β-榄香烯注射液对人肝癌HepG-2细胞侵袭、迁移的作用及其相关机制

目的探讨β-榄香烯注射液对人肝癌HepG-2细胞侵袭、迁移的作用及其相关机制。方法首先进行肝癌HepG-2细胞培养,设置实验组及对照组。实验组细胞给予不同浓度(10、20、30、50、100、200、400μg/mL)的β-榄香烯注射液处理,对照组细胞不添加任何药物处理。以MTT法检测HepG-2细胞活力,另采用Transwell小室迁移/侵袭实验检测HepG-2细胞体外迁移能力及侵袭能力;采用细胞-基质粘附实验测定HepG-2细胞的粘附能力;最后以Western blot法定量检测HepG-2细胞MMP-2、MMP-9基因的表达。结果 MTT检测结果显示,当β-榄香烯注射液浓度为50、100、200及400μg/mL时,HepG-2细胞的活力随β-榄香烯注射液浓度的增大而明显降低(P<0.05),具有浓度依赖性;细胞-基质粘附实验结果显示,随着β-榄香烯注射液浓度的增大,HepG-2细胞的粘附率明显降低(P<0.05或P<0.01);Transwell迁移/侵袭实验结果显示,随着β-榄香烯注射液浓度的加大,HepG-2细胞侵袭及迁移数量逐步降低,且β-榄香烯注射液浓度为20、30μg/mL时HepG-2细胞迁移及侵袭细胞数量明显降低,而迁移及侵袭抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01)。Western blot实验显示,随着β-榄香烯注射液浓度的加大,MMP-2及MMP-9蛋白表达量均逐渐降低,且对MMP-2蛋白表达的抑制作用更为显著。结论β-榄香烯注射液可有效降低肝癌HepG-2细胞的粘附能力,并抑制其侵袭及迁移,其作用机制很可能与其明显下调机体MMP-2及MMP-9蛋白表达相关。     

β-榄香烯增强奥沙利铂抑制人胃癌细胞的增殖及其机制

目的:探讨β-榄香烯联合奥沙利铂对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响,并进一步探讨其机制。方法:MTT法检测细胞的药物敏感性,流式细胞术PI染色检测细胞凋亡,Western Blot检测蛋白表达,应用SPSS(13.0软件包)进行统计学分析。结果:奥沙利铂以剂量依赖的方式抑制SGC7901细胞增殖,24h的IC50为(28.29±3.67)mg/L;低毒剂量(5μg/ml)的β-榄香烯联合奥沙利铂组细胞IC50明显降低至(14.04±0.71)mg/L,且明显增强了奥沙利铂诱导的细胞凋亡(P<0.05);进一步检测了β-榄香烯作用后GST-π蛋白的表达情况,结果显示β-榄香烯以剂量依赖的方式下调GST-π蛋白表达。结论:β-榄香烯增强奥沙利铂抑制人胃癌细胞的细胞毒作用,其机制可能与降低GST-π蛋白的表达有关。     

β-榄香烯增强奥沙利铂抑制人胃癌细胞的增殖及其机制

目的：探讨β-榄香烯联合奥沙利铂对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响,并进一步探讨其机制。方法：MTT法检测细胞的药物敏感性,流式细胞术PI染色检测细胞凋亡,Western Blot检测蛋白表达,应用SPSS（13.0软件包）进行统计学分析。结果：奥沙利铂以剂量依赖的方式抑制SGC7901细胞增殖,24h的IC50为（28.29±3.67）mg/L;低毒剂量（5μg/ml）的β-榄香烯联合奥沙利铂组细胞IC50明显降低至（14.04±0.71）mg/L,且明显增强了奥沙利铂诱导的细胞凋亡（P〈0.05）;进一步检测了β-榄香烯作用后GST-π蛋白的表达情况,结果显示β-榄香烯以剂量依赖的方式下调GST-π蛋白表达。结论：β-榄香烯增强奥沙利铂抑制人胃癌细胞的细胞毒作用,其机制可能与降低GST-π蛋白的表达有关。     

