辣根过氧化物酶／吲哚乙酸自杀基因系统联合放射对Hep-2细胞的生长抑制作用

目的：研究辣根过氧化物酶（HRP）/吲哚乙酸（IAA）自杀基因系统联合放射对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,观察HRP/IAA系统是否具有放射增敏性。方法：将构建成功的pcDNA3.1-HRP转染Hep-2细胞,RT-PCR及Western blotting分别在mRNA和蛋白质两个水平检测其表达;分别以0.5 mmol/L IAA、2 Gyγ-射线及两者联合作用于转染HRP后的Hep-2细胞,实验分为4组：A、对照组;B、加药组;C、放射组;D、加药及放射组。克隆形成实验观察HRP/IAA系统对细胞存活分数的影响,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERSF2;流式细胞仪分析各组细胞周期时相的变化;AnnexinV-FITC试剂盒比较各组细胞凋亡率。结果：转染pcDNA3.1-HRP的Hep-2细胞,RT-PCR和Western blotting能检测到HRP的表达;加药及放射组比单纯放射组细胞存活分数降低,SERSF2为1.302;与A组相比,B、C、D组G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率均显著增高（P〈0.01）;D组与B组相比,G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高（P〈0.01）;D组与C组比较,G0/G1期、G2/M期细胞比例升高（P〈0.05）,S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高（P〈0.01）。结论：HRP/IAA系统与放射联合应用能更有效地抑制Hep-2细胞生长、诱导其凋亡,HRP/IAA系统具有放射增敏性。     

辣根过氧化物酶/吲哚乙酸系统作为基因导向性酶前体药物疗法的研究

目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)系统作为基因导向性酶前体药物疗法(GDEPT)体外作用于人喉鳞癌Hep-2细胞株所产生的细胞毒性作用。方法:构建pcDNA3.1-HRP,将其瞬时转染Hep-2细胞后,Western blotting检测HRP蛋白的表达,MTT法检测加药IAA后对细胞增殖的影响。结果:pcDNA3.1-HRP构建成功,瞬时转染Hep-2细胞后Western blotting能检测到HRP蛋白的表达,MTT法显示HRP/IAA系统能较明显抑制细胞增殖。结论:HRP/IAA系统具备一定的作为基因导向性酶前体药物疗法治疗肿瘤的潜力。     

重组人腺病毒p53提高肺腺癌放射敏感性的实验观察

目的:评价重组人腺病毒p53(rAd-p53)注射液对肺腺癌A2细胞系放射敏感性的影响。方法:实验分空白对照组(C组)、照射组(R组)、加药组(D组)、照射加药组(R D组),利用单击多靶数学模型拟合辐射剂量效应曲线,应用细胞克隆形成实验观察各组细胞存活情况,应用流式细胞仪技术分析各组细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:R组与R D组平均致死剂量(D0)分别为1.26Gy、0.45Gy,准阈剂量(Dq)分别为3.37Gy、1.05Gy;两组放射增敏比SERD(0D0之比)为2.8,SERD(qDq之比)为3.21;流式细胞仪结果提示R D组G2/M期细胞比例及细胞凋亡率增加最明显(P<0.05),二者之间存在正相关关系(rs=0.989,P<0.05)。结论:rAd-p53对体外培养的肺腺癌A2细胞具有放射增敏作用。     

姜黄素对人宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究

目的 :探讨姜黄素对宫颈癌 Hela细胞放射敏感性的影响及机制。方法 :利用细胞克隆技术进行剂量 -存活曲线分析 ,末端脱氧核苷酰转移酶法检测细胞凋亡 ,并对细胞周期进行分析。结果 :姜黄素组 D0 值为 96.89c Gy,空白对照组和空白药剂组 D0 值分别为 1 30 .1 2 c Gy和 1 40 .46c Gy( P<0 .0 5 )。流式细胞仪分析空白对照组和姜黄素组凋亡区阳性细胞分别为 1 .2 3%和 90 .70 % ( P<0 .0 5 ) ;经姜黄素 2 0μM、40μM处理 2 4 h后 ,与对照组相比 ,G0 /1期细胞比例降低 ,G2 + M期细胞比例增高。结论 :姜黄素可以明显提高宫颈癌 Hela细胞的放射敏感性 ,机制可能与其引起瘤细胞周期阻滞 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关     

