结缔组织生长因子对Kupffer细胞诱导的肝星状细胞激活的影响

目的 探讨肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达对Kupffer细胞(Kc)诱导的HSC激活的影响.方法 构建含CTGF的RNA干扰载体.将肝星状细胞系rHSC-99分为3组:对照组、空载体组和RNA干扰组.采用RT-PCR方法 检测HSC的CTGF表达.分离培养KC,建立各组HSC与KC的共培养体系,MTT检测HSC的增殖情况;RT-PCR检测HSC的TGF-β1、I型前胶原的表达;Western Blot检测HSC的TGF-β1表达,ELISA检测共培养上清中I型胶原的表达;免疫荧光化学检测HSC的α-SMA的表达. 结果 构建CTGF的RNA干扰载体Psilencer 3.1H1-Neo-CTGF.RNA干扰后CTGF表达降低22%.KC得率为5×107,活率＞98%.在HSC和KC共培养体系中,RNA干扰HSC的CTGF表达后,与KC共培养的HSC活化和增殖明显被抑制,与对照组相比,HSC的增殖降低29%(t:20.17,P＜0.01).Ⅰ型前胶原和α-SMA的表达下降38%,细胞培养上清中Ⅰ型胶原的分泌量下降48%(t=12.18,t=7.81,t=15.96,均P＜0.05).TGF-β表达则没有明显的变化.结论 阻断HSC的CTGF表达能抑制由KC诱导的HSC激活.     

生长因子对大鼠肝星状细胞间质胶原酶基因表达的调节作用

目的 了解转化生长因子—β(TGF—β)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)对大鼠肝星状细胞间质胶原酶(MMP13)基因表达的影响。方法 在培养的肝星状细胞系中加入TGF—β(1μg／L)、EGF(100μg／L)和PDGF(200μg／L)，于不同的时间点(8、24、48、72h)收集细胞，提取总RNA；用逆转录定量多聚酶链反应(PCR)方法测定MMP13的基因表达水平。结果 TGF-β组肝星状细胞MMP13基因表达水平在8、24、48、72h4个时间点均明显低于对照组。EGF组肝星状细胞MMP13的基因表达水平在8、24、48h均明显高于对照组；24h达高峰，为对照组的3倍。PDGF组肝星状细胞MMP13的基因表达水平在8、24、48、72h均明显高于对照组；48h达高峰，为对照组的3倍。结论 TGF—β可抑制大鼠肝星状细胞MMP13基因的表达；而EGF、PDGF可增强肝星状细胞MMP13基因的表达。     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞形态及表达结缔组织生长因子的影响

目的 通过观察肿瘤坏死因子（TNF）-α对肝星状细胞（HSC）形态和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨TNF—α在肝纤维化中的作用机制。方法 采用体外培养大鼠肝星状细胞，加入TNF-α和TGF-β1，透射电镜观察肝星状细胞的形态学改变并应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测不同处理组HSC中CTGF的表达。结果 TNF-α、TGF—β1均诱导HSC中CT-GF表达；10μg／L浓度的TNF-α作用6、24和48h后，检测到CTGFmRNA表达，而TGF-β1在1μg/L浓度作用4h后，即可诱导HSC中CTGFmRNA表达。结论 TNF-α诱导HSC中CTGF的表达可能参与早期肝纤维化的形成。     

转化生长因子-β_1对前列腺基质细胞基因表达的调节作用

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对前列腺基质细胞基因表达的调节作用。　方法　原代培养人前列腺基质细胞 ,并传代至 4～ 6代。分别将浓度为 0 .0 1、0 .10、1.0 0、10 .0 0 μg/L的TGF β1加入细胞培养液中。孵育 48h后收集细胞。用内参照半定量RT PCR方法检测前列腺基质细胞雄激素受体 (AR)、TGF β1、bFGF和平滑肌特异性标记蛋白smoothelin基因的转录水平。　结果　与对照组相比 ,低浓度 (0 .0 1μg/L)的TGF β1可增强体外培养的前列腺基质细胞内AR表达 (P <0 .0 1) ,差别有显著性意义。随TGF β1浓度增加 ,促AR表达作用减弱。随TGF β1浓度增加基质细胞TGF β1、bFGF和smoothelin基因的转录增加 (P <0 .0 1) ,并且随着应用浓度增加促各基因转录的作用增强。　结论　TGF β1对前列腺基质细胞基因表达具有广泛的调节作用 ,在前列腺增生发病中具有重要作用     

