PCR技术临床实验室应用价值的评价

随着分子生物学技术的发展,聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术已广泛应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病的诊断,如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、人类白细胞表面抗原（ＨＬＡ）配型、法医学方面的鉴定工作等。现就是否所有的临床实验室都需要开展ＰＣＲ技术及ＰＣＲ技术检测病原微生物的临床意义谈谈我们的看法。１目前国内临床实验室应用ＰＣＲ技术存在的问题在设施方面,如仪器显示的温度与孔内的温度不一致,有孔间差;自动化程度较低,人工操作人为误差较大;实验室布局不合理,不能满足３个分开的房间进行分阶段操作（…     

PCR试剂盒保存方法的探讨

聚合酶链反应( polymerase chain reaction,PCR)又称体外基因扩增技术.1985 年美国PE公司人类基因研究室Muliss等人发明了该项技术,极大地推动了生命科学各个领域的发展并因此获得诺贝尔奖.近年来,PCR技术在临床应用越来越广泛,它已使临床检测水平跃上一个新台阶.但在临床检测过程中,发现PCR结果有时不太稳定,这与许多因素有关,如PCR试剂盒的保存条件、PCR操作环境、样品处理的手段等等.本文对乙型肝炎PCP试剂盒的保存条件问题做了一些研究.     

罗氏Lightcycler荧光PCR仪检测结果中文操作系统

罗氏Lightcycler实时荧光定量PCR仪是目前国内临床基因扩增检验实验室首选的检测仪器，也是卫生部临床检验中心推荐的定量检测仪器。随着卫生部临床检验中心对各地临床基因扩增检验实验室认可工作的开展，该PCR仪的应用逐渐广泛，但对各家医院的实验室来说都存在操作软件不能直接生成中文报告的问题。由于其操作软件为英文版，且要求英文版的win2k或NT操作系统，软件默认的结果报告只是数据，不能作为正式检验报告单发给患者。为此，我们利用office2000中的Access和Word应用程序，巧妙地解决了中文报告单的生成问题，而且同时建立了检验结果管理系统数据库，以便于结果的查询和分析，现简述如下。     

荧光定量PCR技术及其在临床上的应用

荧光定量PCR（Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction FQ-PCR)技术是在90年代末期发展起来的一项全新技术。经过几年的实践及临床应用，已获得了较为稳定的检测效果。作为一种体外基因扩增技术，它能敏感地检测初始模板浓度及基因变异等情况。它的出现，克服了传统PCR技术普遍存在的假阳性及不能定量等问题，使得PCR技术更广泛地应用于临床，在监测患者病情、预后、指导用药等方面有着广阔的应用前景。本文概述了FQ－PCR技术及其在临床上的应用，即常见病原体的检测及其在分子遗传学和法医学中的应用。     

全国临床基因扩增检验实验室技术验收及人员培训全面展开

卫生部于 2 0 0 2年 1月 14日印发了《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发 [2 0 0 2 ]10号 ) (以下简称《办法》)后 ,卫生部临床检验中心 (以下简称部中心 )根据文件精神 ,即着手准备临床基因扩增检验实验室的技术验收工作 ,在 2 0 0 2年 2月 2 0日也下发了《临床基因扩增检验实验室工作规范》(卫检字 [2 0 0 2 ]8号 ) (以下简称《工作规范》) ,编辑出版了全国临床基因扩增检验实验室技术人员上岗培训统一教材《临床基因扩增检验技术》(人民卫生出版社 ,2 0 0 2年 8月 ) ,制定了临床基因扩增检验实验室的验收原则及相关文件。现全…     

PCR技术及其在实验诊断中的应用

基因扩增聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)，这项技术自1988年Kary Mullis首次报道以来，由于耐热DNA聚合酶和热循环自动仪器的研制成功。仅几年之间就以惊人的速度广泛应用于分子生物学各个领域。     

