维生素B6对H22小鼠肝癌细胞的细胞毒作用

目的：研究维生素B6（吡哆醇）对体外培养的H22小鼠肝癌细胞的细胞毒作用。方法：①细胞培养：H22小鼠肝癌细胞生长于含15％灭活小牛血清、 100 μ／ml青霉素和100 μg／ml链霉素的DMEM完全培养基中，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养；②MTT（噻唑蓝）法检测14种化疗药物对H22细胞的细胞毒作用；③不同浓度的维生素B6对H22细胞的作用：预先将盐酸吡哆醇（PN*CL）用无血清培养基配制成20 mmol/L、30 mmol/L、40 mmol/L、60 mmol/L的贮存液-20℃保存备用。各试验组终浓度分别为2 mmol/L、3 mmol/L、4 mmol/L、6 mmol/L，MTT法测定PN的细胞毒性；④维生素B6作用不同时间对H22细胞细胞毒性的影响：分别于培养24 h、48 h、72 h终止反应读取结果。统计学处理采用方差分析和Q检验。结果：按照相对抑制率IR％=1-试验组OD值／对照组OD值×100％的公式计算各种药物的抑制率，以IR＜30％为不敏感、30％≤IR≤50％为敏感、 IR≥50％为高度敏感作标准，对H22细胞高度敏感的有Ara-C（77%)和ICTX（74％）；敏感的有HRT（36％）、VP-16（31％）、CBDCA（42％）、eADM（45％）；其余均不敏感（IR=-14％至22％），因此作者选择1×105／ml细胞浓度作为本实验的基础，并从敏感药物中选择卡铂作为阳性对照。试验②中各实验组平均OD值（以±s表示）依次为0.775±0．028，0．666±0．046，0．579±0．038，0．469±0.041，而阴性对照组平均OD值为1.055±0.072，实验组对阴性对照组的IR%随给药浓度的增加而增加(26.5%,36.8%,45.1%和55.6%,P＜0.01)，而且终浓度为3 mmol/L的吡哆醇与终浓度为13.9 μg/ml的阳性对照卡铂的细胞毒作用相当，IR值均为36.8%，而PN终浓度为4 mmol/L时与浓度为31 μg/ml的eADM的作用相当。从所做的药物剂量-效应曲线上可知IC50=5 mmol/L。此外，药物与细胞接触的最初24 h各组平均OD值无明显差别(0.81±0.066;0.86±0.02;0.853±0.023;0.797±0.105;P＞0.05)，培养48 h(平均OD=0.775±0.028;0.666±0.046;0.579±0.038;0.469±0.041)和72 h(平均OD=0.74±0.086;0.50±0.046;0.42±0.062;0.32±0.02)后平均光密度值随给药浓度增加而增加，各组之间有显著差别(P＜0.01)。结论：维生素B6对体外培养的H22小鼠肝癌细胞的生长具有抑制作用，二者之间有剂量、时间依赖性关系，其抑癌作用同抗癌药eADM(31μg/ml)对H22细胞的抑制作用基本相当。     

脱水淫羊藿素对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究异戊烯基类黄酮化合物脱水淫羊藿素（AHI）对人肝癌细胞株MHCC-97H的增殖、迁移和凋亡的影响。方法:体外培养人肝癌细胞株MHCC-97H及人正常肝细胞株L02，分别用0、20、40、80、120、160、200 μg/ml浓度的AHI处理MHCC-97H细胞，用0、25、50、100、150、200、400、500 μg/ml浓度的AHI处理L02细胞。采用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移情况;Hoechst33342实验和流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:经0、20、40、80、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后，MHCC-97H细胞的存活率分别为（100.00±0.00）%、（97.41±2.10）%、（96.58±3.23）%、（87.72±4.85）%、（78.33±3.76）%、（56.97±2.61）%、（15.25±2.51）%，差异有统计学意义（ F=429.20， P<0.001）;80、120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、25、50、100、150、200、400、500 μg/ml AHI处理24 h后，L02细胞存活率分别为（100.00±0.00）%、（96.82±3.79）%、（95.36±3.43）%、（90.79±5.75）%、（77.67±5.66）%、（63.98±5.22）%、（34.22±4.01）%、（33.84±4.41）%，差异有统计学意义（ F=233.20， P<0.001）;100、150、200、400、500 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。AHI处理L02细胞24 h半抑制浓度（IC 50）为（300.20±17.10） μg/ml，明显大于MHCC-97H细胞IC 50（158.60±5.50） μg/ml，差异有统计学意义（ t=13.65， P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后，MHCC-97H细胞克隆数分别为1 993.00±46.29、1 355.00±54.84、998.33±21.03、218.33±35.95，差异有统计学意义（ F=954.80， P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后，MHCC-97H细胞愈合率分别为（51.68±1.93）%、（16.04±0.73）%、（8.88±0.31）%、（-6.94±0.46）%，差异有统计学意义（ F=1 616.00， P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。Hoechst33342实验显示，经0 μg/ml AHI处理的MHCC-97H细胞于倒置显微镜下显示出均匀的暗蓝色，并呈现出完整的细胞核状态;相较于0 μg/ml，120、160、200 μg/ml AHI处理的细胞出现皱缩、破碎的现象，细胞核形态异常，部分细胞核被染为亮蓝色，且该情况随着浓度的增加愈为明显。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后，MHCC-97H细胞凋亡率分别为（10.51±0.56）%、（42.23±0.87）%、（61.92±0.52）%、（72.05±0.74）%，差异有统计学意义（ F=4 677.00， P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理的MHCC-97H细胞Bax、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、Cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bcl-2蛋白相对表达量差异均有统计学意义（ F=30.43， P<0.001;F=212.80， P<0.001;F=475.30， P<0.001;F=10.75， P=0.004）;160、200 μg/ml AHI Bax蛋白表达与0 μg/ml AHI相比，均显著升高（均 P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI Cleaved Caspase-3/Caspase-3、Cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达与0 μg/ml AHI相比，均显著升高（均 P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI Bcl-2蛋白表达与0 μg/ml AHI相比，均显著降低（均 P<0.05）。 结论:AHI可抑制人肝癌细胞株MHCC-97H的增殖、迁移，并促进其凋亡。     

