PTEN基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞增殖的影响

目的：探讨PTEN抑癌基因联合多西环素（Dox）对黏液表皮样癌细胞系增殖的影响。方法：用脂质体将野生型PTEN基因导人人黏液表皮样癌细胞系,再用不同浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,应用HE染色判定细胞形态,用流式细胞仪检测细胞周期,用免疫组化染色检测细胞PCNA和EGFR蛋白表达。结果：PTEN基因转染联合Dox组癌细胞增殖抑制显著,细胞出现空泡变性和凋亡,多数癌细胞阻滞于G1期,癌细胞中PCNA和EGFR蛋白的表达显著减弱,比PTEN基因转染或Dox单用作用更强。结论：PTEN抑癌基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞系增殖具有显著的协同抑制效应。     

PTEN基因联合多西环素抑制黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的研究

目的探讨外源性PTEN抑癌基因联合多西环素对人黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的影响。方法用脂质体将野生型PTEN基因导入黏液表皮样癌细胞系,再用不同质量浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,用端粒酶重复扩增法-酶联免疫吸附（TRAP-ELISA）测定细胞端粒酶活性。结果与对照细胞比较,野生型PTEN基因明显增加癌细胞对多西环素的敏感性,增敏比为1.65～4.75倍。PTEN基因转染或多西环素诱导癌细胞端粒酶活性明显下降（P＜0.05）,二者联合应用对癌细胞端粒酶活性抑制更为显著（P＜0.01）。结论PTEN抑癌基因联合多西环素对人黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性具有显著的协同抑制效应。     

PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭特性的影响。方法　用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照(M3SP2 -pBp细胞 ) ,分别用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、细胞迁移试验及细胞侵袭试验测定M3SP2 -PTEN细胞和M3SP2 -pBp细胞体外黏附、迁移和侵袭能力。结果　M3SP2 -PTEN细胞在Metrigel和Fn基质上黏附数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,黏附抑制率分别为 34 3%和 4 9 4 %。M3SP2 -PTEN细胞在Matrigel基质上迁移距离小 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,迁移抑制率为 2 6 0 %。M3SP2 -PTEN细胞体外侵袭细胞数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,侵袭抑制率为 31 4 %。结论　外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭具有抑制作用。     

中文文摘

.1.PTEN基因联合多西环素抑制黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的研究/刘斌…//华西口腔医学杂志.-2010,28(5).-532～534,538用脂质体将野生型PTEN基因导入黏液表皮样癌细胞系,再用不同质量浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,用端粒酶重复扩增法-酶联免疫吸附(TRAP-ELISA)测定细胞端粒酶活性。结果:与对照细胞比较,野生型PTEN基因明显增加癌细胞对多西环素的敏感性,增敏比为1.65～4.75倍。PTEN基因转染或多西环素诱     

PTEN抑癌基因对高转移性粘液表皮样癌细胞药物敏感性的影响

目的 评价外源性PTEN抑癌基因对人高转移性粘液样癌细胞系M3SP2药物敏感性的影响。方法 用脂质体介导法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系，以空载体转染细胞为对照，然后应用MTT比色法测定两种癌细胞对10种常用抗癌药物敏感性。结果 与对照细胞比较，PTEN基因转染细胞对6种抗癌药物甲氨喋呤、重组人干扰素－γ、丝裂霉素、多西环素、平阳霉素和氟脲嘧啶的相对抗肿瘤活性呈不同程度地增强，药物增敏比增加了1.5-52.1倍。结论 外源性野生型PTEN抑癌基因能增强粘液表皮样癌细胞对常用抗癌药物的敏感性。     

外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响

目的 :观察外源野生型PTEN基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响。方法 :应用倒置显微镜观察法、HE染色观察、扫描电镜及透射电镜观察法 ,比较野生型PTEN抑癌基因转染的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 PTEN与对照的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 pBp的形态学差异。 结果 :M 3SP2 pBp细胞体外生长活跃 ,细胞数量多 ,核分裂相多 ,细胞表面微绒毛丰富 ,细胞核切迹明显 ,细胞质中线粒体丰富 ;M 3SP2 PTEN细胞生长缓慢 ,分裂相很少 ,细胞数量少 ,部分细胞空泡变性 ,染色质凝集 ,细胞膜彭出 ,线粒体数量少并发生肿胀 ,较多的溶酶体融合。结论 :外源野生型PTEN基因的转染能导致体外培养的高转移性黏液表皮样癌细胞变性、坏死或凋亡。     

外源性PTEN基因诱导黏液表皮样癌细胞系凋亡的研究

目的：探讨转染外源性PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌细胞系M3SP2的诱导凋亡作用。方法：用含野生型PTEN抑癌基因逆转录病毒载体转染高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体亲本细胞为对照细胞。体外细胞凋亡采用苏木精-伊红染色、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪检测,裸鼠移植瘤细胞凋亡应用苏木精-伊红染色形态学判定。Bc l-2、P53和H-ras蛋白表达用免疫组化染色检测。结果：试验细胞M3SP2-PTEN与对照细胞M3SP2-pBp比较,出现较多的典型的凋亡细胞特征。试验细胞和对照细胞凋亡率分别为7.5%-13.6%和1.2%-2.3%;裸鼠移植瘤M3SP2-PTEN组和M3SP2-pBp组的凋亡指数分别为17.4%和3.5%。免疫组化染色显示M3SP2-PTEN细胞与对照细胞比较,P53蛋白表达增强,Bc l-2和H-ras蛋白表达减弱。结论：外源性PTEN抑癌基因能显著诱导高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞凋亡,并且与P53、Bc l-2和H-ras蛋白表达有一定关系。     