应用生物发光技术定量检测PCR扩增产物

目的　建立一种基于生物发光技术的定量检测PCR产物的方法 ,并用于HBV定量PCR检测。方法　首先利用ATP硫酰化酶 (ATPsulfurylase)将焦磷酸 (PPi)定量转化成ATP ,然后利用虫荧光素酶 (luciferase)系统发光检测ATP ,从而确定样品中PPi含量。利用 2次PCR法扩增HBVDNA目的片段 ,并进行回收纯化定量 ,以之作为阳性标准模板制作标准曲线。选择适当的循环次数扩增样品中HBVDNA ,利用化学发光法检测扩增产物中PPi的量 ,进而确定样品中HBVDNA模板的量。结果　当起始模板量为 (10～ 5 )× 10 5拷贝 ,循环次数为 2 5 ,发光值与起始模板浓度呈现良好的相关。检测 32份样品血清 ,其中 2 3例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 1 6× 10 5拷贝 / μl,9例HBsAg(+)、HBeAg(- )、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 5 6× 10 3 拷贝 / μl。结论　本方法是一种操作简便、灵敏度高的定量PCR方法     

提高PCR检测结果可信性的措施

PCR技术问世以来在一些疾病病原学的诊断方面得到了广泛的应用。高灵敏度和高特异性是PCR技术的最大特点，该技术已渗透到分子生物学的各个领域。PCR技术看似易于操作，但由于PCR技术在我国应用时间还不长，且影响因素和环节较多，在实际工作中已遇到不少问题，如假阴性、假阳性，结果的可靠性等，这些质疑对操作人员和临床医师都存在着困惑。因此，要使PCR这一具有强大生命力的技术健康发展，提高PCR检测结果可信性已势在必行。现将如何提高PCR检测结果可信性的一些措施报告如下。1、实验室要求1．1实验室布局：为了避免PCR实验…     

应用质量控制多规则分析能力验证结果

目前，不论是发达国家还是发展中国家，应用质量控制多规则分析能力验证（proficiency testing，PT），已被绝大多数临床实验室广泛接受，越来越受到实验室工作人员的重视。盯是通过提供能力验证的外部机构将同一份标本分发给多家实验室进行检测，然后收集实验室上报结果并进行分析评价，从而比较、评估各实验室的校彬检测能力。80年代初，卫生部临床检验中心在国内组织临床化学能力验证活动，至今已有二十多年，对实验室间的测定结果一致性有很大的促进作用，其准确度也得到了一定的保障。     

2003-2005年参加美国病理学家协会能力验证的结果分析

随着各种检测技术的发展，医疗诊断越来越依赖于实验室检测的结果，对于医学实验室而言，如何保证提供可靠的结果显得尤为重要。医学实验室的质量保证包括室内质控和室间质评两个方面。我室多年来严格保证每个项目的室内质控，同时还参加了国家卫生部临床检验中心开展的室间质评活动。近年来，我室在申请美国病理学家协会（CAP）的质量认可时，也积极参加了CAP组织的能力验证（PT）计划，它作为一种外部质控手段，同样可以帮助我们评价分析性能，促进我室的质量改进。总结我室13项体液免疫项目在2003—2005年参加9次CAP-PT的结果，全面评价检测性能，为质量控制提供依据，保证为临床提供可靠的检测结果。     

PCR检测病毒核酸在血制品生产中的应用

目的　建立适用于血制品企业的PCR检测原料血浆的方法。方法　以HBV ,HCV和HIVPCR荧光定量检测试剂和WHO标准品对CAP样品、BBI样品和公司混合血浆进行测定 ,追踪调查部分阳性血浆献浆者。结果　PCR检测结果与CAP和BBI公布结果基本相符。在原料血浆中用PCR方法检出 35份阳性血浆。结论　PCR检测技术能应用于血制品企业。     

浅谈上海市临床PCR实验室的建立和管理

正聚合酶链式反应(PCR)是由美国Kary Mullis于1983年发明的~([1])。它有非常高的检测灵敏度,并且还有快速、简便、特异等优点,能将研究所需要的基因在试管内迅速扩增至几十万甚至上百万倍。由于PCR技术优点多,被越来越广泛地应用在医学领域,很多医疗机构相继建立了临床PCR实验室。因业务需要上海市浦东新区周浦医院也建立了PCR实验室,笔     