增加细胞内三氧化二砷浓度恢复耐三氧化二砷的K562细胞对其敏感性的研究

目的 探讨耐受三氧化二砷（ATO）的白血病ATO耐药K562细胞（K562/AS2细胞）内砷浓度与耐药性的关系.方法 亲代敏感K562细胞（K562/S细胞）按照逐步增加ATO浓度诱导,建立K562/AS2细胞.采用原子荧光光谱法检测细胞内砷浓度.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度ATO对细胞的毒性作用.结果 1μg/ml ATO培养24、48、72h后,K562/S细胞内的砷浓度比K562/AS2细胞增高[（15.63±0.42） μg/L比0μg/L、（22.27±0.15） μg/L比（3.51±0.12） μg/L、（24.31±0.21） μg/L比（3.61±0.11） μg/L;均P＜0.05].随着ATO浓度的增加及培养时间的延长,K562/AS2细胞内砷浓度逐渐增加（P＜0.05）,在1μg/ml和2μg/ml间砷浓度增加较快.K562/AS2细胞生长抑制率也逐渐增加（P＜0.05）,在1μg/ml和2μg/ml间增加较快.直线相关分析显示,当K562/AS2细胞与ATO接触分别为24、48和72 h时,其细胞生长抑制率均与细胞内ATO浓度呈正相关.结论 增加ATO浓度或延长ATO作用时间均可增加耐药细胞内ATO浓度,细胞内ATO浓度与ATO对细胞的毒性呈正相关,增加细胞内ATO浓度能够增强耐ATO K562细胞对ATO的敏感性.     

东亚钳蝎毒抗癌多肽对人肿瘤细胞系和动物移植瘤的作用

目的研究东亚钳蝎毒抗癌多肽(APBMV)对人早幼粒白血病细胞系HL-60和人肝癌细胞系SMMC-7721及对小鼠肝癌H22移植瘤的作用.方法体外应用MTT法、生长抑制实验和集落形成实验,观察APBMV对HL-60、SMMC-7721及H22瘤细胞的作用;体内实验采用小鼠H22实体瘤模型,检测肿瘤生长抑制率(IR)、白细胞计数(WBC)和脾脏指数(SI),观察APBMV对H22带瘤小鼠的影响.结果APBMV 对HL-60和SMMC-7721细胞均具较强的毒性作用,其IC50值分别为10.74 μg/ml和11.33 μg/ml; APBMV可显著抑制两种细胞的生长,剂量效应关系明显,HL-60和SMMC-7721细胞24h、48h和96h的IC50值分别为19.41 μg/ml、9.90 μg/ml、11.41 μg/ml和l5.87 μg/ml、13.05 μg/ml、8.70 μg/ml;APBMV浓度>8 μg/ml时,可明显抑制SMMC-7721细胞的集落形成(P<0.01),IC50为10.83 μg/ml.H22细胞经APBMV处理后,代谢MTT的能力明显低于对照组,但剂量效应关系不明显(P>0.05).APBMV能显著抑制H22带瘤小鼠的肿瘤生长,IR最高达40.30%( P<0.01), 小鼠WBC和SI无明显变化或略高于对照组,而5-Fu组小鼠WBC和SI均明显下降(P<0.01).结论APBMV是东亚钳蝎蝎毒中有效低毒的抗肿瘤成分,对HL-60、SMMC-7721细胞和小鼠H22肿瘤有显著抑制作用.     

