大鼠坐骨神经切断后Robo2在脊髓及背根节的表达变化

目的:研究坐骨神经损伤后Roundabout 2(Robo2)在成年大鼠背根节和脊髓的表达变化。方法:健康成年雌性SD大鼠坐骨神经切断后分别存活3～28d,取其L_(4～6)背根节(DRG)和脊髓;利用RT-PCR和免疫组织化学技术检测Robo2在上述组织中的表达变化。图像分析技术对阳性细胞的灰度值进行测定。结果:正常DRG感觉神经元表达Robo2 mRNA和蛋白质,脊髓前角运动神经元不表达。坐骨神经切断后3 d DRG内Robo2表达增加,7～14 d达高峰,21～28 d恢复到正常水平。结论:坐骨神经切断可导致DRG内Robo2的表达上调,可能与早期的感觉轴突再生有关。     

部分背根切断后备用DRG卫星细胞NGF、BDNF和NT-3的表达变化

为探讨部分去背根猫备用背根节 ( L6 )卫星细胞 NGF、BDNF和 NT-3的表达变化 ,将成年雄猫 2 0只分为正常对照组和术后 3 d、术后 7d及术后 10 d三个实验组。实验组行单侧部分背根切断术 (切除一侧 L1 ～ L5,L7～S2 DRG,保留 L6 背根为备用根 )。取正常组一侧和术后 3 d、7d及 10 d实验组手术侧的 L6 DRG制作 2 0μm厚冰冻切片 ,行免疫组化反应 ;观察 NGF、BDNF和 NT-3在 DRG卫星细胞的分布 ,计数各组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量。结果发现 ,部分去背根术后7d和 10 d组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量较术后 3 d组和正常组者明显增高 ( P<0 .0 1)。表明 ,单侧部分背根切断导致备用 DRG卫星细胞的 NGF、BDNF和 NT-3的表达上调 ,这一变化可能与脊髓可塑性有关。     

外源性NGF对大鼠坐骨神经切断缝合术后脊髓和背根节CGRP表达的影响

观察外源性神经生长因子(NGF)对坐骨神经切断立即缝合后大鼠脊髓和背根节(DRG)内不同时间点降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。成年SD雄性大鼠随机分为NGF组、生理盐水(NS)组、假手术组与正常对照组。实验组动物右侧坐骨神经切断后立即缝合,每天给予NGF(400单位/kg腹腔注射),动物分别存活1、3、5、7、14、21、28d,免疫组织化学方法结合图像分析检测相应节段脊髓和背根节内CGRP的表达。结果表明,NGF处理组术侧背根节与脊髓后角内的CGRP表达明显高于同时间点的NS对照组,平均光密度值相比P<0.05。但各组中脊髓前角运动神经元内的CGRP表达没有明显变化(P>0.05)。结果提示外源性的NGF能明显增加损伤后背根节感觉神经元与损伤侧脊髓后角的CGRP表达,对CGRP在脊髓前角运动神经元内的表达没有明显影响。     

Slit-Robo GTPase激活蛋白在坐骨神经切断后脊神经节的表达变化

目的:观察Slit-Robo GTP酶激活蛋白(srGAP)在成年哺乳类动物脊神经节(DRG)的表达及其变化,了解srGAP在神经再生中的作用.方法: 应用RT-PCR、免疫印迹法、免疫组织化学方法,检测成年SD大鼠正常和坐骨神经切断后1、3、7d 的DRG srGAP1、2、3 mRNA及其蛋白的表达.结果: srGAP1、3 mRNA在正常DRG均有弱表达,而srGAP2不表达;坐骨神经切断后3、7d,srGAP1、3 mRNA表达增强,以术后7d最高;免疫组织化学显示,srGAP1在神经元胞体、突起均有表达,在DRG内胶质细胞亦有表达,坐骨神经切断后3、7d表达增强.结论: 本研究结果说明Slit-Robo信号通路存在于大鼠周围感觉神经元内,周围神经损伤可激活此信号通路.     

