大鼠脊髓损伤模型脊髓组织中Mst3b、GAP-43的表达及意义

目的观察大鼠损伤脊髓组织中哺乳动物ste20样蛋白激酶3b（Mst3b）、神经生长相关蛋白43（GAP-43）的表达变化,探讨其意义。方法 68只SD大鼠,取4只作正常对照（A组）,余随机均分为假手术（B）组、单纯损伤（C）组、肌苷治疗（D）组和6-硫代鸟嘌呤（6-TG,E）组。C、D、E组建立大鼠脊髓半横断损伤模型,B组只咬除棘突及椎板不损伤脊髓。各组分别于术后3、7、14、28 d采用免疫组化SP法检测脊髓中的Mst3b和GAP43蛋白。采用BBB运动功能评分法评定术后各时点C、D、E组动物左右肢功能。结果 A组大鼠脊髓组织中Mst3b、GAP-43无表达,B组极少表达,C、D、E组有明显表达（P均〈0.01）;Mst3b、GAP-43分别在术后7、14 d表达率最高,与大鼠左右肢功能的恢复趋势一致（P均〈0.01）;Mst3b与GAP-43的表达呈正相关（r=0.804,P〈0.01）。大鼠左右肢BBB评分D组高于C组,C组高于E组（P均〈0.01）。结论 Mst3b、GAP-43在大鼠正常脊髓组织中无表达,在损伤脊髓组织中表达明显,且二者表达呈正相关关系。Mst3b、GAP-43可能在脊髓损伤修复过程中起重要作用。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响。方法42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只。通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积。结果3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P<0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P<0.05)。缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡。     

大鼠脊髓损伤后神经功能评价方法比较

目的探讨评价脊髓损伤后神经功能的最佳方法。方法将20只大鼠随机分为两组，损伤组建立中度脊髓损伤模型，对照组仅行T8椎板切除术。分别于术后第1、2、3、4、6、10周对大鼠行斜板试验评分、改良Tarlov评分、BBB评分、运动诱发电位检测（MEP）。结果与对照组比较，斜板试验测定角度第l一4周均减小（P〈0．05），第10周未见明显变化（P〉0．05）；改良Tarlov评分第1-4周分值间差别有统计学意义（P〈0．05），第6、10周无统计学意义（P〉0．05）；而BBB评分和MEP检测术后各周差别均具有统计学意义（P均〈0．05）。结论BBB评分和MEP评价对大鼠脊髓损伤后神经功能更具优势。     

腺病毒介导h BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞静脉移植对大鼠脊髓损伤后OMgp表达的影响及意义

目的探究人脑源性神经营养因子(h BDNF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉移植治疗大鼠脊髓损伤(SCI)后对少突胶质细胞髓鞘糖蛋白表达(OMgp)的影响及意义。方法构建表达h BDNF全长的并以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为标志基因的5型复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad5-hBDNF-EGFP),分离大鼠BMSCs并培养扩增,转染Ad5-hBDNF-EG-FP及EGFP空白载体,观察细胞荧光表达情况,Western印迹法检测细胞h BDNF表达水平。将18只SD大鼠随机分为A、B、C组,A组进行静脉移植h BDNF-EGFP-BMSCs,B组进行静脉移植空白载体-EGFP-BMSCs,C组不进行BMSCs移植,3组均采用改良Allen重物打击法制作T10节段脊髓损伤模型。观察大鼠建模后24 h及1、3、5 w脊髓损伤的行为学(BBB)评分及第5周皮层体感诱发电位(CESP),Western印迹法检测第5周大鼠损伤区脊髓h BDNF、OMgp蛋白表达。结果 h BDNF-EGFP-BMSCs中h BDNF表达水平显著高于空白载体-EGFP-BMSCs(P<0. 05),且细胞呈现较强绿色荧光表达。A、B组3、5 w时BBB评分显著高于C组(P<0. 05),且第5周时A组显著高于B组(P<0. 05)。第5周,A、B组CSEP潜伏期缩短及峰值增加较C组明显(P<0. 05),且A组增加较B组明显(P<0. 05); A组损伤区脊髓组织h BDNF表达显著高于B、C组(P<0. 05); A组OMgp表达显著低于B、C组,且B组显著低于C组(P<0. 05)。结论静脉移植h BDNF-EGFP-BMSCs可通过抑制OMgp的表达促进损伤脊髓结构修复及功能重建,是SCI有效的治疗手段。     

