14例人乳头状瘤病毒16型E7基因结构和变异分析

目的分析江西地区宫颈癌患者HPVI6型E7序列突变情况,探讨其与宫颈癌发生的相关性。方法用棉拭子擦去宫颈口多余分泌物．用取样刷置于宫颈口顺时针方向旋转5-6周以获取足量的宫颈脱落上皮细胞。提取组织DNA,用HPV16E6特异性引物进行PCR扩增．对扩增的基因片段进行测序分析。结果在HPV16E7基因核苷酸及氨基酸序列变异中鳞癌有6例、CINⅢ6例和CINII2例,鳞癌和CINHI12例都有氨基酸错意突变,尤以A647GA646CC790T多见。结论表明这一地区HPV16、A647G、A646C、C790T变异可能与宫颈癌的发生密切相关,可能提示为致癌预警信息,为HPV基因变异与宫颈癌的关系研究提供更完善的理论依据。     

多重实时荧光定量PCR方法在高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测中的应用

摘要：目的?建立一种基于多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)技术的可同时检测14种高危亚型人乳头瘤病毒(HPV16、18、31、33、35、39、52、45、51、56、58、59、66、68)癌基因E6/E7 mRNA的方法。方法?对14种高危型HPV各自的E6/E7基因序列区域设计特异性引物和探针，配以优化的反应体系，形成HPV E6/E7 mRNA检测体系，评价方法检出限、特异性。收集223例临床样本，分别用自建的一步法MRT-PCR法与转录介导等温核酸扩增(TMA)技术(Aptima?HPV试剂盒)检测HPV E6/E7 mRNA，同时评估HPV E6/E7 mRNA检测结果与薄层液基细胞学检测、宫颈组织病理学检测结果的一致性。结果?建立的检测方法对常见的低危型HPV无交叉检出，且对14种高危型HPV的检测限可达10～100 copies/μL。该方法检测223例临床标本的结果与Aptima??HPV检测结果相比，一致性较好(Kappa=0.910)。以组织病理结果为CINⅡ及以上的作为阳性，MRT-PCR法临床检测敏感性为84.0%，特异性为94.4%，阳性预测值为65.6%，阴性预测值为97.9%。结论?建立的MRT-PCR方法具有特异性好、灵敏度高和稳定性好等优点，为HPV临床快速检测以及宫颈病变筛查提供了一个有效的技术平台。     

宫颈癌前病变中人乳头状瘤病毒16/18DNA整合状态的研究

目的探讨宫颈癌及癌前病变中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18DNA整合入宿主基因组的发生情况。方法选取128例HPV16/18阳性患者的液基细胞学剩余标本,其中炎症18例,CINⅠ35例,CINⅡ29例,CINⅢ24例,SCC22例。采用荧光定量PCR检测HPV16/18的E2和E6基因,根据E2/E6比值判定HPV16/18DNA的存在状态。结果①确定0.8和0.83分别为荧光定量PCR区分游离型和混合型HPV16/18的界值。②HPV16/18整合发生率与不同程度的宫颈病变有关,并且随着宫颈病变级别的升高,整合发生率呈上升趋势。③混合型在CINⅡ和CINⅢ中所占比例最高。结论HPV16/18整合是宫颈癌变的早期事件,与宫颈癌前病变的进展有关;荧光定量PCR可以作为细胞学筛查的一种有效方法,以发现向宫颈高度鳞状上皮病变、宫颈癌发展的高危患者。     

两种检测方法测定13种高危型人乳头状瘤病毒的比较研究

人乳头状瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发生的主要原因，及早发现及监测HPV感染是预防宫颈癌发生的重要手段。本研究采用实时荧光定量多重PCR法检测13种高危型HPVDNA，与美国Digene公司的第2代杂交捕获法（HybridCapture2，HC2）相比较，综合评价荧光定量多重PCR法检测HPV在宫颈病变筛查中的应用价值。[第一段]     

实时荧光定量PCR反应检测宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型和巨细胞病毒的协同感染

目的探讨宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型和巨细胞病毒协同感染的关系。方法采用实时荧光定量PCR反应(FQ-PCR)同时检测两种病毒的感染率。结果38例宫颈癌中检出HPV16/18型35例(阳性率92.11%),CMV11例(阳性率28.95%)。32例宫颈癌前病变(CIN)中检出HPV16/18型20例(阳性率62.50%),CMV7例(阳性率21.87%)。30例正常宫颈脱落细胞中检出HPV16/18型5例(阳性率16.67%),未检出CMV。结论宫颈脱落细胞HPV16/18型感染率随宫颈病变程度的加重而升高,且差异有显著性(P<0.05),CMV感染率随宫颈病变程度的加重而升高但差异无显著性(P>0.05),CMV仅是协同HPV16/18型感染导致宫颈癌的发生。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型感染

