀伤作用 ,具有良好的临床应用前景     

人膀胱移行细胞癌EGFR基因片段与核基质蛋白的相关性

背景与目的:研究人膀胱移行细胞癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因片断与核基质蛋白(nuclear matrix proteins,NMPs)的相关性.材料与方法:分别提取培养细胞和膀胱癌组织标本的核基质蛋白及其全细胞蛋白,同时抽提组织标本的基因组DNA和核基质DNA,根据EGFR cDNA序列合成两对PCR引物,分别以基因组DNA和各核基质DNA为模板,PCR扩增其结合片断;并对引物Ⅰ产物进行序列测定;以引物Ⅱ的产物制备探针,southwestern杂交进一步检测EGFR基因片断与核基质蛋白结合情况.结果:110 bp PCR(引物Ⅱ)产物见于基因组DNA和各核基质DNA(NM DNA 0,NM DNA25,NM DNA 50,NMDNA100);940 bp PCR(引物Ⅰ)产物出现在基因组DNA和除NM DNA100外其他核基质DNA中.940 bp序列与EGFR基因DNA序列完全一致.Southwestern blot检测结果表明,全细胞蛋白及核基质蛋白中出现特异的分子量约为60 kD的DNA-蛋白阳性杂交条带.结论:人膀胱移行细胞癌中,EGFR活性转录基因片段与核基质及核基质蛋白结合,NMPs可能和EGFR基因转录或转录后翻译等基因调控事件相关,核基质对EGFR在膀胱癌中高表达可能具有重要的调控作用.     

氯化锂增强巨噬细胞分泌产物对EL—4细胞的G1期阻滞作用

本实验用~3H掺入法和流式细胞术(FCM)研究分析了LPS和LPS与氯化锂(LiCl)共同激活的巨噬细胞3、7、10天培养上清对小鼠淋巴瘤细胞EL-4的DNA合成和细胞周期的影响。结果表明:7天、10天的条件上清抑制EL—4细胞的DNA合成,加Li比单独用LPS对DNA合成的抑制更明显。细胞周期分析显示:LPS激活的巨噬细胞上清使EL—4细胞出现明显的G_1期阻滞现象,但呈时间依赖性减弱,而加Li可以维持G_1期阻滞,抵消前述的时间依赖性减弱。     

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标.方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2 CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性.结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%.结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞.2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞.3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性.4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数.     

脐血CIK细胞表型变化与细胞毒活性相关性研究

目的 研究脐血来源细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞表型变化与细胞毒活性相关性.方法 用流式细胞术测定诱导前脐血单个核细胞及诱导后培养7、14和21 d CIK细胞的表型;用CCK-8测定培养0、7、14和21 d CIK细胞按20∶1、10∶1、5∶1与肿瘤细胞U251、SiHa和A549接种时对其的细胞毒活性.结果 ...     

脐血来源树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫特异性

[目的]研究脐血来源树突状细胞(DC)体外诱导特异性抗卵巢癌细胞的免疫效应.[方法]①从脐血中分离单个核细胞(MNCs)后,获得单核细胞(Mo).粒单集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化,培养7天后应用流式细胞仪进行细胞表型分析.②诱导单核细胞分化的第3天加入人卵巢癌细胞株3AO的冻融抗原,共培养4天后获得负载肿瘤抗原的成熟DC;将致敏DC与从脐血中分离的同种异体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL及上清对人卵巢癌细胞株3AO、人胚肾细胞株293T(对照细胞)、人肝癌细胞株HCCC-9810的细胞毒作用.[结果]①脐血来源单核细胞(Mo)在GM-CSF和IL-4作用下,7天后可分化生成成熟的DC,高表达DC特异性抗原CDla、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、HLA-DR、CD83.②DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活同种异体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生.不同浓度CTL及上清对卵巢癌细胞3AO有特异性杀伤、抑制作用(P＜0.05).[结论]脐血中单核细胞可体外分化扩增为成熟的功能性DC,并诱导出特异性杀伤卵巢癌细胞的免疫效应.     

脐血CIK细胞的体外增生及其抗肿瘤效应

 【摘要】　目的　研究脐血CIK细胞体外增生活性及对肿瘤细胞的杀伤活性，为CIK细胞在肿瘤过继免疫治疗中的应用提供实验依据。方法　脐血经密度梯度离心获得单个核细胞，以CD3单抗、重组人白细胞介素-2（rhIL-2）、重组人白细胞介素-1（rhIL-1）和重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）为诱导剂制备多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）。并设只加IL-2诱导成的LAK细胞和未加细胞因子的脐血单个核细胞（CBMNC）作为对照。培养前后分别用显微镜观察细胞形态，流式细胞术测定细胞表型的改变，锥虫蓝拒染法测定细胞增生水平，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定对肺癌细胞的杀伤活性。结果　实验发现，通过细胞因子的联合，可大量诱导出高活性的CIK细胞，CIK细胞在培养的第5天开始增生，第14天达到高峰，增生的细胞表型以CD+3 CD+56细胞为主。而LAK细胞的增生高峰出现在第7天，随后增生不明显；CBMNC表型无明显变化，增生不明显。CIK细胞针对肿瘤细胞的体外杀伤活性高于LAK细胞和CBMNC。结论　在体外细胞因子的联合作用下脐血能成功地诱导出大量的CIK细胞。脐血CIK细胞体外扩增快，杀伤活性强，对肿瘤细胞的作用优于传统的LAK细胞，为肿瘤的过继性免疫治疗提供了一个新的方向。     

TIL与脐血LAK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）和脐血淋巴因子激活杀伤（LAK）细胞在含重组白细胞介素2（rlL－2）的完全培养基中可大量扩增培养，体外培养肿瘤组织的TIL及癌性腹水的淋巴细胞对自体瘤细胞（黑色素瘤，卵巢囊腺癌，大网膜转移性腺癌及癌性腹水）有明显的杀伤作用，胎儿脐血中分离培养的LAK细胞对肿瘤细胞也有较强的杀伤作用，在效靶比例分别为20：1和40：1时，对肿瘤细胞的杀伤作用后者均明显高于前者（P=0.025和P=0．01），且TIL对自体瘤细胞的杀伤作用明显高于脐血LAK细胞（P＜0．01），为临床应用TIL和脐血细胞提供实验依据。     

基质细胞源性因子-1对脐血AC133^＋细胞迁移功能的影响

目的探讨了趋化因子即基质细胞源性因子-1（SDF-1）在脐血AC133^＋细胞迁移中的作用。方法用跨膜迁移（Transwell）实验来确定SDF-1最佳趋化浓度，并评价SDF-1最佳趋化浓度条件下细胞迁移率。结果随着SDF-1浓度增加，新鲜脐血AC133^＋细胞迁移率升高，但SDF-1浓度达到150ng／ml时迁移率趋于平稳；当CXCR4阻断型抗体作用后，迁移率与未加SDF-1组无差异。结论通过Transwell Plate可以有效地模拟细胞穿越内皮现象。随着趋化因子SDF-1浓度的增高，迁移率递增，但当SDF-1浓度高到一定程度时，细胞趋化率达稳定，继续增高SDF-1浓度，细胞迁移率变化不显著，应用CXCR4阻断抗体后AC133^＋细胞迁移率与未加SDF-1差异无统计学意义。