过表达SIRT1对高糖诱导RVECs细胞的影响及对VEGF和PEDF表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子-1(SIRT1)对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(RVECs)增殖、凋亡的影响.方法:构建SIRT1过表达慢病毒载体,感染体外培养的RVECs细胞.实验分3组:(1)正常对照组(NG组):不处理;(2)高糖组(HG组):33 mmol/L葡萄糖处理;(3)SIRT1过表达慢病毒组(SIRT1组):33 mmol/L葡萄糖处理,同时转染SIRT1过表达慢病毒.采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测细胞SIRT1、血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的表达.采用噻唑蓝比色法和原位末端标记法(TUNEL)检测细胞增殖、凋亡情况.结果:与NG组较,HG组细胞SIRT1表达降低,VEGF和PEDF表达增加,细胞增殖率增加、凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与HG组比较,SIRT1组细胞SIRT1表达增加,VEGF和PEDF表达降低,细胞增殖率降低、凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.05).Pearson分析显示,SIRT1表达与VEGF和PEDF呈负相关(r=-0.814,P=0.005;r=-0.593,P=0.029).结论:过表达SIRT1能够抑制高糖诱导的RVECs细胞增殖、促进凋亡,并下调细胞VEGF和PEDF表达.     

PEDF对低氧状态下人支气管上皮细胞表达VEGF的影响

目的:研究色素上皮衍生因子(PEDF)对低氧状态下人支气管上皮细胞(HBE)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并探讨该作用与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的相关性?方法:体外培养的HBE细胞取第3~7代用于实验,氯化钴(CoCl2)100 ?滋mol/L模拟缺氧状态?实验分为4组:正常对照组(A组)?氯化钴干预组(B组)?氯化钴 + PEDF 50 ng/ml干预组(C组)及氯化钴 + PEDF 200 ng/ml干预组(D组)?RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α及VEGF 在mRNA水平上的表达差异;ELISA及Western blot法检测各组细胞VEGF蛋白表达水平;细胞免疫荧光染色法(IF)检测各组细胞HIF-1α蛋白在细胞质和细胞核中的表达情况?结果:①B组VEGF的mRNA水平较A组显著升高[为A组的(8.56 ± 0.67)倍,P < 0.01],C组与D组的VEGF mRNA水平较B组明显下降(P < 0.01);B组 HIF-1α mRNA的表达水平较A组明显升高(P < 0.01),B?C?D 3组间HIF-1α mRNA无统计学差异;②细胞培养基上清中B组VEGF表达量[(1 370.10 ± 42.98)pg/ml]较A组[(670.00 ± 23.35) pg/ml]明显升高(P < 0.01),且B组与C组[(816.19 ± 37.05) pg/ml]及D组[(646.47 ± 22.70)pg/ml]比较差异有统计学意义(P < 0.01)?③Western blot结果显示B组VEGF的蛋白表达量为A组的(3.99 ± 0.37)倍,差异有统计学意义(P < 0.01);C组与D组VEGF的蛋白表达水平较B组明显下降,差异有统计学意义(P < 0.05)?④IF结果显示,B组HIF-1α的表达水平及核内转移较A组和D组明显升高?结论:PEDF对低氧状态下HBE细胞高表达的VEGF具有一定抑制作用,且该抑制作用可能与PEDF调控HIF-1α有关?     

牛蒡子苷元对高糖刺激大鼠系膜细胞VEGF和PDGF—BB表达的影响

糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）是糖尿病（diabetesmellitus,DM）的严重并发症,也是其导致终末期肾病（endstagerenaldisease,ESRD）的主要原因,主要以系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）过度集聚为特点,并最终进展为肾小球硬化及肾小管间质纤维化。高血糖对各种肾脏细胞都有损伤作用。在不同的肾脏细胞中,高糖可以激活多种信号通路,刺激细胞因子产生。体内外研究表明,血小板衍生生长因子和（PDGF—BB）和血管内皮生长因子（VEGF）在DN及肾小球硬化症的发生、发展中发挥着重要作用。近年来研究表明中药牛蒡子具有降血糖活性,牛蒡子主要药用成分为牛蒡子苷（ARC）、牛蒡子苷元（ARC—G）及牛蒡子酚A、B等,     

