人血浆DNA双重实时荧光定量PCR检测法的建立

目的 建立带有内参照的双重实时荧光定量PCR方法检测血浆DNA含量.方法 构建重组质粒DNA作为内参照物,采用共用下游引物的双重实时荧光定量PCR技术同步扩增人看家基因β-actin和重组质粒载体中人工合成DNA序列,定量检测健康成年人血浆DNA含量.结果 本法能在同一个反应管中对目的基因和内参照进行同步扩增,两者的扩增无相互干扰,特异性好;重组质粒DNA的平均扩增效率达90%,β-actin基因的平均扩增效率接近100%;本法批内变异系数（CV）11%,批间CV17%.结论 成功建立含有内参照的双重实时荧光定量PCR方法,可对血浆DNA进行定量检测.     

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术检测血浆（或血清）结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）DNA的技术。方法 建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTB DNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTB DNA含量。结果 18例非结板肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTB DNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例（18．2％）治疗前血浆（或血清）MTB DNA阳性。在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆（或血清）MTB DNA阳性检出率为27．8％（5／18）,其特异性达100％。结论 本研究证实了结核患者血浆（或血清）循环MTB DNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。     

实时荧光定量PCR检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎中的价值

目的：分析实时荧光定量PCR（Real Time PCR）检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法：分别用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测389份临床病人血清，并用t检验分析比较HBV—DNA阳性结果。结果：在血清学标志物组合模式中，多种组合都可检测出HBV—DNA含量，尤其是在传统认为没有HBV感染的血清中也可检测到一定程度的HBV—DNA含量。结论：实时荧光定量PCR检测HBV—DNA是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

目的研究实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用。方法对PCR在不同食品致病菌的检测效果进行比较,分析PCR在食品致病菌检测中的作用。结果实时荧光定量PCR技术在食品致病菌包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等多种致病菌都有着较为有效地检测结果。结论作为一种新兴的检测方法,PCR技术可以快速,准确地检测食品中的各种致病菌。为保障消费者的食品安全工作做出了很大的贡献。     

实时荧光定量PCR在肺炎支原体DNA检测中的应用

支原体（Mycoplasma）是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具胞壁的原核微生物。支原体种类繁多,对人致病的有肺炎支原体、人型支原体、解脲脲原体等。肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）引起的主要疾病有原发性非典型肺炎、咽炎和气管支气管炎。MP是儿科患者呼吸道感染的常见病原体之一。     

荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤方法初探

目的体外构建DNA氧化损伤模型,荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤。方法体外应用亚甲蓝联合可见光(MBL)方法建立DNA氧化损伤模型,通过8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)特异性切割氧化损伤位点8-羟基鸟嘌呤(8-oxoG),运用荧光实时定量PCR法检测不同比例混匀的OGG1酶切与未酶切的DNA氧化损伤模板。结果成功构建体外氧化损伤DNA模型,OGG1酶能特异切割氧化损伤位点;OGG1酶切DNA在定量PCR体系模板中所占比例,与线粒体DNA编码基因COⅡ扩增Ct值呈正相关。结论自制OGG1酶具有良好的生物活性,可以联合荧光实时定量PCR检测DNA氧化损伤。     

实时荧光定量PCR检测胸水端粒酶活性

端粒酶检测方法从端粒酶重复序列扩增方法（TRAP）、TRAP-ELISA法逐渐发展为实时荧光定量PCR（FQ—PCR）方法。本文采用的FQ—PCR方法对胸水内的端粒酶活性进行检测，现报道如下。     

实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA的应用评价

目的探讨实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA浓度的检测范围和检测健康人全血中核酸DNA的Ct本底值。方法采用试剂盒提取纯菌、健康人和临床患者血液中的核酸DNA,应用实时荧光定量PCR进行检测。结果经检测,40份健康人群血液标本Ct值平均值为37.0,标准差为1.9,Ct值95%置信区间为33.0 ~ 38.8。 将布鲁氏菌核酸DNA标准品倍比稀释（56.2 ng ~ 0.026 5 fg）,实时荧光定量PCR检测灵敏度为6.7 fg。结论实时荧光定量PCR检测纯菌核酸DNA的灵敏度相当于2个基因组DNA拷贝数,但用于检测血液标本尚待进一步研究。     

荧光定量PCR在乙型肝炎患者检测中的临床应用

目的　探讨荧光定量 PCR( fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)定量检测血清HBV-DNA的临床应用价值。方法　采用 FQ-PCR和 ELISA法检测 1 76例乙型肝炎患者血清 HBV DNA含量和 HBV血清学标志物 ,并进行比较分析。结果　 HBs Ag、HBe Ag和抗 -HBc三项阳性 ,HBs Ag、抗 -HBe、抗 -HBc三项阳性 ,HBs Ag、HBe Ag两项阳性 ,HBs Ag、抗 -HBc阳性的样品中 ,HBV DNA阳性率分别为 95 .1 %、83 .3 %、1 0 0 .0 %、81 .8% ,DNA拷贝数/ml分别为 2 .2 9× 1 0 7、1 .2 3× 1 0 6 、8.5 1× 1 0 6 、6.61× 1 0 5,其中以抗 -HBc-Ig M阳性组 DNA拷贝数为最高。结论　 FQ-PCR法检测 HBV DNA具有灵敏度高、结果可靠的优点 ,可检测 HBV感染和复制状态 ,对于乙肝的早期诊断、传染性判断和疗效考核具有重要的指导意义。     

荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

目的对Roche Light Cycler 480Ⅱ型荧光定量PCR仪(Roche 480)和ABI 7500检测乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)结果进行比对和偏倚评估,探讨不同检测系统间检测结果的可比性和偏倚的可接受性。方法按照美国临床实验室标准化委员会EP9-A2标准要求,以Roche 480为参比仪器,ABI 7500为实验仪器,对患者HBV DNA项目进行检测,通过比较这两种荧光定量PCR仪器间的系统误差,判断检测结果的可比性。结果Roche 480及ABI 7500检测HBV DNA具有良好的相关性(r=0.993 1),偏差在可接受范围内,系统误差临床可接受。结论 Roche 480及ABI 7500检测结果具有较好的一致性,可同时用于肝炎病毒DNA的检测。     

实时荧光定量PCR检测曲霉DNA技术的建立与临床应用

目的 利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于系统性曲霉感染的快速检测.方法 用自行设计的高效率引物对标准菌株和临床疑为系统性曲霉感染患者血标本进行实时荧光定量PCR检测,对方法的敏感度和特异度进行评价,并与半乳甘露聚糖抗原检测比较.结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量与预期分子量一致,熔解曲线峰值单一,对应温度值与预期值相同.检测97例可疑曲霉感染血标本,27例阳性,其中一次阳性7例,间断阳性14例,连续阳性6例,与临床诊断符合率为90%.结论 荧光定量PCR可敏感、特异地检测曲霉感染,有一定的临床应用前景.     

实时荧光定量PCR检测血清／血浆microRNAs临床应用前的准备

现已证明血清／血浆 microRNAs（miRNAs）表达谱的变化与多种疾病的发生、发展相关。血清／血浆miRNAs分子稳定,不易降解,且标本采集创伤小、便捷,非常适合应用于临床实验室检测。因此miRNAs极有可能成为未来疾病诊断和预后评估的分子标志物乃至治疗靶标。实时荧光定量 PCR 检测法（real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）操作简便,需要的 RNA 量较少,灵敏度极高,能在短时间内获得结果,并可同时检测多种miRNAs 表达,有良好的应用前景。本文将详细探讨现阶段用于血清／血浆miRNAs 定量检测的RT-qPCR方法,以及总结血清／血浆miRNAs 定量检测应用于临床检验应注意的问题。     

荧光定量PCR检测沙眼衣原体（CT）DNA及临床应用

沙眼衣原体(CT)是一类介于细菌和病毒之间的微生物,是重要的性传播疾病之一,虽然在某些人群中没有症状,但它可引起严重的后遗症,临床确诊比较困难。 我们于2001年5月开展荧光定量PCR检测工作以来,共检测501倒尿(阴)道分泌物中CT-DNA的含量,同时与金     

荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究

乙肝病毒血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (ＨＢＶ)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测ＨＢＶＤＮＡ是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定ＨＢＶ感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ -ＰＣＲ)克服了常规ＰＣＲ假阳性率高的缺点 ,实现对ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,可为乙型肝炎提供…     

实时荧光定量PCR检测低含量HBVDNA的分析

目的 探讨低含量乙型肝炎病毒DNA(hepatitisBvirusDNA,HBVDNA)的稳定性及其与HBV血清标志物的关系.方法 收集实时荧光定量PCR(real-timefluorescentquantitativePCR,RT-FQ-PCR)检测HBVDNA在500～5000IU/ml的标本,分成两组:(Ⅰ)500～1000IU/ml;(Ⅱ)1000～5000IU/ml.用相同方法重复检测DNA,同时用ELISA方法检测HBV血清标志物.结果 所有样本HBVDNA在500～1000IU/ml和1000～5000IU/ml的比率,第1次分别为41.1%和58.9%,第2次为34.2%和64.4%,两次结果在两个区间的分布差异无统计学意义.Ⅰ,Ⅱ两组样本两次PCR结果在相同范围的比率分别为48.3%,75.6%,差异有统计学显著性意义(P<0.01).Ⅰ,Ⅱ两组血清标志物HBsAg阳性、HBcAb阳性的比率分别为70.0%,75.6%;HBsAg阳性、HBeAg阳性的比率为11.7%,10.5%;HBsAg阴性、HBcAb阳性的比率为15.0%,13.9%.HBsAg阳性、HBcAb阳性与其他类比较差异有统计学显著性意义(P<0.01).结论 低含量HBVDNA(500～5000IU/ml)用RT-FQ-PCR两次检测重复性尚可,随DNA含量的增高,结果稳定性相应增高.相应的血清标志物以HBsAg阳性、HBcAb阳性最常见.     

逆转录实时荧光定量PCR检测p73 mRNA在结肠癌的表达

目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。     

核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量的性能评价

目的评价核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量的方法学性能。方法分析该检测系统的灵敏度、线性范围、精密度、与其他商品化的PCR检测系统相关性,并对132份临床标本进行检测分析。结果检测灵敏度为2.0×102Copies/ml;最低检测界限5.00×102Copies/ml。结果在5×102～5×106Copies/ml范围内呈线性,回归方程为y=0.245+0.945 x,r=0.998。批内CV 4.3%～7.6%,批间CV 8.9%～11.8%,总CV 9.9%～14.0%。与其他商品试剂对比检测,两者相关性良好(y=0.332+0.941x,r=0.952),结果相差在0.5 log以内。2组病例中,EB病毒急性感染组的血浆EBV DNA平均载量为8.2×104Copies/ml,EB病毒急性感染组与EB病毒既往感染组的血浆EBV DNA阳性率存在显著差异(P0.01),健康对照组未检测出血浆EBV DNA。结论核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量,具有准确、快速、简便的优点,适合临床实验室常规开展。