毒黄素对非小细胞肺癌A549细胞株作用的实验研究

目的 研究毒黄素不同浓度和不同作用时间对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 分别取0.5、0.375、0.25和0.125 μmol／L毒黄素作用于A549细胞（实验组）,以不加毒黄素为对照组,分别培养24 h和48 h。采用CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC／PI凋亡试剂盒检测A549细胞增殖抑制率和凋亡率。划痕实验对比0.125 μmol／L毒黄素组和对照组（0 μmol／L毒黄素）在12、24和48 h细胞迁移率。结果 0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞增殖抑制率分别为（93.51±3.69）％、（40.38±3.08）％、（23.54±2.58）％和（13.07±2.37）％,48 h为（90.53±3.58）％、（53.72±3.02）％、（34.44±3.10）％和（24.78±2.43）％。0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞凋亡率分别为（78.68±2.22）％、（43.66±2.53）％、（20.81±2.59）％和（6.25±0.96）％,高于对照组的（1.57±0.52）％;0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组48 h细胞凋亡率分别为（88.66±3.16）％、（59.86±2.81）％、（27.89±3.48）％和（9.91±1.33）％,高于对照组的（1.59±0.55）％。0.125 μmol／L毒黄素组12、24和48 h细胞迁移率分别为7％、11％和16％,低于对照组相应的14％、26％和39％。结论 毒黄素对A549细胞有明显增殖抑制和促凋亡作用,并呈时间和剂量依赖性,且可抑制A549细胞迁移活性。     

根皮素诱导小细胞肺癌H446细胞凋亡的机制研究

目的 探讨根皮素对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法 采用20、30、40 μg／ml 根皮素分别处理人小细胞肺癌H446细胞,并设不加药对照组。采用MTT法检测不同浓度根皮素对H446细胞作用24、48及72 h的细胞增殖率;采用流式细胞术检测不同浓度根皮素作用24 h的H446细胞凋亡数量;采用Western blotting检测不同浓度根皮素对细胞浆中细胞色素C含量的影响;采用实时定量PCR（QPCR）检测不同浓度根皮素作用于H446细胞24 h pro caspase 3、Bax和Bcl-2基因的表达。结果 20、30、40 μg／ml根皮素均能抑制H446细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术检测显示,对照组细胞的凋亡比例为（4.23±0.25）％,经20、30、40 μg／ml根皮素处理后细胞的凋亡比例分别增加到（12.97±0.21）％、（18.48±0.24）％、（33.61±0.27）％,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;此外,根皮素剂量依赖性地增加细胞浆中细胞色素C的含量和pro caspase 3 mRNA和Bax mRNA的表达,同时抑制Bcl 2 mRNA的表达（P＜0.05）。结论 根皮素能够抑制H446细胞的增殖,其机制可能为通过调节线粒体中细胞色素C的释放和凋亡相关分子的表达促进H446细胞的凋亡。     

阿霉素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其免疫原性研究

[目的]研究阿霉素诱导的人肺癌A549细胞凋亡及免疫原性。[方法]体外培养人肺癌A549细胞,将阿霉素加入A549细胞培养液中,使其终浓度分别为1mg/L、3mg/L、5mg/L,12h后以吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色凋亡方法检测其诱导的细胞凋亡情况;以凋亡的A549细胞为抗原,体外致敏分离的正常人外周血单个核细胞,72h后以MTT法检测其对培养的A549细胞的杀伤效果。[结果]阿霉素按1mg/L、3mg/L、5mg/L终浓度作用A549细胞12h后,凋亡率分别为17.60%±1.77%,62.93%±1.70%,16.80%±0.65%。在外周血单个核细胞杀伤实验中,阿霉素诱导的A549凋亡细胞抗原组(A组)光密度(OD)值为0.66508±0.036859,正常细胞对照组(N组)OD值为0.94132±0.018455,凋亡抑制组(Z-A组)为0.71810±0.026841。A组与N组、Z-A组相比,OD值均显著降低(P<0.05)。[结论]阿霉素可诱导A549细胞凋亡,而由凋亡细胞致敏的体外单个核细胞可产生对A549细胞的杀伤效应。     