冬虫夏草对糖尿病肾病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在大鼠糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾组织中的表达及冬虫夏草(Cordyceps sinensis,CS)干预后对其的影响,探讨冬虫夏草的抗缺氧损伤的肾保护机制。方法：健康雄性Wistar大鼠通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制作成糖尿病模型,4周时测定24 h尿蛋白>30 mg/d为DN模型大鼠(n=30),随机分为糖尿病肾病组(DN组,n=15)和冬虫夏草组(CS组,n=15),另取15只正常大鼠作为对照组(NC,n=15)。CS组予CS提取原液5.0 g/(kg?d)灌胃,NC和DN组均予以等量饮用水灌胃,分别于灌胃2,4,6周时随机处死三组大鼠各5只,检测24 h尿蛋白定量、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetyl glucosaminidase,NAG酶)、血清肌酐水平;HE及MASSON染色观察肾脏组织形态学变化;反转录PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA表达;免疫组织化学方法检测肾组织中HIF-1α及VEGF蛋白的表达。结果：与NC组相比较,DN组肾小管空泡变性明显,肾小球系膜区基质增多,24 h尿蛋白排泄量、尿NAG酶、血肌酐显著升高,肾组织HIF-1α和VEGF mRNA及其蛋白表达均显著增加(均P<0.05),两者的表达均随着病程延长而逐渐增强,且两组HIF-1α与VEGF表达呈正相关(r=0.850,r=0.887,均P<0.05);与DN组相比较,CS组大鼠肾小管病变程度减轻,24 h尿蛋白排泄量、尿NAG酶、血肌酐降低,肾组织HIF-1α和VEGF mRNA及其蛋白表达均下调(均P<0.05),但仍明显高于NC组(P<0.05),但CS治疗第4周、第6周HIF-1α的mRNA及蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论：DN病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达上调,两者呈正相关,提示DN肾组织存在慢性缺氧。CS可通过下调DN肾组织HIF-1α及VEGF的表达起到抗慢性缺氧损伤的肾保护作用。     

脂联素干预对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达色素上皮衍生因子的影响

目的:探讨脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法:体外常规培养大鼠系膜细胞,传代后分组:对照组(培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L) 、高糖A 、B组(培养液葡萄糖浓度分别为15,30 mmol/L)、脂联素A、B、C、D组 (30 mmol/L葡萄糖培养液+脂联素,使培养液脂联素浓度分别为2.5,5,10,20 mg/L),分别作用24 h后,RT-PCR法测定各组细胞PEDF mRNA的表达水平;ELISA法测定各组上清液中PEDF蛋白的含量.结果:(1)与对照组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达显著降低(P<0.05);(2)脂联素干预各组高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达恢复(P<0.01).结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF的表达,脂联素干预可逆转这一改变.     

肝癌患者血浆PEDF和VEGF表达水平及其与预后关系的探讨

目的观察肝癌患者血浆色素上皮衍生因子(PEDF)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平并探讨其与预后的关系。方法采用ELISA法检测肝癌患者43例(肝癌组)、肝脏良性疾病患者20例(良性肝病组)及健康对照者20例(健康对照组)血浆PEDF和VEGF水平;肝癌患者平均随访(12.02±0.23)个月,记录短期主要不良终点事件(SMAE)发生情况。结果血浆PEDF水平肝癌组较良性肝病组及健康对照组明显降低(P<0.01),VEGF水平明显升高(P<0.01),而良性肝病组与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肝癌患者随访结束后,高PEDE/VEGF比值(≥3)亚组22例发生SMAE 3例(13.64%),低PEDF/VEGF比值(<3)亚组21例发生SMAE 7例(33.33%),Kaplan-Meier生存曲线显示2组差异有统计学意义(P=0.039)。另外,与未发生SMAE的肝癌患者(33例)比较,发生SMAE者(10例)有更低的PEDE/VEGF比值(2.14±0.76 vs.3.49±1.12,P<0.01)。结论 PEDF和VEGF参与肝癌的病理生理过程,低表达的PEDF及高表达的VEGF反映肝癌发生、发展及转移情况,两者比值可能成为预测肝癌转移及预后的有效指标。     