子宫颈病变是女性最常见的疾患之一,其中最严重的是宫颈癌,而人类乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的发生有密切关系[1]。HPV的亚型,现在发现已超过100种,其中感染生殖道的HPV亚型有近30种,可分为低危型和高危型[2,3]。低危型主要是HPV611型,与尖锐湿疣有关;高危型主要是HPV1618型,与宫颈癌发生相关。有文献报道宫颈鳞癌HPV感染率可高达93%～100%[3],因此,检测子宫颈病变是否感染HPV高危型成为防治宫颈癌的重要一环。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)方法[4],检测宫颈涂片后剩余的细胞内HPV1618型感…     

高危型人乳头状瘤病毒E6/E7mRNA检测对宫颈病变的诊断研究

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测对宫颈病变的诊断价值。方法选择我院2019年3月-11月接诊的疑似宫颈病变患者,筛选163例患者,采用电脑随机分组的方式,163例分为81例对照组以及82例研究组,对照组接受高危型人乳头瘤病毒(human papollomavirus,HPV)DNA检测,研究组患者均接受高危型人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测,对比两组患者的检测准确率。结果研究组慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)I型宫颈癌诊断准确率均高于对照组,有统计学意义(P<0.05);研究组与对照组在CIN Ⅱ型、CIN Ⅲ型诊断准确率上虽无统计学意义,但是研究组的准确率高于对照组。结论对于疑似宫颈病变的患者而言,接受高危型人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测,不仅能够有效的判断疾病的类型,且诊断准确率较高,值得推广。     

人乳头瘤病毒E6／E7mRNA在不同程度宫颈病变中的应用价值

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）E6／E7 mRNA水平在不同程度宫颈病变中的应用价值。方法选取2011年4月至2013年4月广东省中医院妇科门诊收治的HPV感染患者430例,将HPV‐DNA阳性标本根据病理资料分为炎症组、CINⅠ组、CIN Ⅱ组、CIN Ⅲ组和宫颈癌组。用反转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组标本的HPV E6／E7 mRNA水平,比较不同宫颈病变组间HPV‐DNA病毒载量及 HPV E6／E7 mRNA阳性检出率的差异情况。结果随着宫颈病变程度增加,HPV‐DNA病毒载量未呈现逐级递增的趋势,各病变组间的病毒载量两两比较差异无统计学意义（P＞0．05）;而HPV E6／E7 mRNA阳性检出率则逐级递增,除炎症组与CINⅠ组的检出率比较差异无统计学意义（P＞0．05）之外,其余各组之间的检出率两两比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 HPV E6／E7 mRNA与宫颈病变程度有高度的相关性,可作为宫颈疾病筛查的重要检测指标。     

荧光定量PCR在人乳头状瘤病毒检测中的应用

目的了解我院皮肤性病科生殖器疣患者的人乳头状瘤病毒(Hum an pap illom a viruses,HPV)感染情况。方法用荧光定量PCR法对38例尖锐湿疣(CA)患者和60例亚临床患者进行HPV 6,11,16,18检测。结果(1)男性患者和女性患者的阳性率分别为79.4%(54/68)和76.7%(23/30),两者差异无统计学意义。(2)CA患者疣体组织、亚临床患者的皮损标本检出率分别为94.7%(36/38)和68.3%(41/60),两者差异有统计学意义(P<0.05)。(3)38例HPV阳性病例中感染HPV6、11型占75.3%(58/77),感染HPV16、18型占10.4%(8/77),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)乳头瘤病毒感染无性别差异;(2)疣体组织的检出率高于其他皮损标本;(3)荧光定量PCR灵敏度高,特异性强,结果准确。     

实时PCR快速检测宫颈组织HPV16感染的应用

目的建立实时PCR技术快速检测宫颈组织HPV16感染.方法根据Gene Bank中HPV16E6序列,设计合成特异的引物和MGB荧光探针,优化实验条件,并对40例宫颈癌,38例宫颈非典型增生,20例正常对照宫颈组织标本进行HPV16 DNA检测.结果建立了灵敏、特异地检测宫颈组织HPV16 DNA的实时PCR技术;宫颈癌、宫颈非典型增生和正常对照宫颈组织中HPV16 DNA阳性率分别为42.5%、34.2%和0%;宫颈癌组织中HPV16 DNA平均拷贝数(106.01±1.22拷贝/mL)高于宫颈非典型增生组(105.78±1.37拷贝/ml),但差异无显著性(P＞0.05).结论实时PCR检测宫颈组织内HPV16感染,具有快速、简便、特异性强等优点,适用于临床常规检测.     

