补体旁路激活导致内皮细胞活化和损伤

目的研究补体替代途径的激活对血管内皮细胞活化和损伤的作用。方法采用眼镜蛇毒因子(CVF)与人血清孵育,特异激活补体替代途径。将孵育物作用于人微血管内皮细胞,采用ELISA检测内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8的表达,采用酶活性测定法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,化学发光法检测内皮细胞caspase-8活化信号,MTT法检测内皮细胞增殖活性,并检测内皮细胞释放NO的变化。结果补体旁路激活导致内皮细胞瞬时表达P-selectin,并进而使内皮细胞上调表达E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8。内皮细胞经补体激活物刺激后,LDH释放增加、凋亡信号caspase-8活化上调以及NO释放下调,同时,细胞增殖也受到抑制。结论补体旁路激活能诱导内皮细胞活化和损伤,介导血管内皮的生理结构与功能发生变化,从而可能导致相应的炎症和组织损伤。     

两种抗补体蛋白对脂多糖致急性肺损伤的保护作用比较研究

目的通过比较两种不同的补体干预方式对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用,进一步认识补体在LPS致ALI中的作用,并探讨补体不同成分在ALI中的作用。方法造模前将抗补体蛋白眼镜蛇毒因子(CVF)和Atrase A分别给予对应组别的大鼠,抑制补体。通过大鼠尾静脉注射LPS(5 mg.kg-1),造成ALI模型。在给予LPS后1、6、12 h采集标本,分别测定血清补体溶血活性、肺含水量、肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性,取支气管肺泡灌洗液(BALF)测定细胞数、蛋白含量以及TNF-α和P-selectin的含量,取肺组织行病理切片检查。通过对实验结果的分析比较,评价两种抗补体蛋白对LPS致大鼠ALI的保护作用。结果在LPS致ALI的早期伴随有明显的血清补体活性下降。模型组的血清补体活性在给予LPS后的1 h内下降了47%。采用Atrase A抑制了50%补体活性的实验组其MPO、TNF-α、P-selectin水平未上调。完全去除补体活性的CVF组其MPO活力在1 h时与正常对照组相当,在6、12 h时则上升至与模型组相当,而TNF-α和P-selectin水平则介于模型组和正常组之间。病理切片检查表明两种抗补体蛋白均能有效减轻肺组织病理损伤,其中Atrase A明显优于CVF。结论补体明确参与了LPS致ALI的病理过程。采用抗补体干预能减轻ALI炎症和相关病理损伤,但两种抗补体蛋白的保护作用有明显区别。采用CVF完全去除补体C3、C5-C9仅在ALI早期有明显的保护作用,而仅部分抑制了补体活性的Atrase A则明显优于CVF,提示Atrase A作用的补体成分可能在ALI中具有重要作用。     

柴胡粗提物对补体系统的抑制作用

目的研究柴胡粗提物对补体系统的作用。方法将柴胡粗提物分别与补体溶血实验中的各要素混合,作用一段时间后再加入其他组分,观测体系的溶血情况,探讨其对补体经典途径或旁路途径激活的作用。结果在经典激活途径中,柴胡粗提物与补体预先混合,能降低体系最终的溶血,而与溶血素或羊红细胞预先混合,体系的溶血无明显改变。在旁路激活途径中,柴胡粗提物与补体预先混合也能降低体系最终的溶血,而与兔红细胞预先混合,体系的溶血无明显改变。结论柴胡粗提物通过抑制补体,从而对溶血实验产生影响。     

补体旁路过度激活影响体内凝血功能

目的研究补体旁路的过度激活对体内纤溶、凝血及血小板的影响。方法采用尾静脉注射眼镜蛇毒因子(CVF)造成大鼠体内补体旁路的过度激活。检测大鼠给药前和给药后多个时间点血样的补体活性、t-PA、PAI-1、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、P-selectin、PF-4、β-TG、血小板数量及聚集活性的变化,并检测小鼠静脉给予CVF后其尾部出血时间的变化。结果大鼠注射CVF后,血清补体活性在1h内基本消失。t-PA和PAI-1含量在1h内有明显增加,在48 h时间点t-PA/PAI-1比值有明显下降(P<0.01);PT、APTT、TT均略有变化,而血浆FIB含量明显下降;补体旁路的过度激活导致血中P-selectin、PF-4、β-TG明显上调,血小板数量明显减少,凝血酶和花生四烯酸诱导的血小板聚集被明显抑制,而ADP诱导的血小板聚集只受到轻微影响。小鼠尾部出血时间在1 h时明显缩短。结论补体旁路的过度激活能明显影响体内凝血功能,导致血液的高凝状态。     