黄芪对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

[目的]体外观察黄芪对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用并探讨其作用机制。[方法]用20、100、200μg/mL的黄芪作用于Hep-2细胞24 h,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,共聚焦荧光显微镜观察细胞凋亡,Western Blot检测Bcl-2和Cyclin B1的蛋白表达。[结果]黄芪对Hep-2细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量依赖性;随着黄芪浓度增高,处于G2/M期细胞的比例逐渐升高,同时伴有G0/G1期细胞减少,细胞凋亡率逐渐升高,各实验组之间及其与对照组之间的差异均有显著性意义(P<0.05);荧光显微镜观察可见典型细胞凋亡;Western Blot检测显示黄芪可剂量依赖性抑制Bcl-2和Cyclin B1的蛋白表达。[结论]黄芪可通过抑制Bcl-2和Cyclin B1的蛋白表达,引起喉癌细胞G2/M期阻滞,抑制增殖和凋亡,发挥抗癌作用。     

Glu-GNPs对人肺腺癌细胞株A549放射增敏的初步探讨

目的探讨偶联葡萄糖的纳米金颗粒(Glu-GNPs)对人A549细胞的放射增敏作用及其机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测低浓度(≤20 nmol/L)Glu-GNPs联合放射对A549细胞存活的影响,克隆形成检测Glu-GNPs对A549细胞的放射增敏作用,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及其凋亡。结果低浓度Glu-GNPs对A549细胞生长无明显抑制,联合X射线后具有抑制作用,在15 nmol/L范围内,随浓度增大,抑制作用增强;15 nmol/LGlu-GNPs对A549细胞有放射增敏作用,由Dq、Do计算放射增敏比(SER)分别为1.93、1.10;Glu-GNPs、单纯放射均可诱导细胞凋亡,凋亡率分别为(7.64±1.43)%、(13.46±1.99)%,联合放射组凋亡率为(21.43±1.04)%,显著高于前两组(P<0.01);Glu-GNPs作用后,细胞周期发生变化,表现为S期减少,G2/M期增加(P<0.05)。结论 Glu-GNPs对人肺腺癌细胞株A549具有放射增敏作用,其机制可能为抑制细胞亚致死损伤修复,阻滞细胞于G2/M期,并诱导细胞凋亡。     

多西紫杉醇对非小细胞肺癌细胞株A-549放疗增敏作用及机制

目的:研究多西紫杉醇对体外培养非小细胞肺癌细胞的细胞周期改变和凋亡影响,及其放疗增敏的作用及机制.方法:以非小细胞肺癌细胞株A-549为实验对象,MTT法观察多西紫杉醇对A-549细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率.结果:多西紫杉醇对A-549细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(1μg/ml)时即可降低A-549细胞的克隆形成率.各处理组细胞的细胞周期和凋亡率结果表明,多西紫杉醇+放疗组G2/M期细胞比例较其他组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P<0.05).结论:多两紫杉醇在低细胞毒性浓度下对非小细胞肺癌细胞株A-549有放射增敏作用;多西紫杉醇对A-549细胞增敏其机制可能与其能改变细胞生长周期并诱导其凋亡有关.     