实时PCR快速检测宫颈组织HPV16感染的应用

目的建立实时PCR技术快速检测宫颈组织HPV16感染。方法根据GeneBank中HPV16E6序列,设计合成特异的引物和MGB荧光探针,优化实验条件,并对40例宫颈癌,38例宫颈非典型增生,20例正常对照宫颈组织标本进行HPV16DNA检测。结果建立了灵敏、特异地检测宫颈组织HPV16DNA的实时PCR技术;宫颈癌、宫颈非典型增生和正常对照宫颈组织中HPV16DNA阳性率分别为42.5%、34.2%和0%;宫颈癌组织中HPV16DNA平均拷贝数(106.01±1.22拷贝/mL)高于宫颈非典型增生组(105.78±1.37拷贝/ml),但差异无显著性(P>0.05)。结论实时PCR检测宫颈组织内HPV16感染,具有快速、简便、特异性强等优点,适用于临床常规检测。     

实时荧光PCR法在高危型人乳头瘤病毒检验中的诊断价值研究

将我院收治的96例人乳头瘤病毒(HPV)感染者临床资料作为研究对象,分别通过实时荧光PCR及二代杂交式捕获法(HCⅡ)检测患者样本,分析患者临床病理结果,比较两组方法不同宫颈病变HPV检出率及HPV阳性检出率的差异;PCR对宫颈上皮内瘤变HPV检出率为93.8%稍高于HCII 87.5%,比较无统计学差异(P0.05),PCR对慢性宫颈炎及鳞状上皮病变HPV检出率为64.3%显著高于HCII 35.7%,比较具有统计学差异(P0.05);PCR对HPV阳性检出率为71.9%(69/96)高于HCII 62.5%(60/96),比较具有统计学差异(P0.05),PCR、HCII检测方法总符合率为82.3%(79/96),在(CINII级及III级患者中上述两种方法与病理结果相关性较好(r2=0.953),同时PCR检测的特异性与灵敏性显著高于HCII,比较具有统计学差异(P0.05);实时荧光PCR法对高危型人乳头瘤病毒诊断效果好,其对HPV特异性及灵敏性均较高,与病理结果的相关性较好,值得临床选择。     

实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒应用研究

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)的应用价值。方法随机选择2015年2月至2016年2月于本院就诊的宫颈病变患者203例,采用实时荧光定量PCR和第二代杂交捕获法(HCⅡ)对宫颈组织标本进行HPV DNA检测,对检测结果进行分析。结果 77例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为93.51%和85.71%,二者比较差异无统计学意义(P0.05);和72例慢性宫颈炎及鳞状上皮病变患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为59.72%和36.11%,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。203例患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为71.43%和57.64%,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论实时荧光定量PCR和HCⅡ都可用于HPV DNA检测,二者对某些类型宫颈疾病的检测阳性率存在差异。实时荧光定量PCR检测对HPV感染具有一定的辅助诊断意义,有利于宫颈类疾病的早期诊治,值得推广应用。     

人乳头状瘤病毒感染宫颈病变程度与E2、E6、E7基因表达水平相关性研究

目的 从分子水平探讨E2及E6、E7基因在子宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌发病过程中的相关性及临床意义.方法 纳入2018-02-2019-10期间感染HPV16型的因CIN及宫颈癌就诊于我院行宫颈活检术、宫颈锥切术、宫颈癌根治术的患者100例为实验组,同期因其他子宫良性肿瘤于我院行全子宫切除术的患者15例作为对照组...     

