c-Myc 和 Bin1 在人食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的： 研究人食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer, ESCC）组织及其癌旁组织中 c-Myc和 Bin1 基因的表达情况,并分析其临床意义。 方法： 收集2013年4月至2014年3月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切除并经病理证实的ESCC患者肿瘤组织和相应癌旁组织标本各54例,使用RT-PCR和免疫组织化学法检测ESCC组织和癌旁组织中c-Myc和 Bin1 基因的mRNA和蛋白的表达。 结果： 与癌旁组织相比,ESCC组织中的 c-Myc mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著升高\[（0.34±0.29） vs （0.17±0.16）, P <0.001;55.56% vs 33.33%, P =0.033\], Bin1 mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著降低\[（0.25±0.19） vs （0.33±0.20）, P <0.001;57.41% vs 84.48%, P =0.007\]。ESCC组织中 c-Myc mRNA的表达与 Bin1 mRNA的表达呈显著负相关关系（ r =0.790, P <0.001）,c-Myc蛋白表达与Bin1蛋白表达也呈显著负相关关系（ P =0.019）。c-Myc和 Bin1蛋白表达均与患者TNM分期、肿瘤侵犯深度、分化程度、淋巴结转移相关。 结论： 人ESCC患者肿瘤组织中c-Myc呈高表达,而Bin1呈低表达,两者表达呈负相关,均与ESCC进展和淋巴结转移有关联。     

食管鳞癌组织和引流淋巴结中IDO和BIN1的表达及其临床意义

目的:探讨食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者肿瘤组织和引流淋巴结(tumor draininglymph node,TDLN)组织吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)和桥接整合因子1(bridging integrator 1,BIN1)的表达及其在ESCC进展中的意义.方法:收集2013年4月至2014年7月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切除并经病理证实的71例ESCC患者的肿瘤组织、癌旁组织和TDLN标本,其中肿瘤组织以癌旁组织作为对照组,转移淋巴结以未转移淋巴结作为对照组,均采用Real-time PCR法和免疫组化法检测IDO和BIN1表达情况,分析两者表达的相关性及其与患者临床特征的关系.结果:与未转移淋巴结相比,转移淋巴结中IDO mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著增高(0.47±0.14vs0.22 ±0.09,P＜0.01;90.91％ vs 67.35％,P=0.042),而BIN1 mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著降低(0.15 ±0.11 vs 0.35 ±0.15,P＜0.01;50.00％ vs 77.55％,P=0.028).与癌旁组织相比,肿瘤组织中IDO mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著增高(0.51 ±0.12 vs 0.24 ±0.11,P＜0.01;81.69％ vs 22.54％,P＜0.01),而BIN1 mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著降低(0.17±0.10 vs0.41±0.14,P＜0.01;19.72％ vs 80.28％,P=0.006).肿瘤组织和TDLN中,IDO蛋白表达与肿瘤侵犯范围、淋巴结转移、临床分期相关,而BIN1蛋白表达与肿瘤分化程度、侵犯范围、淋巴结转移、临床分期相关.结论:ESCC患者肿瘤组织和转移TDLN中IDO表达水平显著提高、BIN1表达水平显著降低与患者临床特征密切相关,可能是影响ESCC进展的重要因素.     

食管鳞状细胞癌组织Bin1基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)患者的食管鳞癌组织、癌旁组织中Bin1基因启动子甲基化状态及其mRNA的表达及其临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测58例经病理证实的ESCC患者的食管鳞癌组织、癌旁组织中Bin1基因mRNA的表达情况;用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述食管鳞癌组织中Bin1基因启动子甲基化状态,比较ESCC患者Bin1甲基化状态与临床病理分期的关系.结果:ESCC组织中Bin1基因启动子甲基化率明显高于癌旁组织(58.62％ vs 25.86％,x2=12.76,P＜0.01),Bin1甲基化状态与患者TNM分期、肿瘤侵润深度、分化程度、淋巴结转移相关(均P ＜0.05).ESCC组织中Bin1 mRNA的表达水平明显低于癌旁组织[(0.78 ±0.05) vs (1.03±0.03),t=9.643,P＜0.01)];发生Bin1甲基化的组织中Bin1 mRNA表达水平明显低于未发生甲基化的组织[(0.68±0.04) vs (0.85±0.07),t=2.476,P＜0.05].结论:Bin1基因启动子区甲基化状态可能与ESCC的发生密切相关,它是ESCC中Bin1 mRNA低表达或缺失的机制之一,且与ESCC进展和淋巴结转移有关.     

