丝光绿蝇抗菌肽针刺诱导及初步电泳分离

目的探讨丝光绿蝇抗菌肽的诱导及电泳分离方法。方法丝光绿蝇3龄幼虫针刺体壁诱导后，第48小时提取其血淋巴，设置3、5、7、10μl不同的加样量和pH值60、6．5、7．0的琼脂平板，观察对溶壁微球菌的抑菌效果。置于100、80℃水浴30s、1、3和5min后，观察不同温度处理不同时间后的去杂蛋白效果和对溶壁微球菌的抑菌效果，并对各样品进行电泳分离。结果随加样量增加抑菌环直径增大，10μl环太大易变形，不易测量，以加7μl血淋巴对溶壁微球菌的抑菌效果最佳。平板pH值6．0时，对溶壁微球菌的抑菌环直径最大，随pH值增加而抑菌环直径减小。血淋巴100℃水浴30s、1min仍有抑菌活性，处理3和5min无抑菌活性；80℃水浴30s至5min均有抑菌活性，电泳显示100℃处理3和5min的样品与其他相比缺少2条蛋白区带。结论针刺诱导的丝光绿蝇抗菌肽在酸性条件下抑菌活性更强，分离时血淋巴预处理采用80℃水浴1—3min去杂蛋白效果较好，诱导的血淋巴100℃处理3和5min即丧失抗菌活性，电泳显示缺少2条区带，此2条差异区带可能为抗菌肽组分。     

丝光绿蝇研究概况

丝光绿蝇属于双翅目丽蝇科丽蝇亚科,为常见的医学媒介昆虫,能机械性传播疾病,引起蝇蛆病,其尸食性特点,又使其在环境净化、法医昆虫学领域等方面有较大的应用价值。近年来,在丝光绿蝇的营养成分、诱导其幼虫产生抗菌物质及幼虫在伤口愈合中的作用等研究方面也取得了一定进展。现就国内外关于丝光绿蝇的饲养、生物学特性、实验生态学、防治和应用等方面的研究做一概述,并探讨丝光绿蝇以后的研究方向,以期为进一步研究丝光绿蝇提供帮助。     

丝光绿蝇抗菌物质诱导研究

目的 探讨针刺体壁对丝光绿蝇抗菌物质的诱导表达规律。方法 丝光绿蝇三龄幼虫针刺体壁处理后，分别于第0、12、24、36、48、60、72、84h提取血淋巴，以金黄葡萄球菌为指示菌，采用平板滤纸片法作抑菌试验，用于显示丝光绿蝇抗菌物质的诱导表达，以抑菌圈直径表示抑菌活力的大小。提取诱导后48h的血淋巴，设置3、5、7ul不同的血淋巴加样量实验组，记录不同加样量对金黄葡萄球菌的抑菌效果。设置不同稀释浓度，记录不同浓度的血淋巴对金黄葡萄球菌的抑菌活力。观察诱导后48h的血淋巴对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、枯草杆菌、溶壁微球菌等8种细菌的抑菌效果。结果 丝光绿蝇幼虫针刺体壁处理后，对金黄葡萄球菌的抑菌活力高峰出现在处理后48h。平板滤纸片法抑菌试验中，以加7ul血淋巴的抑菌效果最佳。丝光绿蝇诱导48h血淋巴1／2、1／4、1／8、1／16、1／32、1／64的不同稀释浓度，对金黄葡萄球菌均能产生明显的抑菌环。丝光绿蝇诱导后48h的血淋巴，对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、枯草杆菌、溶壁微球菌等8种细菌都能产生明显的抑菌环。结论 针刺体壁能诱导丝光绿蝇体内产生抗菌物质，诱导的抑菌活力峰出现在处理后48h。抑菌试验加样以7ul为宜，诱导后丝光绿蝇的血淋巴，稀释至64倍，对金黄葡萄球菌仍有抗菌活性，提示有较强的抗菌活性。对8种细菌都能产生明显的抑菌环，提示具有较广的抗菌活性。     

丝光绿蝇室内连续5代成虫产卵特征观察

目的　观察丝光绿蝇室内连续人工饲养的各代成虫产卵特征。　方法　将丝光绿蝇引入室内 ,采用人工配制的幼虫饲料在室内进行连续饲养 ,观察记录其室内第 1～ 5代成虫产卵结果。　结果　成虫第 1～ 5代产卵天数 (x± s)分别为 :5 .5 0± 0 .17,8.2 5± 0 .96 ,8.2 5± 0 .5 0 ,7.2 5± 1.5 0 ,8.5 0± 1.2 9;产卵次数分别为 :18.0 0± 1.41,2 7.75± 9.0 0 ,2 3.0 0± 8.12 ,2 3.5 0± 11.5 6 ,33.2 5± 12 .89;第 1、2、4、5代产卵指数分别为 :0 .36 0± 0 .0 18,0 .788± 0 .32 0 ,0 .6 42± 0 .2 91,0 .819± 0 .40 6。室内第 1代产卵天数少于第 2、3、5代 (P<0 .0 5 ) ,与第 4代无显著性差异 ,第 2～ 5代间产卵天数均无显著性差异 ;产卵次数及产卵指数室内第 1～ 5代间均无显著性差异。　结论　本次实验丝光绿蝇引入室内连续饲养的各代成虫产卵特征比较稳定。     