白细胞介素10对大鼠肝损伤时肝星状细胞转化生长因子β1 和血小板源生长因子基因表达的影响

目的探讨白细胞介素10(IL-10)在大鼠肝损伤过程中对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGFβ1)和血小板源生长因子(PDGF)的影响.方法治疗组用含有IL-10基因的腺病毒载体通过尾静脉转染大鼠(n=11),同时设立空载体组(n=12)和空白对照组(n=12),另给以皮下注射四氯化碳,每周2次,8周后处死大鼠,离体肝脏用胶原酶灌注以及密度梯度离心方法分离HSC.应用酶联免疫吸附法测大鼠血清中IL-10水平,逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹检测HSC的TGFβ1和PDGF表达.结果治疗组的IL-10水平明显高于空载体组和空白对照组(P<0.05);治疗组HSC的TGFβ1和PDGF的mRNA、蛋白表达水平均低于空载体组和空白对照组(P<0.01).结论 IL-10可以通过下调HSC的TGFβ1和PDGF的表达来减轻肝损伤时HSC的激活程度.     

转移生长因子-β、碱性成纤维细胞生长因子诱导人成骨细胞表达血小板衍生生长因子BmRNA的研究

目的　探讨转移生长因子（TGF）-β、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人成骨细胞血小板衍生生长因子（PDGF）-B mRNA表达的影响及其意义。方法　体外分离培养人成骨细胞。在体外培养的成骨细胞中分别加入10、20、40、80、160 μg/L梯度浓度的PDGF-BB培养细胞24 h,以摄取3H-TdR为细胞增殖指标检测细胞增殖状况。以4 μg /L的TGF-β和10 μg/L的bFGF培养细胞24 h,寡核苷酸探针检测细胞PDGF-B mRNA的表达。 结果　10～160 μg/L的PDGF-BB可促进成骨细胞增殖（P＜0.05）。在普通培养条件下,细胞不表达PDGF-B mRNA;当培养体系中加入TGF-β和bFGF,可见PDGF-B mRNA的表达。 结论　PDGF-B基因的表达可能是骨组织生长的储备因素,TGF-β和bFGF可诱导成骨细胞表达PDGF-BB。     

生长抑素类似物奥曲肽对肝星状细胞结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)中结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响。方法 从Sprague Dawley大鼠的肝脏中分离培养HSC,待其自发激活增殖及传代后,将其分为5组,其中4组加入不同浓度的OCT,余1组为不加OCT的对照组,培养72h,RT-PCR法检测各组细胞CTGF及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的情况。结果 OCT能够明显抑制CTGF及FGF-β1mRNA的表达。在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论 OCT能够抑制激活的HSC中TGF和TGF-β1基因的表达,由此发挥其抗纤维化作用,为临床抗纤维化治疗提供新的思路。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

5-羟色胺受体在肝星状细胞上的表达及5-羟色胺对肝星状细胞生物学活性的影响

目的　探讨 5 羟色胺 ( 5 HT)受体在肝星状细胞 (HSC)的表达及 5 HT通过其受体的介导对HSC生物学活性的影响。　方法　采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法来分离培养HSC ;RT PCR方法检测HSC中 5 HT受体 1B、2A、2B、3等亚型的表达 ;Westernblot方法检测 5 HT及其 2A受体阻断剂酮色林、3型受体阻断剂恩丹西隆对HSC表达TGF β1和Smad4的影响。建立聚硅酮膜培养法 ,将HSC培养在聚硅酮膜上 ,研究 5 HT及酮色林、恩丹西隆对HSC收缩的影响。结果　HSC表达 5 HT的 1B、2A、2B等受体亚型 ,不表达 3亚型。5 HT明显促进HSC表达TGF β1和Smad4(P <0 0 5 ) ,酮色林能抑制TGF β1和Smad4的表达。恩丹西隆的作用不明显。 5 HT能促进HSC的收缩 ,并成量效依赖关系 ,这种收缩作用能被酮色林所阻断 ,不被恩丹西隆阻断。　结论　HSC表达 5 HT的多种受体亚型 ,5 HT通过其受体的介导对HSC的生物学活性发生影响 ,在肝硬化、门静脉高压症的发生发展中起了一定的作用。     

