均相时间分辨荧光法测定阿达木单抗结合活性

目的 建立一种基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术的分析方法,用于快速、简便、稳定地检测阿达木单抗与TNF-α抗原的结合活性.方法 将检测试剂、梯度稀释的标准品及待测样品加入96孔板,孵育后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值和抗体浓度进行四参数曲线拟合,根据标准品及待测样品的EC50值计算样品的相对结合活性;同时...     

重组风疹病毒外膜蛋白E1的表达及其在血清学中的初步应用

目的 在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法 .方法 通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的方法 检测世界卫生组织(WHO)的风疹检测质控血清以及来自广西桂林的未知血清样本.结果 采用WHO用于风疹检测的质控血清对所表达的重组抗原的抗原性进行鉴定,通过试验,特异性、敏感性均为100%.用表达的抗原对来自我国广西的200份未知血清样本进行风疹病毒外膜蛋白抗体的检测,阳性率为93%,与文献报道的我国其他地区风疹病毒抗体阳性率基本一致.结论 通过实验我们表达了具有良好抗原性的风疹病毒外膜蛋白E1,为进一步研究风疹病毒感染的实验室诊断技术奠定了基础.     

弓形虫IgM抗体检测方法的研究

本文以鼠抗人μ链单克隆抗体捕获被测人血清中ＩｇＭ抗体，再以辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原进行直接酶联免疫吸附试验，检测人血清中特异性抗弓形虫ＩｇＭ抗体，并以阻断试验证实该方法的特异性。与风疹病毒ＩｇＭ抗体阳性血清，巨细胞病毒ＩｇＭ抗体阳性血清和类风湿因子等无交叉反应。与进口试剂盒以酶联免疫吸附试验双夹心法（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ－Ｔｏｘ－ＩｇＭ）进行比较检测了临床血清样品１０５３份，两者阳性符合率为９５．５６％，ＤＳ－ＥＬＩＳＡ阴性血清在Ｄ－ＥＬＩＳＡ法亦阴性，而且后者灵敏度略高。酶标记抗原和包被抗体的酶标板在４℃中保存６个月仍稳定。试剂盒操作简便，快速，适用于弓形虫病的早期诊断。     

动物源性生物材料中残留α-Gal抗原检测方法

为了定量检测动物源性生物材料中残留α-Gal抗原含量,本实验室建立了M86抗体的ELISA抑制法。用兔血红细胞制备标准曲线,以Galα-1,3-Gal/BSA为固相抗原,利用特异性抗α-Gal单抗M86与待测物反应,再取上清液中剩余的M86抗体与固相抗原反应后检测待测物中α-Gal抗原含量。结果显示其标准曲线的R2=0.999,具有很好的相关性;经α-Gal阳性和阴性材料的验证证实其具有较好的灵敏性和特异性。利用该方法考察了大鼠组织、动物源性脱细胞生物材料、猪真皮处理前后α-Gal抗原的表达特征。该方法有望成为评价动物源性生物材料及其衍生物α-Gal抗原残留的一种有效方法。     

基于石墨烯场效应晶体管的新型冠状病毒抗原检测技术

目的建立一种简易、灵敏且快速的新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)抗原检测方法。方法构建石墨烯场效应晶体管器件, 并对传感器沟道材料进行探针分子修饰。在不同浓度2019-nCoV刺突蛋白溶液中进行电学信号的测试, 从而将抗原抗体特异性识别的生物信号转化为电学信号。结果抗体探针通过连接分子成功固定在石墨烯表面, 特异性靶向目标待测物, 从而确保传感器件的检测准确性。测试不同目标物浓度条件下石墨烯场效应晶体管的转移曲线得到相应的狄拉克点偏移, 最低检测浓度达到3.6×10-17 g/ml, 器件响应时间低至3 min。结论本研究初步建立了利用石墨烯场效应晶体管进行灵敏、高效且简便的2019-nCoV抗原检测方法。     

