外源性PUMA对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨外源性p53上调凋亡调制因子(PUMA)对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法将肺癌A549细胞分为Control组、空载体组、PUMA组(转染pCEP4-(HA)2-PUMA质粒),DDP组(10μg·mL-1)和PUMA+DDP组(转染pCEP4-(HA)2-PUMA质粒,加10μg·mL-1顺铂)5个组。细胞生存率和凋亡率分别用MTT法和流式细胞仪检测,细胞PUMA、Bax及Bcl-2蛋白表达水平采用Western blot方法检测。结果与Control组比较:PUMA组、DDP组及PUMA+DDP组A549细胞增殖均显著降低(P<0.01),且PUMA+DDP组降低程度最强(P<0.01);凋亡率均显著升高(P<0.01);Bax蛋白水平呈显著性升高(P<0.01),Bcl-2蛋白呈显著性下降(P<0.01)。结论外源性PUMA可抑制肺癌A549细胞增殖,促进凋亡,其机制与增加细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。 更多还原     

C2-神经酰胺在A549/PC9细胞凋亡中的作用及影响

目的 探讨C₂神经酰胺(鞘磷脂类物质之一)对非小细胞肺癌(A549和PC9)细胞凋亡的影响。方法 培养非小细胞肺癌细胞系(A549和PC9),提取总蛋白进行Western blot,检测两种细胞中凋亡蛋白Caspase-3及cleaved Caspase-3蛋白的表达情况;使用CCK-8比色法筛选药物浓度;Hoechst 33258凋亡染色检查细胞凋亡情况;流式细胞化学术检测细胞凋亡比率,RT-PCR检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果 神经酰胺在50μmol/L浓度处理后细胞活力均在70%左右;与对照组相比,神经酰胺组凋亡蛋白表达升高(P<0.05);流式细胞化学术及凋亡染色检测显示神经酰胺处理组凋亡率与对照组相比增加(P<0.05);在基因水平检测mRNA显示凋亡蛋白Caspase-3表达增加(P<0.05)。结论 C₂-神经酰胺可以促使非小细胞肺癌细胞凋亡,从而为临床肺癌的化疗提供新的治疗靶点。     

核仁素表达下调对顺铂诱导人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖抑制和凋亡的影响

目的:观察核仁素(C23)表达下调对顺铂(DDP)诱导人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖抑制和凋亡的影响。方法:将细胞随机分为5组:对照组、DDP组、S+DDP组(转染C23正义寡核苷酸后再用DDP)、AS+DDP(转染C23反义寡核苷酸后再用DDP)与R+DDP(转染随机寡核苷酸后再用DDP);用MTT法检测各组细胞增殖率;用Western印迹和RT-PCR检测各组C23,Bcl-2和Bax蛋白与mRNA的表达;用DAPI染色方法和流式细胞术检测各组细胞凋亡核百分率、细胞凋亡率。结果:C23反义寡核苷酸显著抑制了C23蛋白和mRNA的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);AS+DDP组与DDP组比较,细胞增殖率下降约18%(P<0.01),C23与Bcl-2蛋白和mRNA表达均降低(P<0.01),但Bax表达增高(P<0.01);细胞凋亡核百分率与细胞凋亡率均增高(P<0.01)。结论:C23表达下调能促进DDP诱导的SaOS-2细胞增殖抑制和凋亡。     

茶多酚联合顺铂对肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响

目的 观察茶多酚（TP）、顺铂（DDP）及两者联合对人肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响,探 讨TP 联合DDP 联合影响A549 细胞生长的机制。方法 人肺癌细胞A549 经TP、DDP 单独或联合处理后, 将A549 细胞分成TP 组、DDP 组、TP 联合DDP 组（TP+DDP 组）及空白对照组,MTT 法检测细胞增殖 情况,Annexin V/PI 双染流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot 检测细胞中p-AKT 和p-ERK1/2 的表达。 结果 TP 组、DDP 组及TP+DDP 组细胞增殖率分别为（91.0±3.6）%、（84.3±5.0）% 和（70.3±4.2）%, TP+DDP 组的细胞增殖率与DDP 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TP+DDP 组低于DDP 组;流式细胞 术示TP 组细胞凋亡率无明显影响,TP+DDP 组凋亡率与DDP 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;DDP 组细胞中p-AKT、p-ERK1/2 蛋白表达降低,TP 联合DDP 组中p-AKT、p-ERK1/2 的蛋白表达与DDP 组 比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TP+DDP 组低于DDP 组。结论 TP 与DDP 联合用药可增强DDP 的抑 制增殖和促进凋亡作用,其机制可能与下调AKT 的表达和ERK1/2 蛋白的磷酸化有关。     