肝星状细胞中蛋白激酶C活性改变对其表达血小板源生长因子及增殖的影响

目的观察蛋白激酶C（PKC）活性改变对肝星状细胞（HSC）表达血小板源生长因子（PDGF）的影响及对HSC增殖和激活的作用。方法将肝星状细胞系rHSC-99随机分为3组：对照组（A组）；PKC激动剂PMA0．5μmol／L组（B组）；PKC抑制剂Calphostin C100nmol／L组（C组）。加药后0、3、6、12、24h分别检测各组细胞PKC活性的变化；作用24h后，采用Westernblot方法检测各组细胞PDGF和胞外信号调节激酶（ERK）的表达；采用免疫荧光化学方法检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的表达；采用MTT法检测细胞的增殖情况。结果PMA作用后PKC的活性显著增强，而Calphostin C则抑制PKC的活性。PKC活性增强后，与对照组比较HSC的PDGF表达升高了1．4倍（P〈0．01），ERK表达升高了1．2倍（P〈0．05）；n—SMA的表达升高了1．3倍（P〈0．01），并促进HSC的增殖；PKC活性抑制后则能抑制以上的作用。结论PKC活性的改变能调控HSC中PDGF的表达，在HSC的增殖和激活中发挥调节作用。     

妊高征胎盘滋养细胞浸润能力的检测及胰岛素样生长因子-Ⅱ、转化生长因子-β1对其的影响

目的　检测妊娠高血压综合征 (妊高征 )胎盘滋养细胞浸润能力 ,胰岛素样生长因子 II(IGF II)、转化生长因子 β1(TGF β1)对细胞滋养细胞侵袭力的影响。　 方法　从正常及妊高征胎盘分离、纯化细胞滋养细胞行体外培养 ;用体外侵袭试验检测正常及妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力 ;IGF II、TGF β1对两组滋养细胞侵袭力的影响。　 结果　妊高征滋养细胞较正常滋养细胞的侵袭力显著降低 (P <0 .0 5 ) ;IGF II明显促进、TGF β1明显抑制正常妊娠滋养细胞的侵袭能力(P <0 .0 5 ) ;二者对妊高征滋养细胞侵袭力的影响不显著 (P >0 .0 5 )。　结论　妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力显著降低 ;IGF II、TGF β1可能在妊高征胎盘滋养细胞浅浸润过程中起一定作用。     

反义转化生长因子-β1基因对骨肉瘤细胞表达转移相关因子的影响

目的　探讨反义转化生长因子(TGF) β1基因转染对骨肉瘤细胞MG 63表达基质金属蛋白酶(MMPs)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA )等肿瘤转移相关因子的影响。方法　将反义TGF β1基因转染MG 63 ,G418筛选转染细胞后,采用Northernblot法检测转染细胞MMP 2、MMP 9和uPA的表达情况。结果　反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞上清培养的Mv 1 Lu细胞增殖活性为0 .975±0 .0 16(对照组1.0 3 2±0 .0 2 7,P >0 .0 5 ) ;Northernblot法检测显示MMP 2和uPAmRNA的表达明显降低。结论　通过反义基因技术阻断骨肉瘤细胞TGF β1自分泌环,在降低肿瘤细胞TGF β1表达的同时,也降低了转移相关因子MMP 2、uPA的表达,从而可能抑制肿瘤的侵袭和转移     