106. 胃癌原代培养体外抗肿瘤药物敏感实验

目的：肿瘤药敏试验在恶性肿瘤化疗中起着越来越重要的作用。为了提高化疗效果,实现“个体化”化疗方案,本文采用MTT分析比色法,比较观察了30例胃癌手术标本原代培养细胞对临床常用的7种化疗药物的敏感性。旨为临床胃癌手术患者选择有效安全的化疗药物提供实验依据。30例肿瘤标本均取自手术切除的新鲜组织,制成含活瘤细胞数为1×105／ml悬液,接种于96孔培养板内。实验组与对照组再分别加入不同浓度的化疗药物或1640培养液,每组设3个复孔。置37℃、5%CO2湿性培养箱中培养48 h后,每孔加MTT（5 mg/ml）10 μl,继续培养6 h,加终止液SDS 100 μl／孔,过夜后在自动酶标仪吸收波长570 nm条件测定各孔的光密度OD值。根据下列公式计算抑制率：抑制率（％）＝（1-实验孔平均OD值／对照孔平均OD值）×100％。抑制率≥50％为高度敏感(++);≥30％为敏感（＋）;≤29％为不敏感(-);30例标本中,有2例因细胞生长不良未能进行药敏评价。其余28例标本中,有4例(14.29%)标本对7种药物均敏感,有3例（10．72%)对7种药物均不敏感;本实验结果表明：不同个体间药敏结果存在很大差异。敏感程度依次为：丝裂霉素78．55%（22例）,5-氟脲嘧啶75％(21例）、顺铂71．44％（20例）、足叶乙甙46.43%（13例）、阿霉素42．86％（12例）、阿糖胞苷36．71％（10例）、长春新碱25％（7例)。由于个体肿瘤细胞生物学特性的差异,使不同癌瘤对同一种药物敏感性不一样,同一种癌瘤对不同化疗药物的敏感也相差甚远。这与临床常见的不同病人采用同一药物、同一剂量治疗而效果悬殊很大是相符合的。因此通过MTT比色法检测可用来指导临床个体化针对性化疗,对进一步提高胃癌综合治疗效果,有较重要的临床价值。     

尼妥珠单抗联合X射线照射对肺腺癌细胞A549的作用

目的:探讨表皮生长因子(Epidermal growth factor receptor,EGFR)受体抑制剂尼妥珠单抗(h-R3)联合X射线照射,对肺腺癌细胞系的A549细胞的作用.方法:肺腺癌细胞系A549细胞常规培养48 h后,分为对照组,单纯h-R3组,单纯照射组,h-R3联合照射组.h-R3组分别以终浓度0.5、5、50、100、1 000 μg/mL处理后继续培养24 h,照射组采用Varian-6MV直线加速器X射线照射2、4、8、10 Gy后继续培养24 h;h-R3联合照射组在照射前以50 μg/mL浓度h-R3处理后继续培养24 h.收集各组细胞进行甲基噻唑基四唑(MTT)法检测.测定细胞的光密度值(Optical Density,OD),绘制细胞存活情况,并在倒置显微镜下观察细胞形态变化.结果:对照组A549细胞的OD值为0.786 7±0.076 4,不同浓度h-R3组的OD值分别为0.793 6±0.084 6,0.823 4±0.068 8,0.760 3±0.057 3,0.790 2±0.063 7,0.820 8±0.077 0,与对照组比较无明显差异(P>0.05);不同剂量照射组OD值分别为0.246 0±0.023 1,0.330 8±0.033 6,0.343 0±0.028 1,0.317 5±0.030 7,明显低于对照组(P<0.05);50 μg/mL浓度h-R3联合不同剂量照射组OD值分别为0.192 3±0.014 6,0.231 8±0.020 6,0.293 0±0.024 3,0.193 7±0.021 8,与单纯照射组相比,其OD值均明显减少(P<0.01);h-R3联合照射组的A549细胞形态变化明显,存活细胞数明显少于单纯照射组.结论:尼妥珠单抗(h-R3)单独应用对A549细胞的生长增殖未见明显抑制作用,但增强了照射对A549细胞的生长抑制作用,其放射增敏的作用机制值得进行分子生物学水平的深入研究.     

塞来昔布对肺腺癌A549细胞MMP-2表达的影响

[目的]探讨塞来昔布对肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及分泌的影响。[方法]肺腺癌A549细胞分实验组和对照组,用ELISA法检测塞来昔布的不同浓度（10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）和20μmol/L的塞来昔布不同作用时间（6h、12h、24h）对A549细胞培养上清液中PGE2及MMP-2的浓度变化,同时用Westernblot法检测A549细胞MMP-2蛋白质表达情况。[结果]上述三种浓度塞来昔布处理A549细胞12h后上清液PGE2浓度（38.63±2.13,15.02±0.95,2.56±0.5pg/ml）,与对照组（45.56±0.93pg/ml）比较差异有显著性;MMP-2浓度（12.48±2.06,3.96±0.08,1.21±0.11pg/ml）,与对照组（25.38±1.034pg/ml）比较差异有显著性。20μmol/L的塞来昔布处理A549细胞经上述不同时间后上清液PGE2浓度（34.69±2.23,12.18±1.36,5.56±0.95pg/ml）,与对照组（45.56±0.93pg/ml）比较差异有显著性;MMP-2浓度（8.31±1.34,4.55±0.86,1.21±0.11pg/ml）与对照组（25.38±1.03pg/ml）比较差异有显著性。塞来昔布浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞培养上清液PGE2及MMP-2的浓度均逐渐降低,MMP-2蛋白质表达的条带逐渐减弱。[结论]塞来昔布能以浓度依赖性和时间依赖性方式抑制肺癌A549细胞PGE2、MMP-2的分泌,塞来昔布可能通过PGE2途径抑制肺癌A549细胞MMP-2表达从而抑制细胞侵袭能力。     