百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞株A549增殖与凋亡的影响

目的 研究人工合成百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞A549的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 将细胞分为5组：空白对照组、A549细胞组、A549细胞+ATQTHB干预(400μg/mL)组、人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)组、BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组。采用CCK-8法分析细胞增殖抑制情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果 与A549细胞组相比,400μg/mL ATQTHB干预对A549细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);ATQTHB干预后,人正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖与未干预细胞间差异无统计学意义(P>0.05);与A549细胞组相比,A549细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.05);与BEAS-2B细胞组相比,BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率无显著改变(P>0.05),Bcl-2和Bax的蛋白表达水平差异无统计学意义(...     

川楝素通过XIAP途径增强肺癌细胞对顺铂的敏感性

目的: 研究天然药物活性成分川楝素对顺铂抗肺癌活性的协同效应并研究其机制。方法：实验对象为人肺癌细胞系A549,实验分为对照组,川楝素组,顺铂组,川楝素+顺铂组及川楝素+顺铂+XIAP质粒。MTT实验检测各组A549的细胞活力抑制率;流式细胞实验检测各组A549的细胞的凋亡;免疫共沉淀及western blot实验检测各组A549的细胞中XIAP表达水平及其与caspase-9和caspase-3的相互作用;western blot实验检测各组A549的细胞caspase-9和caspase-3的活化。结果：顺铂+川楝素组A549的细胞活力抑制率(66.8±5.9)显著高于顺铂单治疗组(15.2±1.2, P<0.05)和川楝素+顺铂+XIAP质粒组(20.4±1.8, P<0.05);顺铂+川楝素组A549的细胞凋亡率(34.5±2.6)显著高于顺铂单治疗组(9.7±0.8, P<0.05)和川楝素+顺铂+XIAP质粒组(13.3±1.2, P<0.05);免疫共沉淀及western blot实验显示川楝素能显著抑制A549细胞中XIAP的表达及其与caspase-9和caspase-3的相互作用,川楝素促进顺铂对caspase-9和caspase-3的活化。结论：川楝素通过下调XIAP的表达增强肺癌细胞对顺铂的敏感性。     

TLR9在胃癌细胞上的表达及其作用的实验研究

目的 探讨TLR9在胃癌细胞MGC803上的表达及其激动剂对MGC803细胞增殖和凋亡的影响.方法 用RT-PCR方法检测MGC803细胞上TLR9的表达;用TLR9的激动剂CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligodexynucleotides,CpG-ODN)10μg·mL-1分别作用MGC803细胞24、48 h和72 h后,用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术观察CpG ODN作用MGC803细胞24 h后的细胞凋亡现象.结果 MGC803细胞上有TLR9的表达;TLR 9激动剂CpG ODN作用于MGC803细胞不同时间点,均能明显抑制MGC803细胞生长(P＜0.01),以早期凋亡为主.结论 TLR9激动剂CpG ODN对胃癌细胞的生长具有抑制作用.     

MAPK1基因沉默对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinases1,MAPK1)基因沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法 利用CRISPR/CAS9基因编辑技术构建MAPK1沉默细胞系,采用Real-time PCR和Western blot检测沉默MAPK1后mRNA和蛋白表达水平。将MAPK1沉默载体与空载体转染至肺癌A549细胞中,并分为MAPK1沉默组、空载体组和空白组。对各组的肺癌A549细胞进行培养,利用CCK-8实验检测细胞增殖能力;平板集落形成实验检测细胞集落形成能力;平板划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况以及Western blot实验检测MAPK1沉默后ERK/mTOR通路蛋白表达。结果 Real-time PCR和Western blot结果表明成功构建肺癌A549细胞MAPK1沉默细胞系。MAPK1沉默使肺癌A549细胞增殖能力减弱（P<0.05）,迁移和侵袭能力降低（P<0.05）,细胞凋亡率增加且细胞周期被阻滞于S期（P<0.0...     