半乳糖凝集素-9在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨半乳糖凝集素-9(galectin-9)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)组织及癌旁组织中的表达及对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:收集山东大学附属济南市中心医院胸外科于2012年1月至2013年1月期间手术切除的ESCC患者组织标本89例及距癌组织边缘5 cm以上的癌旁组织标本20例,采用免疫组化法检测ES-CC及癌旁组织中galectin-9蛋白的表达,并分析其与患者性别、年龄、浸润深度、肿瘤大小、分化程度、病理分期(pTNM)及淋巴结转移等临床病理特征之间的关系.采用脂质体介导法将pcDNA3.1-galectin-9转染食管癌EC9706细胞系,运用细胞划痕愈合实验和Transwell侵袭实验,检测galectin-9表达上调对食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力的影响.结果:ESCC组织中galectin-9蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织[25.8％ (23/89) vs 50％ (10/20),P＜0.05],galectin-9蛋白的表达与ESCC患者肿瘤分化程度及淋巴结转移相关(均P＜0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度及病理分期无关(均P＞0.05).在食管癌EC9706细胞中过表达galectin-9后,与阴性对照组相比,肿瘤细胞的侵袭[(45.0±8.0) vs (160.0±12.0),P＜0.01]和迁移能力[(20.6±2.1) vs(87.6±4.9),P＜0.05]明显下降.结论:galectin-9的表达缺失参与了食管癌的发生、发展,ga-lectin-9可以抑制ESCC细胞的侵袭及迁移.     

长链非编码RNAXLOC_005009对食管鳞状细胞癌生物学特性的影响

目的:探讨长链非编码RNA XLOC_005009基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)的体外增殖、迁移、侵袭和细胞周期与细胞凋亡等生物学特性的影响.方法:收集2015-2016年河北医科大学第四医院肿瘤研究所57例ESCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织标本.应用实时荧光定量PCR检测XLOC_005009基因在人ESCC细胞系Eca 109、Kyse 170与ESCC组织及其癌旁组织的表达,构建pcDNA3.1-XLOC_005009过表达质粒并转染Eca109、Kyse170细胞,应用MTS法、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室、流式细胞术分别检测转染前后细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、细胞周期与凋亡的变化.结果:XLOC 005009 mRNA在食管癌组织中的表达明显低于癌旁组织(0.06±0.06 vs 0.21±0.19,P＜0.05),且食管癌细胞XLOC 005009 mRNA表达亦均低于对照组(P＜0.05).转染过表达质粒的Eca109和Kyse 170细胞XLOC_005009基因表达显著高于对照组(Eca109细胞:039±0.17 vs0.02±0.00;Kyse170细胞:0.35±0.08 vs 0.01±0.01,均P＜0.05).与对照组相比,XLOC_005009基因过表达Eca 109和Kyse170细胞增殖能力细胞显著减弱(P＜0.05);克隆形成率显著减少(P＜0.05);穿膜细胞数显著减少[Eca109细胞:(146.40±34.47) vs(193.00±26.33);Kyse170细胞:(157.80±32.51)vs (269.00±29.89),均P＜0.05];Eca109细胞迁移率无显著变化,Kyse170细胞迁移率明显减小(P＜0.05);S期细胞比例增加,细胞凋亡影响不明显.结论:XLOC_005009低表达与食管癌的发生发展密切相关,XLOC_005009过表达可抑制食管癌细胞的体外增殖、侵袭与迁移能力.     

lncRNARP11-259P1.1在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床预后的关系

目的:探讨lncRNA RP 11-259P 1.1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)中的表达水平及其与患者临床病理特征和预后的关系.方法:收集2012年1月1日至2016年12月31日西南医科大学附属医院行手术切除的130例ESCC原发病灶及对应癌旁组织标本、人ESCC细胞株KYSE510、Eca109及食管上皮细胞株Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测lncRNA RP11-259P 1.1在ESCC组织及细胞中的表达水平,分析其在组织中表达水平与患者临床病理特征及预后的关系.结果:lncRNA RP11-259P1.1在ESCC细胞及组织中表达水平显著高于正常管上皮细胞及癌旁组织(均P＜0.01).lncRNA RP11-259P1.1高表达与肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移及术前放化疗(CRT)后肿瘤缓解明显相关(均P＜0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位、吸烟状况等无关(均P＞0.05).在63例术前接受新辅助CRT治疗患者中,低表达lncRNA RP11-259P1.1患者与高表达患者比较:(1)病理完全缓解率明显升高(60.00％ vs 21.21％,P＜0.01);(2)术前CRT的疗效更佳(P＜0.05);(3)中位无进展生存时间和生存时间均明显延长[(28.00±2.47) vs(17.00±1.90)个月,(41.57±2.45) vs (30.00±2.55)个月;均P＜0.01].lncRNA RP11-259P1.1为ESCC患者独立的预后因素(P＜0.05).结论:lncRNA RP11-259P1.1可能是ESCC潜在的预后和术前CRT疗效评价的分子标志物,低表达lncRNA RP 11-259P 1.1的患者术前给予CRT疗效更佳.     