丝光绿蝇室内种群连续2代产卵动态观察

目的观察丝光绿蝇室内种群在整个产卵期内的产卵量动态变化规律.方法观察丝光绿蝇室内种群第6代及第7代成虫整个产卵期内每天的产卵量,并进行分析.结果第6代成虫于产卵期第4天和第11天出现2个产卵高峰,产卵量分别为1 252和1 290粒;第7代成虫于产卵期第1天和第8天出现2个产卵高峰,产卵量分别为858和763粒,后期产卵相对较少.结论丝光绿蝇室内种群产卵期内产卵量不稳定,后期产卵能力较低.     

两组丝光绿蝇室内连续5代成虫形态观察比较

目的　观察比较两种饲料对丝光绿蝇室内连续饲养的各代成虫形态的影响。　方法　将丝光绿蝇引入室内 ,分成两组 ,即鱼粉组和麦麸组 ,分别采用两种幼虫饲料在室内进行连续饲养 ,分别随机测量两组室内第 1～ 5代成虫头宽 ,进行比较观察。　结果　成虫头宽经 t检验 ,组间比较 ,第 1、4、5代成虫头宽两组间雄性以及雌性均无显著性差异 ,第 2、3代鱼粉组成虫头宽显著性大于麦麸组 ;组内比较 ,两组内雄性以及雌性成虫头宽第 1代均显著性大于其第 2～ 5代。　结论　可能提示幼虫饲料添加鱼粉有利于丝光绿蝇的生长发育 ,将丝光绿蝇引入室内连续饲养 ,成虫形态有减小的趋势。     

感染丝光绿蝇的双翅目虫疠霉形态观察

目的描述丝光绿蝇感染双翅目虫疠霉的症状及其虫疠霉的形态特征,为控制丝光绿蝇提供科学依据。方法醋酸地衣红和棉蓝染色法观察双翅目虫疠霉的形态,分别显微测量分生孢子、细胞核和分生孢子梗直径,并摄影。结果感染双翅目虫疠霉的丝光绿蝇成虫附着于大叶榕的树干上,双翅向侧上方张开,浓密的灰白色虫霉子实层几乎覆盖整个虫体,四周可见很多密集的、长短不一的假囊状体伸出。双翅目虫疠霉的初生分生孢子长椭圆形至近纺锤形,（24.8±1.8）μm×（10.8±0.9）μm〔（22.1～28.6μm）×（9.1～14.3μm）〕,长径比（L/D）为2.3±0.2（1.89～2.86）,双囊壁,单核。次生分生孢子形似初生分生孢子（17.3±1.4）μm×（11.5±1.0）μm〔（15.6～19.5μm）×（9.1～13.0μm）〕,L/D为1.5±0.1（1.3～1.7）。假囊状体多,单菌丝状,基部φ（19.7±1.3）μm（16.2～22.9μm）,端部φ（5.4±1.2）μm（4.0～6.1μm）。假根单菌丝状,φ（19.5±0.9）μm（16.6～21.4μm）,端部分化为盘状固着器。休眠孢子未见。结论双翅目虫疠霉可能对丝光绿蝇有控制潜力。     

丝光绿蝇抗菌物质针刺诱导及对溶壁微球菌的抑菌活性研究

[目的]探讨针刺体壁诱导丝光绿蝇产生的抗菌物质对溶壁微球菌的抑菌活性。[方法]丝光绿蝇三龄幼虫经针刺体壁诱导后,48 h提取其血淋巴,设置3μl、5μl、7μl、10μl不同的加样量,观察对溶壁微球菌24 h后的抑菌效果。设置1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128不同的稀释浓度,加样量10μl,观察对溶壁微球菌24h后的抑菌效果。[结果]诱导后48 h的血淋巴不同加样量对溶壁微球菌均有大而明显的抑菌环产生,10μl环太大易变形,不易测量,以加7μl血淋巴对溶壁微球菌的抑菌效果最佳。稀释1/4、1/8、1/16、1/32、1/64浓度组均有抑菌环产生,抑菌环随稀释倍数增加而减小,稀释1/128时观察不到抑菌环。[结论]针刺诱导丝光绿蝇产生的抗菌物质对溶壁微球菌有较强的抑菌活性。     

