表皮干细胞增殖分化的分子调控机制

皮肤作为人体最大的组织器官，覆盖于人体的外表，是医学美学美容研究的主要组织器官。近年来的研究表明，皮肤表皮细胞的自我更新、再生修复以及衰老退变是由来自毛囊或表皮基底层的成体干细胞——表皮干细胞的增殖分化所决定的。对于表皮干细胞的深入研究，将对烧创伤创面修复机制、皮肤年轻化医学美容提供强有力的实验依据及新技术、新方法。     

影响皮肤干细胞增殖与分化的信号转导途径及其分子调控机制研究进展

皮肤干细胞是皮肤发生、修复、改建的重要“源泉”，为修复因外伤、感染等导致的皮肤缺损所必需。烧伤创面、供皮区创面以及其他创面的修复离不开皮肤干细胞的增殖与分化。皮肤干细胞具有很强的增殖能力，但在正常稳定条件下，则处于相对静息状态。本文就近年来表皮干细胞向终末角质细胞增殖分化过程中研究较多的信号转导通路综述如下。[第一段]     

毛囊黑素干细胞分化与移行调控机制的研究进展

毛囊作为一个重要的成体干细胞贮存区域,其富含的干细胞可分化形成毛囊及上皮的多种细胞,对维持毛发的周期性生长有重要作用。其中毛囊黑素干细胞起源于神经嵴,并迁移通过真皮和表皮最终停留在毛囊,目前研究已经表明它的生理功能包括两方面,一方面向上移行进入表皮形成表皮黑素单元;另一方面,在毛囊生长期,毛囊黑素干细胞周期性向下进入毛母质形成毛囊黑素单元。毛囊黑素干细胞在形成毛囊黑素单元过程中,主要受比邻的毛囊干细胞、角质形成细胞、毛乳头细胞、周边的基底膜成分及内在的转录因子等调控,这些细胞和基质蛋白通过不同的通路调节了毛囊黑素干细胞的分化和移行。     

毛囊干细胞及其分离与识别方法的研究进展

干细胞是指未成熟细胞,具有自我更新和分化能力,可分化为胚胎干细胞和成体干细胞、其他细胞、组织及器官[1],胚胎十细胞是最有应用价值的干细胞,但由于来源于胚胎,进行相关研究和治疗必然涉及伦理和道德问题,所以胚胎干细胞的研究受到限制,而来源于同体的成体干细胞就不存在这种限制.皮肤组织更新速度快、再生能力强,因此,来自皮肤局部的干细胞受到了重视.     

毛囊干细胞定向分化过程中Wnt信号通路介导的基因调控

皮肤的毛囊干细胞具有自我复制以及多向分化潜能,在毛囊形态发育和定向分化过程中,Wnt信号通路起决定性作用。参与这条信号通路的重要蛋白质,如Wnt蛋白、Frizzled、B—catenin、GSK313、APC、Axin等研究相对较早,且颇为深入。但对于这条通路下游的调节因子,尤其是细胞核内关键性转录因子Tcf3、Lef1,以及它们所调控的一些重要基因c—myc、eyelinDl等的研究仍处于起步阶段。本文就Wnt信号通路介导的基因调节毛囊干细胞定向分化的研究现状进行综述．为构建组织工程皮肤提供理论参考。     

表皮干细胞的研究近况

目前临床上虽然基本解决了大面积深度烧伤后的创面覆盖问题 ,但仍存在局部皮肤薄弱、抗拉及磨擦能力差等不足 ,特别是无皮肤附件 ,严重影响患者的生活质量。近来研究表明 ,表皮干细胞是皮肤发生、修复、改建的关键性源泉[1] ,了解表皮干细胞增殖分化及其调控机制 ,对于促进皮肤功能和结构的生理性修复意义重大。一、表皮干细胞的定位表皮干细胞为组织特异性干细胞 ,在胎儿期主要集中于初级表皮嵴 ,至成人时呈片状分布在表皮基底层。毛囊隆突部亦含有丰富的干细胞[1,2 ] ,基于Ｍｉｃｈａｅｌ等[3] 对角膜表皮干细胞与短暂扩充细胞的研究 ,Ｔ…     