β-榄香烯联合紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

目的:观察联合β-榄香烯和紫杉醇对诱导胃癌细胞凋亡以及对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:β-榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印记检测凋亡相关蛋白的表达。结果:单药β-榄香烯作用SGC7901细胞24、48和72小时的IC50值分别为(52.56±6.26)、(28.69±2.36)和(13.33±0.64)μg/ml。单药紫杉醇作用24、48和72小时的IC50值为(7.23±1.98)、(1.72±0.76)和(0.22±0.19)μg/ml。选用低浓度药物(10μg/ml的β-榄香烯和2μg/ml的紫杉醇)联合处理SGC7901细胞24小时,与相应浓度β-榄香烯、紫杉醇单药组相比,两药联合组对SGC7901的增殖抑制率显著增强(P<0.05),细胞凋亡率显著提高。进一步研究发现β-榄香烯和紫杉醇联合后,诱导了PARP裂解以及显著下调了Bcl-2与Bax的比值。结论:β-榄香烯和紫杉醇联合用药后,可能通过下调Bcl-2与Bax的比值诱导PARP裂解,进而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

β-榄香烯对人食管癌细胞 EC9706增殖、凋亡及 caspase-3的影响

目的：研究β-榄香烯对人食管癌细胞EC9706增殖、凋亡及caspase-3表达的影响。方法采用不同浓度的β-榄香烯（0、10、20、30、40、50μg／ml）处理细胞24 h,CCK-8测定细胞增殖活力。以50μg／mlβ-榄香烯处理细胞0、6、12、24 h,CCK-8测定细胞增殖活力。以不加β-榄香烯组作为对照组,选取50μg／mlβ-榄香烯处理细胞24 h,流式细胞术测定细胞凋亡率,分光光度法测定caspase-3活性。结果随着β-榄香烯浓度的增加,人食管癌细胞增殖活力逐渐下降,呈浓度依赖性（P＜0．05）。以50μg／mlβ-榄香烯处理细胞0、6、12、24 h,随着时间的增加,细胞增殖活力下降,呈现时间依赖性（P＜0．05）。相比对照组,50μg／ml β-榄香烯处理细胞24 h后细胞凋亡明显增加（P＜0．05）,caspase-3活性明显增加（P＜0．05）。结论β-榄香烯可抑制食管癌细胞增殖、诱导其凋亡,并且其诱导凋亡的作用机制可能与促进caspase-3活化有关。     

邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白和微管蛋白表达的影响

背景与目的： 探讨邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)和苯并[a]芘[benzo(a)pyrene,BaP]单独或联合染毒对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白和α-微管蛋白表达的影响。 材料与方法： 分离纯化大鼠睾丸支持细胞,以1、10、100 μg/ml DBP和0.1、1、10 μg/ml BaP单独或依次联合染毒12、24、48 h后,用免疫荧光方法检测细胞中波形蛋白和α-微管蛋白的表达。 结果： 与DMSO组比较,染毒24 h后,10 μg/ml DBP与1 μg/ml BaP均可诱导波形蛋白表达水平下降(P<0.05),100 μg/ml DBP组和10 μg/ml BaP组的波形蛋白下降更为显著(P<0.01),100 μg/ml DBP＋10 μg/ml BaP联合染毒组波形蛋白的表达显著降低(P<0.01)。染毒48 h后,DBP和BaP单独染毒中、高剂量组波形蛋白的表达显著降低(分别为P<0.05和P<0.01);联合染毒各组的波形蛋白表达与DMSO组相比均显著减少(P<0.05或P<0.01),但与DBP和BaP各对应剂量单独作用组并无显著差异(P>0.05)。染毒24 h后,10 μg/ml BaP组α-微管蛋白表达明显增加(P<0.05);48 h后,100 μg/ml DBP组α-微管蛋白表达显著上升(P<0.05), BaP各组α-微管蛋白表达均显著增加。 结论： 一定剂量的DBP和/或BaP可诱导大鼠支持细胞内波形蛋白表达降低,微管蛋白表达增加,二者联合作用呈现拮抗效应。     