慢性坐骨神经结扎神经痛大鼠脊髓背角和背根神经节p-JNK表达及意义

目的： 观察磷酸化应激激活蛋白激酶(p-JNK)在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角和背根神经节表达的变化,探讨慢性神经痛的发生机制。方法: 采用坐骨神经慢性结扎损伤（CCI）模型,18只SD大鼠随机分为3组（n=6）。对照组（Con组）：不接受任何手术操作;假手术组（sham组）：只分离坐骨神经;CCI组：结扎坐骨神经。于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14 d 测定机械痛阈（MWT）和热痛阈（TWL）,术后3、7、14 d取大鼠术侧L4、L5脊髓背角和背根节, 免疫组化法分析脊髓背角和背根节p-JNK动态变化。结果: CCI组较Con组术后各时点TWL和MWL明显降低（P<0.05）。CCI组较Con组各时点脊髓背角和背根神经节p-JNK表达明显增加（P<0.01）。结论: 初级感觉神经元中p-JNK表达可能是神经损伤的因素之一。     

大鼠坐骨神经损伤后Src抑制的蛋白激酶C的底物在背根神经节中的表达变化

目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在背根神经节(DRG)中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经夹伤及切断模型。通过Western印迹法、Real-time PCR及免疫组织化学方法检测坐骨神经损伤后SSeCKS在DRG中表达的时空变化。结果:大鼠坐骨神经夹伤后6h,DRG中可检测到SSeCKS的表达并逐步升高,伤后12h达到高峰,2d后逐渐下降;而大鼠坐骨神经切断后DRG中SSeCKS的表达高峰发生在伤后2周,1d时最低;SSeCKS主要分布于DRG大、中、小神经元胞质;SSeCKS与NeuN、NF200以及GAP43存在共定位。结论:大鼠坐骨神经损伤后,引起DRG中SSeCKS的表达变化,其可能参与疼痛信号转导通路并与周围神经损伤后的再生有关。     

局麻药长时间阻滞外周神经对神经源性疼痛发生过程中背根神经节内GAP-43表达的影响

用免疫组织化学方法观察了局麻药长时间阻滞外周神经对神经源性疼痛发生过程中生长相关蛋白(GAP-43)在背根神经节内表达的影响。实验选用SD大鼠35只,随机分成正常对照组、单纯坐骨神经横切组、坐骨神经横切前阻滞组、坐骨神经横切后阻滞组4大组,后三大组再按术后取材时间分为3、7d两个时间组。暴露大鼠右侧坐骨神经,于坐骨结节远端约1cm处横断坐骨神经。根据分组,阻滞组分别从横切前1h和横切后4h开始对神经横切的近心端进行长效局麻药阻滞,持续整个观察期。术后不同时间取与伤侧坐骨神经相连的背根神经节(DRG),应用免疫组织化学和图像分析的方法研究背根神经节中GAP-43的表达并进行定量分析。结果表明:术后3、7d,单纯坐骨神经横切组背根神经节内的GAP-43表达增高,而阻滞组内的GAP-43表达与正常组无差别。本研究结果提示坐骨神经横切前1h或之后4h开始局麻药阻滞神经均能抑制神经源性疼痛发生过程中GAP-43的高表达。     

大鼠坐骨神经横断后背根节Robo1表达的时空模式

目的:观察周围神经损伤对脊神经节(DRG)Robo1表达的影响,初步了解Robo1在周围神经再生中的作用.方法:横断成年SD大鼠坐骨神经或脊神经后根,术后3、 7、 14、 21、 28d取其腰4～6DRG,用RT-PCR和免疫组织化学方法检测Robo1表达,免疫荧光双标法检测Robo1与Robo2有否共表达.结果:坐骨神经横断能上调DRG Robo1的表达,术后7～14d达高峰,而脊神经后根切断对其表达无影响;DRG感觉神经元不共表达Robo1和Robo2.结论:Robo1在DRG内的表达存在细胞特异性,周围突受损能上调Robo1在DRG中的表达,其表达模式与多数神经营养因子类似,提示Robo1可能参与感觉神经元再生过程.     