毛囊干细胞体外诱导分化为血管内皮细胞的实验研究

目的探讨体外诱导人毛囊干细胞成血管内皮细胞的可行性。方法采用中性蛋白酶(Dispase)分离人毛囊干细胞,用含10 ng/mL VEGF、2 ng/mL bFGF及10%血清的EGM-2诱导液对其诱导,以无诱导因子的基础培养液为对照组,对每代细胞形态进行观察。诱导4代后,检测vWF(von Willebrand factor)与CD31的表达。结果在诱导液的作用下,细胞形态逐步向内皮细胞的铺路石样形态转变,对照组细胞形态改变不明显。至第4代,实验组已明显表达vWF与CD31,对照组表达不明显;流式细胞仪检测显示,实验组阳性表达率近80%,对照组则低于5%;RT-PCR显示,实验组表达vWF,对照组未见明显表达。结论使用含10 ng/mL VEGF、2 ng/mL bFGF及10%血清的EGM-2诱导液,可在体外诱导人毛囊干细胞分化成血管内皮细胞。     

影响神经干细胞定向分化的因素及其调控机制

神经干细胞（Neural stem cell,NSC）是一类具有高度自我更新和多向分化潜能的神经前体细胞。Gage在2000年将NSC的特点具体定义为：NSC作为一种专能干细胞具有以下特点：①NSC是来源于神经系统或能产牛神经组织的细胞;②NSC具有自我更新及增殖的能力;③NSC只能产某些特定种类的细胞,而不像胚胎干细胞可分化为机体所有的细胞;     

用毛囊隆突细胞构建复合皮的实验观察

目的 以人毛囊隆突细胞为种子细胞体外构建组织工程复合皮，在体观察其功能性修复全层皮肤缺损的可行性。方法 胶原酶消化法体外分离培养人毛囊隆突细胞和毛乳头细胞，实验分为A、B两组。A组将毛囊隆突细胞与毛乳头细胞按1：2混合，接种于胶原包被的聚羟基乙酸纤维支架中；B组单纯接种相同数量的毛乳头细胞。而后覆盖角质形成细胞膜片，构成组织工程复合皮，移植于裸鼠全层皮肤缺损创面。观察创面愈合情况，分别于术后2、4、6周在光学显微镜下观察移植物组织学变化。结果 组织工程复合皮能够有效修复A、B两组裸鼠全层皮肤缺损。术后2周，A、B组创面均可见完整的表皮及真皮结构。术后4-6周，A组复合皮表皮层明显增厚并形成基膜的钉突，可见毛囊样结构；B组仅表皮层有所增厚但基膜平整，未见钉突和毛囊结构形成。结论 以聚羟基乙酸真皮基质为支架，用角质形成细胞、毛囊隆突细胞和毛乳头细胞共同构建的组织工程复合皮，可以有效修复裸鼠全层皮肤缺损。其中毛囊隆突细胞参与了创面解剖修复，同时可能引导组织结构和功能的修复。     

骨髓间质干细胞及分化成骨的分子机制

骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal sterncells，BMMSC)在骨髓中的含量极少，但其扩增能力很强，能诱导分化为多种间质组织，本文就BMMSC的生物学特性及其在骨损伤修复和造骨调控的作用机制进行综述。     

微RNA调控间充质干细胞软骨分化的机制研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是软骨组织工程的一种理想种子细胞,体外条件下诱导MSCs软骨分化,将直接影响组织工程修复软骨的成败。微RNA（microRNA, miRNA）是一类由内源基因编码、长度为22个核苷酸左右的单链RNA,在细胞增殖、分化、凋亡以及疾病发生过程中发挥重要的调控功能,其在转录后水平调控与软骨分化相关转录因子及信号通路靶基因的表达,以此调控MSCs软骨分化。本文就miRNA调控MSCs软骨分化的机制研究进展作一综述。     