大鼠胸段脊髓打击损伤程度与脊髓功能变化的关系

目的探讨不同程度打击建立不同损伤程度的大鼠胸段脊髓损伤(SCI)模型的可行性,并评估SCI程度与脊髓功能变化的相关性。方法选择成年雌性SD大鼠32只,按随机数字法随机分为实验A组8只、B组8只、C组10只,对照组6只。采用通用型脊髓打击器建立大鼠胸段SCI模型,实验组用质量10 g的重锤在不同高度(A组2.5 cm、B组5.0 cm、C组10.0 cm)实施单次打击;对照组仅行椎板切除,不打击。分别于术前,术后1 d、1周、2周、4周、6周进行BBB评分;术后1、6周取材行脊髓组织学观察,比较各组脊髓最大受损面积比;并对脊髓最大受损面积比与BBB评分进行相关性分析。结果在建立大鼠胸段SCI模型中,C组死亡1只。实验组术后各时间点BBB评分比较有统计学差异(P均<0.05)。A、B组术后1周脊髓功能均不同程度恢复,C组术后6周仍无明显恢复,对照组无脊髓功能障碍。实验组间的脊髓最大受损面积比比较有统计学差异(P均<0.05),脊髓最大受损面积比与BBB评分呈负相关(rp=-0.836 3,P=0.000)。结论不同程度打击可建立不同损伤程度的大鼠胸段SCI模型,其SCI程度与脊髓功能变化呈负相关。     

依达拉奉对急性脊髓损伤后大鼠神经细胞的保护机制

目的 观察依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后caspase-3、Bcl-x1表达的影响,探讨其对脊髓损伤后神经细胞的保护作用。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组（A组,16只）,手术对照组（B组,32只）和依达拉奉治疗组（C组,32只）。采用改良Alien法,建立脊髓损伤大鼠模型。B、C组分别在建立模型后静滴Ns和依达拉奉。采用硫代巴比妥酸法和免疫组化sP法分别检测脊髓损伤后3、6、24、48h脊髓组织中丙二醛（MDA）水平和caspase·3、Bcl-x1的表达水平。结果B组MDA水平、caspase-3和Bd-x1阳性表达水平均明显高于A组（P〈0．05和P〈0．01）;C组MDA水平和caspase_3阳性表达水平均低于B组（P均〈0．05）,Bcl-x1表达水平高于B组（P〈0．05）。结论依达拉奉可抑制脊髓损伤后神经细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化激化、减弱caspase-3表达和增强Bel-x1表达水平有关。     

罗格列酮对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的观察罗格列酮对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠,以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤模型（中度）,随机分为损伤组和药物组,各20只。药物组大鼠尾静脉注射PPARγ受体激动剂罗格列酮。损伤后1、3、7、14 d取两组大鼠脊髓损伤区组织,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测Bax、Bcl-2,同时采用BBB评分方法观察两组大鼠神经功能恢复情况。结果与损伤组相比,药物组大鼠神经细胞凋亡数少,Bax表达低,Bcl-2表达高,神经功能强（P均〈0.05）。结论 PPARγ受体激动剂罗格列酮能减少脊髓损伤后神经细胞凋亡,促进神经功能的恢复     

大鼠脊髓半切损伤后外源性NEP1-40对神经中丝NF200表达的影响

目的探讨外源性Nogo受体拮抗剂（NEP1-40）在脊髓损伤修复过程中的作用及机制。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组各20只。后两组均建立大鼠T10脊髓右侧半横断损伤模型,治疗组通过损伤处置管从术后第1天开始每天予NEP1-4015μg溶于PBS缓冲液25μl,连续7d;模型组予等量的PBS缓冲液;假手术组仅去除椎板,不做脊髓半横断,术后不埋管,不用药。分别于术后7、14、21、28d采用Basso-Beattie-Bresnahan运动（BBB）评分法行大鼠行为学表现评分,免疫组化染色法检测受损节段脊髓中NF200的表达。结果治疗组各个时间点的BBB评分均高于模型组,NF200阳性细胞的数目均高于模型组（P均〈0.05）。BBB评分与NF200阳性细胞数量呈明显正相关（r=0.937,P〈0.01）。结论脊髓损伤后注射NEP1-40可增加NF200阳性神经元数目,促进轴突再生及运动功能恢复。     

