诃子提取物对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究诃子提取物对过氧化氢（H2O2）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法采用H2O2处理体外培养心肌细胞,造成氧化应激模型,通过检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）漏出量,丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性来反映诃子提取物对H2O2氧化模型的影响,并采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞的代谢率。结果与模型组相比,诃子提取物能显著减少LDH和CK漏出量（P〈0.01）,升高A值（P〈0.01）,降低培养液中MDA含量（P〈0.05,P〈0.01）,升高SOD活性（P〈0.01）。结论诃子提取物可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关。     

柚皮素对氧化应激所致成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的：观察柚皮素对氧化应激导致的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外分离培养成骨细胞,细胞分空白对照组、单纯 H2 O2作用组、H2 O2＋0 J．1μmol／L 柚皮素组、H2 O2＋1μmol／L柚皮素组、H2 O2＋10μmol／L柚皮素组。 MTT法检测成骨细胞活力;流式细胞术检测成骨细胞凋亡率;荧光显微镜观察活性氧（ ROS）含量;比色法检测丙二醛（ MDA）含量;Real time-PCR和Western-blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达情况。结果与空白对照组比较,单纯H2 O2处理组细胞活性明显降低,凋亡率及ROS、MDA含量明显增加;同时Bcl-2 mR-NA和蛋白表达明显下调,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调（ P ＜0．05）。与单纯H2 O2处理组比较,柚皮素预处理24 h能够明显增强细胞活性,降低细胞凋亡率及ROS、MDA含量,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达,呈剂量依赖性（ P ＜0．05）。结论柚皮素在氧化应激条件下能够促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Caspase-3表达有关。     

柿叶提取物对氧化应激损伤U257神经胶质细胞的保护作用

目的研究中成药“柿叶提取物”对体外过氧化氢（H2O2）引起U257神经胶质细胞氧化应激损伤的保护作用及其保护机制。方法体外培养U257神经胶质细胞,建立氧化应激引起的细胞损伤模型;采用MTr比色法测定细胞的存活率;以Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;用丙二醛（MDA）及还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒作相应酶活性或产物含量分析。结果U257神经胶质细胞与300μmol／L的H2O2共孵育10h可诱导细胞凋亡。柿叶提取物（5、10、30μg／ml）3个剂量组均能降低凋亡细胞百分率,降低细胞内MDA含量,提高细胞内GSH含量,该作用呈剂量依赖性。结论柿叶提取物片对氧化应激引起的U257神经胶质细胞损伤有明显的保护作用,其保护机制与细胞内氧化还原的平衡状态改善有关。     

卷柏总黄酮对H_2O_2所致PC12细胞损伤的保护作用

目的观察卷柏总黄酮对H2O2所致PC12细胞损伤的保护作用。方法用H2O2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞存活率;分光光度法测定LDH漏出量,检测细胞损伤程度;硫代巴比妥酸法测定MDA含量;黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。结果卷柏总黄酮能明显改善H2O2诱导的细胞损伤,与模型组相比,可使细胞存活率升高,降低LDH漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性。结论卷柏总黄酮对H2O2所致PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

黄芪甲苷对H_2O_2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄芪甲苷对H2O2引起PC12细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。方法用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,通过MTT法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察细胞内核酸形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内活性氧的产生及细胞周期变化情况;Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A、磷酸化p38及T-p38的表达。结果成功建立了H2O2致PC12细胞氧化应激损伤模型;黄芪甲苷能够提高H2O2损伤的PC12细胞的活力,提升因H2O2导致的细胞凋亡率的下降,降低H2O2所致的胞内ROS升高的状况。机制研究表明:黄芪甲苷通过恢复H2O2诱导细胞周期蛋白Cyclin D1表达下调的情况,调控各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖;进一步研究发现黄芪甲苷是通过抑制H2O2对p38的激活发挥作用的。结论黄芪甲苷对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过调控细胞周期蛋白Cyclin D1的表达来实现的,调控过程与p38/MAPK通路密切相关。该发现为临床上抗氧化治疗策略提供有益的实验依据。     

