辐射所致残存染色体易位与放射敏感性关系研究

目的 :应用荧光原位杂交 (FISH)方法研究人肿瘤细胞放射敏感性与染色体残存易位关系及临床应用的可行性。方法 :采用 3种放射敏感性不同的人肿瘤细胞系 :鼻咽鳞癌 (CNE)、肺腺癌 (SPC)和乳腺腺癌 (MCF 7)。通过克隆形成方法测定 2Gy、4Gy、6Gy和 8GyX线照射剂量下肿瘤细胞的存活率。采用常规染色体制片过程和 2号染色体涂染探针及FISH方法 ,测定 2Gy、4Gy和 6GyX线照射2 4h后 ,肿瘤细胞 2号染色体内在和诱导的畸变量。结果 :未照射的对照细胞 2号染色体存在不同程度的内在畸变。 2Gy、4Gy和 6Gy照射后 2 4h ,CNE、SPC和MCF 7细胞诱导生成的残存染色体畸变与剂量关系一致 ,能够反映细胞的放射敏感性 ,所有细胞系诱导 2号染色体生成的畸变与细胞存活率均存在良好相关性 (rs=0 96)。结论 :诱导的残存染色体畸变与照射剂量呈线性关系 ,采用FISH方法计数照射诱导的残存染色体畸变 ,可以预测肿瘤细胞间的放射敏感性差异并具有重要的临床意义     

荧光原位杂交法预测肿瘤放射敏感性的初步研究

目的 研究应用荧光原位杂交（FISH）方法预测人肿瘤细胞放射敏感性及其应用的可行性。方法 用3种放射敏感性不同的人肿瘤细胞株[鼻咽鳞癌（CNE）、肺腺癌（SPC）和乳腺癌（MCF-7）],常规克隆形成方法测定不同剂量照射后的存活分数和照射后24h经秋水仙素阻断细胞分裂周期,低渗、固定、常规染色体制片后,采用8号染色体涂染探针和FISH方法测定肿瘤细胞8号染色体诱导的畸变量。结果 2、4、6Gy照射后24h、CNE、SPC和MCF-7细胞诱导生成的残存染色体畸变能够反映细胞 的放射敏感性,所有细胞株诱导染色体畸变与细胞存活分数分别存在良好相关性（r=0.98）,3种细胞株SF2和相应残存染色体畸变也存在良好相关性（r=0.96）。结论 采用FISH方法计数照射诱导的残存染色体畸变,可以预测肿瘤细胞的放射敏感性差异并具有重要的临床意义。     

“彗星” 法分析人肿瘤细胞DNA放射损伤和修复

探讨“彗星”分析法 (CA)在检测体外培养人肿瘤细胞DNA放射损伤与修复和放射敏感性的关系。方法　采用碱性CA检测鼻咽高分化鳞癌上皮细胞系 (CNE 1)、食管鳞癌上皮细胞系 (Ec 10 9)、肺腺癌细胞系 (GLC)和胃低分化腺癌细胞系 (BGC 82 3)经 6MVX射线照射后单细胞内DNA单链断裂 (SSB)程度及其与放射剂量的关系 ,以及CNE 1和GLC细胞系在分别接受了 16GyX射线照射后的自身修复情况 ,同时与相应的细胞存活曲线比较。结果　碱性CA可以检测出 4个细胞系DNA的SSB ,并与放射剂量呈良好的线性关系。 16Gy剂量下各细胞系的SSB程度依次为CNE 1>Ec 10 9>GLC >BGC 82 3。CNE 1,Ec 10 9,GLC和BGC 82 3细胞系的Do值分别为 1.2 5 ,1.2 7,1.88和 1.5 6。 16Gy诱导CNE 1和GLC细胞系的DNA损伤后 ,其半修复时间分别为 7.4,17.8min。结论　采用碱性CA能确切反映 4种人肿瘤细胞系DNA的定量损伤程度及其与放射剂量的关系 ,并能确切反映辐射损伤后自身修复能力 (CNE 1和GLC)在受测时间中的定量变化情况。自身修复能力的大小在鳞癌和腺癌细胞系间与放射敏感性的大小 (Do值 )有较好的对应关系。     