阿司匹林和吲哚美辛抑制胃癌细胞株MGC803细胞增殖实验研究

目的 非甾体类抗感染药(nonsteroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)以其抗感染和抗风湿的作用广泛应用于临床,近年来,NSAIDs对多种肿瘤的防治作用被广泛关注.本研究探讨NSAIDs阿司匹林(aspirin,ASP)和吲哚美辛(indomethacin,Indo)抑制胃癌细胞增殖的作用和机制.方法 MTT法检测2、4、8、10 mmol/L ASP以及200、400、800、1 000 μmol/L Indo对MGC803细胞增殖活性的影响;蛋白质印迹法检测ASP和Indo对MGC803细胞中CRP和IL-6蛋白表达的影响.结果 不同浓度的ASP和Indo对MGC803细胞具有增殖抑制作用,其中8 mmol/L ASP组和800μmol/L Indo组细胞的增殖抑制最明显,8 mmol/L ASP抑制率为(70.5±1.3)％,与2、4 mmol/L的(18.8±1.1)％和(59.5±1.7)％比较,差异有统计学意义,P＜0.01;800 μmol/L Indo抑制率为(79.9±1.9)％,与200、400、1 000 μmol/L的(31.5±0.7)％、(49.9±1.6)％和(59.0±1.0)％比较,差异有统计学意义,P＜0.01.并且8 mmol/LASP组和800 μmol/L Indo组对MGC803细胞的增殖抑制还具有时间效应,作用48 h的抑制效果明显,8 mmol/L ASP 48 h抑制率为(83.9±1.6)％,与24 h的(69.5±2.1)％比较,差异有统计学意义,P＜0.05;800 μmol/L Indo 48 h抑制率为(82.4±1.4)％,与24、72、96 h的(71.8±1.6)％、(72.8±1.6)％和(70.0±1.8)％比较,差异有统计学意义,P＜0.05.MGC803细胞高表达CRP和IL-6,并且ASP和Indo能下调MGC803细胞CRP和IL-6蛋白的表达水平,8 mmol/L ASP、800 μmol/L Indo下调CRP的表达分别达79.0％和88.9％,下调IL-6的表达分别达49.8％和61.0％.结论 NSAIDs ASP和Indo对胃癌MGC803细胞具有增殖抑制作用,并能下调MGC803细胞中CRP和IL-6的表达.     

人参皂苷Rg3 协同TRAIL促进肺癌H358 细胞凋亡的机制

[摘要] 目的：探讨人参皂苷Rg3 联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对肺癌H358 细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:肺癌H358 细胞培养完成后，0、50、100、200 ng/ml TRAIL 或0、25、50、100 μmol/L Rg3 作用H358 细胞48 h，按照实验方法分为对照组、50 μmol/L Rg3 组、100 ng/ml TRAIL 组及50 μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL 组。MTT法检测Rg3 和/或TRAIL 对肺癌H358 细胞增殖的影响，DAPI 染色荧光倒置显微镜观察Rg3 和/或TRAIL 对肺癌H358 细胞形态学变化的影响，流式细胞术检测Rg3 和/或TRAIL 对肺癌H358 细胞凋亡的影响,WB实验检测Rg3 和/或TRAIL 对各组肺癌H358 细胞内死亡受体（DR5）及caspase-8 表达的影响。结果：50 μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL 组与其他各组比较，肺癌H358 细胞的增殖抑制最明显（P<0.05）；DAPI染色后显示，50 μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组多数胞核皱缩，染色质凝集，荧光强度增加，并出现饱和碎裂等晚期凋亡形态学改变；50 μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组与其他各组比较，细胞凋亡率升高最明显，细胞内DR5 及caspase-8 表达增强最明显（均P<0.05）。结论：人参皂苷Rg3 联合TRAIL能够协同抑制肺癌H358 细胞的增殖及诱导细胞凋亡，其作用机制可能与人参皂苷Rg3 协同促进DR5 及caspase-8 的表达上调有关。     