β-榄香烯对胃癌细胞Akt通路活化和凋亡相关蛋白表达的影响

目的：旨在探讨β-榄香烯对人胃癌BGC823细胞Akt通路的活化和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PARP表达的影响。方法：实验分为对照组和β-榄香烯处理组,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）试验法检测β-榄香烯对人胃癌BGC823细胞的药物敏感性,采用Western blot检测蛋白表达,应用SPSS（13.0软件包）进行统计学分析。结果：β-榄香烯处理胃癌BGC823细胞24h的IC50为46.56μg/ml,选用50μg/ml和200μg/ml的β-榄香烯处理24h,BGC823细胞凋亡率分别为12.33%和42.59%,与对照组相比有统计学差异（P〈0.05）。与对照组相比,β-榄香烯处理组Bcl-2与Bax的比值显著下调、伴有PARP裂解。进一步检测发现β-榄香烯处理组明显下调了Akt的磷酸化水平,从而有效抑制Akt信号转导通路。结论：β-榄香烯可以通过抑制Akt信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值和诱导PARP裂解,进而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

β-榄香烯联合照射对肺腺癌A549细胞凋亡及Livin基因表达的影响

目的:检测β-榄香烯乳对肺腺癌A549细胞株放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法:四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测β-榄香烯乳对A549细胞增殖的半数抑制浓度(IC50);将细胞分为对照组(C)、照射组(R)、β-榄香烯乳组(0.1×IC50、0.2×IC50)及β-榄香烯乳联合照射组(0.1×IC50+R、0.2×IC50+R),用不同浓度的β-榄香烯乳处理细胞24h后照射,流式细胞仪检测细胞凋亡率。实时定量PCR技术(real-time PCR)检测细胞Livin基因mRNA表达量。结果:MTT法测得β-榄香烯乳对A549细胞增殖的IC50值为115μg/ml;流式细胞仪检测β-榄香烯乳联合照射组细胞凋亡率明显高于单纯照射组及β-榄香烯乳组(P<0.05);β-榄香烯乳联合照射组细胞Livin基因mRNA表达量较照射组明显下降(P<0.01)。结论:β-榄香烯乳可抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡和抑制Livin基因mRNA表达,其放射增敏机制可能与这些作用有关。     

β-榄香烯对肾细胞癌的抗肿瘤作用及机制研究

目的:探讨β-榄香烯对肾细胞癌786-0细胞的抗肿瘤作用及机制.方法:浓度为50,100,150,200和250 μg/ml β-榄香烯作用于肾癌786-0细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力.50,150μg/ml β-榄香烯作用于786-0细胞24h,流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡和周期分布,免疫印迹法检测PARP裂解和凋亡相关蛋白的表达.结果:β-榄香烯对肾癌786-0细胞的抑制作用随着浓度和时间的增加而增强.流式细胞术结果提示β-榄香烯可诱导细胞凋亡,而对细胞周期分布无明显影响.β-榄香烯可裂解PARP,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达.结论:β-榄香烯可能通过诱导细胞凋亡发挥对肾癌786-0细胞的抗肿瘤作用.     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝还原法（MTT）观察华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;采用原位缺口末端标记法（TUNEL）及AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用逆转录—多聚酶链反应技术（RT-PCR）检测华蟾素注射液对HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA水平表达的影响。[结果]华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和浓度依赖性;华蟾素注射液作用HepG-2细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小,染色质浓缩边集,呈时间和浓度依赖性（P〈0.05）;PT-PCR法检测表明华蟾素注射液抑制HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA表达,表现浓度依赖性。[结论]华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,可能通过下调TopoⅠ、TopoⅡ表达实现的。     

β-榄香烯对肾细胞癌的抗肿瘤作用及机制研究

目的：探讨β-榄香烯对肾细胞癌786-0细胞的抗肿瘤作用及机制。方法：浓度为50,100,150,200和250μg/mlβ-榄香烯作用于肾癌786-0细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力。50,150μg/mlβ-榄香烯作用于786-0细胞24h,流式细胞术碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡和周期分布,免疫印迹法检测PARP裂解和凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对肾癌786-0细胞的抑制作用随着浓度和时间的增加而增强。流式细胞术结果提示β-榄香烯可诱导细胞凋亡,而对细胞周期分布无明显影响。β-榄香烯可裂解PARP,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达。结论：β-榄香烯可能通过诱导细胞凋亡发挥对肾癌786-0细胞的抗肿瘤作用。     