高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞低氧诱导因子1α（hypoxia—inducible factor-1α，HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境，研究RPE细胞分别在5．56mmol／L葡萄糖（对照组）、5．56mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（低氧组）、25mmol／L葡萄糖（高糖组）以及25mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（联合组）的培养条件下，通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达，Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较，高糖组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白，对照组未能检测出HIF-1α蛋白；且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加（均P〈0．05）。与低氧组比较，联合组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组（P〈0．05）；同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加（均P〈0．05）。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成，且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用，在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定，同时也促进VEGF的表达增加。     

急性脑梗死患者血清VEGF、PEDF表达及其比值的变化和临床意义

目的 探讨急性脑梗死患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的表达以及其比值的动态变化,并探讨其临床意义。 方法 采用前瞻性对照实验的研究方法分为脑梗死组和正常对照组,对新诊断的41例急性脑梗死患者入院第1、3、7、14、28天应用双抗体夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测血清PEDF、VEGF浓度并计算VEGF/PEDF的比值变化,健康体检者作为正常对照组。 结果 急性脑梗死患者血清VEGF浓度随病程逐渐增高,第7天达到最高浓度(214.72±55.95)ng/L,与对照组比较,差异有统计学意义(t=2.439,P<0.05)。而急性脑梗死组血清PEDF浓度在入院后第1天最低(28.77±8.60)ng/L,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.063,P<0.05),随病程时间延长逐渐提高,第14天接近健康人正常水平。急性脑梗死组患者发病第1、3、7天血清VEGF/PEDF比值分别为7.48±1.98、7.86±2.83、7.39±2.18,均高于对照组5.93±1.99,差异有统计学意义(分别t=3.63,P<0.001;t=3.68,P<0.001;t=3.24,P<0.01)。 结论 VEGF/PEDF比值可以作为诊断急性脑梗死的一个检测指标,血清VEGF、PEDF浓度及其比值变化在急性脑梗死患者发病过程中有重要临床意义。      

PEDF与VEGF在子宫内膜异位症发生发展中的作用

目的：探讨色素上皮衍生因子（Pigment epithelium derived factor,PEDF）与血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）在子宫内膜异位症（内异症）患者子宫在位内膜,异位内膜及正常对照组内膜组织中的表达,并探讨二者在内异症患者的新生血管生成过程中的作用。方法：采用免疫组织化法检测34例内异症患者异位内膜,及在位内膜组织中PEDF与VEGF表达的蛋白含量,并与对照组进行比较。结果：研究组在位及异位子宫内膜组织均有PEDF和VEGF的蛋白表达,PEDF的蛋白表达异位内膜高于在位内膜,高于同期对照组正常内膜。VEGF的蛋白表达异位内膜低于在位内膜,对照组正常内膜低于在位内膜,差异有统计学意义（P〈0.05）。PEDF在对照组分泌期内膜表达低于增生期,而对照组分泌期内膜VEGF的表达高于增生期,二者均呈现出周期性变化。但研究组在位内膜,异位内膜PEDF及VEGF的表达失去了周期性变化,差异无统计学意义。结论：内异症患者PEDF在异位内膜的表达比在位宫内膜及对照组正常子宫内膜高,VEGF在位内膜的表达比异位内膜及对照组正常子宫内膜高。根据r-AFS分期法,PEDF在III、IV期患者在异位内膜的表达比I、II高,VEGF表达高低与r-AFS分期无明显关系。二者在EMT患者的在位内膜,异位内膜上的表达,可能参与内异症异位病灶的形成,而且二者与内异症患者的新生血管生成可能有关。     

