精子膜功能测定对不育症诊断探讨

为准确评估精子功能与潜在受精能力，采用精子低渗处理，ＨＥ染色和常规精液分析方法，对５０例健康青年（生育组）和５０例患不育症（不育组）的精子膜功能对照组比较。结果发现精子膜膨胀分１０型，其中Ｂ、Ｄ、Ｅ为优势精子，其它类型为劣质精子；生育组精子膜膨胀率明显大于不育组精子膜膨胀率（Ｐ〈０．０１）；精子膜功能与精子活率、活动力密度相关，精子膜膨胀率较高，其活率与活动力也高，认为精子膜膨胀测定并用ＨＥ染色，     

杜仲叶乙醇提取物对小鼠免疫功能的影响

用淋巴细胞转化试验，抗体分泌细胞功能测定试验及吞噬试验分别研究用２０％和５０％乙醇提取的杜仲叶药理成分对小鼠免疫功能的影响。结果表明：杜仲叶的乙醇提取成分能明显增强小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ刺激的增殖反应及腹腔巨噬细胞的吞噬功能，而对脾抗体形成细胞未见明显影响。     

基于拉曼光谱技术的肉苁蓉苯乙醇苷对氧化损伤人精子DNA的保护作用

【目的】基于拉曼光谱技术,探讨肉苁蓉苯乙醇苷对Fenton’s试剂诱导人精子氧化损伤的保护作用。【方法】体外建立氧化损伤精子模型,给予肉苁蓉苯乙醇苷(剂量分别为0.1、0.01、0.001μg/mL）保护处理后,采用共聚焦显微拉曼光谱技术,检测分析精子核部DNA的变化情况。【结果】 Fenton’s试剂致使人精子细胞核拉曼光谱的强度和峰位移发生显著变化,给予肉苁蓉苯乙醇苷保护处理后,这种变化被抑制,且呈一定的剂量相关性。【结论】肉苁蓉苯乙醇苷对氧化损伤人精子DNA具有一定的保护作用。     

银杏叶提取物对紫外线所致兔晶状体氧化损伤的保护作用

目的研究银杏叶提取物（EGB）对紫外线所致体外培养兔晶状体氧化损伤的保护作用。方法将体外培养兔晶状体分为正常培养组,紫外线照射对照组（波长260～365 nm,强度400 W/cm2,时间30 min）,照射前EGB保护组,照射中EGB保护组,照射后EGB保护组。照射前后各培养24 h,观察各组晶状体混浊情况,并测定晶状体中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、活性氧物质（ROS）以及丙二醛（MDA）的含量。结果紫外线照射组晶状体全部混浊,SOD、GSH-Px、CAT酶活性降低,ROS及MDA含量升高。照射前及照射后EGB保护组晶体混浊率较对照组明显降低（P〈0.05）。各EGB保护组抗氧化酶活性均较对照组升高,ROS及MDA含量降低,其中照射前及照射后EGB保护组与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论紫外线照射引起兔晶状体氧化损伤,EGB可作为一种抗氧化剂减轻这种氧化损伤。     

山稔子提取物对体外DNA氧化性损伤的保护作用

目的 观察山稔子提取物对原代体外培养淋巴细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法 原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为7组,其中5组细胞用不同浓度的山稔子提取物溶液预先处理60 min,再加入50 μmol/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,7组细胞共同在4℃下染毒20 min,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度.结果 H2O2可致原代培养脾淋巴细胞的DNA严重损伤,而山稔子提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100 μg/mL的浓度下.彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为85%、65%和30%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(52.82±6.42)μm,逐渐降低为(43.68±5.59)μm、(35.80±8.75)μm、(25.35±4.32)μm(P分别<0.05、0.01、0.01).结论 山稔子提取物具有抗氧化作用,能在一定浓度范围内保护细胞显著降低氧自由基对DNA的氧化损伤.     