外源性bFGF对坐骨神经钳夹损伤后脊髓DRG感觉神经元CGRP变化的影响

目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤后大鼠背根神经节(DRG)和脊髓后角内降钙素基因相关肽(CGRP)变化的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、阳性对照组和bFGF组。阳性对照组动物右侧坐骨神经钳夹损伤,bFGF组动物右侧坐骨神经损伤后给予bFGF,在不同时间点运用免疫荧光技术结合图像分析检测相应背根节和脊髓后角CGRP的变化。结果:bFGF处理组术侧DRG内中小型神经元和脊髓后角内的CGRP表达明显高于阳性对照组,积分光密度值相比(P<0.05);但DRG内大型神经元内CGRP表达没有明显变化。结论:结果提示外源性bFGF能明显促进损伤后同侧DRG中小型神经元和脊髓后角CGRP的合成,对DRG内大型神经元中CGRP的表达没有明显影响。     

大鼠脊神经后根切断后脊髓和背根神经节CGRP的表达变化

为观察大鼠脊神经后根切断后相应背根神经节(DRG)和脊髓节段CGRP的表达变化,本研究采用25只健康成年SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和L4、5后根切断后3d、7d和14d组(n=5),用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测各组相应DRG和脊髓节段内CGRP的表达变化。结果如下:后根切断后3d、7d和14d伤侧DRG内CGRP表达较对照组和对侧明显增强;后根切断后3d脊髓后角CGRP免疫阳性纤维减少,7d、14d时进一步减少;后根切断后3d脊髓前角运动神经元内CGRP表达增加,免疫阳性细胞数增多,7d和14d时表达进一步增强。以上结果提示,脊神经后根切断后DRG和脊髓CGRP表达变化呈现一定的时空模式,可能参与了神经损伤后的再生过程。     

大鼠坐骨神经横断后脊髓、背根神经节及坐骨神经Slit 2表达的变化

目的：观察 Slit 2在大鼠坐骨神经横断模型中的表达变化,为进一步研究 Slit/Robo 在周围神经再生中的作用提供实验依据。方法：SD 大鼠坐骨神经横断后用原位杂交及免疫组织化学方法检测 Slit 2在脊髓、背根神经节(DRG)和横断神经近、远端内的表达变化,图像分析方法测定阳性细胞数及平均积分光密度值。结果：正常脊髓前角运动神经元、DRG 和神经干内 Slit 2有一定的基础表达。损伤后近端神经胶质瘤、神经远端 Slit 2表达增高;DRG 内的 Slit 2表达呈现一定的时间变化,7 d 为表达高峰,14 d 下降。结论：Slit 2存在于正常成年大鼠周围神经系统,损伤可致其表达改变,Slit 2可能在周围神经再生中发挥重要作用。     

不同延迟时间后修复大鼠坐骨神经缺损对CGRP表达的影响

目的：观察大鼠坐骨神经缺损不同延迟时间后修复对降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响.方法：大鼠右侧坐骨神经切断分别预变性0、3、7、14和21 d后（n=6）以左侧自体新鲜神经桥接,神经再生6周后用免疫组化方法检测CGRP在脊髓和背根节（DRG）的表达变化.结果：术侧DRG CGRP表达均明显增强,其中21 d组明显强于0 d组（P＜0.05）;术侧脊髓后角CGRP免疫阳性面积明显增大,21 d组明显大于0 d组（P＜0.05）,其CGRP表达在0 d、3 d和21 d组均强于对侧（P＜0.05）,而3 d和21 d组又明显强于0 d组（P＜0.05）;3d组脊髓前角的CGRP表达在明显强于0 d组和对侧（P＜0.05）.结论：预变性处理可以影响CGRP的表达从而影响神经再生过程.     