泰素联合放射对人鼻咽癌细胞的作用

目的：研究泰素（Taxol)结合放射对人鼻咽癌细胞系（CNE）的联合作用效应。方法：用克隆形成法制作细胞存活曲线，流式细胞分析测定细胞周期分布。Tunel法作细胞凋亡测定。结果：不同浓度的Taxol与CNE细胞作用24h ,其细胞毒性呈剂量依赖性。在放射增敏实验中，100mmol/LTaxol作用24h，对CNE细胞有放射增敏作用，增敏比为1．23。同样剂量的Taxol作用同样时间，可诱导CNE细胞的G2＋M期阻滞。Tunel法测定细胞凋亡，10μmol/L Taxol作用24h，可诱导CNE细胞凋亡，X射线照射2Gy也可诱导CNE细胞凋亡，而10μmol/L Taxol与2Gy射线同时作用，诱导凋亡明显增加。结论：Taxol对CNE细胞有放射增敏作用，除自身对细胞凋亡有诱导作用外，还能增强放射对CNE细胞凋亡的诱导作用。     

人肿瘤细胞系LigaseⅣ基因突变与放射敏感性的关系研究

目的研究人肿瘤细胞DNA-LigaseⅣ基因突变与放射敏感性的关系.方法常规集落形成方法测定人鼻咽鳞癌(CNE)、肺腺癌(SPC-A1)和乳腺腺癌(MCF-7)细胞系不同剂量照射后的细胞存活分数,采用聚合酶链式反应和克隆技术测定3种细胞参与DNA损伤修复的DNA ligaseⅣ基因序列,分析它们的同源性变化和突变对基因产物亲疏水性的影响.结果 3种细胞存活参数比较存在较大差异,CNE细胞较SPC-A1和MCF-7细胞显示出较高的放射敏感性.CNE、SPC-A1和MCF-7细胞LigaseⅣ基因同源性分别为99.95%、99.99%和99.98%,包括碱基转换和颠换突变.部分突变碱基导致氨基酸替代并影响基因产物的亲疏水结构.CNE细胞LigaseⅣp的313aa His→Arg、538aa Gly→Arg、579aa Lys→Arg和585aa Asn→Ser替代与CNE细胞放射敏感性高于SPC-A1和MCF-7细胞有关.结论 LigaseⅣp在非同源性末端连接(NHEJ)途径中起关键和最终连接作用,该基因突变影响肿瘤细胞的双链断裂损伤修复能力和放射敏感性.     

三氧化二砷对卵巢癌细胞的放射增强作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合放射肿瘤细胞杀灭的影响，方法：以人卵巢癌细胞SKOV－3为实验对象，用四氮唑盐（MTT）比色法和流式细胞仪磷酯酰丝氨酸Ⅴ／PI双重染色法观察不同浓度As2O3与放射联合和单纯As2O3对SKOV－3的杀伤和诱导凋亡作用。采用成克隆分析法观察5mol/L As2O3的放射增强作用。结果：（1）细胞生长抑制随着As2O3剂量的增加而增强；（2）As2O3＋放射组的细胞存活率均低于单纯As2O3组，但随着As2O3剂量的加大，放射组和未放射组的存活率越来越接近；（3）在2Gy下，随着As2O3剂量的加大，凋亡的比例增加；（4）细胞存活曲线显示，放射＋As2O3组的Dq值小于单纯照射组（1．44Gy，2．78Gy），D0值也小于单纯照射组（0．85Gy，1．30Gy，SF2也小于单纯照射（0．42，0．87），根据D0值求出的增强比为1．53，根据SF2求出的增强比为2．07。结论As2O3在临床应用剂量范围内，与常规分割剂量放射治疗联合时，有望对肿瘤有较好的放射增强作用。     

诱导建立乳腺癌MCF-7放射耐受细胞亚株的实验研究

  目的  探索诱导并建立人乳腺癌MCF-7放射耐受细胞亚株的体外实验方法。  方法  体外培养MCF-7细胞株, 应用梯度递增的X线对MCF-7进行诱导照射, 照射剂量达到59Gy时, 得到放射耐受细胞亚株(MCF-7R), 扫描电镜和透射电镜观察亲本株MCF-7与放射耐受细胞亚株MCF-7R细胞超微结构, 流式细胞仪检测其细胞周期分布, 集落形成实验检测其放射敏感性, 并计算存活分数, 多靶单击模型拟合细胞存活曲线。  结果  与MCF-7相比, MCF-7R外形及细胞器均出现明显改变; G₂/M期比例明显降低; (13.32%vs.9.43%)放射敏感性参数SF₂即照射2 Gy时的细胞存活分数升高34%(P < 0.001), 准域剂量Dq值由2.261 Gy升高至3.695 Gy(P < 0.05), 平均致死剂量D_o值由1.215 Gy升高至1.834 Gy(P < 0.05)。  结论  照射剂量梯度递增法是可行的建立人乳腺癌放射耐受细胞亚株的方法, 得到的放射耐受亚株细胞形态及细胞生物学特性与亲本株细胞相比较有明显差异。      

