系统性硬皮病成纤维细胞研究进展

成纤维细胞在硬皮病纤维化过程中具有重要作用。体外培养的系统硬皮病皮损成纤维细胞发生了基质合成和生长增殖的异常以及粘附力的改变。能够合成高产量胶原及其它基质的成纤维细胞亚群在硬皮病皮肤纤维化中可能起重要的作用。硬皮病皮损中表害细胞间粘着分子１型ＨＬＡ－Ⅱ类抗原的成纤维细胞数目增加可能与局部炎症或免疫反应有关。     

细胞因子与真皮纤维化

转化生长因子β和血小板衍生的生长因子等细胞因子作为重要递质,介导了成纤维细胞迁移、增殖和细胞外基质成分的合成,参与了纤维化过程。免疫组化和原位杂交技术证实了纤维化皮损中上述因子的存在。硬皮病和瘢痕疙瘩成纤维细胞在体外也显示了对细胞因子的异常反应。损伤、炎症或自身免疫过程中某些细胞因子浓度增加可引起纤维化特有的多效性遗传程序的活化。成纤维细胞内细胞因子调节程序的内在改变也可能与纤维化有关。     

细胞因子与真皮纤维化

转化生长因子β和血小板衍生的生长因子等细胞因子作为重要递质，介导了成纤维细胞迁移，增殖和细胞外基质成分的合成，参与了纤维化过程。免疫组化和原位杂交技术证实了纤维化皮损中上述因子的存在。硬皮病和瘢痕疙瘩成纤维细胞在体外也是显示了对细胞因子的异常反应。损伤，炎症或自身免疫地过程中某些细胞因子浓度增加可引起纤维化特有的多特有的多效性遗传程序的活化。成纤维细胞内细胞因子调节程序的内在改变也可能与纤维化有关     

体外培养硬皮病成纤维细胞的超微结构观察

为探讨硬皮病纤维化硬化形成的机制，应用透射电镜对培养的硬皮病皮损和正常皮肤中的成纤维细胞进行了超微结构观察。结果示硬皮病成纤维细胞中有丰富的，高度发达的粗面内质网，且多个区域有高尔基复合体及其形成的分泌泡存在。正常皮肤中的成纤维细胞内粗面内质网少，未见高尔基复合体的分泌泡。提示硬皮病成纤维细胞的蛋白合成及分泌功能活跃，因此胶原合成增高。     

细胞外基质与成纤维细胞的相互作用及其在硬皮病中的意义

细胞外基质与成纤维细胞相互作用的主要表现为:细胞外基质调控成纤维细胞的增殖与分化、对成纤维细胞趋化作用、负反馈抑制成纤维细胞合成胶原。成纤维细胞表面介导细胞外基质-成纤维细胞相互作用的粘附分子主要是整合素β_1、β_3亚族,与多种细胞外基质共同具有的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列特异结合。硬皮病中成纤维细胞表面整合素α_1、α_3链表达较正常成纤维细胞明显增强;β_1整合素在皮损血管周围、淋巴样细胞聚集区及胶原束间明显增多;胶原和前胶原肽对成纤维细胞合成胶原的负反馈抑制在硬皮病时消失。细胞因子、转化生长因子-β、干扰素等对细胞外基质-成纤维细胞相互作用有调节作用。     

氧化应激在系统性硬皮病发病中的作用

系统性硬皮病是一种自身免疫性疾病,其确切病因不明,可能与微血管病变、免疫反应、细胞外基质合成过多相关.近年来,有证据表明,氧化应激可能在系统性硬皮病的发生发展过程中起重要作用.一些学者提出,在系统性硬皮病发生的初始阶段,患者体内激活的成纤维细胞能产生大量的活性氧,使机体处于一种过度的氧化应激状态,在这一状态下,大量产生胶原蛋白Ⅰ,促使组织纤维化.将围绕氧化应激、氧化应激产物及其如何通过调节细胞因子表达、介导免疫反应等方面参与皮肤和各器官纤维化的过程进行概述.     

细胞外基质与成纤维细胞的相互作用及其在硬皮病中的意义

细胞外基质与成纤维细胞相互作用的主要表现为，细胞外基质调控成纤维细胞的增殖与分化，对成纤维细胞趋化作用，负反馈抑制成纤维合成胶原，成纤维细胞表面介导细胞外基质－成纤维细胞相互作用的粘附分子主要是整合素β１β３亚族，与多种细胞外基质共同具有的精氨酸－基氨酸－天冬氨酸序列特异结合，硬皮病中成纤维细胞表面整合素α１，α３链表达较正常成纤维细胞明显增强β１整合素在皮损血管周围，淋巴样细胞聚集区及胶原束间明     

与系统性硬皮病相关的细胞因子

系统性硬皮病是以成纤维细胞过度增殖,多脏器进行性纤维化为特征的结缔组织疾病,多种细胞因子参与发病过程。如转化生长因子、肿瘤坏死因子和白介素-6等可通过调节成纤维细胞增殖及细胞外基质合成促进组织纤维化,而干扰素-γ则可以抑制成纤维细胞胶原蛋白的合成。     