毛囊再生机制及干细胞诱导毛囊再生的研究进展

治疗脱发的手段主要有药物治疗与手术植发等,而这些治疗方案并不能使已完全微小化的毳毛毛囊得以再生.近年来,干细胞治疗的兴起为毛囊的再生提供了理论基础,通过查阅相关文献,总结归纳毛囊与毛发的基本结构和特性、如何调节毛囊生长、如何影响毛囊周期的转化,对干细胞治疗脱发类疾病的研究有重要意义.现综述如下.     

微RNA与间充质干细胞软骨分化调控机制研究进展

微RNA（microRNA,miRNA）是一类由内源基因编码、长度为22个核苷酸左右的单链RNA。相关研究表明,在细胞增殖、分化、凋亡以及疾病发生过程中微RNA发挥巨大作用,越来越多地引起人们的关注。MSC（mesenchymal stem cell,间充质干细胞）软骨分化过程中,微RNA在转录后水平调控软骨分化相关靶基因的表达,以此调控间充质干细胞软骨分化。     

体外诱导毛囊干细胞成血管平滑肌细胞的实验研究

目的探讨体外诱导人毛囊干细胞成血管平滑肌细胞的可行性。方法采用中性蛋白酶(Dispase)分离人毛囊干细胞,用含10 ng/mL PDGF-BB、10%血清的低糖DMEM诱导液对其进行诱导,无PDGF-BB的培养液为对照组,观察每代细胞形态,诱导4代后检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)与肌钙结合蛋白(Calponin)的表达。结果在诱导液的作用下,细胞形态逐步向平滑肌样转变,对照组细胞形态改变不显著。细胞免疫荧光检测显示,至第4代,实验组已明显表达α-SM actin与Calponin,对照组表达不明显;流式细胞仪检测显示,实验组α-SM actin与Calponin阳性表达率近50%,对照组则低于8%;RT-PCR显示,实验组表达Calponin,而对照组未见明显表达。结论使用含10 ng/mLPDGF-BB的低糖DMEM培养液可体外诱导人毛囊干细胞成血管平滑肌细胞。     

人毛囊外根鞘细胞的分离及培养

目的 建立毛囊外根鞘细胞的分离和培养方法.方法 利用中性蛋白酶分离得到单个毛囊,采用组织块法和消化法进行细胞培养,倒置显微镜、扫描及透射电镜观察细胞形态,培养各代细胞做生长曲线,RT-PCR检测干细胞相对特异性标识分子K15和细胞分化标识分子外皮蛋白的mRNA表达情况.结果 组织块法和消化法均能培养出毛囊外根鞘细胞,并可传代培养,组织块法细胞生长慢,不易汇合,消化法细胞增殖快.各代细胞中K15和外皮蛋白mRNA均有表达.结论 消化法适合毛囊外根鞘细胞的体外培养,该方法的建立为进一步分离纯化培养毛囊干细胞奠定了基础.     

表皮干细胞的研究进展

表皮干细胞（epidermal stem cells）主要位于表皮基底层和毛囊外根鞘膨凸部（bugle）。表皮干细胞通过不对称分裂完成自我更新,同时形成一个新的子代细胞——短暂扩增细胞（transit amplifying cells,TA cells）。TA细胞继续分裂扩增、上移从而形成其他各细胞层如颗粒细胞层、棘细胞层等。随着时间的推移,颗粒层细胞、棘层细胞发育成熟行使组织功能,并逐渐老化失去细胞器,被细胞自身分泌的角质蛋白所替代,形成透明层或者角质层直至脱落。这个过程又可称为：生长期、衰退期和静止期。表皮就是遵循这个不断循环往复的生理过程,自我更新,自我修复。     