血管内皮生长因子反义核酸对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用

目的：血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在人类多数实体肿瘤中均有表达，射线可诱导其表达增加，产生放射抗拒。本实验目的在于探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸干涉对高转移宫颈腺癌Hela细胞株的放射增敏作用。方法：实验组通过脂质体介导将VEGF基因反义寡核苷酸瞬时转染入Hela细胞，设VEGF正义寡核苷酸组和空白对照组作比较，各组均予6MV-X线照射，剂量为0Gy、2Gy、4Gy和6Gy，用RT-PCR检测照射前后Hela细胞中VEGFmRNA表达；用流式细胞术检测细胞凋亡；平板克隆形成试验检测克隆形成率的变化。结果：与对照组比较，VEGF反义寡核苷酸不仅可抑制Hela细胞中内源性VEGFmRNA的表达（P〈0．01），亦可显著抑制辐射诱导的VEGF表达的增加（P〈0．01）；VEGF表达下调使射线诱导的细胞凋亡率明显升高（P〈0．01）．细胞克隆数量明显降低（P〈0．01）;结论：针对人VEGF基因反义寡核苷酸干涉可抑制射线诱导的VEGF的高表达，增强射线对肿瘤细胞的杀伤作用。提高细胞的放射敏感性。     

松胞素阻滞微核法检测鼻咽癌细胞株放射敏感性的研究

目的：探讨用松胞素阻滞微核法来预测鼻咽癌细胞株放射敏感性价值。方法：用松胞素阻滞微核法微核率、微核细胞率检测鼻咽癌高分化鳞癌细胞株CNE1及低分化鳞癌细胞株CNE2,在不同X线剂量照射下染色体断裂或缺失程度的差异,与经典的克隆形成法存活分数比较。结果：CNE1、CNE2的微核率、微核细胞率在照射剂量0、0．5Gy时,差异无统计学意义,P〉0．05;但在剂量1、2、4、6和8Gy时,CNE2的微核率、微核细胞率明显比CNE1大,P〈0．05。CNE1、CNE2的微核率、微核细胞率与照射剂量间呈线性正相关,其斜率CNE2明显比CNE1大。微核率、微核细胞率与细胞株的存活分数明显负相关。结论：松胞素阻滞微核法微核率、微核细胞率敏感检测出CNE1、CNE2放射敏感性差异,与克隆形成法检测结果一致。松胞素阻滞微核法是一种检测鼻咽癌细胞株放射敏感性准确、简便和有效的方法。     

鼻咽鳞癌CNE1、CNE2细胞系IMRT模式离体照射生物效应研究

目的 观察适形调强放射治疗(IMRT)模式单次剂量输出时间延长对鼻咽鳞癌CNE1、CNE2细胞放射生物效应的影响,以便为临床制定个体化IMRT计划提供一些理论依据.方法 分别急速照射指数生长期的CNE1细胞、CNE2细胞9个剂量点,采用克隆分析法计算细胞存活分数,运用单靶多击和线性二次方程数学(LQ)模型拟合曲线,求出2种细胞放射生物学参数.将指数生长期的CNE-1细胞、CNE-2细胞分成3个组:[1] EBRT组;[2] IMRT模式15 min照射组;[3] IMRT模式30 min照射组(单次剂量输出时间延长至15 min和30 min).每组照射总剂量为6 Gy,1次/天,2 Gy/次,连续照射3天,采用克隆分析法计算细胞的存活分数.结果 急速照射1次后的各点细胞存活率以单靶多击模型拟合曲线,得出CNE1细胞D0值为0.88 Gy, Dq值为0.47 Gy, N值为3.5, CNE2细胞DO值0.60 Gy, Dq值为0.36 Gy, N值为4.0;以LQ模型拟合曲线,得出CNE1细胞α值为0.16 Gy-1,β值为0.089 Gy-2,α/β值为1.8 Gy, CNE2细胞α值为0.97 Gy-1,β值为0.086 Gy-2,α/β值为11.3 Gy.CNEl细胞EBRT组细胞存活率为7.21%,IMRT模式15 min照射组为8.85%,IMRT模式30 min照射组为9.92%,IMRT模式组随着单次剂量时间延长到15 min和30 min,细胞存活率较EBRT组明显增加,t检验有显著差异(P<0.05).CNE2细胞EBRT组为0.190%, IMRT模式15 min照射组为0.204%,IMRT模式30 min照射组细胞存活率为0.207%,t检验无显著差异(P>0.05).结论 鼻咽高分化鳞癌CNE1细胞具有较低的α/β值及较大的D0、Dq值,相对于鼻咽低分化鳞癌CNE2细胞具有较强的亚致死性修复(SLDR)能力.SLDR能力在单次剂量延长的放疗中对细胞存活起重要作用.IMRT模式单次剂量输出时间延长将使CNE1细胞存活率增加明显,而CNE2细胞增加不明显.     