大鼠坐骨神经固有频率测定

目的:确定实验大鼠坐骨神经的固有频率，观察不同状态下神经固有频率的变化，为神经再生修复研究中康复治疗仪器的频率选择提供参考。方法:将18只SD大鼠随机分为正常组、SNI 7 d组、SNI 28 d组，每组各6只，正常组不予干预，模型组行坐骨神经钳夹伤术。于造模后第7天通过振动平台对正常组、正常组的离体神经（即离体组）、SNI 7 d组，以及造模后第28天对SNI 28 d组大鼠施加振动频率源，在振动响应检测模块测得的数据基础上，根据频率特性曲线确定大鼠坐骨神经固有频率。结果:正常组、离体组、SNI 7 d组、SNI 28 d组大鼠坐骨神经频率特异性曲线均显示单一峰值；组间固有频率比较差异均无统计学意义（P=0.156）；组间两两比较显示，正常组与离体组、SNI 7 d组、SNI 28 d组比较，SNI 7 d组与SNI 28 d组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。固有频率检测值总体均数为9.635 Hz。结论:实验大鼠坐骨神经固有频率约为9.635 Hz，且固有频率是相对稳定的，不会因其所处状态不同而发生较大变化。     

大鼠坐骨神经受压和解压后背根节和脊髓内神经元nNOS表达的变化

目的 :观察坐骨神经受压及解压后大鼠腰段背根节和脊髓内神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)表达的变化 ,借以探讨外周神经源性痛的发病和影响机制。方法 :大鼠随机分为压迫组、解压组和对照组 ,采用聚乙烯管压迫坐骨神经的动物模型 ,用免疫细胞化学方法并结合计算机图像分析进行研究。结果 :与对照组比较 ,压迫组和解压组腰4～ 6背根节中nNOS的表达显著增加 ,相应节段脊髓背角的表达则明显降低 ;解压组与压迫组比较 ,背根节中nNOS的表达明显减少 ,而脊髓背角的已经下调的nNOS表达则回升 ,但仍然低于对照组水平。结论 :NO可能与神经源性痛时在中枢和外周的痛觉敏感性形成和神经系统长时程改变有关。     

瓦勒变性坐骨神经段对大鼠BMSCs向SCs分化的影响

 目的:通过观察瓦勒变性坐骨神经段对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖、分泌功能以及向施万细胞（Schwann cells, SCs）分化的影响,探讨其在BMSCs向SCs分化中的作用及可能的机制。方法:采用全骨髓贴壁法分离、培养SD大鼠BMSCs,并采用免疫荧光法鉴定。应用Transwell建立坐骨神经段与BMSCs双层培养体系,将实验分为瓦勒变性坐骨神经段与BMSCs联合培养组（A组）、正常坐骨神经段与BMSCs联合培养组（B组）和BMSCs单独培养组（C组）。倒置相差显微镜观察联合培养过程中BMSCs 形态变化;免疫荧光染色检测联合培养第7天各组BMSCs表达S-100情况;联合培养第0、1、4、7、11、14天,利用细胞计数法绘制各组BMSCs生长曲线,ELISA法检测各组培养液上清中神经生长因子（nerve growth factor, NGF）含量,实时荧光定量PCR检测各组BMSCs中S-100 mRNA表达情况。结果:成功分离培养BMSCs,免疫荧光鉴定BMSCs呈CD29、CD44和CD90表达阳性。联合培养第7天倒置相差显微镜观察可见,A组BMSCs胞体回缩,呈梭形,并带有突起,形态类似SCs;B、C 组大部分BMSCs 形态无明显变化。联合培养第7天免疫荧光染色示,A、B、C 组 BMSCs S-100阳性表达率分别为31.1%±2.9%、16.2%±1.7%和0.42%±0.07%,A组阳性表达率明显增高（P<0.05）。各组BMSCs生长曲线均近似“S”形,从第4天开始,A组BMSCs增殖速度明显快于B、C组（P<0.05）;ELISA 法检测示,A 组NGF含量呈时间依赖性增加,于联合培养第7天达高峰,随后呈下降趋势。B、C 组NGF含量随共培养时间延长有所增加,但显著低于A组（P<0.05）;实时荧光定量PCR检测示,联合培养第4、7、11、14天,A组S-100 mRNA表达明显高于B、C组（P<0.05）。结论: 瓦勒变性坐骨神经段能有效促进大鼠BMSCs增殖并诱导BMSCs向SCs样细胞分化,联合培养过程中NGF可能参与BMSCs向SCs分化的调控。     