应用蛋白微阵列同时检测人血清抗ToRCH抗体

目的：建立一种基于多元蛋白微阵列的免疫检测方法，用于同时检测人血清中识别弓形虫（TOXO）、风疹病毒（RV）、巨细胞病毒（CMV）、单纯疱疹Ⅰ型、Ⅱ型病毒（HSV-1、HSV-2）的特异性抗体。方法：将TOXO、RV、CMV、HSV-1和HSV-2抗原喷印到活化的玻片表面，抗原与活化基团共价结合后，制成蛋白微阵列。固定在玻片表面的抗原与病人血清中的特异性抗体反应、结合后，加入荧光标记的二抗，然后用高分辨率的激光共聚焦芯片扫描系统对蛋白微阵列进行扫描成像。所获得的图像用自行开发的软件进行分析，并自动判定并生成待测样本的定性结果。结果：使用此套蛋白微阵列系统检测抗TORCH抗体参考品，并与其它多种检测方法进行比较，各检测项目的符合率分别为92％～100％、92％～100％、96％、84％～96％、76％-96％。结论：多元蛋白微阵列法特异性强，灵敏度、准确度、精密度较高，具有应用和推广价值。     

电化学生物传感器的应用

电化学生物传感器是基于传感器表面抗体和抗原相互作用的生物传感器,将抗体(抗原)固定在传感器表面后再分别用来检测抗原(抗体)。相比其他生物传感器,电化学传感器具有较好的选择性和较高的灵敏度,因此在不同的科学领域具有广泛的应用前景。本文综述了电化学生物传感器的工作原理、分类、抗原抗体的固定方法,以及在食品安全、临床医学和环境监测领域的应用,并进一步指出目前生物传感器存在的不足之处以及今后研究的重点方向。     

微机辅助正交设计对ELISA实验条件的初步探讨

本文用正交设计对用ELISA法检测抗HSV-Ⅰ型IgG抗体过程中四个常见的影响因素(抗原包被温度、洗涤次数、待测血清温育时间、酶结合物温育时间)进行了研究,较简便地确定了用ELISA法检测抗HSV-Ⅰ型IgG抗体的最佳实验条件组合。改进后的方法较原法节省时间近一半,而不影响实验的敏感性和稳定性。运用微机正交设计计算程序,大大提高了工作效率。     

新型优生4项快速检测试剂的制备与条件优化

技术检测是目前优生需要进行的4项测定,如能做到将此4种病原体抗体一次性快速检测将会为临床和病人带来方便.我们制备了一种新型优生4项快速检测试剂,在传统的免疫层析技术基础上,将弓形虫(Tox)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV Ⅱ)抗原分别在硝酸纤维素膜(NC膜)的不同位置交错包被成线,通过胶体金标记羊抗人IgM抗体显色,同时检测人血清中针对抗原的特异性IgM抗体.     

半巢式PCR法在鉴定风疹病毒标本基因型中的应用

目的在无法成功分离风疹病毒的前提下鉴定风疹病毒阳性标本的基因型,从而全面完整地了解河北省风疹病毒基因型的特征.方法采用半巢式PCR法,将盲传三代风疹病毒核酸检测为阴性而咽拭子标本风疹病毒核酸检测为阳性的风疹疑似病例咽拭子标本进行核酸扩增、序列测定和分析.结果检测的11份风疹疑似病例咽拭子标本中有6份为2B基因型风疹病毒,5份为1E基因型风疹病毒,11份标本与相应的各基因型参考株同源性高,重要抗原位点未发生变异.结论使用半巢式PCR法能够成功地鉴定出盲传为阴性的风疹病毒基因型,丰富了风疹病毒基因库,并为更全面地了解河北省风疹病毒分子流行病学提供依据.     

