TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒(HCV) RNA定量检测结果的影响.方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息.分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCVRNA,qPCR检测提取HCV RNA的病毒载量,分析两种提取方法所得HCV RNA检测结果的差异.结果 qPCR结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性:y=0.978x+0.063(R2 =0.973).Bland-Altman统计分析显示TRIzol法提取的HCV RNA病毒载量对数值的平均值略低于磁珠法,但差异无统计学意义(P＞0.05).基因型分析结果显示1a、1b、2a、3a和6a基因型中两种提取方法差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TRIzol法提取HCV RNA的定量检测结果和磁珠法相当,且成本低廉,可在国内广泛用于试剂盒的开发和HCV RNA临床检测.     

两种HCV RNA荧光定量试剂盒检测丙型肝炎病毒的比较分析

目的 比较分析两种丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测试剂盒的临床性能.方法 随机抽取63例临床血清样本进行平行检测,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 对照试剂检测63例临床样本中有22例阳性,41例阴性;磁珠法试剂检测63例样本中有27例阳性,36例阴性,两种试剂的阳性样本具较好的一致性（P=0.000）,磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关性（r=0.935,P＜0.05）.结论 两种试剂都可以应用于HCV临床检测,磁珠法试剂具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV RNA定量检测试剂.     

血清HCV RNA不同提取方法的对比研究

目的:探讨不同方法提取丙型肝炎患者血清HCV RNA ,比较每种方法提取的RNA用于RT-PCR荧光定量检测的敏感度.方法: 分别采用异硫氰酸胍-酚氯仿法、蛋白酶K-酚氯仿法、固相吸附法、柱式总RNA抽提法提取7例疑似 HCV感染者血清标本中的HCV RNA,采用实时荧光定量PCR法进行检测.结果:采用异硫氰酸胍-酚氯仿法、蛋白酶K-酚氯仿法提取HCV RNA用于核酸检测有漏检现象,而采用固相吸附法和柱式总RNA抽提法,敏感度均可达到100%.结论采用固相吸附法和柱式总RNA抽提法提取血清HCV RNA具有较高的敏感度,在实时荧光定量PCR法检测中具有重要的临床价值.     

两种核酸提取方法对HCV-RNA检验结果的影响

目的:讨论固相吸附法和氯仿-异丙醇核酸提取方法对丙型肝炎病毒-RNA检验结果的影响。方法:选取106例丙型肝炎患者,随机分为实验组和对照组两组,采集所有患者血液,分离血清。实验组的53例患者,采用固相吸附法提取血清中的核酸。对照组的53例患者,采用氯仿-异丙醇法提取血清中的核酸。提取后的核酸,应用荧光定量PCR技术检测丙型肝炎病毒-RNA的含量,比较两种提取方法对丙型肝炎病毒-RNA检验结果的灵敏度、抗干扰能力和阳性率。结果:经研究比较发现:1对照组血清采用氯仿-异丙醇法提取核酸,稀释1×104倍后,荧光定量PCR可以检测,继续稀释则无法检测。实验组按照固相吸附法提取核酸,稀释1×105倍后,荧光定量PCR可以检测,继续稀释则低于检测限。2对照组核酸荧光定量PCR检测后,阳性35例,阳性率66.04%。实验组检测后阳性44例,阳性率83.02%。两组结果比较P<0.05,有显著性差异。3当血红蛋白浓度为5g/L时,两组抗干扰能力差别不大,P>0.05。当血红蛋白浓度为50g/L时,两组结果比较P<0.05。结论:与氯仿-异丙醇核酸提取方法相比,固相吸附法提取的丙型肝炎病毒-RNA灵敏度、阳性率更高,抗溶血干扰能力更好,具有一定优势。     

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸含量与丙型肝炎病毒抗体和丙氨酸氨基转移酶的相关性

[目的]探讨丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量与丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)间的相关性.[方法]采用实时荧光定量PCR检测302例丙型肝炎患者血清中HCV RNA含量,同时采用ELISA法检测抗-HCV水平,利用全自动生物化学检测仪测定ALT水平.[结果]302例丙型肝炎患者血清标本中,抗-HCV均呈阳性,其中199份标本HCV RNA含量高于检测上限(103 U/mL),2种检测方法的符合率为65.9%.ALT异常率随HCV RNA含量的增高而升高,两者呈显著正相关(r=0.155,P<0.05);而ALT水平变化与HCV RNA含量无相关性(r=0.001,P>0.05).[结论]HCV RNA含量与抗-HCV水平是诊断HCV感染的重要指标,HCV RNA含量结合ALT水平测定可帮助临床了解HCV在体内复制的状况及肝脏损伤情况.     

慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA、脂联素水平与AST/ALT比值的相关性

目的探讨慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA、脂联素水平与AST/ALT比值的关系,评价HCV RNA、脂联素和AST/ALT比值水平在判断丙肝患者预后方面的价值。方法采用荧光PCR试剂盒测定HCV RNA,ELISA法检测脂联素,全自动生化分析仪检测AST和ALT。结果与正常对照组相比,慢性HCV患者组血清HCV RNA和AST/ALT比值水平明显增高（P〈0.05）,而脂联素水平则降低（P〈0.05）;HCV RNA病毒含量与AST/ALT比值呈正相关（r=0.535,P〈0.01）,HCV RNA病毒含量与脂联素水平呈负相关（r=-0.483,P〈0.05）,AST/ALT比值与脂联素水平呈负相关（r=-0.426,P〈0.05）。结论联合检测血清HCV RNA、脂联素水平和AST/ALT比值的水平,对慢性丙型肝炎的疗效观察及预后估计有重要的临床价值。     

荧光定量PCR检测丙型肝炎RNA结果分析

目的：分析丙型肝炎病毒RNA[HCV—RNA]与丙型肝炎抗体（抗-HCV）及转氨酶（ALT）之间的关系.方法：荧光定量PCR（FQ—PCR）、酶免化学发光法、全自动生化分析仪分别检测含量与ALT水平之间无明显相关性，但是HCV—RNA阳性率在ALT正常组与异常组之间差异有显著性（P〈0．005）。结论：在丙肝的诊断、治疗中，检测HCV—RNA含量有积极的意义。     

实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床意义

目的：探讨实时荧光PCR检测技术在丙型肝炎病原诊断及在监测干扰素-α治疗慢性丙型肝炎早期病毒学应答反应(EVR)中的临床意义。方法：采用一种新的丙型肝炎病毒核酸(HCV—RNA)扩增(PCR)定量检测方法——实时荧光PCR检测HCV—RNA，对96例慢性丙肝(其中20例随机接受Pegasys或Referun-α治疗，每例思者分别采集治疗前后系列血清7份)、30例其它肝病、15例非肝病和86例健康献血员的血清标本进行HCV—RNA检测，部分血清标本与Amplicor(Roche)进行核对。结果：96例慢性丙肝患者血清HCV—RNA检出率85.4％(82／96)、其它肝病、非肝病和健康献血员中均未检出HCV—RNA；部分标本经与Amplicor核对呈较好相关性，r(log)＝0．91。随机接受Pegasys或Referon-α治疗的20例丙肝患者治疗前后EVR显示，前者的EVR似较后者明显，但因病例数太少，无明显统计学差异(G＝4.467,P＞0.05)。结论：实时荧光PCR检出的HCV—RNA载量可较客观地反映丙肝患者体内病毒复制水平，支持干扰素治疗慢性丙型肝炎EVR可用于预测长期疗效。     

HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCVRNA检测的临床意义

目的探讨HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCV RNA检测的临床意义。方法收集我院HCV感染及其与HBV重叠患者血清标本共179例,分为慢性丙型肝炎组（n=101）、肝硬化组（n=45）和肝癌组（n=33）。采用ELISA法检测血清抗HCV,用荧光定量PCR检测HCV RNA;对重叠感染HCV和HBV的31例患者同时检测HBVDNA。结果 179例患者抗HCV的总阳性率为97.8%,高于HCV RNA的阳性率（69.8%）（P〈0.01）。肝硬化组和肝癌组HCV RNA的阳性率分别为82.2%和84.8%,高于慢性丙型肝炎组阳性率64.4%（P〈0.05）。HCV与HBV重叠感染组的HCV RNA的阳性率为48.4%,低于单纯HCV感染组的HCV RNA阳性率（71.6%）（P〈0.05）。HCV与HBV重叠感染患者的HBV DNA阳性率为35.5%,也显著低于单纯HBV感染患者阳性率（76.7%）（P〈0.01）。HCVRNA阳性组ALT异常率（60.8%）高于HCV RNA阴性组（35.2%）（P〈0.05）。结论对HCV感染相关的不同疾病患者联合检测抗HCV、HCV RNA和ALT,对于HCV和HBV重叠感染者同时检测HBV DNA,有利于疾病的明确诊断、病情观察及预后判断。     