LncRNA HOTAIR调节细胞自噬对脊髓损伤模型神经元凋亡的保护作用

目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)在脊髓损伤凋亡和自噬中的作用及相关机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(SCI组)。构建缺氧缺糖诱导的SY-SH5Y细胞模型(OGD模型),将SY-SH5Y细胞分为Control组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+pcDNA-HOTAIR组、OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic组、OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组。通过脊髓损伤运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能的恢复能力;通过双荧光素酶报告基因实验分别检测HOTAIR和miR-17、miR-17和Beclin-1之间的靶向关系;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠脊髓组织和细胞中HOTAIR、miR-17、Beclin-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脊髓组织和细胞中Beclin-1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、P62蛋白的表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与Sham组比较,SCI组大鼠BBB评分下降,脊髓组织中...     

热休克蛋白70对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法　体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP 70 ,用过氧化氢 (H2 O2 )造成心肌细胞损伤。采用免疫组化 ,DNALadder,流式细胞仪 ,细胞色素C氧化酶比活力的测定 ,电镜观察等作为检测指标。结果　温度诱导后HSP 70在胞浆中大量表达 ,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力差异有显著意义 (P <0 .0 1)电镜观察损伤组细胞的细胞膜、细胞器损伤明显 ,并出现凋亡小体。结论　HSP 70可延迟细胞凋亡 ,对心肌细胞具有保护作用     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70 、TNF-α、NF-κB表达及损伤神经细胞凋亡的影响

目的：观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70（热休克蛋白70），TNF－α（肿瘤坏死因子－α），NF－κB（核蛋白因子－κB）表达及损伤神经细胞凋亡的影响，方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，大脑中动脉阻塞2h，再灌注损伤10h，用免疫组织化学法和原位缺口末端标记（TUNEL）法分别检测假手术组，对照组和亚低温组HSP70，TNF－α，NF－κB表达水平和凋亡细胞百分率。结果：亚低温组HSP70表达水平对照组显著升高（P＜0．05），而TNF－α，NF－κB表达水平和凋亡细胞百分率明显低于对照组（P＜0．05），结论：亚低温下调大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF－α，NF－κB表达水平和上调HSP70表达水平可能与其抗损伤神经细胞凋亡作用有关。     

大鼠急性脊髓损伤热休克蛋白47的表达变化

目的 研究老年大鼠急性脊髓损伤(SCI)中热休克蛋白47(HSP47)的表达情况.方法 用54只Wistar大鼠制作钳夹型SCI模型,在SCI后3 d及每周评价BBB评分,并在1、3、5 w用免疫组化方法 分析脊髓中HSP47的表达情况.结果 正常Wistar大鼠脊髓组织低表达HSP47,在SCI后表达明显提高,且在第5周仍有上升趋势(P＜0.01).脊髓损伤后灰质、白质分界不清,细胞凋亡明显,HSP47主要在血管及靠近软脊膜处白质中表达.结论 老年Wistar大鼠SCI 后HSP47表达增加,HSP47可能参与到SCI的病理改变过程中.     

