间接ELISA法用于细胞抗原特异的单克隆抗体筛选

在单克隆抗体（ｍＡｂ）制备过程中，间接ＥＬＩＳＡ方法用于可溶性蛋白为抗原的ｍＡｂ筛选。当得不到可溶性抗原的情况下，用细胞膜抗原或克隆抗原分子，再以痘苗病毒为载体转入真核细胞制备ｍＡｂ，可以用间接免疫荧光法进行筛选。由于此种方法费时，所需细胞数量大，影...     

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验，以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明，用正交法所得的安验结果中，最佳配用情况下，包被用抗体和主要的酶标记抗体的作同位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上，两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体央心去的本底很低．可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性，滴度为1：16(对流电泳法)的患者血清稀释至2^19时仍可得到P／N比≥2．1的读数，目测判定结果对至少在2^18稀释度下可明确地判定出阳性结果。     

抗人NGAL单克隆抗体的制备及其定量检测方法的建立

目的获得抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)特异性单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法通过杂交瘤技术制备了抗人NGAL高亲和力高特异性单克隆抗体,筛选能够结合天然NGAL的单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA系统。以重组人NGAL为检测对象,对系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行全面分析和评价。通过对肾病患病组和对照组尿液标本检测初步研究其在临床上的分析性能。结果获得了8株能稳定分泌抗人NGAL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选得到F2和G2两株单克隆抗体可用于双抗夹心ELISA免疫检测。本方法线性范围为0～40 ng/ml,灵敏度为4.8 ng/ml,批内变异CV≤10.04%,批间变异CV≤9.76%,平均回收率为101.9%。临床标本检测显示肾病组与对照组有显著差异(P<0.01)。结论本研究制备了高亲和力特异性单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够检测体液标本中的天然NGAL蛋白,检测结果与临床基本符合,为其临床应用和推广奠定了基础。     

抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法,对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。方法:将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用辛酸-硫酸铵法纯化,并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化,建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。结果:经细胞融合、筛选及克隆化,共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株,其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法,该方法灵敏度达到870 U/L,平均回收率为107.81%,批内变异系数平均为6.7%,批间变异系数平均为9.3%,可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。结论:成功地制备了抗青霉素的mAb,并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。     

用非竞争性ELISA测定单克隆抗体的亲和力常数

本文采用Beatty报道的非竟争性ELISA结合双抗体夹心法测定了5株单克隆抗体的亲和力常数。直接采用杂交瘤的细胞培养上清,无需纯化抗体,无需对抗原精确定量。而且,方法简便、快速、重复性和准确度都较好,值得推广。     

测定人血清纤维连接蛋白含量的双抗体夹心ELISA法的建立

４株经细胞融合获得的针对纤维连接蛋白（Ｆｎ）的单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ抗体相加试验和抗体竞争试验证实，为作用于Ｆｎ不同位点的单克隆抗体。选择其中２株单克隆抗体，应用于测定人血清Ｆｎ含量的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法．其批内差异为４．５％，批间差异为５．９％．建立的标准曲线相关系数为０．９８２，测定１３２例献血员血清Ｆｎ合量为０．２５５±０．０２８ｍｇ／ｍｌ，与文献报道相符．     

一种检测可溶性白细胞介素2受体夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同表位的小鼠抗人白细胞介素2受体(IL-2R)单克隆抗体(McAb),在国内首次建立了检测可溶性IL-2R(sIL-2R)的夹心法ELISA,并进行了初步应用。结果显示:本法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,能检出正常人、某些患者血清中以及细胞培养上清中sIL-2R,可用于基础和临床免疫学研究。     

错位阻双单克隆抗体夹心ELISA竞争法测定同位阻群抗体相对亲和力

在抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体位阻分析的基础上，选用错位阻双单克隆抗体夹心ELISA竞争法测定同位阻群抗体相对亲和力。并蹦出了第4组，第5组相对亲和力最好的抗体为9B5和24D2。方法简便易行。     

间接免疫荧光法测定抗人肾脏集合管细胞抗体

<正>越来越多的研究表明不少远端肾小管性酸中毒(dRTA)可继发于自身免疫性疾病,如临床上发现某些甲状腺疾病患者可伴发dRTA,这可能是抗甲状腺球蛋白抗体(TG)及抗甲状腺微粒体抗体(TM)与集合管细胞存在交叉反应.因此测定体内抗集合管抗体,对于研究和诊治dRTA具有较大价值.为此,我们用培养的人集合管细胞作为载体.运用间接免疫荧光法建立了测定血清中抗集合管细胞抗体的检测方法.1 材料和方法1.1人肾脏集合管细胞株H_5培养于载玻片.H_5细胞为法国Tenon医院肾脏实验室赠送.1.2对象阳性对照:小鼠抗人集合管细胞单克隆抗体(McAb).阴性对照:正常人血清.测定对象:两例甲亢病例,同时伴有典型dRTA,且血清抗甲状腺球蛋白抗体及抗甲状腺微粒体抗体阳性.1.3FITC标记的羊抗人IgG抗体及羊抗小鼠IgG抗体(华美生物工程公司).     