与系统性硬皮病相关的细胞因子

系统性硬皮病是以成纤维细胞过度增殖，多脏器进行性纤维化为特征的结缔组织疾病，多种细胞因子参与发病过程。如转化生长因子、肿瘤坏死因子和白介素-6等可通过调节成纤维细胞增殖及细胞外基质合成促进组织纤维化，而干扰素-γ则可以抑制成纤维细胞胶原蛋白的合成。     

Hedgehog信号通路在系统性硬皮病发病机制中的作用

系统性硬皮病(systemic sclerosis, SSc)是一种典型的纤维化疾病，可累及皮肤、心脏、肺、胃肠道等多个器官。SSc的发病机制尚未完全阐明，目前认为SSc发病的主要机制是成纤维细胞异常活化，分泌过多的细胞外基质所致，但成纤维细胞持续活化的机制仍不明确。已有研究表明多种信号通路参与了成纤维细胞活化，如Hedgehog(Hh)、Wnt/β-catenin、Notch、TGF-β等。本文主要针对Hh信号通路及其在SSc发病机制中的作用进行综述，探讨系统性硬皮病纤维化的可能发生机制及潜在的治疗靶点。     

Expression of Smad3 and Smad7 mRNA in cultured scleroderma fibroblasts

目的:探讨体外培养来自硬皮病患者的成纤维细胞中转化生长因子(TGF)β受体活化的Smad3及Smad7 mRNA表达水平.方法:体外培养4例硬皮病患者(患者组)及4名正常对照者(对照组)组织的成纤维细胞,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分别检测硬皮病患者组成纤维细胞及正常对照组成纤维细胞中Smad3和Smad7 mRNA的表达情况,并比较两组间的表达差异.结果:体外培养的硬皮病患者组成纤维细胞的Smad3及Smad7 mRNA表达水平均要显著高于对照组的成纤维细胞(P < 0.05).结论:Smad3在硬皮病中的上调,提示Smad3在硬皮病的发病过程中可能与TGF-β协同作用,共同促进了硬皮病的纤维化过程.而Smad7在硬皮病中的表达升高,可能是机体的一种负反馈调节作用.     

UVA1在硬皮病的应用进展

硬皮病是一种以局限性或弥漫性皮肤硬化或伴有内脏器官纤维化为特征的结缔组织病,目前尚无特效的药物和满意的疗法。UVAI(340～400 nm)作为一种较新的光学疗法为硬皮病提供了新的治疗手段并已取得了较为满意的疗效。UVA1照射可促进真皮成纤维细胞上基质金属蛋白酶的表达,抑制胶原合成,减少炎症细胞浸润,在临床上表现为原先硬化的皮肤软化。近年来,诸学者对不同剂量UVA1治疗硬皮病的疗效进行了观察并探讨了UVA1治疗硬皮病的可能的机制。     

系统性硬皮病与萄葡糖胺聚糖

系统性硬皮病存在葡萄糖胺聚糖代谢紊乱,在病人皮肤组织、尿液、病变皮肤组织成纤维细胞培养液、血液中葡萄糖胺聚糖含量均高于正常人,皮肤中葡萄糖胺聚糖成分变化在硬皮病的病程变化中各不相同,从病人尿液中提取一种硫酸肝素样葡萄糖胺聚糖对小鼠有致纤维化作用,同时对病人外周血淋巴细胞有明显转化作用。已知许多疾病的纤维化与肥大细胞浸润并存,硬皮病亦有同样改变,这种纤维化可能与肥大细胞内含大量肝素有关。     

硬皮病皮损中热休克蛋白47、碱性成纤维细胞生长因子及Ⅰ型胶原蛋白的检测及意义

目的:探讨热休克蛋白(HSP)47、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及Ⅰ型胶原(COL-1)在硬皮病皮损中的表达及意义,分析三者在硬皮病发病机制中的作用及相互之间的关系。方法:采用免疫组化法检测早期硬皮病组(21例)、晚期硬皮病组(21例)及正常对照组(10例)皮肤石蜡包埋组织中HSP47、b FGF及COL-1的原位表达情况。结果:HSP47、b FGF及COL-1均弥漫表达于正常皮肤和硬皮病皮损的细胞质中。HSP47在早期硬皮病组和晚期硬皮病组中的表达均高于正常对照组(P0.01),但三者分别在早、晚期硬皮病组中的表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。硬皮病皮损中HSP47与COL-1的表达呈正相关(r=0.579,P=0.000);b FGF与COL-1的表达呈正相关(r=0.379,P=0.000);HSP47与b FGF的表达也呈正相关(r=0.493,P=0.000)。结论:HSP47、b FGF及COL-1在早、晚期硬皮病皮损中表达均明显上调,HSP47、b FGF及COL-1可能参与硬皮病的病理纤维化进程。     