他克莫司缓解大鼠自体移植静脉桥内膜增生的研究

目的探讨他克莫司对大鼠自体移植静脉移植物(静脉桥)内膜增生的影响。方法 (1)选取28只雄性SD大鼠,建立颈外静脉移植颈总动脉模型,将大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠肌注他克莫司0.2 mg/(kg·d),对照组大鼠肌注相同剂量生理盐水。术后2周、4周采集大鼠移植静脉桥,采用HE染色法检测大鼠新生内膜厚度;采用免疫印迹法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27表达水平,比较两组大鼠静脉桥组织中p27蛋白表达情况。(2)将人大隐静脉平滑肌细胞分为实验组(根据他克莫司浓度分4个亚组进行干预)和对照组(PBS缓冲液干预)。采用MTT法检测比较各组细胞增殖情况;采用Transwell小室法观察比较各组细胞迁移情况。结果 (1)与对照组比较,术后2周,实验组大鼠移植静脉桥新生内膜厚度明显减少(P0.05),术后4周时减少更为明显(P0.01)。经他克莫司治疗后2周和4周实验组大鼠移植静脉桥组织中p27蛋白水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或0.01)。(2)不同浓度的他克莫司对HSVSMC增殖均产生抑制作用,随着其浓度增高抑制作用增强,有明显剂量效应关系;半抑制浓度(IC50)为390 nmol·L-1。他克莫司对HSVSMC迁移有明显的抑制作用,他克莫司浓度越高抑制作用越显著,浓度达到2 000 nmol·L-1时,抑制率最高,几乎无细胞迁移。结论他克莫司对自体静脉移植术后静脉桥再狭窄具有明显抑制作用,其机制可能与p27蛋白表达上调,抑制静脉平滑肌细胞增殖与迁移有关。     

慢性脊髓压迫减压后脊髓缺血再灌注损伤的动物实验研究

目的探讨慢性脊髓压迫减压后是否存在再灌注损伤,以及脊髓压迫程度与再灌注损伤的关系。方法选择新西兰兔96只,随机分成A、B、C、D4组,每组又分为2个亚组,每个亚组12只。A组为假手术组,B组椎管内占位50%,C组为椎管内占位60%,D组为椎管内占位70%。B1、C1、D1组不取螺钉,B2、C2、D2组取出螺钉后6h分别进行改良Tarlov评分及MDA含量、GSH-px活性、SOD活性测定,TUNEL阳性细胞计数。结果 Tarlov评分A组显著高于B、C、D组（P均〈0.05）;B1、C1、D1组Tarlov评分依次减低（P均〈0.05）,B2、C2组Tarlov评分高于B1、C1组（P均〈0.05）。C1、D1组与A1组比较,D2组与D1组比较,MDA表达明显增高（P〈0.05或〈0.01）。C1组、D1组与A1组比较,D2组与D1组比较,SOD和GSH-px活性降低明显（P〈0.05或〈0.01）。结论慢性脊髓压迫减压后可以出现缺血再灌注损伤,且脊髓压迫程度越重,再灌注损伤越显著。     

年龄对嗅鞘细胞移植治疗大鼠脊髓损伤疗效影响的实验研究

目的研究嗅鞘细胞(OECs)对大鼠脊髓损伤的修复作用及年龄因素的影响。方法新生Wistar大鼠嗅球做OECs培养，制备2月龄大鼠脊髓半横断模型A、B组，老年(24月龄)大鼠脊髓半横断模型C、D组，B、D组行OECs移植，A、C组注入生理盐水作为对照，观察术后动物脊髓功能恢复情况。术后8w取材，了解OECs在体内成活情况及脊髓再生情况。结果OECs体内成活，B、D组BBB功能得分及脊髓损伤区再生的神经纤维数均显著性高于A、C组，B、D组间及A、C组无显著性差异。结论OECs移植能明显促进脊髓损伤的修复，年龄因素对修复无显著性影响。     

维生素C对热应激小鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响

目的通过对小鼠肝脏热休克蛋白70（HSP70）表达的实验研究,验证在夏季高温季节运输过程饮水中添加维生素C（VitC）对热应激缓解作用的可行性。方法昆明小鼠30只,随机分为3组,A组为常温对照组,B组为热应激组,C组为实验组（热应激＋VitC组）,B、C组在恒温箱内30℃饲养6 h,于实验后处死各组小鼠,取其肝脏组织,利用半定量法和Western blot蛋白印记技术检测HSP70的表达情况,做组间比较分析。结果 B、C组HSP70 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）,且B组均高于C组（P均〈0.05）。结论饮水中添加VitC使HSP70的表达趋于正常,对热应激有一定的缓解作用。     