不同核酸提取方法检测HIV病毒载量和耐药基因的研究

目的比较5种核酸提取法提取HIV RNA的效率。方法收集2015年HIV病毒感染者血样,使用不同核酸提取方法平行检测Ct值及载量值,分析检测的检出率、敏感性、变异系数、稳定性,并进行耐药扩增。结果 5种提核酸方法检出率国产磁珠法最高,5种方法差异无统计学意义(χ2=7.98,P=0.09);Ct值从小到大顺序为:国产磁珠法≥离心柱法大批量法≥进口磁珠法试剂盒自带法;重复性比较表明国产磁珠法检测结果较稳定;核酸胶显示国产磁珠法提取RNA浓度最高;提取方法不影响耐药关键位点检测。结论 5种核酸提取方法均能检测HIV信息,国产磁珠法提取病毒核酸进行检测,敏感性和稳定性均较高。     

HCV RNA定量检测试剂的临床应用

目的:探讨HCV RNA定量检测试剂的临床应用效果。方法:通过和市场上广泛使用的柱提取试剂比实验,对一种丙型肝炎病毒磁珠法核酸提取荧光定量PCR检测试剂的临床使用进行评估。结果:①浓度在5.00E+03～5.00E+06 IU/mL的样本,两种试剂的定量结果与理论靶值均具有很好的对应性,具有较好的重复性和精密度;对于1.00E+03IU/mL以下的样本,磁珠法的定量结果重复性好,定量准确;而柱提取法大部分均未能检出。②对于2种方法检测的339例临床样本,中高病毒载量组柱提取法检测>5.00E+02IU/mL有147例,两种试剂定量结果基本一致,相关性r为0.9413。3 339例临床血清样本中5例样本磁珠法检测为阳性,而柱提取法检测为阴性,P<0.01,二者有显著性差异。这5例样本,丙肝肝炎抗体检测均为阳性。结论:①对于中高病毒载量的样本,两种试剂均具有良好的检测效果;②磁珠法对比柱提取法在低病毒载量区域,灵敏度更高,同时操作相对简单,不易出现污染与脱靶,具有较高的临床应用价值。     

High prevalence of hepatitis C virus-ribonucleic acid positivity in anti-hepatitis C virus negative renal transplant patients

Background

Hepatitis C virus (HCV) infection is common in renal transplant (RT) patients. Some of these patients remain anti-HCV negative despite presence of infection and these are identified by a positive HCV-ribonucleic acid (RNA) test.

Methods

We studied 404 RT patients for prevalence of HCV-RNA positivity in anti-HCV negative patients. Serum was tested for presence of anti-HCV antibodies using a third generation HCV micro-ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) test, which utilises a combination of HCV structural and nonstructural antigens. The RNA was extracted from patient serum for HCV viral quantification using Quiagen Ql Amp Viral RNA mini extraction kit. The HCV-RNA viral load was performed on Corbet Rotor Gene 3000 thermocycler using Taqman principle.

Results

About 308 patients were anti-HCV negative and 96 were anti-HCV positive, resulting in prevalence of overt HCV infection of 23.7%. A total of 130 anti-HCV negative patients tested positive for HCV-RNA making a prevalence of occult HCV infection of 42.2%. There was no significant difference in the rate of overt or occult HCV infection between males and females. Patients with HCV infection (whether overt or occult) had received more number of dialysis sessions (62.5 vs 32.2) and blood transfusions (2.78 vs 1.99) when compared to those without HCV infection (P=0.001). The mean duration on dialysis was also longer (8.15 months vs 4.53 months) in patients with HCV infection (P= 0.0001).

Conclusion

A direct test for HCV viraemia is important to accurately determine the epidemiology of HCV infection in RT patients who remain anti-HCV negative despite harbouring active HCV infection.     