下调53BP1基因表达对喉部鳞癌细胞放射增敏作用的研究

目的 利用RNA干扰技术下调喉部鳞癌Hep-2细胞株P53结合蛋白1基因（53BP1）的表达,观察其对肿瘤细胞周期及放疗敏感性的影响。方法 构建53BP1短发夹RNA（shRNA）重组质粒,然后转染Hep-2细胞株,构建稳定低表达53BP1的Hep-2细胞系,通过Western blot检测转染空载质粒的Hep-2细胞（NC）、野生型Hep-2细胞（未转染,Hep-2组）和稳定转染下调53BP1表达的Hep-2细胞组（P6组）细胞53BP1蛋白的表达水平,MTT法检测转染对细胞正常情况下增殖的影响,通过流式细胞术检测经放射线照射后的细胞周期分布,并采用克隆形成实验检测下调53BP1表达的Hep-2细胞系对放射的敏感性变化。结果 成功构建了稳定低表达53BP1的Hep-2细胞株P6,Western blot显示P6组Hep-2相较野生型Hep-2细胞中53BP1蛋白水平下降（P<0.05)。MTT结果示下调53BP1蛋白表达并未影响细胞正常的生长。P6组下调53BP1后,经不同剂量放射后G2/M期周期阻滞较NC组和野生型Hep-2细胞减弱（P<0.05）,周期阻滞比例随放射剂量增加而增加。在0、2、6、10 Gy剂量的照射后,P6组放射敏感参数（D0、N、Dq、SF2）均低于野生型Hep-2组和对照组（P<0.05)。结论 RNA干扰可下调53BP1表达的Hep-2细胞,减少G2/M周期阻滞,从而增强对放射的敏感性。     

激活的吲哚乙酸对HeLa细胞增殖及MDA水平的影响

目的:研究辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)激活吲哚乙酸(indoleacetic acid,IAA)后产生的细胞毒性作用对HeLa细胞增殖及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平的影响. 方法:取不同处理时间点体外培养的人宫颈癌HeLa细胞,经不同终浓度的IAA(分别为20,40,60,80,100 μmol/L)和同一终浓度的1.2 mg/L HRP共同处理后,依次用台盼蓝拒染法、生长抑制实验、集落形成实验、流式细胞术、TBA法及QWin550CW显微镜,检测活细胞数、抑制率、集落形成率、增殖指数、凋亡率和MDA含量,观察细胞形态学变化. 结果:HRP激活的IAA对HeLa细胞生长及降解MTT的能力均有较强的抑制作用,在一定的浓度范围内,呈现明显的时效和量效关系. 在6, 24, 48和72 h检测细胞周期,处理组随着IAA浓度增加,细胞凋亡率增加,S期和G2/M期细胞比率增加,G0/G1期细胞比率下降. 随着IAA浓度的增加,HeLa细胞集落生成率逐渐减少,集落体积变小,各处理组蛋白含量显著降低,MDA含量增加,细胞形态学的变化在72 h最明显. 结论:HRP激活的IAA可能通过促进细胞进入分裂期,同时加速脂质过氧化程度的机制来诱导HeLa细胞凋亡.     

紫草素对人大肠癌HT29细胞化疗增敏作用研究

目的:研究紫草素对人大肠癌HT29细胞奥沙利铂化疗增敏作用及其机制。方法:体外培养并取对数生长期人大肠癌HT29细胞,设紫草素(0.5 mg·L^-1)、奥沙利铂(25 mg·L^-1)、联合[紫草素(0.5 mg·L^-1)+奥沙利铂(25 mg·L^-1)]组,并设空白对照组。给药干预48 h后,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、激活型Caspase-3的表达。结果:较空白对照组,紫草素组人大肠癌HT29细胞处于G0/G1期比例升高且G2/M期比例降低(P<0.05;P<0.01),Bax蛋白表达量升高且Bcl-2表达量降低(P<0.05;P<0.01)、Bax/Bcl-2值升高(P<0.01),激活型Caspase-3蛋白表达量升高(P<0.01)。较奥沙利铂组,联合组人大肠癌HT29细胞增殖率明显降低(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01);处于G0/G1期细胞比例升高而G2/M期比例降低(P<0.05;P<0.01);Bax、激活型Caspase-3蛋白表达量升高且Bcl-2表达量降低(P<0.05;P<0.01),Bax/Bcl-2值显著升高(P<0.01)。结论:紫草素具有提高人大肠癌HT29细胞奥沙利铂化疗敏感性的作用,机制可能与紫草素阻滞细胞周期进程、调节凋亡相关蛋白表达而促进HT29细胞凋亡有关。     