不同抗凝方法对血液补体测定结果的影响

补体系统是人和某些动物种属在长期的种系进化过程中获得的非特异性免疫因素之一,同时也在特异性免疫中发挥效应。补体系统及其单个成分的活性与含量,在参与机体的各种生理、病理状态中发挥重要的生物学效应。检测补体的单个成分及补体的活性测定对于机体免疫系统的功能评价,疾病的诊断与治疗,流行病学调查等均有重要作用。补体活性及含量测定一般采用血清标本,可否用血浆标本进行测定未见相关报道。我们用30例志愿者不同抗凝方法抗凝的血液标本,检测其总补体溶血活性（CH50）、旁路途径溶血活性（AP—H50）、C4活性与含量、B因子（BF）活性与含量、C3含量,结果报道如下。     

广西藤茶总黄酮对正常小鼠免疫功能的影响

目的：探讨藤茶总黄酮（TF）对正常小鼠免疫功能的影响。方法：以碳廓清率法、血清半数溶血值测定法和免疫消浊比浊法，测定正常小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素含量、总补体活性和血清补体C3含量。结果：TF能显著提高正常小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能，明显促进血清溶血素和补体C3的生成，并提高总补体活性，以上均呈一定的剂量依赖性。结论：TF可能提高正常小鼠的免疫功能。     

香椿果多酚对补体致内皮细胞活化和损伤的保护作用

目的评价香椿果多酚类化合物XCG-7对补体致内皮细胞活化和损伤的保护作用。方法采用能特异性激活补体替代途径的眼镜蛇毒因子激活血清补体,将激活的血清作用于血管内皮细胞,诱导其活化和损伤。通过测定内皮细胞P-selectin、E-selectin和IL-8的表达以及乳酸脱氢酶释放和Caspase-3/7活化的变化,评价XCG-7对补体刺激内皮细胞活化和损伤的抑制作用。结果 XCG-7能明显抑制补体刺激内皮细胞P-selectin、E-selectin和IL-8的表达上调,减少补体损伤内皮细胞导致乳酸脱氢酶的释放和Caspase-3/7的活化。结论香椿果多酚化合物XCG-7对补体导致内皮细胞活化和损伤具有明显的保护作用。     

过山枫多糖的体外抗补体活性研究

目的:研究过山枫多糖的体外抗补体活性。方法:采用水提醇沉法提取、分离过山枫多糖;通过苯酚-硫酸法测定其多糖含量;红外光谱确定其多糖结构;将过山枫多糖分别与补体溶血试验中的各要素混合,作用一段时间后再加入其他组分,观测体系的溶血情况,探讨其对补体经典途径激活的作用。结果:分离获得桔红色过山枫多糖,其多糖含量为58.3%。红外光谱显示过山枫多糖主要由α-吡喃糖构成,含有α-D-Glcp。在经典激活途径中,过山枫多糖与补体预先混合能降低体系的溶血,其半数溶血浓度(CH50)为302μg.mL-1,低于肝素的CH50值699μg.mL-1。结论:过山枫多糖具有抗补体活性。     

新型补体抑制剂报告结果前景喜人

Ra Pharmaceuticals公司的研究人员发布了一种新型补体抑制剂,用于治疗补体介导疾病。该公司开发出一种能够产生蛋白-蛋白相互作用强效抑制剂的大环肽平台。RA-101348是一种短环肽,与补体C5结合的亲和力高(K d=2.6 nmol·L-1),可抑制其裂解为C5a和C5b。在体外研究中,这种抑制剂可阻断补体终末复合物(TCC)的形成,如红细胞(RBC)裂解测定中替代经典补体激活途径。食蟹猴皮下注射评估补体活性的体内抑制作用,RA-     

正常及习惯性流产患者血清抗补体活性的研究

目的　通过检测正常育龄妇女、正常妊娠妇女及习惯性流产患者血清中抗补体活性的水平 ,借以分析血清抗补体活性与妊娠的相关性。方法　以经典的补体溶血实验方法为基础 ,在原有反应系统中加入不同人群的血清 ,依据溶血率的变化来判断人血清抗补体活性的水平是否与妊娠有关。以补体被抑制的百分率表示抗补体活性。结果　 1 2 0份血清标本中 ,全部表现有不同程度的抑制效应 ,其中正常孕妇血清抗补体百分抑制率均值为(62± 8) %明显高于正常育龄妇女的 [(44± 1 0 ) % ,P <0 0 1 ] ;妊早期孕妇血清抗补体百分抑制率为 (75± 9) % ,明显高于妊中期 [(61± 7) % ,P <0 0 5]和妊晚期 [(54± 5) % ,P <0 0 1 ] ;习惯性流产组的血清抗补体百分抑制率为(2 1± 4) % ,明显低于对照组 (44± 1 0 ) %。结论　妊娠期妇女血清具有较强的抗补体活性可以保护胎儿免受补体被相关因子激活后引起的对胎儿细胞的损害 ,从而保证胎儿正常发育 ;习惯性流产的发生可能与患者血清中的抗补体活性降低有关     

Factors in cobra venoms affecting the complement system

Three constituents of cobra venoms are known to interact with complement: the “cobra venom factor” (CVF), a high-molecular-weight factor (H-CoF), and the “cobra inhibitor” (CI). CVF and CI act by forming complexes with certain complement components. In doing so, CVF replaces an endogenous component, C3b, and hence activates the alternative pathway and leads to C3 (and C5) consumption. In contrast, CI competes with essential complex formations of endogenous components and thus inhibits various reactions. Both, CVF and CI, are useful tools to study the biochemistry of complement and its pathophysiological involvements. The effect of H-CoF on complement has not yet been studied in detail.     