重组人源细胞珠蛋白单抗制备及检测方法建立

目的制备重组人源细胞珠蛋白（recombinanthumanCytoglobin,rhCygb）单克隆抗体,并建立检测该蛋白双抗体夹心ELISA法,为下一步研究rhCygb药代动力学做准备。方法用纯化的rhCygb免疫BALB/c小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法获得抗rhCygb的单克隆抗体杂交瘤细胞,间接ELISA法筛选制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。结果筛选获取了稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过抗原表位相加法实验获得5株表位不同的细胞株,Western-blotting验证能与rhCygb特异性结合,间接ELISA法验证其不与本实验室制备的其它PET28a-BL21蛋白及BL21裂解液发生交叉反应。本方法灵敏度为1.25ng/ml,在浓度为10～1250ng/ml时,线性关系良好,相关性达0.9931,实验内和实验间平均变异系数分别为6.2%和10.92%。结论成功建立了灵敏度好、特异性高的双抗体夹心法,为下一步研究rhCygb药代动力学奠定了基础。     

抗人血管内皮细胞单克隆抗体的制备及其在血管内皮细胞分型上的可能应用

目前国外已有制备抗人血管内皮细胞(VEC)单克隆抗体(McAb)成功的报道。但国内尚无这方面的报导。国外一些实验室所制得的抗人VEC的McAb,有的与单核细胞或(和)淋巴细胞具有交叉反应,有的作用于细胞质抗原而非膜抗原。Cerilli认为,VEC具有独特的非HLA抗原,而外周血单核细胞也具有这种VEC抗原系统。迄今尚未有人尝试     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备及其特性研究

用肾综合征出血热病毒(HFRSV)陈氏株免疫获得5株单克隆抗体(McAb).B_9株McAb具有血凝抑制和体内保护活性:F_-3、H_(11)株McAb具有较弱的中和活性及体内保护活性;B_9株McAb与重型HFRSV毒株的大部分发生反应.与轻型HFRSV毒株不反应;F_3、H_7株McAb与检测的24个HFRSV毒株均发生反应.B_(11)、F_3、H_7、H_(11)等4株McAb可用于酶联免疫吸附试验。     

层粘连蛋白受体单克隆抗体对人肺癌细胞生长状态的影响

观察了层粘连蛋白受体单克隆抗体对高转移能力的人肺巨细胞癌系体外培养细胞生长状态的影响。结果显示ＭｃＢ１能明显降低ＰＧ瘤细胞的生长速度。提示肿瘤细胞体外生长的调控与层粘连蛋白（ＬＮ）及层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）的作用密切相关。     

一次细胞融合制备分泌抗狂犬病毒单抗杂交瘤及分泌抗独特型单抗杂交瘤的实验研究

根据独特型与抗独特型的免疫网络与免疫调节学说，利用狂犬病毒作为免疫原，设计了不同的动物免疫方案，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞经一次融合，同时获得了分泌抗狂犬病毒单克隆抗体杂交瘤及分泌狂犬病毒抗独特型单克隆抗体杂交瘤，为抗独特型抗体的制备开辟了一条简捷经济的途径。     

细胞培养酶免疫法在检测和分析大肠癌细胞McAb中的应用

由于细胞表面抗原的提纯较难,检测抗细胞类抗原McAb常采用全细胞作抗原。一些学者多采用细胞悬液离心干燥法制备全细胞固相抗原,用免疫酶法进行McAb检测。由于细胞悬液包底,不均匀,以致影响结果的观察。本文报道在制备抗大肠癌HR_(8348)细胞McAb中,将HR_(8348)细胞直接培养于微板孔中,利用其贴壁单层生长的特性,制成包被均     

旋毛虫Ts87抗原单克隆抗体的制备及其识别肽段的研究

将原核系统成功表达的Ts87重组蛋白纯化后免疫动物,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗Ts87抗原的单克隆抗体.通过ElISA、免疫印迹、免疫组化等方法筛选出能分泌抗Ts87御抗原的抗体的阳性克隆,在1000个融合的杂交瘤细胞中,有3株融合细胞分泌的单克隆抗体(2A2,5A3,6G12)鉴定结果为阳性.这3株融合细胞分泌的抗体均能识别Ts87重组蛋白、旋毛虫成虫和幼虫的Ts87抗原以及旋毛虫幼虫组织切片.获得的抗Ts87抗原的单克隆抗体在将来的研究中可作为旋毛虫病的诊断试剂.为了进一步鉴定抗体识别的相应抗原表位和模拟抗原表位,选择了其中一株单克隆抗体5A3筛选噬菌体十二肽库.噬菌体M7展示的肽段是抗体识别Ts87抗原的线性表位,其他的噬菌体克隆展示的肽段是Ts87抗原的模拟表位.该技术为旋毛虫病多表位疫苗的构建奠定了基础.     

抗牛安氏隐孢子虫单克隆抗体的研制与初步鉴定

通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidiumandersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3~4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11)。5株单抗的染色体数目平均在96~98条之间,上清效价分别在1∶100和1∶12800之间,腹水效价分别在1∶12800和1∶204800之间。采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗。对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52·7kDa,轻链分子量约为24kDa。     

抗人纤维蛋白原单克隆抗体生物特性研究的初步报告

扰人纤维蛋白原单克隆抗体是研究血栓形成、纤维蛋白溶解、以及纤维蛋白原结构和功能关系的有用工具。近年来,国外已制备了有关的单克隆抗体,并开展了研究工作。我们于1985年开展了抗体纤维蛋白原单克隆抗体的研制工作,现已成功地得到了一组抗人纤维蛋白原单克隆抗体(命名为HIF)。本文仅就HIF的特异性及其对血液凝固功能的影响作一初步报告。     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。方法以重组SARS—CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。结果共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS-CoV呈阳性反应。10株单抗的相对亲和常数在108～109mol／L^-1之间;10株中有1株为IgG2b。、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg/L。结论获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS-CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。