CpG ODN107增强人鼻咽癌CNE 2细胞对β射线照射的敏感性

目的: 筛选能提高鼻咽癌CNE2细胞对β射线放射敏感性的CpG ODN序列，观察筛选获得的CpG ODN序列放射增敏的作用特点，为寻找新的鼻咽癌放疗增敏剂提供实验依据方法：应用MTT实验筛选21种CpG ODN序列中对人鼻咽癌CNE2细胞放射增敏作用最强的序列，以MTT实验、集落形成实验、划痕实验和流式细胞术检测该最强作用序列与β射线联合作用对CNE2细胞的增殖、集落形成、细胞迁移、细胞周期与凋亡的影响。结果：筛选实验显示CpG ODN107对 CNE2细胞具有最高的增敏比（1.59±0.06），CpG ODN107和β射线联合作用能以剂量依赖方式显著抑制CNE2细胞的增殖，抑制效应显著高于单纯照射（P<0.05, P<0.01）；联合作用显著抑制CNE2细胞集落形成和迁移能力，显著诱导细胞周期阻滞于G0/G1期，显著增加细胞凋亡（P<0.01），上述作用效应均明显强于单纯β射线照射（P<0.05或P<0.01）。结论： CpG ODN 107可显著增强人鼻咽癌CNE2细胞对β射线的照射敏感性，其放射增敏作用可能与诱导细胞周期阻滞和凋亡有关。     

辐射对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其放射增敏意义

目的：探讨不同辐射剂量对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其与放射敏感性的关系,为合理应用COX-2抑制剂提供实验依据。方法：X线照射食管癌Eca-109细胞,2Gy/f,以照射累积剂量（0Gy、20Gy、40Gy）将其分为Eca 109、Eca 109-20、Eca-109-40组;COX-2抑制剂尼美舒利培育Eca-109-40组细胞为Eca-109-40R;RT-PCR及Western-blot检测细胞COX-2的表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果：Eca-109-40细胞COX-2表达增高（P〈0.05）,放射敏感性降低（P〈0.05）,细胞周期S期比例增多（P〈0.05）,Eca 109与Eca 109-20之间差异无统计学意义（P〉0.05）,Eca-109-40R较Eca-109-40 COX-2表达下降（P〈0.05）,放射敏感性增高（P〈0.05）,细胞周期S期比例减少（P〈0.05）。结论：辐射累积剂量在40Gy时Eca-109细胞COX-2的表达较高,癌细胞放射敏感性降低;照射40Gy时加用尼美舒利可提高细胞放射敏感性。     

不同剂量电离辐射对大肠癌细胞株HCT-8的多柔比星敏感性的研究

目的研究不同剂量电离辐射作用后多柔比星（阿霉素）对大肠癌多药耐药细胞株HCT-8细胞毒活性的影响,进一步探讨逆转大肠癌多药耐药性的方法.方法体外培养大肠癌细胞株HCT-8,以400 ng/ml阿霉素作为HCT-8细胞耐药模型刺激浓度制备细胞耐药模型.实验模型分为5组：假照射组;大剂量组（2 Gy）;0.05 Gy＋2 Gy组;0.1 Gy＋2 Gy组;0.2 Gy＋2 Gy组.采用MTT法测定给予阿霉素后大肠癌多药耐药细胞株HCT-8的存活率.结果与假照射组相比,2 Gy大剂量照射组及0.2 Gy＋2 Gy组照射后HCT-8细胞存活率明显降低（P＜0.05）,先给予低剂量照射（0.05 Gy,0.1 Gy）后,再给予大剂量照射,HCT-8细胞存活率降低更明显（P＜0.01）.与单纯2 Gy大剂量照射组比较,0.1 Gy＋2 Gy组HCT-8细胞存活率明显降低（P＜0.05）.结论先给予低剂量照射（0.1 Gy）后,再给予大剂量照射,可提高大肠癌多药耐药细胞株HCT-8对阿霉素的敏感性.     