JAB1对缺氧环境肺癌A549细胞化疗敏感性调控的研究

目的观察导入pcDNA3.1-HRE-JAB1真核表达质粒的肺癌A549细胞,在低氧环境下对健择(Gemzar)的化疗敏感性,以期找到一种提高肺癌化疗敏感性的方法。方法首先构建缺氧反应元件启动的pcDNA3.1-HRE-JAB1真核表达质粒,鉴定后将该质粒导入肺癌A549细胞。在低氧环境培养过程中加入化疗药物Gemzar,观察空白组(A549)、空载体组(A549+pcD-NA3.1-HRE)和质粒组(A549+pcDNA3.1-HRE-JAB1)肺癌A549细胞对Gemzar的敏感性。采用Real-time PCR和Westernblot分别检测各组肺癌A549细胞中JAB1的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组肺癌A549细胞周期分布和凋亡情况。结果通过双酶切鉴定,确定构建获得了pcDNA3.1-HRE-JAB1质粒。在有化疗药物Gemzar的情况下,质粒组分别与空白组或空载体组比较,质粒组肺癌A549细胞中JAB1mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而细胞周期被明显阻滞于G1期(P<0.01)。结论 JAB1在低氧环境下高表达提高了药物Gemzar化疗的敏感性,这将可能成为一种理想的提高肺癌或其他实体恶性肿瘤化疗敏感性的手段。     

长链非编码RNA PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用

目的: 研究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法: 采用RNA测序（RNA-seq）技术检测人肺腺癌细胞A549及其铂类耐药细胞中lncRNA和mRNA的差异表达谱;qRT-PCR检测lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平;利用siRNA技术下调铂类耐药人肺癌细胞中PAPPA-AS1的表达,CCK-8实验检测肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性;克隆形成实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡分布;蛋白质印迹法检测Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平。 结果： 与亲代敏感细胞A549相比,lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中呈高表达;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性增强,细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加（P均<0.05）;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达明显升高,磷酸化PI3K、Akt和mTOR蛋白表达明显降低。结论： 下调PAPPA-AS1可以通过抑制PI3K/Akt信号通路逆转肺腺癌细胞对铂类药物的抵抗性。     

长非编码RNA BANCR逆转非小细胞肺癌细胞株顺铂耐药的研究

目的:研究长非编码RNA BANCR对人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测耐顺铂细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中BANCR的表达差异,发现BANCR在A549/DDP细胞中显著低表达?在A549/DDP细胞中过表达BANCR,分别应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测过表达后A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性,细胞增殖能力,联合顺铂处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后A549/DDP细胞p53的表达变化?结果:BANCR在A549/DDP细胞中的表达量显著低于A549细胞(P < 0.05),在A549/DDP细胞中过表达BANCR可产生以下效应:相较于对照组,顺铂对A549/DDP/BANCR细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),A549/DDP/BANCR细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/BANCR经过顺铂处理后细胞凋亡增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与空白对照组比较,过表达BANCR的 A549/DDP细胞p53表达水平明显升高?结论:BANCR可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调p53蛋白表达而逆转 A549/DDP细胞对DDP的耐药性?     

榄香烯对人肺癌A549细胞系耐顺铂细胞株多药耐药的改善作用及机制研究

[目的]探究榄香烯(elemene,ELE)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药人肺癌A549/DDP细胞系多药耐药的改善作用及其作用机制.[方法]将A549/DDP细胞分为A549/DDP组和ELE组,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测24、48、72h时不同...     

MT1X siRNA对肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨金属硫蛋白1X（MT1X）在肺癌耐药细胞株（A549／DDP）顺铂耐药中的作用。方法通过化学合成针对MT1X的siRNA段抑制其在A549／DDP中的表达,实时定量聚合酶链反应（PCR）及WB检测干扰效果,M1Tr及平板克隆形成实验检测干扰前后细胞对顺铂的药物敏感性变化;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果针对MT1X的siRNA片段能在RNA及蛋白水平有效抑制其在A549／DDP中的表达;与对照组相比,MT1X表达被抑制后,肿瘤细胞对顺铂的敏感性明显升高;增殖被抑制,平板克隆形成率明显降低（P〈O．05）,细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论针对MT1X的siRNA片段可部分逆转肺癌细胞（A549／DDP）对顺铂的耐受,为提高肺癌的化疗效率提供了一种新方法。     