联合应用神经生长因子和神经节苷脂1对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用

目的：了解联合应用神经生长因子(NGF)和神经节苷脂1(GMl)对大鼠周围神经损伤后脊髓神经元的保护作用。方法：选用SD大鼠,分为生理盐水(NS)组、NGF组、GM1组和NGF GM1组,将大鼠坐骨神经造成5mm缺损,术中硅胶管内局部加药、术后大鼠损伤侧小腿肌注药物。术后定期光、电镜观察L4～I6脊髓前角神经元结构变化,测定损伤远段和近段神经传导速度。结果：脊髓运动神经元数目以及神经传导速度4周时,NGF组和GM1组均多于或快于NS组,NGF GM1组则多于或快于NS组、NGF组和GM1组,8周时NGF GM1组、NGF组、GM1组组间无显著性差异但均多于或快于NS组。结论：NGF GM1对周围神经损伤后脊髓运动神经元退变的保护作用与单用NGF或GM1相比,能更早期地发挥作用,并且效果优于单用NGF或GM1。     

Post-traumatic survival in different subpopulations of sensory neurons

An expression of high molecular component of neurofilament triplet NF200 (marker of neurons forming A-fibers) and binding of isolectin B4 (IB4) was examined immunohistochemically in LIV-LV dorsal root ganglia (DRG) neurons after ligation or transection of the sciatic nerve in rat. NF200 immunoreactivity was detected in 15% of all neurons in DRG of intact rats. Ligation of sciatic nerve caused a two-fold decrease in number of NF200-positive neurons by 90th day after nerve injury, however in animals treated with peripheral nerve regeneration stimulator xymedon the number of surviving NF200-positive neurons was increased by 50.7% as compared with control group (nerve ligation without treatment). In DRG of intact rats 23.6% of neurons showed IB4 binding. Of the DRG neurons 2.6% were labeled by IB4 at 30th day after ligation of the nerve. At 90th day after ligation no IB4-positive neurons were revealed in DRG of untreated rats, while xymedon treatment was shown to result in more than 8-fold increase in the number of surviving IB4-positive neurons. IB4-positive neurons have greater probability of entering the posttraumatic apoptosis. After nerve ligation the survival of NF200- and IB4-positive neurons was less than that one following nerve transection, suggesting that axon lengthening could be a the factor supporting neuronal survival. Pyrimidine derivative xymedon promoted the survival of neurons in both subpopulations with predominant effect on IB4-positive neurons.     

Nerve growth factor protects adult sensory neurons from cell death and atrophy caused by nerve injury

Summary The reaction of dorsal root ganglia (DRG) neurons to axotomy and its alteration by locally supplied nerve growth factor (NGF) were examined in adult rats. Surgically implanted silicone chambers attached to the severed tip of the sciatic nerve acted as reservoirs capable of providing prolonged access of NGF to the site of injury. The time course of NGF activity within the chambers was determined by using the standard NGF chick DRG bioassay. The fluid from chambers filled with the NGF-saline solution maintained NGF activity for periods up to 6 weeks after implantation. By 9 weeks, however, the fluid from most chambers failed to show any NGF activity in the bioassay.Experiments were designed to compare the response in adult rats to injury of DRG neurons receiving chambers filled with either NGF-saline or with only saline. The total neuronal counts in the lumbar fourth and fifth DRG at 3 weeks and 6 weeks after sciatic nerve section showed 22% and 16% cell death, respectively, in those injured neurons receiving saline-filled chamber implants. The animals that received chamber implants which contained an NGF-saline solution showed no cell death in the ipsilateral DRG at either 3 or 6 weeks after injury. Morphometric analysis of injured DRG neurons showed evidence of atrophy in the injured neurons which did not receive NGF. The degree of atrophy among all cell sizes was significantly decreased in those injured neurons receiving NGF. At 3 weeks after section the mean volume of injured neurons not treated with NGF was decreased by 28% as compared with only a 13% decrease in neurons treated with NGF. Similar findings were noted in the 6-week studies. NGF treatment did not alter the incidence of classic changes of chromatolysis in the groups of injured neurons receiving either NGF-saline-filled chambers or only saline-filled chambers.