土贝母皂甙A对实验动物免疫功能的影响

土贝母皂甙Aip2mg／kg对小鼠脾脏空斑形成细胞显著增高（P＜0．01），而po50mg／kg使小鼠脾脏空斑形成细胞下降（P＜0．01），po同剂量可使胸腺重量显著减轻（P＜0．01），使血清补体C3含量显著增高（P＜0．01），土贝母皂甙A和土贝母皂甙B对大鼠实验性变态反应性脊髓炎、特异性超敏反应有抑制作用。无论ip或po对小鼠血清溶血素生成、IgG含量及总补体活性均无明显影响。     

补体旁路激活致血管平滑肌细胞增殖活化及干预研究

目的研究补体旁路途径激活诱导人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活化及其干预作用。方法采用CVF特异激活血浆补体旁路途经。将VSMC与补体旁路激活产物共同孵育,采用倒置相差显微镜和MTT法分别检测细胞形态变化和增殖活性,ELISA法检测培养上清中E-selectin、ICAM-1和VCAM-1含量,Western blot检测p-NF-κB p65、IKK和NF-κB p65蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测NF-κB p65转录活性,采用PDTC对上述指标的变化进行干预。结果补体旁路激活导致VSMC增殖活化,上调表达E-selectin、ICAM-1和VCAM-1,其中ICAM-1和VCAM-1含量在6 h达到高峰,E-selectin在12 h出现明显上调;VSMC经补体旁路激活产物刺激后,NF-κB p65磷酸化明显增加,NF-κB p65核内转录活性升高,IKK和NF-κB p65蛋白表达上调,PDTC对上述相关指标的变化有明确的干预作用。结论补体旁路激活可导致VSMC增殖活化,其机制与NF-κB信号通路活化有密切关系,且NF-κB抑制剂PDTC对其增殖活化具有明显的干预作用。     

(鱼安)(鱼康)鱼肝油对动物非特异性免疫功能的影响

用黄(鱼安)(鱼康)鱼肝油分别对豚鼠和小白鼠进行非特异性免疫功能的试验,结果表明:补体总量增加21.15%(P<0.001),溶菌酶含量增加73.2%(P<0.001),脾指数增加57.8%(P<0.001)。     

Lysis via the lectin pathway of complement activation: minireview and lectin pathway enhancement of endotoxin-initiated hemolysis.

Lysis via the newly discovered lectin pathway of complement activation is reviewed. Mannan-coated erythrocytes sensitized with MBL are lysed in human serum containing Mg-EGTA via the lectin pathway by a process which requires alternative pathway amplification. The inhibitory activities of C4bp and factor H, which are augmented in the presence of MBL, regulate this hemolysis. Lectin pathway activity is enhanced by IgG, which inhibits H activity, and is inhibited by C-reactive protein, which enhances the activity of H. Lectin pathway hemolysis in Mg-EGTA also is seen in other species, and is particularly intense and does not require alternative pathway amplification in the guinea pig. New investigations using E-RaLPS as the MBL-binding agent allowed comparison with classical pathway activation by rabbit anti-RaLPS using the same indicator cell. E-RaLPS-MBL are lysed in human serum-Mg-EGTA, and alternative pathway amplification is required. The addition of rabbit anti-E to E-RaLPS-MBL leads to significant enhancement of lysis in Mg-EGTA, much greater than Ig enhancement of hemolysis via the alternative pathway. Lectin pathway activation also enhances the antibody-independent C activation of the classical C pathway via C1q by ReLPS, as well as the direct activation of the alternative C pathway by wild type LPS. Thus, potentiation of reactions initiated at sites of IgG deposition and Ig-independent complement activation represents another characteristic of the lectin pathway.     

Isolation of an anticomplement factor from the venom of the Mojave rattlesnake (Crotalus scutulatus scutulatus)

The venom of the Mojave rattlesnake was fractionated by DEAE-Sephadex column chromatography. A venom fraction, F5, inactivated both human and guinea pig complement. Both serum and purified C3 were partially converted to a protein of faster electrophoretic mobility, indicating that F5 had a direct proteolytic effect on C3. This product was capable of passively lysing guinea pig red blood cells. F5 very effectively inactivated the classical pathway, but only partially inactivated the alternative pathway. The venom fraction worked in a dose-dependent fashion, was heat labile but not lethal to mice at concentrations as high as 10 μg/g mouse weight. Antibodies were produced by immunizing rabbits with F5. The antibodies formed one precipitin line in gels against F5 and also neutralized the complement inactivating activity. The antibodies recognized the venom of the western diamondback rattlesnake, Crotalus atrox, but did not, however, recognize the crude venom of the Mojave rattlesnake.