内毒素对人巨噬细胞系U937生物学性状和生长因子分泌能力的影响

目的　探讨不同浓度的内毒素 /脂多糖 (LPS)对人巨噬细胞系U937生物学性状和生长因子分泌能力的影响。　方法　分别以 0 .0、0 .1、1.0、10 .0、5 0 .0、10 0 .0 μg/ml的LPS刺激体外培养的U937,作用 2 4h后运用四氮噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖活力 ,应用流式细胞仪测定细胞凋亡率 ,并用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清中转化生长因子 β1(TGF β1)和血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化。　 结果　与LPS为 0 .0 μg/ml时比较 ,当其浓度为 0 .1～ 10 0 .0 μg/ml时可刺激U937细胞凋亡、促进其分泌TGF β1(P <0.0 5～ 0.0 1),其中低浓度 (0 .1～ 10 .0 μg/ml)的LPS可促进U937增殖 (P <0.0 5～ 0.0 1),但对VEGF的分泌无明显影响 (P >0.0 5);高浓度 (5 0 .0、10 0 .0μg/ml)的LPS对U937的增殖无促进作用 (P >0.0 5 ),但能提高VEGF的分泌能力 (P <0.0 1)。结论　LPS可激活U937并促使其分泌TGF β1,刺激浓度以 0 .1～ 10 .0 μg/ml为宜 ;LPS仅在较高浓度时能促进U937细胞分泌VEGF。     

高强度聚焦超声对黑色素瘤小鼠局部肿瘤血管生长因子的影响

目的　检测黑色素瘤瘤小鼠高强度聚焦超声(HIFU)治疗前后局部(靶区及边缘)血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子(TGF) β1和TGF α等血管生长因子的表达,探讨HIFU治疗对局部肿瘤血管生长因子的影响。方法　采用B16黑色素瘤动物模型,实验分3组,即HIFU组、手术组和假照组。于治疗后第3天取各组靶区肿瘤组织(手术组除外)及边缘皮肤组织。采用免疫组织化学法检测VEGF、bFGF、TGF β1、TGF α的表达。结果　假照组靶区肿瘤组织VEGF、bFGF、TGF β1、TGF α表达阳性率分别为80 .0 %、5 0 .0 %、65 .0 %、80 .0 % ,而HIFU组为阴性表达;假照组边缘皮肤组织为阴性表达,而手术组及HIFU组边缘皮肤组织的上述4种血管生长因子的阳性表达率均为10 0 % ,两组差异无统计学意义(P >0 .0 5 )。结论　HIFU治疗能够破坏VEGF、bFGF、TGF β1、TGF α等血管生长因子在肿瘤组织中的表达,同时HIFU治疗也可以使靶区边缘血管生长因子的表达增加     

转化生长因子-β多克隆抗体预防腹腔粘连的实验研究

目的　利用转化生长因子 - β(TGF β)多克隆抗体 (多抗 )阻断TGF β生物学作用 ,观察TGF β多抗预防腹腔粘连的效果。 方法　建立大鼠术后肠粘连模型 ,分别腹腔注射生理盐水 (对照组 )、透明质酸钠 (透明质酸钠组 )和不同剂量的TGF β多抗 (抗TGF β组 ) ,术后 2 1d进行粘连评分 ,其中 30只大鼠分别于术后 3 ,1 0d处死 ,取粘连部位组织 ,用免疫组化法 ,测定TGF β的表达。 结果　术后 2 1d粘连评分 :抗TGF β组为 (2 .4± 0 .99) ,显著低于对照组 (6 .0± 1 .2 5)和透明质酸钠组 (3 .4±1 .0 3) ;在不同TGF β多抗浓度中 50 μg组较经济有效 ;对照组和透明质酸钠组TGF β的表达有时间依从性。术后 3d达高峰 ,这种表达可被TGF β多抗抑制。 结论　TGF β多抗在动物模型上可预防腹腔粘连的发生 ,其机制在于抑制了TGF β的表达     

术后狭窄胆管转化生长因子-β1的表达及意义

目的　观察转化生长因子 β1(TGF β1)在术后狭窄胆道中的表达和分布 ,探讨其在良性胆管狭窄形成过程中的作用及意义。方法　采用免疫组织化学streptavidin biotincomplex(SABC)法检测了 12例术后 3～ 6个月狭窄胆道组织中TGF β1的的表达和分布情况 ,并与 5例正常胆道组织进行对照研究。结果　狭窄胆道组织中TGF β1主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞。正常胆管壁纤维组织表达较弱 ,阳性细胞均数为 12 .45± 6.2 4;TGF β1在术后狭窄胆道组织中的表达较强 ,本组 12例标本中 10例表达 ,2例表达 ,阳性细胞均数为5 9 .5 2± 8.3 3 ,与正常胆管比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　TGF β1高表达是造成胆道狭窄过程中成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积、瘢痕增生的重要因素。     