神经干细胞定向分化调控的研究进展

神经干细胞的发现不仅改变了中枢神经系统神经组织不能再生的传统观点，还为中枢神经系统损伤和疾病的研究提供了新的思路和途径。中枢神经系统内神经组织细胞包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等多种细胞，其功能主要依赖神经元及其之间的神经信息传递，不同的神经元在形态结构上基本一致，但功能却各不相同。仅仅通过神经干细胞移植以期代替各种神经元的方法并不理想，较为理想的方法是在应用前根据靶组织类型对神经干细胞进行准确的定向分化诱导。     

胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生研究

目的：分离培养胎鼠的表皮干细胞及毛囊乳头层细胞，通过动物模型观察两者复合移植后，上皮形成及毛囊的再生情况。方法：采用IV型胶原分离培养胎鼠表皮干细胞，检测β1整合素及角蛋白15的表达水平，测定其细胞周期及克隆形成率（以角质细胞为对照）；分离培养毛囊乳头层细胞，并接种在纤维蛋白胶中，与表皮干细胞膜片复合形成全层皮肤等同物，移植在裸鼠全层皮肤缺损创面作为实验组，同时将胎鼠成纤维细胞替代乳头层细胞作为对照组，8－10周后观察创面及囊的组织学变化。结果：胎鼠表皮干细胞表达高水平的β1整合素及角蛋白15；细胞周期分析显示，G1期细胞百分率为94．9％，S期为3．5％，提示为慢循环细胞周期；角质细胞的G1期细胞有百分率为74．1％，S期为17．5％；表皮干细胞的克隆形成率为15．3％，明显高于对照组的6．7％；裸鼠创面愈合后8－10周，实验组可见新生毛囊形成，对照组未见到此现象。结论：能初步实现对胎鼠表皮干细胞的体外分离培养；在毛囊乳头层细胞的诱导下，胎鼠表皮干细胞可参与形成新的毛囊结构。     

体外培养表皮干细胞构建组织工程皮肤的研究

目的探讨应用表皮干细胞构建组织工程皮肤修复皮肤缺损的可行性。方法运用黏附实验将人表皮干细胞分选出来后大量培养，将成纤维细胞和表皮干细胞转移到真皮底物上构建组织工程皮肤，并将之移植于裸鼠皮肤缺损模型，于术后第1、2、4周处死动物，收集标本，进行组织学、透射电镜及免疫组织化学检查。结果组织工程皮肤移植后4周具备完整的表皮层和真皮层，表皮层中具备基底层、棘层、颗粒层和角质层。表皮细胞间还可以看到有桥粒、半桥粒、角质透明颗粒和粗张力微丝柬。表、真皮层间有连续的、完整的基底膜。真皮网架破坏明显，大量的成纤维细胞增殖活跃，胶原纤维排列整齐，有丰富的毛细血管。结论本研究所构建的组织工程皮肤组织学形态和超微结构上已接近于正常的皮肤，从而为临床修复皮肤缺损的研究打下了坚实的理论和实践基础。     

毛囊干细胞细胞膜片的构建研究

目的以毛囊干细胞作为种子细胞，构建细胞膜片，检测培养的细胞膜片的结构，为进一步进行动物试验奠定基础。方法采用中性蛋白酶（Dispase）分离人毛囊干细胞，构建细胞膜片。该膜片构建成功后，分别进行扫描电镜观察、HE染色、角蛋白15和角蛋白10免疫组织化学染色。结果经过1．2周的培养，细胞连接成片，呈现典型的“铺路石”状。将细胞膜片消化下来，HE染色显示该膜片由2～4层细胞组成，电镜观察示细胞排列紧密，细胞基质分泌多。免疫组织化学染色显示细胞膜片大部分细胞K15染色阳性，少量细胞K10染色阳性。结论由毛囊干细胞构建的细胞膜片与人正常表皮结构类似，可进一步深入研究。