东北鹤虱提取物LEGPS-Ⅱ对小鼠巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究东北鹤虱提取物LEGPS-Ⅱ对小鼠巨噬细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用昆明种小鼠,培养腹腔巨噬细胞(MФ),实验分为5组:正常对照组;H2O2氧化损伤组;3个浓度的LEGPS-Ⅱ(30、60、120μmol/L)保护组。用MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)含量。结果:与正常对照组相比,经H2O2处理过的氧化损伤组,细胞存活率明显降低(P<0.01),NO的含量、iNOS的活力明显升高(P<0.01),T-SOD活力明显下降(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01);与H2O2损伤组相比,给LEGPS-Ⅱ各组均显著提高细胞存活率(P<0.05,P<0.01);使细胞培养液中NO的含量、iNOS的活力显著降低(P<0.05,P<0.01),T-SOD活力显著提高(P<0.05,P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01),且呈现剂量依赖性。结论:东北鹤虱提取物LEGPS-Ⅱ可通过其抗氧化作用而在不同阶段保护经H2O2损伤的巨噬细胞     

银杏叶提取物对星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究银杏叶提取物（EGb761）对H2O2所致星形胶质细胞氧化损伤的保护作用。方法 用不同浓度的EGb761预处理细胞，再加入H2O2，通过噻唑蓝（MTT）实验、线粒体跨膜电位（△ψm）及细胞色素C释放实验、DNA损伤实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）活性测定，观察ECb761对细胞存活率、线粒体膜通透性、DNA氧化损伤及Caspase-3活性的影响。结果 EGb761能明显降低H2O2对星形胶质细胞的氧化损伤，提高细胞的存活率；维持线粒体膜的完整性，抑制跨膜电位的耗散和细胞色素C的释放；抑制Caspase-3的活化和DNA的降解。结论 EGb761具有清除活性氧，减轻H2O2所致星形胶质细胞的氧化损伤，对星形胶质细胞有保护作用。     

卡维地洛对ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究卡维地洛（ CAR）对氧化低密度脂蛋白（ ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞（ HAECs）损伤的保护作用。方法：体外培养HAECs,分为对照组、模型组、CAR高剂量组（ CAR H组）和CAR低剂量（ CAR L组）,即对照组（无血清DMEM）、模型组（200 mg/L ox- LDL 100μL）、CAR高剂量组（ CAR H组,200 mg/L ox-LDL及1×10-5 mol/L CAR各100μL）及CAR低剂量组（ CAR L组,200 mg/L ox-LDL及1×10-6 mol/L CAR各100μL）,后两组 CAR预保护1 h后,加入ox-LDL作用24 h;采用MTT法分析细胞存活率,吉姆萨（ Giemsa）染色后观察HAECs形态;酶联免疫吸附法（ ELISA）检测培养液中一氧化氮（ NO）含量及乳酸脱氢酶（ LDH）外漏量。结果：模型组与对照组相比,细胞发生严重的病理形态学改变,细胞存活率及NO含量显著降低,LDH外漏量显著升高（ P﹤0.05）,CAR H组和CAR L组细胞接近对照组,细胞存活率及NO含量较模型组显著提高,LDH外漏量显著降低（ P﹤0.05）。结论：CAR能减少ox-LDL诱导的HAECs损伤,其作用可能与NO系统有关。     

精子膜功能试剂盒的对比研究

目的：研究精子膜功能试剂盒的临床应用价值。方法：使用该试剂盒与精子尾部低渗膨胀试验和伊红Ｙ水试验对３３例正常生育男性和６５例不育症患者进行比较观察。结果：该试剂盒与精子尾部低渗膨胀试验和伊红Ｙ水试验检测结果均呈显著的相关性。结论：精子膜功能试剂盒快速简便、结果准确,可代替精子尾部低渗膨胀试验和伊红Ｙ水试验检测精子膜功能并在临床推广应用。     

白藜芦醇对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度白藜芦醇保护组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200mg/L过氧化氢,白藜芦醇保护组加入不同浓度(12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)后加入200μmol/L过氧化氢。采用CCK-8检测细胞抑制率,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量。结果通过CCK-8法检测发现50mg/L、100mg/L白藜芦醇保护组作用2h,8h,24h可以明显降低细胞抑制率,且与氧化损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组50mg/L、100mg/L SOD活性与氧化损伤组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L 2h、8h、24h MDA含量与氧化损伤组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇对过氧化氢诱导的人RPE细胞氧化损伤有一定的保护作用,提示白藜芦醇对AMD的预防和治疗有一定的作用。     