丝光绿蝇2龄幼虫头节扫描电镜观察及一种新型感受器的发现（双翅目：丽蝇科）

目的对丝光绿蝇2龄幼虫头节感受器进行扫描电镜观察,补充新的形态学信息并筛选出便于物种鉴定的特征。方法2012年6—8月于北京松山国家级保护区和北京林业大学校园采集雌性丝光绿蝇,实验室饲养获得幼虫标本,扫描电镜观察头节感受器形态。结果幼虫头节触角为1个大腔锥形感受器,下颚须内围分布3个锥形、3个大腔锥形及6个小腔锥形3种不同类型的感受器,外围分布2个大腔锥形感受器。口沟基部具1对坑状感受器,下唇两侧附属器官均具1个大腔锥形感受器和1个坑状感受器。结论观察到丽蝇科幼虫新的形态学特征：下颚须的小腔锥形感受器和下唇器官的坑状感受器,其中小腔锥形感受器可作为丝光绿蝇2龄幼虫的鉴别特征。     

丝光绿蝇幼虫不同温度下的形态学变化及法医学意义

目的观察不同温度下丝光绿蝇幼虫形态学变化筛选日龄推断的指标。方法在20℃、24℃和28℃下饲养丝光绿蝇,瘦猪肉诱其产卵,每隔12h取样1次,直至50％以上幼虫化蛹为止,采用形态观察与图像分析相结合的方法对幼虫前气门、后气门、头咽骨进行观察研究。结果丝光绿蝇幼虫前气门、后气门、头咽骨均随着时间的延长发生规律性变化,幼虫后气门平均光密度、咽骨骨化面积及其平均光密度这3项指标是推断幼虫日龄较理想的指标。结论在恒温条件下,幼虫前气门、后气门、头咽骨均发生规律性变化,为法医学中尸体死后间隔时间的精确推断提供了一定的理论依据。     

冷冻丝光绿蝇蛹对丽蝇蛹集金小蜂后代发育和繁殖能力的影响

目的 探讨冷冻丝光绿蝇蛹对丽蝇蛹集金小蜂繁殖的影响.方法 考查丽蝇蛹集金小蜂在冷冻丝光绿蝇蛹内的发育历期、后代大小和雌蜂寿命、后代的寄生和繁殖能力.结果 丽蝇蛹集金小蜂在-20℃和-70℃冷冻后不同时间丝光绿蝇蛹内的发育历期约为13 d,后代雌蜂体长约为1.8mm,雄蜂体长约为1.2 mm,后代雌蜂寿命约为11 d,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);冷冻丝光绿蝇蛹中羽化出的丽蝇蛹集金小蜂对正常丝光绿蝇蛹的寄生率为83%～90%,寄生后蝇蛹的出蜂率为73%～80%,每蛹出蜂数约为37只,雌蜂比90%左右,与对照组比较差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 冷冻丝光绿蝇蛹对丽蝇蛹集金小蜂后代的发育和繁殖能力均无显著影响.     

高温作业者血浆内皮素和降钙素基因相关肽水平的研究

目的：探讨高温工人血浆内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）与高血压发病的关系。方法：应用放射免疫分析法对某矿山机械厂82名高温作业工人进行ET、CGRP水平的测定。同时以该厂不接触高温作业人员为对照研究。结果：高温作业组高血压患病率为39.02%，高血压组ET水平明显高于非高血压组，差异有显著性（P＜0．05），而CGRP的水平两组间差异无显著性。结论：高温作业可致血压升高，其机制与维持机体血压稳定的激素失衡有关。     

补充精,酪氨酸对高温下体温调节的影响

初步探讨了高温环境下补充氨基酸对体温调节的影响。结果显示补充酪氨酸后小鼠在热应激和热习服过程中肛温明显低于对照组．而单一精氨酸则作用不明显。提示高温下作业补充适量酪氨酸和精氨酸不仅可减少热应激反应，还可提高耐热能力并缩短热习服期。     

野生蚕抗菌肽对癌细胞的杀伤作用及其超微结构的研究

目的从野蚕蛹血淋巴中分离纯化抗菌肽,并研究野蚕抗菌肽对体外培养癌细胞的杀伤作用及超微结构的影响。方法采用MTT法检测野蚕抗菌肽对癌细胞的杀伤作用,并用透射电镜观察野生蚕抗菌肽对癌细胞超微结构的影响。结果野蚕抗菌肽对体外培养的A549、HepG2、SW620、HME1四株癌细胞具有较强的杀伤作用,而对HNE1鼻咽癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞杀伤作用较弱,透射电镜观察发现野蚕抗菌肽处理癌细胞后其细胞表面微绒毛减少、细胞膜破损,线粒体肿胀并形成空泡,核被膜消失、核浓缩聚集靠边呈块状或新月状凋亡小体。结论野蚕抗菌肽可有效地杀伤人体不同系统的癌细胞,并诱导HepG2癌细胞凋亡。