柴胡皂苷d通过AKT/mTOR信号通路调控胶质瘤C6细胞自噬

目的 探讨柴胡皂苷d在胶质瘤C6细胞自噬中的作用及其机制。方法 分别以终浓度为0 μmol/L（Control组）、2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L、8 μmol/L、10 μmol/L、12 μmol/L的柴胡皂苷d作用胶质瘤C6细胞后,用CCK⁃8检测细胞增殖能力,后续分别采用克隆形成实验、划痕实验检测柴胡皂苷d（8 μmol/L）对胶质瘤C6细胞增殖能力和细胞迁移能力的影响,Western blot和qRT⁃PCR检测胶质瘤C6细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和AKT/mTOR信号通路相关蛋白及基因的表达情况。结果 与Control组比较,各浓度柴胡皂苷d均能抑制胶质瘤C6细胞增殖且增殖抑制率随着药物浓度的升高而升高（均P<0.01）。8 μmol/L柴胡皂苷d作用24 h后,与Control组比较,胶质瘤C6细胞的克隆形成数目显著减少［（479.33±30.66）个 vs （258.66±73.35）个,P<0.01］,细胞迁移率显著降低［（70.83±4.29）% vs （19.47±1.71）%,P<0.001］,自噬相关蛋白Beclin1和LC3的蛋白及mRNA表达水平均显著升高（均P<0.01）,而AKT和mTOR信号蛋白及mRNA表达水平均降低（均P<0.01）。结论 柴胡皂苷d可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导胶质瘤C6细胞发生自噬并抑制其增殖与迁移。     

钙网织蛋白在阿霉素诱导的早期凋亡A549细胞免疫原性中的作用

[目的]研究钙网织蛋白在阿霉素诱导的凋亡人肺癌A549细胞免疫原性中的作用。[方法]体外培养人肺癌A549细胞,将阿霉素加入A549细胞培养液中,使其终浓度分别为1×10^-3g/L、3×10^-3g/L、5×10^-3g/L,12 h后以吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双染法检测细胞凋亡;应用激光共聚焦显微镜观察凋亡A549细胞表面钙网织蛋白暴露情况。阿霉素3×10^-3g/L作用12 h后诱导的凋亡细胞为抗原组（A组）,A组加入钙网织蛋白阻断蛋白（A-Ca组）,分别刺激外周血单个核细胞,72h后以MTT法检测其对培养的A549细胞的杀伤效果。[结果]阿霉素3×10^-3g/L终浓度作用A549细胞12h后,凋亡率为62.93%±1.70%。经激光共聚焦显微镜检测凋亡A549细胞表面可见钙网织蛋白抗体荧光。外周血单个核细胞杀伤实验MTT检测OD值：A-Ca组0.537±0.056,A组0.437±0.023（P〈0.05）。[结论]阿霉素诱导凋亡的A549细胞表面有钙网织蛋白的暴露。阿霉素诱导的凋亡A549细胞经添加钙网织蛋白阻断蛋白后,其免疫原性下降,表明钙网织蛋白在其免疫原性中起重要作用。     

洛铂对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡作用的实验研究

目的 探讨洛铂（LBP）对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期HepG2细胞,分别采用不同浓度LBP（0、2.5、5、10、20 μmol／L）处理48 h。普通光镜观察细胞形态学改变;MTS法检测细胞增殖,并计算半数抑制浓度（IC50）;Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法及Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测Bax、Bak、Bcl-2、Bid、Bcl-XL、Survivin及PARP-1蛋白表达。结果 随着LBP浓度的升高HepG2细胞密度减少,离巢死亡细胞数目增多;光镜下可见典型核固缩、碎裂的凋亡细胞。LBP能显著抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05）;2.5、5、10、20 μmol／L的LBP作用HepG2细胞48 h后的增殖率分别为（92.11±1.79）％、（65.87±1.78）％、（51.57±0.81）％及（33.11±1.47）％; LBP作用HepG2细胞48 h的IC50为13.28 μmol／L。2.5、5、10、20 μmol／L LBP作用48 h HepG2细胞的凋亡率分别为（11.64±0.85）％、（20.99±2.21）％、（33.02±2.30）％和（40.77±1.58）％,与LBP 0 μmol／L 的（3.29±0.43）％比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.5、5、10、20 μmol／L LBP能够下调HepG2细胞中的Bcl-2、Mcl-1蛋白表达,上调Bax、Bid、PARP-1蛋白表达, 对Bcl-XL、Bak及Survivin蛋白表达无影响。结论 LBP能够诱导HepG2细胞凋亡、抑制细胞增殖,其可能机制与上调Bax、Bid和PARP-1蛋白以及下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达有关。     

吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及分子机制研究

目的 探讨吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分别以吡格列酮（0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L）和吉西他滨（50 μmol/L）作用0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8检测各时间点的细胞增殖情况,流式细胞仪检测72 h细胞周期及凋亡情况,4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色检测48 h细胞凋亡形态学变化,Western blot检测48 h细胞凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果 与0 μmol/L吡格列酮相比,吉西他滨及各剂量吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均降低（P＜0.05）;48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均升高（P＜0.05）,而S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,且细胞逐渐收缩,细胞核逐渐碎裂。与50 μmol/L吉西他滨组相比,10 μmol/L吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞作用48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均降低（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均升高（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞48 h 的S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）。结论 吡格列酮能抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,诱导其凋亡,可能通过上调MAPK/ERK通路实现。     

抗胃癌干细胞单克隆抗体的筛选鉴定及功能研究

目的:筛选鉴定靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体,为胃癌干细胞靶向治疗提供抗体候选药物。方法:以胃癌细胞系BGC-823为模型,采用流式细胞术分选CD44+细胞后检测其自我更新和致瘤能力。双色细胞免疫荧光检测单抗11H5和CD44在BGC-823细胞中的表达情况。流式细胞术分选11H5+细胞后检测其自我更新能力、细胞增殖和耐药能力。结果:流式细胞术分选CD44+细胞成球率明显高于CD44-细胞［（27.2±1.6）% vs （12.9±1.2）%］（P<0.01）,CD44+细胞的致瘤性比CD44-细胞至少高100倍。细胞免疫荧光结果显示单抗11H5识别的抗原能与CD44在BGC-823细胞上共定位。流式细胞术分选11H5+细胞体外成球率明显高于11H5-细胞［（21.4±2.0）% vs （6.2±1.0）%］（P<0.01）,耐药性也明显高于11H5-细胞(IC50值:0.986 μmol/L vs 0.315 μmol/L)。抗体体外功能研究发现,单抗11H5能显著抑制BGC-823细胞成球,抑制率达到47.9%。单抗11H5能抑制其sphere细胞的增殖,抑制率为44.9%（P<0.05）。经单抗11H5作用的耐药能力显著降低(IC50值:0.52 μg/ml vs 0.64 μg/ml)。结论:单克隆抗体11H5是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。     

紫甘蓝提取物对X线照射后舌癌细胞双向作用的实验研究

目的:探讨紫甘蓝提取物（purple cabbage extract,PCE）对X线照射后舌癌细胞的双向作用。方法:将对数生长期的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞及人正常口腔黏膜HOK细胞分为Tca8113细胞对照组（Tca CON）、Tca8113细胞10 μmol/L PCE组（Tca PCE-10 μmol/L）、Tca8113细胞50 μmol/L PCE组（Tca PCE-50 μmol/L）、Tca8113细胞照射组（Tca IR）、Tca8113细胞照射加10 μmol/L PCE组（Tca IR+PCE-10 μmol/L）、Tca8113细胞照射加50 μmol/L PCE组（Tca IR+PCE-50 μmol/L）及HOK细胞对照组（HOK CON）、HOK细胞10 μmol/L PCE组（HOK PCE-10 μmol/L）、HOK细胞50 μmol/L PCE组（HOK PCE-50 μmol/L）、HOK细胞照射组（HOK IR）、HOK细胞照射加10 μmol/L PCE组（HOK IR+PCE-10 μmol/L）、HOK细胞照射加50 μmol/L PCE组（HOK IR+PCE-50 μmol/L）。MTT实验检测加入不同浓度PCE对舌癌细胞Tca8113及正常口腔黏膜HOK细胞增殖的影响;流式细胞术检测6 MeV X 线直线加速器照射后（6 Gy）PCE对Tca8113及HOK细胞凋亡的影响;qRT-PCR实验检测在加入不同浓度PCE作用下对照射后Caspase 3及Caspase 9表达的影响。结果:MTT结果显示,PCE可明显抑制Tca8113细胞的增殖,其增殖抑制率随药物浓度的增加而升高,PCE对正常口腔黏膜HOK细胞增殖无明显的抑制率。流式细胞术结果显示,对于Tca8113细胞,PCE显著提高了照射后Tca8113细胞凋亡率（P＜0.05）;但对于HOK细胞,PCE显著降低了照射后HOK细胞凋亡率（P＜0.05）。qRT-PCR结果显示,对于Tca8113细胞,照射给药组（加10 μmol/L PCE组、加50 μmol/L PCE组）Caspase 3及Caspase 9的表达较单纯照射组明显上调（P＜0.05）;对于HOK细胞,照射给药组（加10 μmol/L PCE组、加50 μmol/L PCE组）Caspase 3及Caspase 9的表达较单纯照射组明显下调（P＜0.05）。结论:PCE通过调节凋亡通路对舌癌Tca8113细胞起到放射增敏的作用,对正常口腔黏膜细胞起到放射防护作用,即PCE对X线照射后舌癌细胞起到双向作用。     