丹参对糖尿病大鼠肾组织VEGF表达的影响及其保护作用

目的探讨丹参对糖尿病大鼠肾组织血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响及其保护作用。方法采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丹参治疗组。给药8周后,观察各组大鼠血糖（BG）、体质量（BW）、肾质量/体质量（KW/BW）、血尿素氮（BUN）、胆固醇（CHO）、内生肌酐清除率（Ccr）、尿白蛋白排泄率（UAER）,行肾组织HE染色,观察肾组织病理形态学改变,采用免疫组化方法分析肾组织VEGF蛋白的表达情况。结果糖尿病模型组各生化指标与正常对照组存在明显差异（P〈0.01）;丹参治疗组较模型组KW/BW降低（P〈0.05）,Ccr明显升高（P〈0.01）,BUN、CHO、UAER明显降低（P〈0.01）。糖尿病模型组较正常对照组肾组织VEGF蛋白表达明显升高（P〈0.01）;丹参治疗组较模型组肾组织VEGF蛋白表达降低（P〈0.05）。结论丹参对糖尿病大鼠肾功能具有保护作用,其机制可能是调节肾组织VEGF的表达,从而减轻肾脏病理损害,发挥其保护作用。     

高糖对肾小球系膜细胞Smurf2表达的影响

目的观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞胞内Smad泛素调节因子2(Smurf2)的表达,探讨泛素化降解在糖尿病肾病中的作用。方法将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、甘露醇组。分别用real ti me quantitative PCR法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smurf2的mRNA和蛋白的表达。结果(1)正常对照组系膜细胞Smurf2的mRNA和蛋白表达较弱。(2)高糖组Smurf2的mRNA和蛋白表达较正常对照组增强(P<0.05),呈浓度依赖性。结论高糖可诱导肾系膜细胞Smurf2表达增强。提示泛素-蛋白酶体途径可能参与了糖尿病肾病的病理进程。     

类风湿性关节炎滑膜中VEGF、bFGF、PEDF的表达分析

目的 检测类风湿性关节炎（RA）患者髋或膝部滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的表达,以研究VEGF、bFGF、PEDF在RA发展中的作用.方法 采用免疫组织化学法对20例RA患者滑膜组织中PEDF、VEGF及bFGF的表达水平进行了检测,并与10例骨关节炎和6例正常滑膜组织进行对照研究.结果 VEGF和bFGF在RA患者的滑膜组织中呈高表达,而在正常人滑膜组织中表达水平则较弱;PEDF在正常人和RA患者的滑膜组织中表达水平均较弱或不表达.结论 RA患者滑膜组织VEGF、bFGF呈过度表达,而PEDF则呈弱表达或不表达.     

高糖和MBL对体外培养的人肾小球内皮细胞表达IL-18的影响

目的观察高糖和甘露聚糖结合凝集素（MBL）对体外培养的人肾小球内皮细胞（HRGEC）表达白细胞介素-18（IL-18）的影响。方法体外培养正常HRGEC,按干预条件随机分为对照组（5mmol/L D-葡萄糖）、高糖组（30mmol/L D-葡萄糖）和甘露醇组（5mmol/L D-葡萄糖＋25mmol/L甘露醇）,培养72小时后分别采用实时荧光定量RCR法（Real-time PCR）和ELISA法检测各组细胞IL-18的mRNA及细胞培养上清液中的蛋白表达。另取细胞随机分为单纯高糖组和高糖＋MBL组,均用高糖培养72h后,分别加入等量的30%MBL缺乏人血清,高糖＋MBL组另加10μg/ml MBL,继续培养4h。采用免疫荧光法检测各组细胞表面凝集素补体途径（LCP）激活终产物膜攻击复合物（MAC）的沉积,并检测各组细胞IL-18的mRNA和蛋白表达。结果与其他各组相比,高糖组细胞的IL-18mRNA以及蛋白表达均明显增加（P〈0.05）;高糖＋MBL组细胞表面有明显MAC沉积,IL-18mRNA及蛋白表达与单纯高糖组相比明显增加（P〈0.05）。结论高糖可以诱导人肾小球内皮细胞炎症因子过表达;高糖和MBL共存时可促成LCP激活,并对DN的炎症状态具有促进作用。     