照射实施时间延长对肿瘤细胞杀灭效应影响的体外实验研究

背景与目的:调强放射治疗(IMRT)是21世纪初的主流放射技术,已广泛地应用于各类肿瘤的放射治疗中,但整个放射实施的时间比常规二维照射技术长得多.本研究采用a/β值不同的临床常见肿瘤细胞株--鼻咽癌CNE和肺癌细胞A549细胞株,研究模拟IMRT技术的照射时间延长所导致的放射生物效应变化.方法:①离体培养鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE、肺腺癌细胞株A549,给予不同剂量的照射,由克隆形成实验求得细胞存活比率(SF),根据LQ模型拟合生存曲线;②对细胞进行分段照射,比较细胞存活比率的变化;③对细胞分别进行总剂量为2 Gy、2 Gy×2次、2 Gy×3次、2 Gy×4次的照射,间隔24 h,每天2 Gy照射的总时间分别为1分57秒(2 min组)、20 min(20 min组)、40 min(40 min组).观察延长照射时间对肿瘤细胞存活比率的影响.结果:CNE细胞的a/β值为1.76 Gy,A549细胞的a/β值为12.41 Gy:随着2次照射时间间隔的延长,细胞存活比率逐渐上升,分别比连续照射时增加了150%和100%,接受照射总剂量为8 Gy的鼻咽癌瘤株CNE和肺癌瘤株A549细胞中,2 min组细胞存活比率最低,分别为0.0237和0.0243;20 min组细胞的存活比率分别为0.0304和0.0296;40 min组细胞的存活比率上升至0.0378和0.0359,与2 min组相比,两株细胞的双侧t检验差异均有显著性(P<0.05).结论:根据体外实验结果,随着照射时间的延长,放射治疗的生物效应下降.在调强放疗的工作实践中,应尽量减少单次照射所需要花费的时间,个体化地设计调强放疗方案;或者考虑适当的进行剂量补偿.     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

不同敏感性鼻咽癌细胞株中Ku蛋白表达情况比较

目的　比较作为DNA双链断裂修复蛋白DNA依赖性蛋白激酶 (DNA PK)的调节亚基70 Ku、80 Ku在不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中的表达情况。方法　成克隆实验测定鼻咽癌高分化鳞癌细胞CNE1和低分化鳞癌细胞CNE2不同剂量照射后的存活分数 ,用线性二次模型拟合剂量存活曲线并求出放射生物学参数α、β、SF2、MID以评价两株细胞的放射敏感性。Westernblot检测照射前和后不同时间及不同剂量CNE1、CNE2细胞中Ku的表达 ,检测蛋白条带的吸光度值做半定量分析。结果　CNE1在各个剂量点的存活分数均比CNE2高 ,MID也大于CNE2 (2 .35∶1.11) ,SF2也大于CNE1(0 .5 4∶0 .37)。Westernblot显示两株细胞中70 Ku、80 Ku均有表达 ,蛋白条带的吸光度值测定显示70 Ku在CNE1、CNE2细胞中分别为 2 0 .0 3± 7.5 6和 19.36± 6 .0 4 ,80 Ku分别为 2 5 .98± 12 .87和 2 3.74±9.2 4 (P值均 >0 .0 5 )。蛋白表达的定量和定性分析同样显示 4Gy照射后不同时间点及 0～ 16Gy照射后 12hKu的表达无统计学差异。结论　实验验证了CNE2比CNE1对放射更敏感 ;照射前后两个细胞均有70 Ku、80 Ku蛋白表达且无差异 ;CNE1、CNE2放射敏感性的差异与Ku蛋白表达量无明显关系。     

X线照射对不同放射敏感性鼻咽癌细胞中ATM mRNA表达的影响

[目的]研究X线照射对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的影响。[方法]采用逆转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）技术．以β-actin为内参照,测定10GyX线照射前后CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的变化：[结果]在X线照射前,CNE1中ATM mRNA基础水平与CNE2相似：存X线照射后,CNE1中ATM mRNA水平在照射4h后明显升高。12h后恢复：CNE2中ATM mRNA水平在照射后12h内无显著变化．[结论]在具有不同放射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中．ATM mRNA表达的基础水平相似,在经X射线处理后,CNE1和CNE2中ATM mRNA水平变化规律不同。这种ATM mRNA表达差异可能是导致两者放射敏感性不同的原因之一．     