高危型人乳头状瘤病毒16,18型DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值

目的评价高危型人乳头状瘤病毒16,18型(HPV16,18)DNA检测在宫颈病变筛查中的价值。方法收集209例病理组织学结果为癌及癌前病变[宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈浸润癌]和296例病理组织学为良性病变(炎症、息肉等),并同时做了液基细胞学检查、HPV16,18 DNA检测的病例,统计比较HPV16,18 DNA检测与液基细胞学检查对癌及癌前病变的敏感性、特异性及阴性预测值;比较不同病变程度分类患者中HPV16,18的检出率。结果 209例癌及癌前病变患者中HPV16,18阳性158例,液基细胞学阳性[低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、不除外高级别鳞状上皮细胞(ASC-H)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌]128例。296例宫颈良性病变患者HPV16,18阳性43例,液基细胞学阳性2例。HPV16,18 DNA检测对癌及癌前病变的敏感性为75.6%,液基细胞学为61.2%,两者比较差异有统计学意义(χ2=12.69,P<0.01),HPV16,18 DNA对癌及癌前病变的检出率明显高于液基细胞学。HPV16,18 DNA检测特异性为85.5%,阴性预测值为83.2%;液基细胞学特异性为99.3%,阴性预测值为78.4%;CINⅡ病变的HPV阳性检出率明显高于CINⅠ(χ2=6.69,P<0.05)。结论高危型HPV16,18感染与宫颈癌及宫颈癌前病变的发生、发展密切相关,HPV16,18 DNA检测对癌前病变和宫颈癌的敏感性高于液基细胞学、特异性低于液基细胞学,对宫颈炎、息肉等良性病变的阴性预测值高于液基细胞学,检测HPV16,18 DNA有着重要的临床价值。     

A型呼吸道合胞病毒荧光定量逆转录PCR检测方法的建立与应用

人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus，hRSV）是引起婴幼儿冬春季下呼吸道感染最常见、最重要的病原体之一。根据病毒表面糖蛋白的抗原差异，可分为A、B两型，在我国流行的以A型RSV为主。本实验室在建立RSV逆转录（RT）-PCR检测方法的基础上，利用Taqnmn荧光定量PCR技术，建立了A型RSV荧光定量RT-PCR检测方法，有利于RSV的快速诊断和型别鉴定。     

高危型人乳头状瘤病毒联合肿瘤标志物检测诊断宫颈癌的临床价值

目的分析高危型人乳头状瘤病毒联合肿瘤标志物检测诊断宫颈癌的应用价值。方法选择2018年1月-2020年1月期间收治的150例宫颈癌患者,50例CIN(宫颈上皮内瘤病变)患者以及100例健康对照组,对入选者采用高危型人乳头状瘤病毒联合肿瘤标志物检测方法。结果①统计软件对比对照组、CIN组以及宫颈癌组CEA、CA125、CA199以及SCCA水平,组间数据差异显著,具有统计学意义;而对比三组HE4水平,组间并无统计学意义产生;②宫颈癌Ⅰ期和Ⅱ期、Ⅲ期SCCA和HE4经统计对比,组间差异显著具有统计学意义;Ⅲ期CEA和CA125水平与Ⅰ期和Ⅱ期相比,组间差异显著具有统计学意义,Ⅲ期CA199和CA125水平与Ⅰ期和Ⅱ期相比,组间差异显著具有统计学意义。结论诊断宫颈癌采用高危型人乳头状瘤病毒联合肿瘤标志物检测可将诊断正确率提升,具有临床应用价值。     

深圳市妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、E7致癌基因的序列分析

目的 检测深圳市宫颈癌患者癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列.方法 采用PCR技术扩增1例在深圳生活17年宫颈癌HPV16型阳性患者组织中HPV16 E6、E7基因,对其进行克隆、构建重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析.结果 成功地克隆了HPV16 E6、E7基因,测序分析表明克隆的HPV16 E6、E7基因与GenBank收录的德国标准株相比完全一致.结论 深圳市妇女宫颈癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列与德国标准株相同.     

人乳头状瘤病毒及其L1蛋白检测在宫颈病变诊断中的应用

宫颈癌（cervical cancer,CC）是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一,仅次于乳腺癌而居于第二位,在发展中国家尤为常见,是妇科三大恶性肿瘤之一,全世界每年都有约20万的妇女死于该疾病.宫颈癌的发生、发展在近二十年中呈现明显上升趋势,其发病与许多因素有关,且农村高于城市,近10年来有持续上升并趋于年轻化.从癌前病变发展到宫颈癌大约需10年的时间,而早期宫颈癌的治疗效果和5年生存率位于恶性肿瘤的前列.为此我们采用聚合酶链反应（Polymerase chain rection,PCR）、基因芯片和免疫组化技术对胜利医院妇科门诊104例疑似宫颈癌或癌前病变的患者和34例健康查体女性,进行了宫颈细胞HPV检测.