MG132对高糖刺激的肾系膜细胞中Smad7表达的作用

目的 观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾系膜细胞胞内Smad7 的表达,并以蛋白酶体特异性抑制剂MG132作为阻断剂,探讨泛素化降解在Smad信号中的作用.方法 将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖+MG132组、甘露醇组、正常对照组+MG132、30 mmol/L高糖+溶剂组等.分别用Real time Quantitative PCR法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smad7的mRNA和蛋白的表达.结果 (1)与正常对照组比较,高糖作用后,各组Smad7 mRNA的表达差异无统计学意义;(2)而正常对照组细胞Smad7蛋白表达较强;高糖组较正常对照组表达减弱(P<0.05),呈浓度依赖性,30 mmol/L高糖组加入MG132后,Smad7蛋白表达增强.结论 (1)高糖可诱导肾系膜细胞Smad7蛋白降解增加;(2)MG132可阻止高糖所导致的上述变化.提示泛素-蛋白酶体途径参与了糖尿病肾病Smad通路的信号调节.     

PEDF对人脐静脉内皮细胞和肺癌SK-MES-1细胞增殖的影响及作用机制

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对SK-MES-1细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响及可能的机制.方法 CCK-8法检测不同浓度PEDF在不同作用时间条件下对HUVECs和SK-MES-1细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度PEDF对此两种细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测PEDF对此两种细胞中血管内皮生长因子(VEGF)基因表达水平的影响.结果 CCK-8结果显示,PEDF对HUVECs和SK-MES-1细胞具有增殖抑制作用,呈一定浓度和时间依赖性(P<0.05);流式细胞术结果表明,实验组细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05),高浓度用药组凋亡率高于低浓度用药组(P<0.05);qRT-PCR结果表明,与对照组相比,PEDF能抑制HUVECs和SK-MES-1细胞中VEGF mRNA水平的表达(P<0.05).结论 PEDF的抗肿瘤作用主要包括抑制肿瘤血管生成和直接作用于肿瘤细胞两方面,PEDF对HUVECs和SK-MES-1细胞增殖的影响可能与降低VEGF表达水平有关.     

MG132对高糖刺激的肾系膜细胞中Smurf2表达的作用

目的 观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞胞内Smad泛素化调节因子-smurf2的表达,并以蛋白酶体抑制剂MG132作为阻断剂,探讨泛素化降解在糖尿病肾病中的作用.方法 将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、30mmol/L高糖加MG132组等.分别用Real time Quantitative PCR 法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞泛素连接酶Smurf2的mRNA和蛋白表达.结果 ①正常组细胞Smurf2的mRNA和蛋白表达较弱,高糖组Smurf2表达较正常组增强(P<0.05),呈浓度依赖性;②30mmol/L高糖组加入MG132后,Smurf2的mRNA和蛋白表达减弱.结论 高糖可诱导肾系膜细胞Smud2表达增强,MG132可阻止高糖所导致的上述变化.提示泛素-蛋白酶体途径参与了糖尿病肾病的发病.     