泛素特异性蛋白酶53在结直肠癌中的表达及其对HCT116细胞的抑制作用

目的:探讨泛素特异性蛋白酶53(ubiquitin specific peptidase 53,USP53)在结直肠癌组织中的表达水平及其过表达对人结直肠癌HCT116细胞功能的影响.方法:运用Real-time PCR及IHC方法检测结直肠癌及癌旁组织中USP53的表达情况;利用UCSC CANCER BROWSER提供的TCGA数据库,检测USP53 mRNA表达水平与临床特征及预后的关系;HCT116细胞中瞬时过表达USP53,利用CCK-8及克隆形成实验检测HCT116细胞增殖变化.结果:免疫组化结果显示,USP53在癌旁组织中的表达显著高于肿瘤组织[91.67％(44/48) vs 18.75％ (9/48),P＜0.01].癌旁组织中USP53 mRNA水平也高于癌组织[(0.85±0.32) vs (0.46 ±0.27),P＜0.05].组织中USP53 mRNA表达水平与预后有关,表达越低预后越差(P＜0.05).过表达USP53后,细胞克隆形成数目显著下降[(123 ±27.22) vs (338±55.24)个,P＜0.01];CCK-8实验结果显示,肿瘤细胞增殖受到显著抑制[(0.14±0.01) vs (0.18±0.04),P＜0.05;(0.23±0.01)vs(0.32±0.01),P＜0.01;(0.45±0.03) vs (0.80±0.05),P＜0.01;(0.83 ±0.03)vs (1.18±0.10),P＜0.01].结论:USP53在结直肠癌中表达下调与不良预后相关,USP53可抑制肿瘤细胞增殖,提示USP53可作为诊断及治疗结直肠癌的新靶标.     

IGFBP3基因在食管鳞状细胞癌中的表达及甲基化状态

目的：检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer, ESCC)中胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding protein 3, IGFBP3)基因的表达情况及甲基化状态,探讨其与ESCC发生发展的关系。方法：收集河北医科大学第四医院2008至2011年间的82例ESCC手术患者的ESCC原发灶组织及癌旁正常黏膜组织。RT-PCR及甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR, MSP)的方法分别检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycitydine, 5-Aza-dC)处理前后的ESCC细胞系(TE1、TE13、YES-2、T.TN、Eca109)及82例ESCC及相应癌旁组织中 IGFBP3 基因mRNA表达水平及甲基化状态,应用免疫组织化学方法检测IGFBP3在ESCC组织中的蛋白表达情况,并分析 IGFBP3 基因甲基化状态与其表达水平之间的关系。 结果： 在ESCC细胞株TE1、TE13、YES-2、T.TN、Eca109中, IGFBP3 基因mRNA均呈阴性或弱阳性表达,用5-Aza-dC培养处理后,其mRNA表达水平均呈现不同程度的增高（P＜0.05）;MSP检测结果显示,在ESCC细胞株TE1、TE13、T.Tn、Yes-2中 IGFBP3基因均呈高甲基化状态。在ESCC组织中 IGFBP3 mRNA表达显著低于癌旁组织\[（0.15±0.07）vs（0.88±0.32）,P＜0.01\],且IGFBP3蛋白在癌组织中的表达阳性率显著低于癌旁组织\[29.3%（24/82）vs 84.1%（69/82）,P＜0.01\],并与TNM分期密切相关（P＜0.05）;IGFBP3基因在ESCC组织中的甲基率为68.3%（56/82）,明显高于癌旁组织的15.9%（13/82）（P＜0.01）;IGFBP3基因在Ⅲ和Ⅳ期肿瘤组织中的甲基化率明显高于Ⅰ和Ⅱ期肿瘤组织（P＜0.05）,而该基因的甲基化率与肿瘤患者的组织学分级无相关性（P> 0.05）。IGFBP3基因甲基化状态与其表达之间有明显的相关性(P＜0.05)。结论： ESCC组织及细胞株中IGFBP3基因呈高甲基化状态,该基因的甲基化可能导致其表达下调,并有可能是ESCC的发生机制之一。     

miR-6803和PPP6R1在食管鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其甲基化状态与患者临床病理特征的关系