β-榄香烯对肝癌细胞SK-hep-1的迁移和侵袭力的影响

目的:观察β-榄香烯对肝癌SK-hep-1细胞的侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其对MMP2基因的调节.方法:将SK-hep-1细胞分为3组:control组、β-榄香烯(80μg/ml)组、TGF-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)(10μg/ml)组,RT-PCR检测各组细胞的MMP2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)mRNA表达;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对β-榄香烯作用的肝癌细胞迁移和侵袭能力进行分析.结果:β-榄香烯作用肝癌细胞中MMP2mRNA表达低于control组和TGF-β1组(P<0.05).β-榄香烯组穿膜细胞数(50±10)少于control组(150±16)及TGF-β1组(300±13),(P<0.05).β-榄香烯组细胞的迁移数(92±8)明显低于control组(180±14)及TGF-β组(300±20),差异具有统计学意义(P<0.05).结论:β-榄香烯能下调肝癌细胞SK-hep-1的MMP2mRNA表达,降低肝癌细胞的侵袭、迁移能力.     

β-榄香烯体外逆转人肺腺癌细胞PC9耐吉非替尼的研究

[目的]探讨β-榄香烯体外逆转人肺腺癌细胞PC9耐吉非替尼的作用及其机制.[方法]噻唑蓝(MTT)比色法测定吉非替尼对PC9/ZD的耐药性,计算耐药倍数.MTT法检测无细胞毒的β-榄香烯浓度,并检测此浓度逆转PC9/ZD的作用,计算逆转倍数.Western Blot检测耐药相关蛋白P-gp、survivin的表达情况.[结果]吉非替尼对PC9细胞的IC50为0.21 μmol/L,对PC9/ZD细胞的IC50为5.45μmol/L,耐药倍数为25.9.当β-榄香烯浓度低于10μg/ml时,对PC9及PC9/ZD的抑制率均小于10％,没有细胞毒性.β-榄香烯10μg/ml可逆转PC9/ZD对吉非替尼的耐药性,逆转倍数为2.68,同时细胞内P-gP及survivin的表达水平明显降低.[结论]β-榄香烯具有逆转PC9/ZD细胞耐吉非替尼的作用,可能与下调耐药细胞内P-gp、survivin表达水平相关.     

α、β-微管蛋白在乳腺癌变不同阶段的表达及意义

背景与目的:紫杉烷类是治疗乳腺癌最重要的化疗药物之一,通过促进微管蛋白聚合,最终导致乳腺肿瘤细胞凋亡.然而紫杉烷类的耐药性常常限制了治疗效果,故揭示α、β-微管蛋白在乳腺癌变过程中表达水平的变化显得尤为重要.本文探讨乳腺非典型增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)、导管内癌(ductal...     

β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,将β-榄香烯(浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml),单独作用于乳腺癌MCF-7细胞,加药24h、48h后用噻唑蓝(MTT法)法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测用药24h后对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响,选取合适的药物浓度(β-榄香烯125μg/ml),与顺铂(3μg/ml)进行联合用药。加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h后药物组对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响。结果:MTT法结果显示β-榄香烯单独用药24h、48h后,与对照组相比,实验组乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组(P<0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P<0.01)。与对照组相比,榄香烯能够使MCF-7细胞产生明显的G0/G1期阻滞(P<0.01)。结论:β-榄香烯单独或与顺铂联合作用均能抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药组,β-榄香烯和顺铂可协同(CDI<1)促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能与G0/G1期阻滞有关。     

ERK信号传导通路在β-榄香烯诱导肾癌细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨ERK信号传导通路在β-榄香烯诱导肾癌细胞凋亡中的作用.方法:以人肾透明细胞癌786-0细胞为研究对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞内磷酸化ERK及总ERK的表达水平.为研究ERK通路活性对β-榄香烯抗肿瘤作用的影响,将实验分为空白对照组,β-榄香烯单药组( 160μg/mL)、ERK抑制剂组(PD98059,20μmol/L)和联合用药组(PD98059+β-榄香烯).结果:40、80、160及320 μg/mL的β-榄香烯作用于786-0细胞24 h,细胞生存率逐渐下降,分别为(83.20±4.63)％、(74.29±3.50)％、(49.75±3.08)％和(16.99±4.73)％,相邻浓度间P均＜0.05.随着浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加.进一步研究发现,β-榄香烯可明显抑制细胞内磷酸化ERK的水平.同β-榄香烯单药组相比,联合用药组的细胞活力明显降低,差异有统计学意义[(52.73±6.36)％vs (39.24±3.24)％],P＜0.05.结论:β-榄香烯可能通过抑制ERK通路活性发挥对肾癌细胞的抗肿瘤作用.     