热休克蛋白70通过Bcl-2抑制氧化应激所致C2C12细胞凋亡

目的 探讨C2C12肌原细胞内热休克蛋白70对Bcl-2表达的影响及Bcl-2对热休克蛋白70抗细胞凋亡作用的影响.方法 应用Western Blotting观察Bcl-2在转染热休克蛋白70真核表达质粒(pcDNA3.1-HSP70)或其反义寡核苷酸C2C12肌原细胞中的表达;采用基因瞬间转染技术使热休克蛋白70过表达的C2C12肌原细胞内Bcl-2表达抑制,应用流式细胞术检测H2O2处理所致细胞凋亡的发生情况.结果 转染热休克蛋白70真核表达质粒的C2C12肌原细胞中,热休克蛋白70和Bcl-2的表达明显高于空载体转染组(P<0.01);而转染热休克蛋白70反义寡核苷酸后,热休克蛋白70和Bcl-2的表达明显低于随机寡核苷酸转染组 (P<0.01);热休克蛋白70过表达的C2C12肌原细胞分别转染Bcl-2反义寡核苷酸及随机寡核苷酸,0.5 mmol/L H2O2处理24 h,Bcl-2反义寡核苷酸转染组的细胞凋亡率明显高于随机寡核苷酸转染细胞组.结论 热休克蛋白70能上调C2C12肌原细胞内Bcl-2的表达;热休克蛋白70的抗细胞凋亡功能可能与其上调Bcl-2表达相关.     

热休克蛋白70对大鼠脊髓损伤后凋亡的影响

热休克预处理能减轻脊髓损伤后的凋亡,其机理可能同热休克蛋白70合成增加,并进一步抑制NF-κB的表达有关。     

红花黄素对脊髓损伤大鼠的保护作用

目的探究红花黄素(SY)对脊髓损伤(SCI)的保护作用及其作用机制。方法将SCI模型大鼠分为模型(Model)组、重组高迁移率组蛋白(HMG)B1处理组(HMGB1组,8μg/kg)、SY干预组(SY组,40 mg/kg)、HMGB1+SY组(8μg/kg HMGB1+40 mg/kg SY),另设假手术(Control组),各组均12只,各组连续给药28 d。行为学运动(BBB)评分法评定运动行为;获取脊髓组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理形态学变化;免疫印迹法(WB)检测脊髓组织中HMG B1、Toll样受体(TLR)4、核转录因子(NF)-κB蛋白表达;制备脊髓组织匀浆液,采用酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHP)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;Tunel染色观察脊髓组织中神经元细胞凋亡情况;Western印迹法检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Cleaved-caspase3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与Control组相比,Model组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Model组相比,HMGB1组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);SY组、HMGB1+SY组与Model组及HMGB1组比较BBB评分显著升高,SOD、GSHP、CAT水平显著升高,MDA水平显著降低,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低,脊髓组织神经细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论 SY可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,缓解SCI后氧化应激水平,减低脊髓组织神经元细胞凋亡,缓解脊髓组织、运动功能损伤。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠脑I／R损伤的保护作用及其机制探讨

目的观察大剂量甲基强的松龙（MP）对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤的保护作用,并探讨其机制。方法将48只SD大鼠随机分为A、B组各24只,均制备大鼠局灶性脑I／R模型,A、B组大鼠经尾静脉分别一次性注入MP10μl（90mg／kg）、生理盐水10μl。采用开阔法观察大鼠行为学变化,采用TUNEL法和免疫组织化学方法检测大鼠脑缺血区神经细胞的凋亡和热休克蛋白（HSP27）、细胞色素C-3（Cyt-3）、Caspase-9蛋白。结果与B组相比,MP组SD大鼠探索活动显著增加,脑缺血区凋亡细胞数明显减少,HSP27表达增加,Cyt．3、Caspase-9蛋白表达降低,P均〈0．01。结论大剂量甲基强的松龙对脑I／R损伤有保护作用,可能与其调控HSP27／DISC信号复合体的表达有关。