Cthrc1及TGF-β1/Smad信号通路在硬皮病成纤维细胞中的表达及其意义

目的初步探讨胶原三螺旋重复蛋白1(Cthrc1)及TGF-β1/Smad信号在硬皮病发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学技术检测30例硬皮病皮损组织及30例正常皮肤组织成纤维细胞中Cthrc1,TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad7的表达情况。结果硬皮病皮损组织中Cthrc1,TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad7的表达(6 620.40±1 758.34,1 098.97±441.08,24 008.58±7 431.01,54 983.22±17 741.32,1 098.34±332.00)均较正常皮肤组织(856.14±169.49,221.51±58.76,1 816.42±313.63,2 069.49±586.66,132.61±66.26)显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);在硬皮病皮损组织中TGF-β1与Cthrc1,Smad2,Smad3,Smad7的表达呈显著正相关性(P0.05)。结论硬皮病皮损组织成纤维细胞中Cthrc1的异常表达及TGF-β1/Smad信号通路异常活化存在一定的相互作用,并可能共同参与了硬皮病皮肤胶原纤维进行性硬化的过程。     

细胞凋亡及凋亡相关基因与硬皮病

急性活动期的硬皮病皮损有内皮细胞凋亡现象。成纤维细胞在与内皮细胞共同培养时,其增生速度较单独培养时快,而胶原合成量较单独培养时少。凋亡相关基因c-myc、bcl-2及fas系统在硬皮病患者中有异常表达。进一步研究细胞凋亡及凋亡相关基因表达与硬皮病的关系,有助于进一步研究硬皮病的发病机理,及探讨新的治疗手段。     

培养硬皮病皮损成纤维细胞Smad3 DNA结合活性的研究

目的：探讨培养硬皮病成纤维细胞中磷酸化转录因子Smad3的表达和转录因子Smad3的DNA结合活性和表达量。方法：4例硬皮病患者和4例正常人对照进入本研究。采用Western Blot检测了磷酸化Smad3在培养硬皮病成纤维细胞全细胞裂解液中的表达;采用电泳迁移率实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测了培养硬皮病成纤维细胞在核蛋白中Smad3的DNA结合活性,并对其进行了密度扫描和定量分析。结果：磷酸化转录因子Smad3的表达在培养硬皮病成纤维细胞全细胞裂解液中呈高表达,所有正常人对照为阴性。在培养硬皮病成纤维细胞核蛋白中,转录因子Smad3的DNA结合活性是显著增高的;经密度扫描,是正常人对照的21倍;培养正常人成纤维细胞核蛋白中转录因子Smad3的DNA结合活性仅略高于本底颜色。结论：磷酸化转录因子Smad3高表达和Smad3的DNA结合活性显著增高,提示转录因子Smad3在硬皮病纤维化的病理发生过程中具有重要作用。     

多光子显微镜技术评估成纤维细胞收缩诱导胶原蛋白基质的重排北大核心CSCD

真皮成纤维细胞是一群充满活力的细胞,在细胞外基质的合成和重排过程中起着重要作用。其收缩特性可以影响皮肤的形态和机械特性。例如,在皮肤创口愈合过程中,成纤维细胞对其周围的细胞外基质施加机械力,使创VI收缩。如果成纤维细胞的收缩在创口闭合之后仍持续存在,这种作用力则可能导致瘢痕的形成,甚至发生组织主体的变形。因此,真皮成纤维细胞的收缩可能参与皮肤老化过程中皱纹的形成。     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对系统性硬皮病皮损成纤维细胞胶原蛋白及相关抑制因子表达的影响

目的：探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷对系统性硬皮病皮损成纤维细胞胶原蛋白及相关抑制因子表达的影响。方法：首先，体外培养建立疾病组和对照组皮肤成纤维细胞系。然后，采用实时定量RT—PCR技术，分别测定两组成纤维细胞Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、MBDI、MBD2、MeCP2、Kaiso等基因的表达水平。最后，观测5-氮杂-2-脱氧胞苷处理前后Col1α2、Smad7、MMP1等基因的表达水平。结果：与健康对照组比较，系统性硬皮病组皮损成纤维细胞Dnmt1、Col1α2表达增高，Smad7、MMP1表达减少（P〈0．05）。经5-氮杂-2-脱氧胞苷处理后，系统性硬皮病组皮损成纤维细胞异常表达的Col1α2降至正常水平，而Smad7、MMP1表达也恢复至正常范围。结论：Dnmt1等表观遗传机制可能参与了系统性硬皮病发病过程。5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为系统性硬皮病治疗的新选择。     

整合素表达对硬皮病成纤维细胞合成原胶原的影响

目的　研究硬皮病成纤维细胞整合素表达对成纤维细胞合成原胶原的影响。方法　运用硫代修饰的整合素反义寡核苷酸阻断硬皮病成纤维细胞表面相应整合素亚基的表达 ,RT PCR检测整合素表达抑制后硬皮病成纤维细胞原胶原mRNA量的变化。结果　反义寡核苷酸能特异抑制硬皮病成纤维细胞相应整合素亚基的表达 ;整合素α5或 β1 亚基表达减少的成纤维细胞 ,原胶原proα1(Ⅰ )、proα1(Ⅲ )mRNA均显著降低。结论　降低硬皮病成纤维细胞整合素的表达 ,可从转录水平抑制成纤维细胞合成原胶原