目的:探讨微小RNA-6803(miR-6803)及其宿主基因蛋白磷酸酶6调节亚单位1(protein phosphatase 6 regulation subunit 1,PPP6R1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达和PPP6R1基因启动子区甲基化状态及其在ESCC发生及发展中的作用.方法:采用2013年至2014年间河北医科大学第四医院生物标本库的72例ESCC手术患者癌组织及对应的癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR法检测miR-6803和PPP6R1在ESCC组织及其癌旁组织和DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理前后的ESCC细胞株TE1、TE13、Eca109、T.TN、Kyse170中的表达水平.用甲基化特异性PCR(MSP)法检测ESCC细胞系和组织及其癌旁组织中PPP6R1的甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系.结果:ESCC组织中miR-6803和PPP6R1的表达水平显著低于癌旁组织(0.318±0.156,0.408±0.177 vs 1.000±0.001,均P＜0.05),miR-6803表达水平与淋巴结转移、组织分化程度及TNM分期密切相关(均P＜0.05);PPP6R1表达水平与TNM分期和组织学分化程度密切相关(均P＜0.05).ESCC组织中miR-6803和PPP6R1基因的表达具有显著相关性(P＜0.05).ESCC组织中PPP6R1的启动子区甲基化率显著高于癌旁组织(56.94％ vs 36.11％,P＜0.05),并与TNM分期和组织学分化程度密切相关(均P＜0.05),miR-6803-和PPP6R1基因的低表达与PPP6R1启动子区甲基化明显相关(P＜0.05).经5-Aza-dC处理后,5种ESCC细胞中miR-6803和PPP6R1的表达均升高,并且TE1、TE13、Kyse170细胞中PPP6R1基因甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余2种细胞中PPP6R1基因均表现为非甲基化状态.结论:miR-6803及其宿主基因PPP6R1的低表达可能与ESCC的发生发展密切相关,其启动子区甲基化可能是miR-6803和PPP6R1表达沉默的机制之一.     

ADAMTS1、ADAMTS18基因在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的:分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中含凝血酶敏感素1型基序的解聚素样金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1,ADAMTS1)及ADAMTS18基因的表达,探讨ADAMTS1和ADAMTS18基因在ESCC发生、发展中的作用。方法:收集2008年6月至2011年8月河北医科大学第四医院手术切除的72例ESCC组织及癌旁组织,应用RT-PCR及免疫组化S-P法分别检测ESCC组织及癌旁组织中ADAMTS1、ADAMTS18 mRNA及其蛋白的表达。结果:1 ESCC组织中ADAMTS1 mRNA的表达显著低于相应的癌旁组织[(0.394±0.123)vs(0.895±0.276),P<0.01],有淋巴结转移组ADAMTS1 mRNA表达显著高于无淋巴结转移组[(0.482±0.157)vs(0.298±0.102),P<0.05];2ESCC组织中ADAMTS18 mRNA表达显著低于相应的癌旁组织[(0.361±0.115)vs(0.879±0.265),P<0.01),高、中分化鳞癌组ADAMTS18 mRNA表达显著高于低分化鳞癌组[(0.496±0.153)vs(0.232±0.088),P<0.05];3ESCC组织中ADAMTS1和ADAMTS18蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织[38.9%(28/72)、34.7%(25/72)vs94.4%(68/72)、93.1%(67/72),均P<0.01],高、中分化组ADAMTS18蛋白阳性表达率显著高于低分化鳞癌组[45.4%(20/44)vs 17.8%(5/28),P<0.05];4ESCC组织中ADAMTS1与ADAMTS18的蛋白表达无明显相关性(χ2=1.338,P>0.05)。结论:ADAMTS1基因在ESCC中的异常表达可能与ESCC的发生及有无淋巴结转移有关;ADAMTS18基因在ESCC中的异常表达可能与ESCC的发生及组织分化程度有关;两种基因在ESCC组织中蛋白的表达不存在明显的相关性。     