PTEN基因转染对粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2增殖的抑制作用

目的:观察外源磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑癌基因对高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2体外生长的影响。方法:应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入M3SP2细胞,通过活细胞观察、细胞生长曲线、分裂指数和克隆形成率了解细胞生长状态。结果:与亲本细胞比较,PTEN基因转染细胞数量减少、排列松散,部分细胞发生变性或崩解;细胞生长缓慢,分裂指数显著减至1612j(P<0101),细胞群体倍增时间明显延长(31174 h),细胞生长抑制率达57105%~71146%(P<01001);细胞克隆形成率为10140%~14193%,克隆形成抑制率高达65%~72% (P<0101)。结论:外源野生型PTEN抑癌基因能显著抑制高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2体外增殖。     

PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌实验性裸鼠肺转移的抑制作用

目的　探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌M3SP2细胞系实验性裸鼠肺转移能力的影响。方法　用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照M3SP2 -pBp细胞 ) ,应用裸鼠肺转移实验测定癌细胞的体内转移能力 ,并进行组织学观察。结果　对照组裸鼠肺转移结节数为 (2 4 0± 1.2 )个 ,组织学观察瘤细胞转移灶体积大 ,细胞生长活跃 ,可见较多核分裂。实验组裸鼠肺转移结节数量减少为 (8 5± 3 4 )个 ,转移抑制率为 6 5 6 % ;组织学观察可见转移灶数量少、体积小 ,并有较多的坏死和凋亡细胞。结论　转染野生型PTEN抑癌基因能降低人高转移性黏液表皮样癌细胞转移能力。     

PTEN抑癌基因对人黏液表皮样癌细胞系增殖和细胞周期的影响

目的：探讨外源性PTEN抑癌基因对唾液腺黏液表皮样癌细胞系增殖抑制的机制。方法：将含野生型PTEN抑癌基因cDNA重组反转录病毒表达质粒导入高转移性唾液腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体细胞为对照。MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化染色检测PCNA、EGFR、CDK4、P16INK4a和P57Kip2蛋白表达。采用SPSS11．0软件包进行统计学分析。结果：与对照细胞比较,PIEN基因转染癌细胞M3SP2-PTEN对表皮生长因子（EGF）介导的细胞增殖具有显著的抑制作用,癌细胞阻滞在G0／G1期,PCNA、EGFR、CDK4以及C—myc蛋白表达减弱,而P16INK4a和P57Kip2蛋白表达增强（P〈0．05）。结论：外源性PTEN基因具有抑制唾液腺黏液表样癌皮细胞系EGF介导的增殖作用,其作用机制与细胞周期进程受阻以及细胞周期调控分子有关。     

TGF‐β1 regulates the invasive and metastatic potential of mucoepidermoid carcinoma cells

J Oral Pathol Med (2011) 40 : 762–768 Background: Patients with mucoepidermoid carcinoma exhibit poor long‐term prognosis because of the lack of therapeutic strategies that effectively block tumor progression. We have previously characterized the Ms cells as a highly metastatic mucoepidermoid carcinoma cell line that expresses high levels of transforming growth factor β1 (TGF‐β1). Here, we studied the effect of suppressing TGF‐β1 by RNA silencing on the invasive and metastatic potential of mucoepidermoid carcinoma. Methods: Cell motility, substratum adhesion, and transmembrane invasion were estimated by migration, matrigel adhesion, and matrigel invasion assay. Matrix metalloproteinase (MMP)‐2 and MMP‐9 activity were determined using gelatin gel zymography. Balb/c nu/nu nude mice lung metastatic model was used to test the metastatic ability of the Ms cells. Lung metastatic tumors were experimentally induced by mice tail vein inoculation of cancer cells. Results: TGF‐β1 silencing inhibits cell motility, substratum adhesion, and transmembrane invasion. In vivo, a significant decrease in lung metastasis was observed when mice received tail vein injections of TGF‐β1‐silenced mucoepidermoid carcinoma cells, as compared to controls. Conclusion: These results unveil a critical role for TGF‐β1 in the progression of mucoepidermoid carcinomas and suggest that patients with this malignancy may benefit from therapeutic inhibition of the effectors of the TGF‐β1 pathway.     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

六亚甲基二乙酰胺对MEC-1细胞体外粘附、移动和侵袭的影响

目的 研究分化诱导剂六亚基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）对人粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１体外粘附、移动和侵袭的影响。方法 用２ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＭＢＡ体外诱导培养ＭＥＣ－１细胞,用ＭＴＴ（ｔｈｉａｚａｌｙｌ ｂｌｕｅ,噻唑蓝）比色法测定细胞在重构基底膜Ｍａｔｒｉｇｅｌ上的粘附,用Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ－ＰＣＦ培养系统测定细胞的移动性和侵袭性。结果 ＨＭＢＡ诱导的ＭＥＣ－１细胞在３０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ粘附实验中的粘     

PTEN基因对粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的研究外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法取PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞的M3SP2-PTEN及逆转录病毒空载体转染的对照细胞M3SP2-pBp,接种于裸鼠背部皮下,测定移植瘤生长曲线,并对移植瘤进行组织学观察。结果对照组移植瘤生长迅速,肿瘤体积倍增时间为32.68h。HE染色切片显示,细胞数量多、排列紧密,核分裂相较多见;而实验组M3SP2-PTEN细胞移植瘤生长比较缓慢,肿瘤体积倍增时间延长为36.58h,肿瘤结节体积明显小于对照组(P<0.01),抑瘤率达63.82%。HE染色切片显示,细胞排列比较松散,较多的细胞出现变性和坏死,部分细胞染色体边集并出现凋亡小体。结论外源野生型PTEN抑癌基因能够显著抑制人高转移性粘液表皮样癌细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制与PTEN基因诱导癌细胞变性和凋亡有关。