CNE、SPC—A1和MCF—7人类肿瘤细胞Ku80基因同源性研究

目的：研究人鼻咽鳞癌(CNE)、肺腺癌(SPC—A1)和乳腺腺癌(MCF—7)细胞Ku80基因功能区的保守性，探讨该基因突变与肿瘤放射和化学治疗疗效的关系。方法：采用聚合酶链式反应和克隆技术测定3种肿瘤细胞内与DNA损伤修复有关的Ku80基因序列，分析他们的功能区保守性变化，模拟和比较突变产物亲疏水性差异。结果：人CNE、SPC—A1和MCF—7肿瘤细胞Ku80基因同源性分别为99．95％、99．5％和99．7％，包括碱基转换和颠换突变。部分突变碱基导致产物氨基酸替代并影响他们的亲疏水结构。SPC-A1细胞发生150aa Ile→Vao、470aa Asp→Gly、553aa Phe→Ile替代和570aaGln→0缺失；MCF-7细胞发生209aa Lys→Glu、 23laa Leu→Arg和297aa→Ser替代；而CNE细胞功能区高度保守。结论：SPC-A1和MCF-7细胞Ku80p功能区存在氨基酸替代，影响其结构和活性变化，与肿瘤细胞DNA双链断裂损伤修复能力和肿瘤放化疗疗效直接相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2放射增敏作用的初步研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞CNE1、CEN2的放射增敏作用及其可能机制。方法:体外培养CNE1、CNE2细胞,CCK-8实验得到EGCG IC20值50μg/ml,即为实验浓度。实验分为4组,对照组:含有和其他组相等浓度的DMSO溶解剂;药物组:DMSO溶解的EGCG;照射组:X线照射组;实验组:EGCG联合X线照射组。体外培养CNE1、CNE2细胞至对数生长期,药物组及实验组分别给予药物即EGCG处理,培养24h后进行相应剂量的X线照射后收集细胞。采用克隆形成实验检测不同射线剂量（0、2、4、6、8、10Gy）处理后各组的克隆形成率、细胞存活率及放射增敏比（SER）,流式细胞分析法检测各组细胞的凋亡情况及细胞周期,Western bolt检测Akt蛋白的表达,RT-PCR检测Akt mRNA的表达。结果:平板克隆实验:照射组及实验组随着X线剂量的逐步增加,克隆形成率随之下降,细胞存活分数下降,呈现剂量依赖效应（P＜0.05）;相同剂量下,实验组比照射组克隆形成率低,实验组Do、Dq明显低于单纯照射组（P＜0.05）,CNE1细胞株SER为1.4962,CNE2细胞株SER为1.1846,说明EGCG具有放射增敏作用（P＜0.05）。流式细胞分析:各实验组与对照组相比,G2/M期百分比升高（P＜0.05）,表明存在G2/M期阻滞,单纯射线组比单纯药物组对G2/M期的阻滞作用更明显,二者联合的实验组表现为协同作用。实时荧光定量实验:各实验组与对照组相比,Akt mRNA表达下降（P＜0.05）,实验组比单纯照射组及单纯药物组更明显。Western blot实验:各实验组与对照组相比,Akt蛋白表达均有下降（P＜0.05）,实验组比单纯照射组及单纯药物组更明显。结论:EGCG对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2具有放射增敏作用,其机制可能是通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞周期、抑制射线诱导的Akt活化而产生。     

电离辐射对胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：研究电离辐射对体外胃腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响。方法：~（60）Coγ射线单次照射胃腺癌BGC-823细胞,照射剂量分别为0、2、4 Gy,利用MTT和克隆形成率实验检测各剂量组BGC-823的增殖能力;同时利用Annexin-V/PI双染法检测各剂量组BGC-823细胞的凋亡;用PI单染测定各剂量组BGC-823的细胞周期。结果：与0 Gy组相比,2、4Gy 60Coγ射线照射可显著抑制胃腺癌BGC-823细胞的增殖（P〈0.05）,诱导BGC-823细胞在照射后依次出现S期和G2/M期阻滞。4Gy 60Coγ射线照射后48h,凋亡细胞比例显著高于对照组（P〈0.05）。结论：60Coγ射线照射可抑制胃腺癌细胞BGC-823增殖、诱导胃癌细胞出现周期阻滞和细胞凋亡。