肺腺癌组织中RNA结合基序蛋白38和p53基因的表达及其临床意义

目的:分析肺腺癌组织中RNA结合基序蛋白38基因(RNA-binding motif protein 38,RBM38及抑癌基因p53 mRNA和蛋白的表达情况,探讨其在肺腺癌发生发展中的意义.方法:取2012年10月至2015年6月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的50例肺腺癌患者的肿瘤组织标本作为实验组,相对应的癌旁组织标本作为对照组.用RT-PCR法检测两组中RBM38及p53mRNA相对表达量,用Western blotting法检测两组中RBM38及p53蛋白的相对表达量.结果:实验组RBM38 mRNA及蛋白相对表达量(0.357±0.170、0.294±0.149)均高于对照组(0.271±0.128、0.206±0.099),实验组p53 mRNA及蛋白(0.457±0.208、0.671±0.200)相对表达量均高于对照组(0.308±0.167、0.332±0.071),差异均有统计学意义(均P＜0.01).RBM38表达与肺腺癌患者TNM分期、浸润深度有关(P＜0.05),p53表达与患者TNM分期有关(P＜0.05).实验组RBM38与p53蛋白表达呈负相关(r=-0.626,P＜0.01).结论:肺腺癌组织RBM38、p53 mRNA及蛋白表达均高于癌旁组织,两者均与患者TNM分期等病理参数关系密切.随着RBM38蛋白表达的增加p53蛋白随之减少,RBM38可能通过抑制p53的翻译从而促进肺癌的发生发展,RBM38可能成为肺腺癌分子靶向治疗的靶点.     

锌转运体1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响

目的： 检测锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)基因在胶质瘤组织中的表达,初步探索ZnT1对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响。 方法： 收集2015年10月至2017年1月中国医科大学附属第一医院神经外科收治的术前未接受过放化疗的 Ⅱ～Ⅲ期胶质瘤患者20例,采用Real-time PCR和Western blotting检测胶质瘤组织与瘤旁组织中ZnT1 mRNA和蛋白的含量。向 胶质瘤细胞系U87中分别转染ZnT1和si-ZnT1质粒,构建ZnT1过表达和低表达细胞系,MTT和Transwell实验分别检测ZnT1对 U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 结果： ZnT1 mRNA和蛋白在胶质瘤组织中表达显著高于瘤旁组织（均P<0.05）。成功构建 ZnT1过表达和低表达U87细胞系。与空白和空质粒对照组相比,转染12 h后,ZnT1过表达U87细胞的增殖（0.54±0.01 vs 0.45± 0.04、0.43±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著升高;而转染12 h后ZnT1低表达U87细胞的增殖（0.37±0.03 vs 0.45±0.01、0.44±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著降低。 结论： ZnT1在胶质瘤组织中呈高表达,ZnT1可以促进 胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭。     

The Expression of RECK mRNA and Protein in Esophageal Squamous Cell Carcinoma and Its Clinical Significance

目的:探讨食管鳞癌组织中RECK mRNA和蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系。方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管粘膜组织中mRNA和蛋白的表达。结果:在食管鳞癌癌变过程中RECK在癌组织、癌旁不典型增生组织及正常粘膜组织中mRNA的含量依次增高,分别为1.052±0.078、1.274±0.235、1.306±0.121,组间比较有明显差异(F=49.936,P<0.05);不同分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移的食管鳞癌组织之间RECK mRNA相对含量差异均有统计学意义(F=5.081,F=26.084,U=24.011,P均<0.05)。食管鳞癌组织及癌旁不典型增生组织中RECK蛋白表达均低于正常粘膜组织,表达量分别为59.7%(37/62)、71.0%(22/31)、85.5%(53/62),组间比较有明显差异(χ2=10.331,P<0.01);食管鳞癌组织中RECK蛋白表达与癌组织的分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中RECK mRNA和蛋白表达均降低,其低表达可能与食管鳞癌发生有关。检测RECK mRNA及蛋白的表达可望成为食管鳞癌早期诊断和判断预后的分子指标之一。     