全反式维A酸对肺腺癌H1299细胞放射敏感性研究

目的探讨全反式维A酸（ATRA）对肺腺癌细胞株H1299放射敏感性影响及其分子机制。方法MTT法检测ATRA对H1299细胞存活率的影响;平板克隆形成实验检测H1299细胞的放射敏感性;流式细胞术检测细胞周期;Western blotting检测survivin与NF-κB的蛋白表达情况。结果不同浓度ATRA对H1299细胞均有抑制作用,浓度为10 μmol/L时最佳（P < 0.05）。相对单独ATRA处理,10 μmol/L ATRA联合不同剂量的射线照射后,细胞生长抑制率明显增加（P < 0.01）。ATRA作用和射线照射后的细胞凋亡增多（P < 0.01）,ATRA联合射线照射作用后的细胞总凋亡率明显高于单纯射线照射（P < 0.01）。与对照组、放射组、ATRA组相比,ATRA+放射组G0/G1期比例明显增加（P < 0.01）。与放射组相比,ATRA+放射组的细胞存活分数值降低,ATRA可以增加肺腺癌H1299细胞放射敏感性,增敏比为1.406。Western blotting结果显示,ATRA+放射组细胞survivin、NF-κB蛋白表达明显降低（P < 0.01）。结论ATRA对肺腺癌H1299细胞具有放射增敏作用,其机制可能与ATRA直接抑制H1299细胞增殖、促进H1299细胞凋亡,下调survivin及NF-κB蛋白表达有关。     

4-羟苯基维胺脂对宫颈癌HeLa细胞系的放射增敏作用

目的探讨4-羟苯基维胺脂(4-HPR)对HeLa细胞生长抑制和凋亡的影响;研究小剂量4-HPR对HeLa细胞的放射增敏效应。方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察4-HPR对HeLa细胞的生长抑制情况;电镜观察4-HPR、放疗处理后HeLa细胞超微结构的改变;流式细胞仪检测单用4-HPR、γ-射线以及2者联合使用时HeLa细胞凋亡率和细胞周期变化。结果4-HPR和2 Gy60Co照射单独作用均可引起HeLa细胞超微结构改变,发生早期凋亡,4-HPR低剂量组(1μmol.L-1,2μmol.L-1)、单纯放射组与无药对照组凋亡率比较无统计学差异(P>0.05);4-HPR 4μmol.L-1组与无药对照组有显著性差异(P<0.01)。2 Gy60Co照射和4-HPR(2μmol.L-1,4μmol.L-1)联合使用细胞凋亡率较单纯放射组凋亡率有显著性差异(P<0.05,P<0.01);4-HPR作用后,HeLa细胞周期发生变化,表现为G1期减少,S期增加。结论4-HPR可诱导肿瘤细胞凋亡,小剂量4-HPR可增加HeLa细胞对放疗的敏感性。     

Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响

目的 观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.方法 构建针对Bcl-2基因的干扰质粒pGPH1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞株,γ线照射后形成4组细胞,分别命名为SGC-7901(A组)、照射/SGC-7901(B组)、Bcl...     

IL-21基因对肝癌细胞抑瘤效应的辐射增敏作用

目的：探讨外源性IL-21基因联合放射对肝癌HepG2细胞抑瘤效应的辐射增敏作用。方法：将Ad—IL-21腺病毒颗粒转染HepG2细胞系,进行6Gy”’Cs7射线照射,将细胞分为4组,包括空白对照组、Ad—IL-21组、照射组以及联合组,观察HepG2细胞的生长、细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：与Ad—IL-21组和照射组比较,联合组HepG2细胞的抑制效应最显著,转染48h的抑制率明显高于转染24h和72h的抑制率。联合组HepG2细胞阻滞在G2期最多,凋亡细胞所占比例最高,转染24h和48h的凋亡率分别达到29．1％和33．1％。结论：IL-21基因联合放射对肝癌细胞的抑瘤效应具有辐射增敏作用,明显地抑制肝癌细胞的生长。     