建立鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因信息分析及PCR检测方法

目的建立鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因物信息分析及PCR检测方法。方法用DNASTAR软件进行核苷酸多重序列比对和基因扩增技术,对某株(ATCC 19606)鲍曼不动杆菌全长生物膜合成基因片段进行扩增和测序,并通过其他菌株检测进行验证。结果鲍曼不动杆菌不同株中均存在与某株的生物膜合成基因高度同源的序列,相似度均达到97%以上。该生物膜合成基因蛋白中存在两个跨膜区,含有与生物膜形成相关的超家族保守功能结构域。所克隆的生物膜合成基因核苷酸和氨基酸序列相似性都为100%。所建立的基于生物膜合成相关基因PCR仅对鲍曼不动杆菌DNA模板呈阳性扩增结果,其检测灵敏度可达10 cfu/m l。对临床分离菌株的检测与临床生化鉴定结果一致。结论鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因存在于各株鲍曼不动杆菌中,其编码蛋白为膜蛋白与生物膜形成有密切关系。所建立的基于鲍曼不动杆菌生物膜合成基因PCR具有特异、敏感、稳定等优点,可用于临床实验室鲍曼不动杆菌感染的快速诊断以及各种医疗器械带菌状况的检测。     

PCR法检测淋球菌的探讨

性传播疾病是当今世界上广泛流行的传染病，其中淋病的发病率最高，约占70％以上，由于其发病人数的增多和危害性之大，淋病的检测日益被人们重视，特别是快速敏感的检测。淋病的临床表现缺乏特异性，其确诊主要靠实验室检查。传统的检查方法是将临床标本涂片，染色后镜检，在中性粒细胞中找到革兰氏阴性双球菌，即为阳性。该方法简单易行，但灵敏度不高，故WHO推荐使用淋球菌分离培养为诊断方法，但其生化鉴定复杂，需较长时间，因而答不到快速检测目的。近年来，分子生物学技术的发展，基因探针技术、PCR技术应用于淋球菌的检测，实现了快速、特异、敏感的检测和鉴定淋球菌的目的。现就我院门诊拟诊淋病137例检测结果加以总结。     

国产乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)定量检测试剂盒技术现状介绍

利用核酸扩增技术(PCR)定量检测样本中HBV DNA是乙型肝炎治疗过程中疗效监测的重要手段之一。继乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)定性检测试剂盒批准临床使用之后，定量检测试剂盒也已陆续批准临床使用。本文对乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)定量检测试剂盒的技术现状，国家定量检测标准品的组成、定值方法、合格标准及国产试剂存在的问题等方面作一粗浅的介绍，以供使用者、临床医生及诊断试剂的研发者参考。     

PCR实验室的消毒与防污染措施

聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）是由美国Kary Mullis于1983年发明的。该技术可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品。1985年PCR技术首先应用于β-珠蛋白DNA的扩增及镰刀状红细胞贫血病的产前诊断,此后该技术被广泛应用于分子生物学、微生物学、医学及遗传学的分子克隆、序列分析、基因突变、遗传病、传染病、性传播疾病及法医判定和考古研究等多个领域。     

PCR扩增肠癌组织p53基因失败的原因分析与解决

目的：分析与解决ＰＣＲ扩增肠癌组织ｐ５３基因时失败的问题,为如何解决ＰＣＲ技术在科研应用中的问题提供一个实例,方法：经初步分析,将失败原因确定为ＤＮＡ模板有问题,采用下列方法处理模板再进行ＰＣＲ反应：用７０％乙醇再清洗模板,用新标本重新提取模板,用ＰＣＲ反应成功与失败的模板配成混合模板。比较ＰＣＲ比较与失败所用模板的差异,寻找与证实失败的原因。结果：最终发现溶解ＤＮＡ模板的ＴＥ缓冲液浓度不高,使Ｐ     

定量PCR技术的研究进展

定量ＰＣＲ技术的研究进展陈建魁综述牟兆钦审校（军事医学科学院附属医院，北京１０００３９）关键词定量ＰＣＲ核酸检测技术聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立以来，定性技术不断改进和完善，可以达到检测单个靶序列的水平。但实际工作中常需要定量检测标本中核酸，而不是...     

低变性温度共扩增PCR及其衍生技术的研究进展

低变性温度共扩增PCR(COLD-PCR)技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、成本低廉等优点。该技术及其衍生技术能够优先富集高野生背景下已知或未知的少量突变,在肿瘤个体化诊断、无创性产前诊断、HBV基因型耐药监测等领域具有广泛的应用前景。本文对此类技术及应用进展作一综述,旨在为其临床及实验室应用提供参考。