Ｔｏｌｌ 样受体９ 在宫颈癌细胞中的表达及抗凋亡作用

目的：研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9（TLR9）的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hela细胞中TLR9 mRNA的表达情况;四甲基偶氮唑盐（MTT）检测不同浓度人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对Hela细胞生长抑制情况;流式细胞术（FCM）检测CpG-ODN预刺激对Hela细胞抗TRAIL诱导凋亡能力的影响。结果①TLR9 mRNA在Hela细胞中表达,应用CpG-ODN刺激24 h后,TLR9 mRNA的表达增加,与PBS对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。②MTT比色法检测显示, TRAIL蛋白可抑制Hela细胞生长,随着TRAIL蛋白浓度增加,抑制率增加。并且计算半抑制浓度IC50（223．092±3．850）ng／mL。③流式细胞术检测显示,TLR9特异性激动剂CpG-ODN刺激Hela细胞后,TRAIL诱导细胞凋亡率为（15．32±2．46）％,与无CpG-ODN预刺激组[（43．49±2．04）％]相比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 TLR9特异性激动剂CpG-ODN能够增强Hela细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡能力,提示TLR9在肿瘤的恶性进程中发挥作用,为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。     

八宝丹处理肺腺癌细胞A549和SPCA-1对顺铂化疗敏感性的影响

目的：探讨八宝丹处理人肺腺癌A549和SPCA‐1细胞系对顺铂（DDP）抗肿瘤化疗敏感性影响。方法收集人肺腺癌A549和SPCA‐1细胞系进行不同处理,随机分为对照组（空白）、DDP组（4 uM ）、（八宝丹＋DDP）组（0.75 mg／kg＋4 uM ）,处理3周,采用MTT法检测细胞增殖能力;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定（TUNEL）法检测细胞凋亡率,采用transwell检测细胞迁移能力。结果与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的 A549和SPCA‐1细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞增殖能力无明显差异（P＞0.05）。与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞凋亡明显增加（P＜0．01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞凋亡明显增加（P＜0.05）。与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞迁移数目明显降低（P＜0.01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞迁移数目明显降低（P＜0.001）。结论（八宝丹＋DDP）可以增加肿瘤细胞的凋亡,降低肿瘤细胞的增殖,减少 A549和SPCA‐1细胞迁移数目,增加肿瘤细胞的DDP抗肿瘤敏感性。     

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?     

肝细胞生长因子对非小细胞肺癌侵袭和迁移的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)转移的影响及其可能的分子机制.方法 以HGF进行诱导培养NSCLC细胞株A549及其耐药株A549/DDP,应用Real time PCR及Western blot检测诱导前后细胞内上皮间质转化(EMT)相关标志物波形蛋白(vimentin)、钙黏蛋白E(E-cadhe-rin)表达的变化.将细胞种植在细胞培养板,设置未外源性添加HGF的为对照组,外源性添加HGF进行细胞培养的为HGF诱导组,应用细胞划痕以及Transwell实验检测诱导前后两株细胞迁移侵袭能力的变化.结果 HGF在A549/DDP细胞的mRNA表达水平较A549细胞显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);提高A549/DDP及A549细胞微环境中HGF水平可诱导细胞vimentin增加、E-cadherin减少,差异均有统计学意义(基因水平P<0.01,蛋白水平P<0.05).细胞划痕实验显示,A549/DDP细胞愈合较A549细胞快,差异有统计学意义(P<0.05),HGF诱导可使细胞侵袭能力增强;Transwell结果显示,HGF诱导组的A549/DDP、A549细胞相对未诱导前细胞的侵袭能力增强,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 HGF促进NSCLC细胞A549/DDP及A549的侵袭迁移,其机制可能与通过调控EMT相关基因的表达相关.     

siRNA干扰沉默bFGF基因对肺腺癌A549增殖和凋亡的影响

目的利用小分子RNA干扰沉默碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因的表达,探讨其对肺腺癌A549细胞Oct-4表达、细胞增殖和凋亡的影响。方法将A549细胞分为转染干扰质粒组(干扰质粒组)、转染阴性对照质粒组(阴性对照组)和未转染质粒组(空白对照组)。采用Real-Time PCR检测质粒干扰后A549细胞bFGF基因mRNA表达的变化;Western Blot检测Oct-4蛋白表达的变化;CCK-8比色分析法绘制生长曲线观察细胞增殖能力变化及Annexin-V-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Real-Time PCR结果显示质粒干扰后A549细胞中bFGFmRNA表达下降(P<0.01);Western Blot显示干扰组A549细胞Oct-4蛋白表达下降(P<0.01);生长曲线结果显示干扰质粒组细胞增殖活力下降明显(第2～4天P<0.0 5,第6～7天P<0.01);流式细胞仪检测凋亡结果显示细胞凋亡增加(P<0.0 5)。结论靶向bFGF基因的小分子RNA可以抑制bFGF表达;bFGF基因被抑制后下调Oct-4表达,细胞凋亡增加,增殖能力下降。