臭氧氧化后处理对肾脏缺血再灌注损伤的作用

摘要：目的  研究臭氧O3氧化后处理对大鼠肾脏缺血再灌注所致肾脏慢性纤维化的作用及相关机制。方法  将72例SD大鼠随机分为4组：假手术组（S组）、单纯缺血再灌注组（I/R组）、O3氧化后处理组（I/R+O3组）、氧气O2后处理组（I/R+O2组）,每组4只。每组在模型复制成功后2周检测血清肌酐（Scr）和血浆尿素氮（BUN）,2和10周取肾脏标本,进行苏木精-伊红染色法染色、Masson染色,以及免疫组织化学法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果  术后2周各组的血清Scr、血浆BUN基本恢复到正常范围,两组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。术后10周Masson染色显示,肾纤维化程度,其他3组较S组重（P <0.05）,I/R+O3组较I/R组、I/R+O2组轻（P <0.05）,而I/R组与I/R+O2组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。与S组比较,其他3组TGF-β1、α-SMA的表达增强（P <0.05）;与I/R组比较,I/R+O3组的表达减弱（P <0.05）;I/R组与I/R+O2组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论  O3后处理可以减轻缺血再灌注损伤肾脏的慢性纤维化,其机制可能与O3后处理抑制转化生长因子-β1/Smad信号通路激活有关。

     

不同精子来源及参数对卵胞浆内单精子注射术结局的影响

目的:探讨不同源性精子、不同参数精子对卵胞浆内单精子注射术(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)结局的影响.方法:回顾性分析2005年6月至2008年12月在中南大学湘雅医院生殖医学中心接受ICSI治疗的433个周期.根据行ICSI的精子来源,分为射出精子组(A组)336个周期...     

不同来源的精子显微受精治疗男性不育

目的回顾分析不同来源精子的单精子卵胞浆内注射(ICSI)治疗男性不育62个周期.方法比较采用手淫射精获得精子、睾丸活切及附睾穿刺获得精子行ICSI治疗后的受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率.结果射出精子组50个周期,受精率72.3% 、卵裂率80%、优质胚胎率40%及临床妊娠率40%;睾丸及附睾精子组12个周期,受精率64.1%、卵裂率76.3%、优质胚胎率35.2%及临床妊娠率33.3%.两组结果比较,无显著性差异.结论不同来源精子行ICSI治疗男性因素不育可以获得相似的治疗结果.     

血清生殖激素水平与精子密度的关系

目的： 探索血清生殖激素卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）及抑制素B（INHB）水平与精子密度的关系,阐明血清生殖激素水平对男性不育的诊断意义。方法：男性不育患者150例（少精子症50例,严重少精子症50例,无精子症50例）,对照组（正常生育组）50例,采用计算机辅助精液分析检测精子密度,采用放射免疫分析法检测血清生殖激素水平。结果：与正常对照组比较,少精子症组、严重少精子组、无精子症组FSH、LH水平均显著增高(P<0.01),INHB水平显著降低(P<0.01);无精子症组与少精子症组、严重少精子组比较FSH、LH水平均增高(P<0.01),INHB水平显著降低(P<0.01)。精子密度分别与FSH、LH呈负相关关系(r=－0.562,P<0.001;r=－0.347,P<0.001),精子密度与INHB呈正相关关系(r=0.623,P<0.001),与T无相关性（r=0.080,P>0.05）。结论：血清FSH及LH水平增高提示睾丸功能有损害,精子密度逐渐降低;INH-B水平与精子密度密切相关,可直接反应睾丸生精功能。     

非梗阻性不育患者精子膜超微结构研究

目的：研究非梗阻性不育患者精子膜超微结构的改变,探讨非梗阻性不育患者精子膜超微结构缺陷对男性不育的影响。方法利用透射电镜对临床非梗阻性不育患者新鲜精液标本中精子膜的超微结构进行观察。结果在电镜下,发现该不育男性患者精子多存在质膜、顶体外膜和/或顶体内膜等畸变,膜结构呈多形态超微结构异常的现象,此外,精子核、颈部和线粒体、微管等超微结构也存在病理性改变。结论精子膜超微结构畸变是非梗阻性男性不育原因之一。     

少精子症、弱精子症和畸形精子症患者精子凋亡率比较

目的：比较少精子症、弱精子症和畸形精子症患者精子凋亡率。方法：应用计算机辅助精液分析（CASA）对生育组(n=14)、不育组［(n=48),少精子症(精子密度<10×10^６•mL^-1)11例、弱精子症(a+b级精子百分率<50%)25例、畸形精子症(形态正常精子百分率<14%)12例］进行精液参数检测,瑞-姬染色检测精子凋亡率。结果：不育组及不育组中的少精子症组精子凋亡率均明显高于生育组（P<0.05）;弱、畸形精子症组精子凋亡〖JP3〗率与生育组比较差异均无显著性（P>0.05）。密度异常组(精子密度<20×10⁶•mL^-1)精子凋亡〖JP〗率明显高于密度正常组(精子密度≥20×10⁶•mL^-1)（P<0.05）;a+b级异常组(a+b<50%)精子凋亡率与正常组比较差异无显著性（P> 0.05）;精子形态异常组(形态正常精子<14%)凋亡率与正常组比较差异无显著性（P> 0.05）。结论：不育组精子凋亡率高于生育组,尤其是少精子症患者精子凋亡率增加更明显。     