大鼠骨髓源内皮祖细胞分化过程Notch信号通路活化及榄香烯干预机制的探讨

目的:观察大鼠骨髓来源内皮祖细胞分化过程中Notch信号通路的活化情况及β-榄香烯对该通路的影响.方法:大鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)的原代培养;RT-PCR法检测不同培养时间(0、4、7、10、14 d)和不同浓度β-榄香烯(0、5、10、20 μg/mL)干预的EPCs中CD133、vWF和Notch信号通路靶基因Hey-2和Hes-1的表达.结果:随着EPCs培养时间的延长,CD133表达明显减弱,vWF表达无显著变化,Notch信号通路靶基因Hey-2和Hes-1表达增加;随着β-榄香烯浓度的增加,Hey-2和Hes-1表达逐渐减弱.结论:在EPCs分化过程中,Notch信号通路发生活化;β-榄香烯对EPCs的分化和Notch信号通路的活化有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性.推测,β-榄香烯可能会抑制EPCs分化为内皮细胞,抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤的生长和转移.     

榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌AGS细胞生长的实验研究

目的 研究榄香烯乳(elemene)单独或联合顺铂(cisplatin)对人胃癌AGS细胞增殖和周期的影响,并探讨两药是否有协同作用及其可能的分子机制.方法 榄香烯乳单独或联合顺铂作用人胃癌AGS细胞.MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;BrdU掺入标记增殖的AGS细胞,免疫荧光细胞染色法测定增殖细胞数;Western印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达.结果 榄香烯乳(10-160μg/ml)对AGS细胞生长的抑制作用呈现浓度和时间依赖性,与对照组比较,除10μg/ml作用12h外,其它各组差异均有统计学意义(P<0.05).细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例下降.榄香烯乳作用AGS细胞后,降低BrdU的渗入率,减少cyclinD1的表达.榄香烯乳(80μg/ml)联合顺铂(4μg/ml)对细胞增殖和周期的抑制明显强于单独用药(P<0.05).结论 榄香烯乳可抑制人胃癌AGS细胞的增殖并阻滞细胞于G0/G1期,与顺铂联合具有协同作用,其机理可能与降低cyclinD1的表达有关.     

卵巢上皮癌组织MyD88和β-Ⅲ微管蛋白表达生物学意义分析

目的:探讨髓样分化因子88(MyD88)和β-Ⅲ微管蛋白(β-tubulinⅢ)在卵巢上皮癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测50例卵巢上皮癌(化疗敏感组和耐药组各25例)和15例正常卵巢组织中MyD88和β-Ⅲ微管蛋白的表达。结果:50例卵巢癌组织中MyD88和β-Ⅲ微管蛋白的阳性表达率分别为36.0%和60.0%,明显高于正常对照组的0和13.3%,差异有统计学意义,P<0.05。MyD88和β-Ⅲ微管蛋白在耐药组中的阳性率分别为52.0%和80.0%,明显高于敏感组的20.0%和40.0%,差异有统计学意义,P<0.05。MyD88与组织分化程度和FIGO分期有关,r分别为-0.302和-0.330,P<0.05。β-Ⅲ微管蛋白与组织分化程度及有无淋巴结转移有关,r分别为-0.323和0.323,P<0.05。MyD88和β-Ⅲ微管蛋白表达呈正相关性,r=0.357,P<0.05。结论:MyD88和β-Ⅲ微管蛋白与卵巢上皮癌化疗耐药密切相关,可预测卵巢上皮癌患者的化疗敏感性。     

β-榄香烯诱导人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡及自噬的实验研究

目的 探讨β-榄香烯在骨肉瘤中诱导自噬发生的信号通路及其对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 以不同浓度(0、10、20、50、100、150μg/ml)的β-榄香烯处理人骨肉瘤143B细胞24、48 h后,应用CCK-8法检测细胞存活率;用0、20、50μg/mlβ-榄香烯处理143B细胞48 h后,应用流式细胞仪使用A...