视瞻昏渺发病机理与VEGF、bFGF、PEDF表达

目的：观察脉络膜新生血管（CNV）动物模型视网膜色素上皮至脉络膜之间细胞因子VEGF、bFGF、PEDF表达的变化。方法：用半导体激光光凝建立CNV动物模型,于造模后1W,2W,3W,4W,8W分别行免疫荧光检查（FFA）;于造模后8W处死动物行HE染色观察视网膜和脉络膜的病理组织学变化,免疫组化法检测VEGF、bFGF、PEDF表达。结果：HE染色可见脉络膜新生血管形成。造模后模型组VEGF、bFGF上调,VEGF／PEDF值升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;PEDF值轻度上调,与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：半导体激光可诱导CNV动物模型,该模型可做为视瞻昏渺的动物模型进行实验研究。     

羊膜移植后碱烧伤兔眼角膜PEDF和VEGF的表达

目的探讨羊膜移植对兔眼碱烧伤角膜色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法新西兰白兔角膜碱烧伤模型被建立,左眼行羊膜移植,右眼作为对照。照相法观察兔眼碱烧伤角膜CNV及免疫印迹法检测不同时间点碱烧伤兔眼角膜中PEDF和VEGF的表达水平。结果羊膜移植组与对照组比较:羊膜移植组兔眼角膜碱烧伤后新生血管的生长速度较对照组慢(P<0.05);羊膜移植组兔眼角膜PEDF的表达水平较对照组高,而VEGF的表达水平较对照组低。结论羊膜移植上调PEDF的表达、下调VEGF的表达抑制兔眼角膜碱烧伤后CNV的形成。     

氟伐他汀对高糖诱导的大鼠系膜细胞ERK1/2和CTGF表达的调控

目的：观察氟伐他汀对高糖刺激下的大鼠系膜细胞ERK1/2活性及CTGF表达的影响,阐明糖尿病肾病(DN)的发生机制和早期防治。方法：实验分两部分,第一部分为重复已有的高糖对系膜细胞刺激作用的实验,验证高糖可通过激活ERK通路使系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达增加,且这种变化与高渗状态无关,分组如下：①正常对照组(NG);②高糖组(HG);③高渗组(MN);④NG+ERK抑制剂PD98059组(NG+PD);⑤HG+ERK抑制剂PD98059组(HG+PD)。第二部分观察氟伐他汀干预前、后ERK1/2活性和CTGF蛋白表达的变化,分组如下：①正常对照组(NG);②高糖组(HG);③正常糖+氟伐他汀组(NG+F);④高糖+氟伐他汀组(HG+F);⑤高糖+氟伐他汀及甲羟戊酸组(HG+F+M)。采用Western blotting、RT-PCR方法检测肾小球系膜细胞ERK1/2、CTGF蛋白及mRNA表达量,ELISA方法检测肾小球系膜细胞培养上清纤维连接蛋白（FN）含量,用考马斯亮兰法测定肾小球系膜细胞内总蛋白变化。结果：第一部分实验HG的ERK1/2活性、CTGF蛋白表达较NG明显增加(P<0.01),HG+PD的ERK1/2活性、CTGF蛋白表达较HG明显减少(P<0.01),而MN、NG+PD与NG比较差异无显著性。第二部分实验观察到HG的大鼠系膜细胞ERK1/2活性、CTGF蛋白及mRNA表达量较NG明显增高(P<0.01),且系膜细胞内总蛋白量和FN量明显增高(P<0.01);HG+F的ERK1/2 活性和CTGF mRNA及蛋白的表达较HG明显减少(P<0.01),同时系膜细胞内总蛋白量和FN量减少(P<0.01);HG+F+M的上述指标与HG+F比较差异无显著性。结论：氟伐他汀可能通过抑制ERK1/2活性降低肾小球内CTGF表达及FN含量,减轻肾小球肥大,起到抑制和延缓DN进展的作用。     

姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5 mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖 6.25 μmol/L姜黄素组,④高糖 12.5 μmol/L姜黄素组,⑤高糖 25μmol/L姜黄素组,⑥高糖 50 μmol/L姜黄素组,⑦高糖 100μmol/L姜黄素组.分别作用24 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用Western Blot法测定细胞内FN蛋白表达.结果:作用24 h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达.不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加.结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用.