雄激素和转化生长因子β_1协同调节前列腺基质细胞增殖和分化

目的　探讨双氢睾酮 (DHT)和转化生长因子 β1(TGF β1)对体外培养的前列腺基质细胞增殖和分化的影响及前列腺基质增生的机制。　方法　体外培养人前列腺基质细胞 ,加入DHT和TGF β1,采用MTT法检测细胞增殖 ,免疫组化、RT PCR方法检测平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达。　结果　对平顶期的前列腺基质细胞 ,单独应用DHT或TGF β1无显著刺激增殖作用 (P >0 .0 5 ) ;DHT和TGF β1联合应用时 ,可显著刺激基质细胞增殖 (P <0 .0 1)。TGF β1可使前列腺基质细胞中平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达增加 (P <0 .0 5 ) ,与DHT联合应用时这种作用更强。　结论　DHT和TGF β1具有协同促进前列腺基质细胞增殖和分化的作用。TGF β1和雄激素可能是前列腺基质增生和平滑肌细胞过度增殖的重要诱因     

血小板衍生生长因子促进肝星状细胞活化在肝癌肿瘤微环境中的作用

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化中的作用已被公认,近年来HSC在肝脏肿瘤微环境中的作用也逐渐引起人们重视.血小板衍生生长因子(PDGF)是HSC最重要的有丝分裂原,其在HSC的活化中具有极为重要的作用.HSC既是PDGF的作用靶细胞,同时也可分泌PDGF,从而形成PDGF激活HSC的双向循环模式.PDGF可通过MAPK、PI-3K、Ca2+、JAK等信号通路激活HSC.研究PDGF激活HSC在肝脏肿瘤微环境中的作用机制,寻找靶向抑制PDGF及肝星状细胞的相应方法,有望为肝脏肿瘤的治疗提供新的方向.     

反义转化生长因子-β1基因逆转骨肉瘤细胞恶性表型的研究

目的　观察反义转化生长因子 (TGF) β1基因对骨肉瘤细胞恶性表型的逆转作用。方法　将反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞MG 63后 ,以G418(4 0 0mg/L)筛选 14d ,获得转染细胞系。分别检测细胞周期、细胞凋亡和明胶酶A(MMP 2 )表达 ,并观察转染细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。结果　与MG 63和空载体转染细胞MG pcDNA3相比 ,反义基因转染细胞MG TGF β1(-)的G0 /G1期细胞从 5 6.2 %和 60 .1%增至 71.6% ,S期细胞从 19.1%和 17.8%降至 12 .9% ,MMP 2mRNA表达明显减少。MG TGF β1( )的软琼脂克隆形成数从 48.6± 8.1和45 .2± 4.7减至 2 8.2± 5 .6,裸鼠体内形成肿瘤的体积 (83 .4± 2 7.4)mm3 也明显小于MG 63组(191.3± 2 1.5 )mm3 和MG pcDNA3组 (2 0 4.2± 3 0 .7)mm3 。结论　反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型 ,抑制肿瘤的侵袭和转移。     

转化生长因子-β1和结缔组织生长因子在慢性胰腺炎组织中的表达及其意义

我们通过建立大鼠慢性胰腺炎 (CP)模型 ,用免疫组织化学技术 ,对转化生长因子 β1(TGF β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在CP形成过程中的表达进行动态观察 ,探讨其作用。一、材料和方法1.试剂与仪器 :三硝基苯磺酸Sigma公司产品 ,恒流静脉泵TE 3 11型 ,Teru mo公司产品 ,兔抗大鼠TGF β1单克隆抗体 ,兔抗大鼠Ⅰ型胶原多克隆抗体SantaCruz公司产品 ,兔抗大鼠CTGF单克隆抗体和EnVisionTM试剂盒购自Dako公司。2 .模型制备[1] :48只SD大鼠 (必凯公司 ) ,体重 2 5 0～ 3 0 0 g ,随机分为两组 :(1)CP组 (n =2 4)。氯胺酮 (10 0mg/kg)…