人精子穿透金黄仓鼠卵试验在男性不育症中的诊断价值

用人精子穿透金黄仓鼠卵试验（ＳＰＡ），对３４例已知有生育力的供者和４８例男性不育症患者进行了检测。３４例有生育力的供者，穿透率为２６％～１００％，平均为８３．４％；４８例男性不育症患者，穿透率为０％～３１％，平均为４．３％，穿透率≤１０％者占９３％。不育组ＳＰＡ穿透率与精液常规检查中的精子密度，精子活动率和畸形率无明显相关关系（Ｐ＞０．０５）。结果提示：ＳＰＡ是评价精子受精能力的一个良好方法。     

晕船易感大鼠与不晕大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的鉴定与分析

目的:观察血红素加氧酶-2基因敲除对Fe2 诱导的脑氧化应激损伤的保护作用.方法:采用立体定向法注射10μl FeCl2(10 mmol/L)至血红素加氧酶-2基因敲除小鼠及野生型小鼠右侧纹状体,制备Fe2 诱导的脑氧化应激损伤模型.测量损伤24 h后损伤区域脑水肿程度.利用MTT法测量损伤72 h后细胞生存率.利用蛋白印迹法检测损伤72 h后细胞脑组织氧化反应性蛋白及脂质氧化蛋白含量.结果:血红素加氧酶-2基因敲除小鼠脑水肿程度显著低于野生型小鼠;损伤区域细胞生存率显著高于野生型小鼠;血红素加氧酶-2基因敲除小鼠损伤区域组织氧化反应性蛋白及脂质氧化蛋白含量显著低于野生型小鼠.结论:血红素加氧酶-2参与了Fe2 诱导的脑氧化应激损伤,基因敲除血红素加氧酶-2对脑氧化应激损伤具有保护作用.     

经皮附睾、睾丸穿刺取精卵浆内显微注射治疗阻塞性无精子症

目的: 应用经皮附睾、睾丸穿刺取精术(PETSA),结合单精子卵浆内显微注射(ICSI)技术治疗阻塞性无精子症。方法: 对8对不孕症夫妇,男性采用经皮附睾、睾丸穿刺取精术;女方采用长方案和短方案超排卵,对分裂中期(M Ⅱ)的卵母细胞行ICSI。结果: 9个周期中,获M Ⅱ 46个,均行ICSI,其中正常受精33个,形成胚胎22个,3例临床妊娠。结论: PET SA和ICSI技术是治疗男性阻塞性无精子症不育的有效方法。     

精子形态正常率与体外受精妊娠结局的关系

目的：探索精子形态对卵子受精率、卵裂率及临床妊娠率的影响,为不孕症患者行辅助生殖技术治疗前助孕方式的选择提供理论依据也为辅助生殖技术方法的改善,积累理论和实践经验。方法：回顾性分析2008年1月至12月接受辅助生殖治疗的1 369例患者的精液分析资料,根据患者精子形态分为4组（≤5.0%,5.1%～10.0%,10.1%～15.0%,＞15.0%）,分别采用体外受精（IVF;n=490)或卵胞浆精子注射(ICSI; n=261）的受精方式。供精者（618例）精子也分为4组（14.0%～17.0%, 17.1%～19.0%,19.1%～23.0%及＞23.0%）,采用IVF受精方式。比较各组精子形态与受精率、卵裂率及临床妊娠率的关系。结果： IVF（病人或供精者）受精方式下,各形态精子组的临床妊娠率、受精率差异有统计学意义（P＜0.05),但卵裂率差异无统计学意义（P＞0.05);ICSI受精方式下,各形态精子组的临床妊娠率、受精率、卵裂率间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：精子形态异常影响IVF成功率;精子形态对ICSI治疗结局无显著影响,对精子形态异常患者采用ICSI技术为最佳。