High prevalence of hepatitis C virus-ribonucleic acid positivity in anti-hepatitis C virus negative renal transplant patients

Background

Hepatitis C virus (HCV) infection is common in renal transplant (RT) patients. Some of these patients remain anti-HCV negative despite presence of infection and these are identified by a positive HCV-ribonucleic acid (RNA) test.

Methods

We studied 404 RT patients for prevalence of HCV-RNA positivity in anti-HCV negative patients. Serum was tested for presence of anti-HCV antibodies using a third generation HCV micro-ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) test, which utilises a combination of HCV structural and nonstructural antigens. The RNA was extracted from patient serum for HCV viral quantification using Quiagen Ql Amp Viral RNA mini extraction kit. The HCV-RNA viral load was performed on Corbet Rotor Gene 3000 thermocycler using Taqman principle.

Results

About 308 patients were anti-HCV negative and 96 were anti-HCV positive, resulting in prevalence of overt HCV infection of 23.7%. A total of 130 anti-HCV negative patients tested positive for HCV-RNA making a prevalence of occult HCV infection of 42.2%. There was no significant difference in the rate of overt or occult HCV infection between males and females. Patients with HCV infection (whether overt or occult) had received more number of dialysis sessions (62.5 vs 32.2) and blood transfusions (2.78 vs 1.99) when compared to those without HCV infection (P=0.001). The mean duration on dialysis was also longer (8.15 months vs 4.53 months) in patients with HCV infection (P= 0.0001).

Conclusion

A direct test for HCV viraemia is important to accurately determine the epidemiology of HCV infection in RT patients who remain anti-HCV negative despite harbouring active HCV infection.Key Words: hepatitis C, real time PCR, renal replacement therapy     

肝癌细胞乙酰胆碱酯酶表达水平与丙型肝炎病毒感染之间的相互影响

目的 探讨丙型肝炎病毒（HCV）感染对乙酰胆碱酯酶（AchE）表达水平的影响以及细胞内AchE活性的变化对HCV感染的影响。方法 以细胞培养来源的HCV（HCVcc）感染人肝癌细胞系Huh7细胞,用蛋白质印迹法以及实时荧光定量PCR（qPCR）进一步验证HCV感染对AchE表达水平的影响,AchE活性检测试剂盒检测细胞内AchE活性的变化。以AchE抑制剂多奈哌齐和伊托必利处理Huh7细胞,同时用HCVcc感染,通过蛋白质印迹法以及免疫荧光法检测Huh7细胞的HCV感染情况。用针对AchE基因的小干扰RNA（siRNA）转染Huh7细胞,随后用HCVcc感染Huh7细胞,通过蛋白质印迹法和免疫荧光法检测AchE的表达以及HCV感染情况。结果 HCVcc感染Huh7细胞60 h后,AchE蛋白表达水平升高,同时酶活性也增强（P均<0.01）。AchE抑制剂呈浓度依赖性抑制HCV对Huh7细胞的感染（P<0.01）。用siRNA敲低AchE的表达后,HCV对Huh7细胞的感染降低（P<0.01）。结论 HCV感染Huh7细胞能上调AchE的表达并增强AchE活性,AchE表达增加和活性增强都能促进HCV的感染,表明AchE在HCV感染Huh7细胞的过程中起着正反馈增强感染的作用。     