胶原蛋白肽经由HO-1途径保护H2O2诱导的MC3T3-E1细胞损伤△*

目的 骨质疏松症与氧化应激和活性氧（ROS）的产生密切相关,胶原蛋白肽具有潜在的抗氧化作用,其作用机理尚不清楚,因此,本研究在胶原蛋白肽对过氧化氢（H2O2）诱导的MC3T3-E1小鼠前成骨细胞氧化应激的保护作用的基础上,探讨其分子作用机制。方法 实验分为正常组,H2O2组,胶原蛋白肽低、中、高剂量组(10, 100, 500 g?L-1)。胶原蛋白肽各组加入相应浓度的药物预处理24 h后,与H2O2组一起加入400 μmol?L-1 H2O2孵育24 h,空白对照组正常培养。CCK 8和乳酸脱氢酶（LDH）的释放检测细胞毒性。抗氧化试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）和丙二醛(MDA)含量的变化,Western blot和RT-PCR分别检测细胞内HO-1蛋白及mRNA的表达水平。结果 胶原蛋白肽能够上调H2O2诱导的细胞存活率,以剂量依赖的方式显著降低H2O2诱导的氧化损伤。胶原蛋白肽能够及时清除细胞内的活性氧,显著上调HO-1的基因表达,提高GSH、MDA的活性,减轻脂质过氧化反应。结论 胶原蛋白肽通过激活HO-1基因表达水平,提高抗氧化活性,对H2O2诱导MC3T3-E1细胞的氧化损伤发挥保护作用。     

黄芩苷对香烟烟雾提取物诱导的细胞损伤保护作用研究

目的研究黄芩苷对香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract,CSE）诱导的人肺泡上皮细胞损伤的影响,并初步探讨其机制。方法制备CSE,用不同浓度黄芩苷对人肺泡上皮细胞A549进行预处理,再用CSE刺激细胞。用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率,彗星实验观察DNA损伤情况,荧光法测定细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量。结果随着CSE浓度的增加和作用时间的延长,细胞存活率下降,各组之间有统计学差异（P〈0.05）;黄芩苷能减少CSE诱导的细胞存活率下降,抑制CSE诱导的细胞内ROS的产生,并有剂量依赖关系（P〈0.05或P〈0.01）;黄芩苷＋CSE组细胞的彗星尾长、尾部DNA含量、尾距、Olive尾距均小于CSE组（P〈0.05）,并且黄芩苷可以减少CSE导致的细胞凋亡。结论黄芩苷可以拮抗CSE对细胞的损伤,提高细胞的存活率,降低凋亡率,其原因可能与黄芩苷能降低细胞ROS含量,减少DNA损伤有关。     

吉马酮通过调控miR-297表达对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响

摘要：目的:探讨吉马酮对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响及分子机制。方法:分离培养小鼠海马神经元,将其分为对照组、H2O2组、H2O2+吉马酮低、中、高(50,100,200μmol·L-1)浓度组、H2O2+miR-NC组、H2O2+miR-297组、H2O2+吉马酮(200μmol·L-1)+anti-miR-NC组、H2O2+吉马酮(200μmol·L-1)+anti-miR-297组。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X（Bax）蛋白表达;丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒分别检测MDA含量和SOD活性;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-297表达水平。结果:吉马酮低、中、高浓度处理后,H2O2诱导的小鼠海马神经元中细胞凋亡率、Bax表达水平和MDA含量降低,Bcl-2表达水平、SOD活性和miR-297表达水平升高,且呈浓度依赖性（P<0.05）。miR-297过表达可降低H2O2诱导的海马神经元细胞凋亡率和MDA含量,提高SOD活性（P<0.05）。抑制miR-297表达逆转了吉马酮对H2O2诱导的海马神经元细胞凋亡和氧化应激的作用。结论:吉马酮可能通过上调miR-297表达抑制H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激。     

银杏叶提取物对糖尿病肾病抗氧化应激及血液流变作用的影响

目的：观察银杏叶提取物对糖尿病肾病（DN）患者血清氧化应激及血液流变学指标的影响。方法：将DN患者按自愿原则分为银杏叶提取物（美怡欣注射液）治疗组和对照组。观察两组治疗前后血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷光甘肽过氧化酶（GSH—Px）、丙二醛（MDA）及血液流变学指标的变化。结果：治疗前两组SOD、GSH—Px、MDA和血液流变学指标无明显差异。银杏叶提取物治疗后SOD、GSH—Px较对照组明显升高,MDA明显降低（P〈0．01）;尿蛋白定量较对照组明显下降（P〈0．01）;低切全血黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数和血小板聚集率较对照组和同组治疗前显著下降（P〈0．01）,而高切全血黏度和血浆黏度下降不明显;红细胞变形性显著增高（P〈0．01）。结论：DN患者细胞抗氧化能力明显降低;银杏叶提取物通过提高抗氧化应激能力及改善血液流变性,减少蛋白尿对肾脏起保护作用。     

狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

摘 要 目的：探讨狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮(WSTF)对氧化应激损伤LO2细胞的保护作用。方法: 通过细胞毒性实验确定给药范围,建立过氧化氢（H2O2）致LO2细胞损伤模型,用含不同浓度WSTF的培养液与急性损伤肝细胞共孵育不同时间,采用MTT比色法测定细胞活力,检测谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST） 和丙二醛（MDA）的水平,评价WSTF对肝细胞损伤的保护作用。检测细胞线粒体膜电位和细胞内活性氧簇（ROS）水平,分析WSTF抑制H2O2诱导LO2细胞凋亡情况。结果:0.3 mmol·L^-1 H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型,确定0.031 2~0.125 mg·mL^-1 WSTF为保护LO2细胞损伤的给药浓度范围。WSTF可抑制H2O2对肝细胞的损伤,并明显降低H2O2致急性损伤肝细胞的 ALT、AST 释放量和 MDA 水平,逆转H2O2诱导LO2肝细胞线粒体膜电位去极化和细胞内ROS升高。结论:WSTF体外给药对肝细胞损伤有保护作用。     

扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢损伤的内皮细胞释放血管活性物质的影响

目的:观察扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对过氧化氢(H2O2)损伤的血管内皮细胞产生血管活性物质的影响。方法:用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304建立H2O2诱导的内皮细胞损伤模型组、不同浓度的SS-GAG组以及正常对照组,用放射免疫法测定培养液中6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)、血栓素B2(TXB2)、内皮素(ET)的含量;用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)的含量。结果:与模型组比较,不同浓度的SS-GAG组均可使血管舒张因子6-keto-PGF1a、NO含量明显增加;缩血管因子TXB2、ET含量明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论:SS-GAG可能通过增加舒血管因子、降低缩血管因子的分泌来减轻H2O2对内皮细胞的氧化损伤。     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的：研究车前子对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将H2O2与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果：H2O2组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i的升高（P〈0.01）,呈时间-效应关系。H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

黄芩苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生理机能的影响

目的：研究黄芩苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生理机能的影响。方法：实验小鼠随机均分为7组,分别为对照组、模型组、香菇多糖（200mg/kg）组,黄芩苷低、中、高（50、100、200mg/kg）3个剂量组及黄芩苷（100mg/kg）＋香菇多糖（100mg/kg）组。在灌胃给予上述药物24d后,对实验小鼠的学习记忆能力进行测试,同时测定小鼠体内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）等酶的活性,及丙二醛（MDA）的含量。结果：高、中剂量的黄芩苷能提高衰老小鼠的学习记忆能力（P〈0.05）,能在一定程度上提高组织或血浆中SOD、GSH-Px的活性,升高血浆中CAT的活性,并降低MDA的含量,但较香菇多糖组效果略差,而黄芩苷＋香菇多糖组效果最佳（P〈0.05））。结论：黄芩苷可延缓D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的衰老进程,其作用机制可能与其调节氧化代谢酶系统有关,可作为抗氧化衰老辅助药物。     

二至丸对氧化性肝细胞损伤的保护作用研究

目的:研究二至丸对氧化性肝细胞损伤的保护作用。方法:采用过氧化氢体外诱导肝细胞氧化损伤,MTT法检测细胞活性,测定肝细胞上清总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平和丙二醛(MDA)的含量。结果:40、8μg·mL-1剂量的二至丸可显著提高肝细胞的TAOC和SOD水平,降低MDA含量,可明显抑制过氧化氢的氧化损伤,提高肝细胞总抗氧化能力。结论:二至丸可有效抑制肝细胞氧化损伤,该结论可为临床用药提供理论依据。     

银杏叶标准提取物对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏叶标准提取物EGB761对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞（PC12细胞）凋亡的保护作用及可能的机制。方法：PC12细胞常规培养生长至对数期,进行如下分组试验：正常对照组（NS）,H2O2组（H2O2,200μmol/LH2O2）,低剂量EGB761组（GL,10μg/mlEGB761＋H2O2）,中剂量EGB761组（GM,20μg/mlEGB761＋H2O2）,高剂量EGB761组（GH,50μg/mlEGB761＋H2O2）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定PC12细胞活力;流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率;分光光度计测定过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活力和抗氧化能力（T-AOC）以及丙二醛（MDA）含量;Western blot法测定胞浆内Bcl-2、Bax以及Caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,H2O2组的PC12细胞的活力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组的PC12细胞活力显著增强,且呈剂量依赖关系（P〈0.05）;GM组和GH组CAT,GSH-Px,T-SOD和活性和T-AOC均显著提高（P〈0.05）,MDA含量显著下降（P〈0.05）,GL组T-SOD活力和T-AOC水平升高以及MDA含量下降（P〈0.05）,而CAT和GSH-Px活力无显著变化（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组PC12细胞的Bcl-2的表达量增加,Bax的表达量下降,Bcl-2/Bax的比值显著增加（P〈0.05）,Caspase-3的表达显著降低（P〈0.05）。结论：H2O2可诱导PC12细胞凋亡,EGB761能显著抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡并对细胞有保护作用;EGB761有较强的抗氧化能力,通过其抗氧化作用改善H2O2诱导的氧化应激状态,并能显著提高Bcl-2/Bax的比值,抑制Caspase-3的活化,发挥保护作用。     