HOXA10 基因在子宫内膜癌组织中的表达及其生物学作用

目的:探讨同源框A10（HOXA10）基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌Ishikawa 细胞株凋亡、迁移及侵袭的影响。方法：收集2012 年至2013 年在鼓楼医院妇产科子宫内膜癌组织标本21 例、正常增殖期子宫内膜组织标本25 例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blotting 方法检测HOXA10 在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达。将感染复数为5、10、20 MOI的ad-flag-HOXA10 腺病毒质粒及20 MOI的ad-flag-lacz 腺病毒质粒(对照组)感染人子宫内膜癌Ishikawa 细胞株,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。将50 nmol/L的si-HOXA10 及si-NC质粒转染Ishikawa 细胞株,分别为下调组及下调对照组;将20 MOI的ad-flag-HOXA10 及20 MOI的ad-flag-lacz 腺病毒质粒感染Ishikawa 细胞株,分别为上调组及上调对照组;Transwell 小室检测各组细胞迁移及侵袭能力。结果：在子宫内膜癌组织中HOXA10 mRNA 表达量比正常子宫内膜组织中显著降低[ （0.56±0.14）vs (1.36±0.33),P<0.01],其蛋白表达量同样显著降低[ （1.01±0.25）vs (2.10±0.71),P<0.01]。上调HOXA10后5、10、20 MOI 组细胞的凋亡率明显升高,且大多数处于早期凋亡[ （50.92±8.79）%、(55.17±4.07)%、(76.10±3.65)% vs (7.74±0.15)%,均P<0.01]。下调HOXA10 表达后迁移细胞数显著增加[ （248±25）vs (135±15)个,P<0.01],上调HOXA10 表达后迁移细胞数显著减少[（50±6）vs (100±13) 个,P<0.01];下调HOXA10 表达后侵袭细胞数显著增多[ （131±18）vs (66±9)个,P<0.01],上调HOXA10 表达后侵袭细胞数显著减少[ （34±8）vs（60±4）个,P<0.01]。结论：HOXA10 基因在子宫内膜癌内膜中表达低于正常内膜,子宫内膜癌Ishikawa细胞株中上调HOXA10 基因表达能促进细胞凋亡并抑制其迁移和侵袭能力。     

贲门腺癌组织中Smad基因家族不同成员的表达及其临床意义

目的:检测贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中Smad基因家族不同成员的表达水平及其相关性,并探讨其临床意义。方法:收集河北医科大学第四医院2004至2009年间病理确证的贲门腺癌患者110例,RT-PCR检测贲门腺癌和癌旁组织中Smad2、Smad3、Smad4和Smad7 mRNA的表达,免疫组织化学方法检测贲门腺癌组织和癌旁组织中p-Smad2/3、Smad4和Smad7蛋白的表达并分析其相关性,分析p-Smad2/3、Smad4和Smad7蛋白表达与贲门腺癌临床病理特征的关系。结果:贲门腺癌组织中Smad2、Smad3和Smad4 mRNA表达水平均显著低于相应癌旁组织[(0.4956±0.1862)vs(0.8611±0.2914),P<0.01;(0.4713±0.1712)vs(0.8314±0.2811),P<0.01;(0.5145±0.1987)vs(0.8954±0.2856),P<0.01],而Smad7 mRNA表达水平显著高于癌旁组织[(0.5114±0.1962)vs(0.2012±0.1006),P<0.01]。贲门腺癌组织p-Smad2/3、Smad4蛋白表达的阳性率显著低于癌旁组织(42.7%vs 93.6%,P<0.01;45.5%vs 95.5%,P<0.01),且与肿瘤TNM分期和组织分化程度密切相关(P<0.05)。贲门腺癌组织Smad7蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织(48.2%vs 3.6%,P<0.01),且与肿瘤组织分化程度密切相关(P<0.05)。贲门腺癌中p-Smad2/3与Smad4蛋白的表达呈正相关,但它们均与Smad7蛋白表达无明显的相关性。结论:贲门腺癌组织低表达Smad2、Smad3和Smad4,高表达Smad7,Smad基因的异常表达可能参与贲门腺癌的发生、发展。     

Association of β-catenin,Wnt1, Smad4, Hoxa9, and Bmi-1 with the prognosis of esophageal squamous cell carcinoma