安徽省无偿献血人群HBV和HCV流行特征分析

目的 分析安徽省无偿献血人群HBV、HCV相关感染指标检出情况及其特征,为预防控制经输血传播疾病提供参考和依据。方法 收集安徽省血液管理信息系统内2016年1月至2020年12月无偿献血者的筛查资料,采用单因素和Pearson相关性分析对不同年份、不同献血次数、不同地区及不同年龄段献血者HBsA、HBV DNA、抗HCV、HCV RNA指标进行回顾性分析,了解HBV、HCV在不同特征人群中的流行情况。结果 共筛查无偿献血人群血液标本2 530 232例,HBsA、HBV DNA、抗HCV、HCV RNA阳性率分别为0.42%、0.10%、0.16%和1.03/10万,不同年度间HBsA、HBV DNA、抗HCV阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中HBsA阳性率、抗HCV阳性率与年份相关,呈现逐年下降的趋势(r_{HBsA阳性率}=-0.900,P=0.037;r_{抗HCV阳性率}=-0.900,P=0.037)。皖南、皖中及皖北地区HBsA、HBV DNA、抗HCV阳性率比较,差异有统计学(P<0.05),皖南地区HBsA阳性率最高(0.65%),皖中地区HBV DNA阳性率最高(0.15%),皖北地区抗HCV阳性率最高(0.18%)。重复献血者占47.53%,重复献血者的HBV和HCV相关指标均低于初次献血者,差异有统计学意义(P<0.05)。18～55岁人群中,HBsA阳性率、HBV DNA阳性率随着年龄增加呈现线性上升趋势(r_{HBsA阳性率}=0.991,P=0.009;r_{HBV DNA阳性率}=0.974,P=0.005)。结论 安徽省无偿献血人群中HBV和HCV总体上呈低流行态势,献血者HBsA、抗-HCV阳性率逐年下降,HBsA、HBV DNA和抗HCV阳性献血者分别相对集中于皖南、皖中、皖北地区,初次献血、中高年龄段献血者阳性率较高,应持续开展献血人群相关指标的监测分析。     

全自动核酸纯化系统在临床分子检测中的应用研究

摘要：目的探讨全自动核酸纯化系统在实时荧光定量检测中的应用价值。方法手工法和全自动核酸纯化系统配套不同磁珠法试剂,分别提取HCV及肠道病毒核酸样本,通过实施荧光定量检测不同方法提取的RNA,对比CT值,比较不同方法的提取效率。结果同一检测项目不同试剂的机提之间无显著差异（t1=0．805,P1=〉005;1．952,P4〉O．05）,机提与手工法之间有显著差异（t3=-3．314,P3〈0．01;t1=-3．576,P2〈0．01）;手工法提取30个样本所需时间均为2h左右;而全自动核酸纯化系统同时提取32个样本所需时间均在1h以内;结论全自动核酸纯化系统提取效率明显优于手工法,NP968全自动核酸纯化系统磁珠法试剂是全开放性的,全自动核酸纯化系统操作简单、快速、提取效率高,值得临床检验推广。     

HCV-cAg与HCV-Ab、HCV-RNA及肝功能之间的关系探讨

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis C virus core antigen,HCV-cAg）与丙型肝炎病毒RNA（hepatitis C virus RNA,HCV-RNA）关系以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）水平与HCV-RNA病毒载量之间的相关性。方法选取78例HCV抗体检测阳性的丙型肝炎或疑似丙型肝炎病人作为观察组,另选取同期健康体检者20名作为对照组。采用ELISA法和荧光定量PCR法等对2组血清样本进行HCV-cAg、HCV-RNA和ALT、AST、GGT水平测定,并比较各参数之间的关系。结果观察组HCV-cAg阳性检出率为41.0%（32/78）,HCV-RNA阳性检出率为53.8%（42/78）,差异有统计学意义（P < 0.01）,且二者之间具有较好一致性（κ=0.747）。观察组ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组（P < 0.01）,但与HCV-RNA病毒载量均无明显相关性（P>0.05）。结论HCV-cAg和HCV-RNA在检测丙型肝炎方面有较好一致性和相关性,可为丙型肝炎的临床诊断提供有价值的依据。     

左金丸不同提取方法的比较研究

目的 优选左金丸最佳提取方法。方法 采用超高效液相色谱法（UPLC）,建立左金丸的指纹图谱以及5种生物碱的测定方法;以指纹图谱相似度和5种生物碱的总量作为评价指标,对左金丸的水提、70%乙醇提取、盐酸-甲醇（1∶100）提取、半仿生提取方法进行比较。结果 左金丸的色谱峰在8 min内检测完,共检测到9个共有峰,基线平稳,峰形较好。5种生物碱的线性关系良好,分离度高;不同提取方法的左金丸指纹图谱相似度＞0.98;而5种生物碱的量差异较大,其中盐酸-甲醇（1∶100）提取的左金丸中5种生物碱的总量最高,水提方法最低。结论 本实验建立的方法操作简便,分析速度快;基于指纹图谱的定性判别和指标成分的定量分析,可以综合全面地评价比较左金丸的提取方法;其中盐酸-甲醇（1∶100）提取左金丸的方法优于其他3种方法。