Disulfiram联合铜对B淋巴细胞白血病细胞株增殖与凋亡影响机制探讨

目的 研究Disulfirum(DS)联合Cu(DS/Cu)对B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞株(nalm6细胞)增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 CCK8法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6的增殖抑制作用,Annexin V/PI法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6细胞的诱导凋亡作用,JC-1法检测不同浓度DS/Cu处理nalm6后线粒体膜电位的变化,蛋白质印迹法检测药物处理后线粒体通路相关蛋白(Bcl-2和Bcl-xl)的表达变化.结果 0.5 μmol/L Cu作用24h后对nalm6细胞的增殖抑制率为(6.39±4.93)％,与对照组比较差异无统计学意义,t=-2.244,P=0.154.而不同浓度的(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4μmol/L)DS联合0.5 μmol/L Cu对nalm6细胞均具有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为(22.29±6.69)％、(48.66±11.58)％、(50.83±12.61)％、(59.24±9.43)％、(62.74±9.17)％、(66.7±7.63)％、(72.13±7.94)％和(77.86±5.43)％,与对照组比较差异均有统计学意义,P值均＜0.05;24 h的IC50为(0.18±0.08) μmol/L.Annexin V/PI检测细胞凋亡结果显示,0.5 μmol/L Cu作用24 h后nalm6细胞的凋亡比例为(7.82±5.13)％,与对照组(8.34±6.23)％比较差异无统计学意义,t=0.112,P=0.916.而不同浓度的DS/Cu对nalm6细胞均具有显著的诱导凋亡作用,0.025、0.05、0.1、0.2和0.5 μmol/L的DS联合Cu(0.5 μmol/L)作用24h后的凋亡率分别为(17.84±7.68)％、(31.39±5.86)％、(60.41±13.87)％、(69.26±13.29)％和(81.37±12.72)％,与对照组比较差异有统计学意义,P值均＜0.05.JC-1法检测线粒体膜电位变化结果显示,单药Cu(0.5μmol/L)组的JC-1多聚体/单体比值为1.12±0.09,与对照组(0.90±0.13)比较差异无统计学意义,t=-2.442,P=0.071.不同浓度的(0.025、0.05、0.1、0.2和0.5 μmol/L)DS联合0.5 μmol/L Cu组处理nalm6细胞12 h后,线粒体膜电位水平明显降低,表现为JC-1多聚体/单体比值随浓度的增加而逐渐降低,分别为1.4±0.32、0.32±0.13、0.14±0.09、0.1±0.02和0.06±0.005,与对照组比较差异有统计学意义,P值均＜0.001.蛋白质印迹法显示,DS/Cu处理nalm6细胞12 h后能下调Bcl-2及Bcl-xl蛋白的表达.结论 DS/Cu对BALL具有增殖抑制及诱导其凋亡的作用,其作用机制可能是通过线粒体通路实现的.     

柚皮苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡及迁移的影响

目的 探讨柚皮苷对卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡及迁移的影响。方法 采用1、5、10、20 μmol／L柚皮苷处理对数生长期的SKOV3细胞,并设不加柚皮苷处理的SKOV3细胞为对照组。采用MTT法检测不同浓度柚皮苷处理48 h及20 μmol／L柚皮苷处理12、24、36、48 h的增殖情况。收集不同浓度柚皮苷处理48 h的SKOV3细胞,Annexin V FITC／PI双染或PI单染流式细胞术分别检测细胞凋亡和细胞周期,Transwell法检测细胞穿膜数以评价迁移能力,Western blotting检测p Akt和PTEN的表达水平。结果 MTT检测发现,经1、5、10、20 μmol／L柚皮苷处理48 h,SKOV3细胞的增殖率降低,除1 μmol／L外,5～20 μmol／L柚皮苷处理SKOV3细胞的增殖率低于对照组（P＜0.05）;10、20 μmol／L处理48 h的增殖率分别为（6195±687）％和（50.58±6.09）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L柚皮苷处理12、24、36、48 h的增殖率依次为（83.93±5.54）％、（73.10±3.58）％、（61.95±5.01）％和（53.00±7.67）％,均低于对照组（P＜005）。与对照组相比,1～20 μmol／L柚皮苷处理48 h的G0／G1期细胞比例和凋亡率升高,S期细胞比例降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。1、5、10、20 μmol／L柚皮苷处理48 h的细胞穿膜数依次为（61.83±6.77）个、（47.17±5.35）个、（32.17±5.95）个和（20.83±3.06）个,p Akt相对水平为0.545±0.050、0373±0035、0280±0054和0173±0034,PTEN相对水平为0.357±0.054、0.468±0.085、0.602±0.063和0.728±0.103,均优于对照组（P＜0.05）。结论 柚皮苷能显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖并促进其凋亡,降低侵袭能力,该过程可能与其抑制PTEN／Akt信号通路激活有关,为临床治疗卵巢癌提供可能线索。