In our previous study, Human Signal Transduction in Cancer Gene Array was used in 12 fresh tumor samples to detect the gene expression profiles in the esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) tissues matched adjacent non-cancerous samples. Among genes up-regulated at least twofold, β-catenin, Wnt1, Smad4, Hoxa9, and Bmi-1 were found. So subsequently, the aim of this study was to investigate the prognosis and clinicopathologic roles of β-catenin, Wnt1, Smad4, Hoxa9, and Bmi-1 in ESCC tissue. The mRNA and protein expression levels of β-catenin, Wnt1, Smad4, Hoxa9, and Bmi-1 genes in 70 ESCC and adjacent non-cancerous paraffin-embedded samples were determined by Real-Time Quantitative PCR (RT-PCR) and immunohistochemical staining. The mRNA expression level of β-catenin, Wnt1, Smad4, Hoxa9, and Bmi-1 in ESCC was significantly higher than that in the adjacent non-cancerous tissues (0.0821 ± 0.0416 vs. 0.0185 ± 0.0201, P = 0.0000; 1.9934 ± 1.9888 vs. 0.8863 ± 0.665, P = 0.0184; 0.0298 ± 0.0215 vs. 0.0189 ± 0.0187, P = 0.0017; 2.098 ± 0.091 vs. 1.016 ± 0.078, P = 0.0000; 2.181 ± 2.158 vs. 0.931 ± 0.894, P = 0.0152; respectively), and the protein expression level of determined genes was also significantly higher than that in the adjacent non-cancerous tissues (0.2835 ± 0.0844 vs. 0.2352 ± 0.0670, P = 0.0003; 0.3830 ± 0.0947 vs. 0.2721 ± 0.1474, P = 0.0000; 0.2637 ± 0.0348 vs. 0.2042 ± 0.0180, P = 0.0000; 0.2058 ± 0.0316 vs. 0.1218 ± 0.0518, P = 0.0000; 0.2736 ± 0.0834 vs. 0.2251 ± 0.0571, P = 0.0001; respectively). Then, the overexpression of mRNA and protein levels of β-catenin, Wnt1 and Bmi-1 was aggressively associated with lymph node metastasis, advanced pathological stage, and prognosis of the patients with ESCC (P < 0.05). The up-expression of Hoxa9 mRNA and protein was also aggressively associated with lymph node metastasis and advanced pathological stage (P < 0.05); however, the overexpression of Hoxa9 protein was not associated with the prognosis (P > 0.05). Meanwhile, the hypo-expression of Smad4 mRNA was aggressively associated with advanced pathological stage and prognosis of the patients with ESCC (P < 0.05); however, the hypo-expression of Smad4 protein was neutral to the prognosis and lymph node metastasis (P > 0.05). β-catenin, Wnt1, Smad4, Hoxa9, and Bmi-1 protein expression analysis showed that the positive outcomes of the combined detection of Wnt1 and β-catenin expression or Wnt1, β-catenin and Bmi-1 expression were significantly worse than those of a single target protein expression (P < 0.05). Meantime, the prognosis of the combined positive expression of Wnt1, β-catenin, and Bmi-1 was poorer than that in the combined positive expression of Wnt1 and β-catenin (P < 0.05). The prognosis of ESCC patients with the overexpression of Wnt1/β-catenin and Bmi-1 was relatively poor, and the level of Wnt1/β-catenin and Bmi-1 was conversely correlated with advanced pathological stage and lymph node metastasis. The expression level of Smad4 and Hoxa9 mRNA was also associated with the prognosis of the patients with ESCC, pathological stage, and lymph node metastasis; however, they might not be the independent prognostic factor.     

IQGAP1 在食管鳞状细胞癌中的表达及其对TE-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨具有IQ 结构域的GTP 激酶活化蛋白1（Ras GTPase-activating-like protein, IQGAP1）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织与细胞中的表达及其对TE-2 细胞增殖及侵袭能力的影响。方法: 收集2015 年1 月至2016 年12 月郑州大学附属肿瘤医院125 例ESCC手术切除的癌及癌旁组织标本,以及ESCC细胞系TE-2、TE-3、ECA109 和正常食管上皮细胞株Het-1A。用免疫组化染色法检测癌组织中IQGAP1 的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系;用qPCR和Western blotting 检测ESCC细胞中IQGAP1 mRNA和蛋白的表达。用si-IQGAP1（阳性转染组）、si-CTRL（阴性对照组）质粒转染TE-2 细胞,用MTT法、Transwell 小室法和Western blotting 分别检测沉默IQGAP1 对TE-2 细胞增殖、侵袭能力以及上皮钙黏蛋白和神经钙黏蛋白表达的影响。结果: IQGAP1 在ESCC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）,其高表达与肿瘤分期和分级密切相关（均P<0.05）;IQGAP1 mRNA和蛋白在TE-2、TE-3、ECA109 细胞中表达水平显著高于Het-1A细胞（均P<0.05）。沉默IQGAP1 后,与阴性对照组和空白组比较,阳性转染组TE-2 细胞中IQGAP1 mRNA及蛋白的表达水平明显下降（均P<0.05）;细胞的增殖和侵袭能力显著降低（均P<0.05）,上皮钙黏蛋白表达水平升高（P<0.05）,神经钙黏蛋白表达水平下降（P<0.05）。结论: IQGAP1 在ESCC组织中高表达,敲减IQGAP1 可抑制ESCC细胞的增殖和侵袭能力,其在ESCC的发生发展过程中起重要的作用。     