感咳双清胶囊中黄芩苷在中国健康志愿者体内的药动学研究

目的:研究感咳双清胶囊中黄芩苷在中国健康志愿者体内的药动学。方法:8名健康志愿者单次口服1.8g感咳双清胶囊,采用高效液相色谱法检测血药浓度,应用DAS软件计算药动学参数。结果:口服1.8g感咳双清胶囊的主要药动学参数分别为t1/2z=(3.304±0.614)h;tmax=(8.0±0.0)h;Cmax=(2.214±0.363)mg·L-1,AUC(0～24)=(18.914±4.064)mg·h·L-1;AUC(0～∞)=(19.291±4.110)mg·h·L-1。其动力学过程符合二室模型。结论:黄芩苷在体内吸收和消除较慢,达tmax所需时间长。     

定心方对氧化应激所致心肌细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨定心方对氧化应激所致心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能作用机制。方法:培养乳鼠心肌细胞,采用200μMH2O2建立氧化应激损伤导致心肌细胞凋亡模型,运用Hoechest33324法测定心肌细胞凋亡情况,乙醛代谢法检测乙醛脱氢酶(ALDH2)活性,采用硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:H2O2作用2h可导致心肌细胞凋亡,定心方显著抑制心肌细胞凋亡,表现为在Hoechest33324染色中,细胞核溶解和核碎裂减轻,凋亡细胞数明显减少(P<0.05),并且能够显著增强ALDH2及SOD活性,降低MDA含量(P<0.05)。结论:定心方对H2O2所致的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制可能是通过抗脂质氧化及增强ALDH2酶活性而实现。     

银杏达莫在内皮细胞氧化损伤中保护作用的实验研究

目的观察银杏达莫对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤的保护作用,并初步探讨银杏达莫在动脉内皮氧化损伤中的作用机制。方法 H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞及家兔动脉内皮氧化性损伤,观察银杏达莫对内皮细胞氧化损伤的保护作用。结果在各试验浓度中较高浓度银杏达莫对H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤有明显的保护及促增殖作用。结论银杏达莫对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤有明显保护作用。     

合成红景天苷对H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的：研究合成红景天苷对过氧化氢所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：体外培养H9c2细胞,分为正常对照组、模型组、提取红景天苷（10-4 mol·L-1）组和合成红景天苷（10-6、10-5、10-4mol·L-1）组,药物孵育24 h后,加入过氧化氢终浓度400μmol·L-1损伤4h,检测各组细胞活力和培养液上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、SOD活性显著降低,LDH、CK活性和MDA含量显著升高（P〈0.01）。与模型组相比,红景天苷预处理组能明显提高细胞活力和SOD活性（P〈0.05）,明显降低LDH、CK活性及MDA含量（P〈0.05）,并与浓度呈正相关。结论：红景天苷对过氧化氢造成的心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,且合成红景天苷效果优于提取红景天苷。     

金银花抗氧化作用的分子学机理研究

目的探讨金银花抗氧化作用分子学机理。方法采用过氧化氢（H2O2）作用于人正常RBL肝细胞，制作氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞分为四个实验组：正常对照组（C），H2O2损伤组（H2），金银花前保护组（Jb），金银花后保护组（Ja）。采用TUNEL和DNA Ladder法，检测各组细胞凋亡情况。应用免疫组化和Western blot观察各组细胞的HSP-70、NF-kB、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达及免疫反应活性。应用MTT实验检测RBL细胞的生存率。结果Jb组的细胞凋亡率明显低于H2和Ja组，Bcl-2表达增高，HSP-70、NF-kB、Bax和Caspase-3的表达降低。结论金银花对RBL细胞氧化应激损伤具有一定保护作用．且前保护作用效果好于后保护作用，其保护作用机理可能是通过抑制HSP-70和NF-kB的表达，阻抑NF-kB信号传导途径并提高细胞内抗氧化防御酶系水平。