吲哚乙酸与辣根过氧化物酶对BXPC-3细胞凋亡的影响

目的:探讨吲哚乙酸(IAA)联合辣根过氧化物酶(HRP)对BXPC-3细胞凋亡及自由基表达的影响.方法:台盼蓝(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC-3细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测法检测细胞凋亡;生化法检测细胞内SOD,MDA的含量;激光共聚焦显微镜检测细胞内的自由基含量.结果:与对照组相比,IAA/HRP组的细胞凋亡数增加,而且随着IAA浓度的增大,细胞凋亡数存在上升的趋势;SOD活性和MDA含量在IAA/HRP组中均明显升高;对照组的自由基含量比IAA/HRP组明显降低,且自由基的含量具有浓度和时间依赖性.结论:IAA联合HRP诱导自由基产生是诱发人胰腺癌BXPC-3细胞凋亡的可能机制之一.     

下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响

目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.     

熊果酸对肝星状细胞内活性氧产生的影响及与细胞调亡的关系

目的：体外观察熊果酸对肝星状细胞内活性氧（ROS）的产生、细胞凋亡、NF-κB核易位及X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP ）mRNA表达的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的机制。方法：取对数生长期的肝星状细胞（HSC-T6）进行分组：A组：瘦素(100 ng/ml)刺激组,B组：瘦素+熊果酸（50μM）组,C组：瘦素+ N-乙酰-L半胱氨酸（10mM）组,D组：空白对照组。检测DCF荧光强度（反映ROS水平）、细胞凋亡率、NF-κB（P65）核移位率; XIAP mRNA的表达。结果：1. A组HSC-T6细胞内DCF荧光强度明显强于D组,B组、C组细胞内ROS水平明显降低于A组（均P<0.001）。2．A组在48h的HSC-T6细胞凋亡率低于D组（P<0.05）;B组在48h的 HSC-T6凋亡率不仅明显高于A组（P<0.001）, 而且高于C、D组（均P<0.05）。3．A组细胞凋亡率显著高于D组（P<0.001）;B组、C组的NF-κB核移位率均显著低于A组（均P<0.001）;4．瘦素作用HSC-T6细24h的XIAP mRNA表达显著高于D组（P<0.01）;B组、C组在12h、24h的表达均低于A组(P<0.01 或P<0.05)。结论：熊果酸能抑制瘦素刺激HSC-T6细胞引起的ROS产生,并能诱导HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS对 NF-κB的活化,下调XIAP基因表达有关。     

端粒酶抑制剂联合辐射对人胶质瘤细胞存活的影响

目的 :观察端粒酶抑制剂AZT联合60 Coγ 射线对人脑胶质瘤细胞U2 5 1端粒酶活性及细胞存活的影响 ,探讨AZT的放射增敏作用。方法 :实验分 4组 :A、空白对照组 ;B、放射组 ;C、加药组 ;D、加药放射组。用克隆形成分析法观察AZT对U2 5 1细胞放射敏感性的影响 ,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERD0 、SERDq、SERSF2 。用端粒重复序列扩增 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) PCR ELISA方法检测端粒酶活性的动态变化。结果 :照射前经 0 .8mmol·L-1AZT处理 2 4h明显降低了 2Gyγ 射线照射后U2 5 1细胞的存活分数 ,SERD0 、SERDq、SERSFM2 分别为 1.2 94 ,1.2 5和 1.36 5 ;表明AZT具有放射增敏的作用 (P <0 .0 5 )。端粒酶活性分析显示A、B、C、D组细胞的端粒酶活性分别为 1.5 6 3± 0 .0 2 2 ,1.92 3± 0 .188,1.0 5 7± 0 .12 6 ,1.2 0 9± 0 .15 3,各组之间差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :AZT能明显抑制 2Gy照射诱导的U2 5 1细胞端粒酶活性升高 ,并显著增加U2 5 1细胞的放射敏感性 ;AZT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关。