人食管鳞癌组织中RIZ1基因表达水平的研究

  目的  研究RIZ1基因mRNA及蛋白在人食管鳞癌中的表达。  方法  以48例人食管鳞癌组织、相应癌旁及正常组织为研究对象, Real-time PCR法检测RIZ1基因mRNA表达情况; 55例癌组织及相应正常组织采用免疫组织化学法检测RIZ1蛋白的表达情况。  结果  统计结果显示人食管鳞癌组织中RIZ1 mRNA的表达量显著低于正常食管组织(P < 0.01), 癌旁组织中的表达量也显著低于正常食管组织(P < 0.01), 但癌组织与癌旁组织的表达量无显著性差异(P=0.067)。RIZ1蛋白在癌组织中阳性表达率为29.1%(16/55), 在正常食管组织中阳性表达率为76.4%(42/55), 差异具有统计学意义(P < 0.01)。  结论  人食管鳞癌组织中RIZ1基因不仅在mRNA转录水平, 而且在蛋白表达水平明显减低。提示RIZ1表达降低可能与食管鳞癌的发生有关, RIZ1在食管鳞癌的发生过程中起到抑制作用。RIZI可能是食管鳞癌的潜在抑制基因。      

lncRNA DGCR5通过上调EGFR表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨长链非编码 RNA（long non-coding RNA,lncRNA）DiGeorge 综合征临界区基因 5（digeorge syndrome critical region gene 5,DGCR5）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）TE1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法：采用qPCR检测ESCC细胞系 TE1、Yes-2、KYSE150 和 Eca9706 中 DGCR5 的表达水平。将siRNA-DGCR5（si-DGCR5）和阴性对照组（si-NC）质粒转染进TE1细胞,用CCK-8、划痕愈合、Transwell小室法分别检测TE1细胞增殖、迁移和侵袭能力。依据GEPIA数据库资料分析食管癌组织中 DGCR5 表达与细胞表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的相关性,并用qPCR和Western blotting（WB）检测ESCC细胞系中EGFR mRNA和蛋白表达水平,进一步用WB实验检测转染 si-DGCR5 前后 TE1细胞中EGFR蛋白的表达水平。结果：DGCR5 在 ESCC 细胞系中均高表达（均 P<0.01）,转染siDGCR5组TE1细胞中DGCR5的表达水平明显低于si-NC组（P<0.01）。敲低DGCR5后,TE1细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著低于si-NC组细胞（均 P<0.01）。GEPIA 数据库的分析显示,食管癌组织中 DGCR5 表达水平与 EGFR 的表达呈正相关（P<0.01）。敲低DGCR5后TE1细胞中EGFR蛋白表达水平明显下降（P<0.01）。结论：lncRNA DGCR5在ESCC细胞中呈高表达,可能通过上调EGFR表达来促进TE1细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为。     

食管鳞癌中CAV-1基因的表达及甲基化状态

背景与目的：作为重要的表观遗传学现象之一,DNA甲基化对基因表达发挥着重要的调控功能。研究表明肿瘤细胞基因组正常DNA甲基化模式异常改变所导致的肿瘤相关基因功能异常可能参与肿瘤发生与发展。本研究通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中质膜微囊蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)基因的表达及甲基化状态,探讨CAV-1基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法：分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR法、免疫组织化学SP法检测食管癌及相应癌旁正常黏膜组织标本中CAV-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况。结果：CAV-1 mRNA在食管癌和癌旁正常组织中的表达量分别为0.86±0.56和0.40±0.36,食管癌组织中CAV-1 mRNA表达量明显高于癌旁正常组织,2者差异有统计学意义(P<0.05)。CAV-1 mRNA表达与患者的淋巴结转移及肿瘤组织学分级有关(P<0.05);食管鳞癌组织中,CAV-1蛋白表达阳性率为66.7%(34/51);显著高于正常食管黏膜组织(15.7%,8/51)(P<0.01)。CAV-1蛋白表达与患者的淋巴结转移有关(P<0.05),而与肿瘤的临床分期和分化程度无关(P>0.05)。51例食管癌组织中1例发生了基因启动子区甲基化,甲基化率为2.0%(1/51);而相应癌旁正常黏膜组织中未发现有该基因的甲基化现象。食管癌组织中该基因的甲基化率与相应癌旁正常组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：CAV-1基因在食管鳞癌组织中mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁正常黏膜组织,该基因的高表达对于肿瘤的发生及淋巴结的转移起到了一定的促进作用;癌及癌旁组织中该基因的表达异常均与该基因的甲基化状态无关。