酶联免疫吸附试验技术在TORCH综合征中的应用

本文将弓形体病毒ＩｇＭ抗体型居细胞病毒ＩｇＭ抗体、风疹病毒ＩｇＭ抗体、单纯疱疹病毒Ⅱ型ＩｇＭ抗体（ＴＯＲＣＨ）列入孕期常规检查并用ＥＬＩＳＡ技术进行测定，所测阳性率依次为０．９４％、０．８６％、０．９４％、２．０４％。待测标本均经双盲法检测，证实ＥＬＩＳＡ方法的正确性。我们并指导育龄妇女避免与弓形体传染源接触，使孕妇感染率自１９９３年的４．４１％下降至１９９８年的０．９４％。对风疱病毒无免疫力者（     

丙型肝炎病毒游离核心抗原检测试剂盒临床考核数据分析

用国外丙型肝炎病毒游离核心抗原检测试剂盒对自然供血员及丙型肝炎可疑感染者血样共9215份血清进行检测，并对检测数据进行统计分析。结果发现，该试剂在9215份血清中筛出两份HCV游离核心抗原阳性血清，其中一份为抗原和抗体同时阳性血清，产生的抗体为核心区抗体。另外一份为单独游离核心抗原阳性血清。临床考核发现该试剂出现了较多的假阳性结果。由于本试剂盒采用双抗体夹心酶联法原理（ELISA）检测人血清或血浆样品中丙型肝炎病毒核心特异性抗原，该试剂方法简单，易于操作，该检测系统可同时处理大量样品，可用于高通量检测。确证的两份抗原阳性血清和部分复筛抗原阳性血清进行RIBA检测结果显示，有一份抗原和抗体同时阳性的血清，     

一种迅速、廉价微量的毛细管免疫测定技术

本文介绍了一种简单,迅速的单相琼脂技术。样品仅需1微升,作用时间仅2小时,适合分析抗原含量少的样品。原理:抗体与琼脂混合置毛细管中,待凝后上加抗原。作用一定时间后,抗原进入琼脂形成沉淀带,沉淀带的宽度与抗原浓度     

用生物传感器测定重组人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的亲和力及抗原识别表位

目的 测定重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体的抗原识别表位及其亲和常数.方法 借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析.结果 10株TNF-α单抗的亲和常数介于105～107 M-1之间,其中所测的5株抗体识别肿瘤坏死因子上3种不同的抗原表位.结论 生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构象关系.     

一种用于临床和免疫分析的简易且廉价的一次性电化学传感器

近年来,人们对应用生物传感器作各种定量分析的兴趣倍增。在这些生物传感器中,最为常用的是酶电极。目前,人们努力的焦点集中在研制免疫传感器上,并已做了许多试验,包括苯并-15-冠-5-地高克辛(benzo-15-crown-5-cigoxin)抗原-离子载体缀合物的混合体压电晶体,场效应晶体管,涂层导线电极以及Clark氧电极。所有这些用于定量免疫学反应的传感器都遇到了同样的问题,即由于难以分离抗原-抗体复合体,因而需要很长的回复时间。耦合在电极表面上的抗原或抗体因失去活性而使重复性欠佳。为使其在全血清或贫血中发生作用,往往需要进行清洗或使样品高度稀释。Robinson等人通过采用磁性电极而解决了     

肠道病毒71型抗原含量检测方法的建立及初步验证

目的 建立肠道病毒71型(EV71)抗原含量检测方法并进行初步验证,用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的检测.方法 以抗EV71单克隆抗体为包被抗体,酶标抗EV71多克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,以本室自制EV71抗原参考品为定量标准,建立抗原标准曲线,确定定量限度及最佳定量范围,并对该方法的准确度、精密度和特异性进行初步验证.结果 建立了双抗体夹心检测EV71抗原含量的ELISA方法,定量限度为0.23μg/ml,最佳定量范围为7.32～0.23μg/ml,相关系数为R2=0.9976;准确性较好,回收率在90%～110%之间;精密性较好,变异系数小于10%;除与EV71样品有特异性反应外,与其他样品无交叉反应.结论 建立了检测EV71抗原含量的双抗体夹心ELISA方法并进行了初步验证,为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了简便、快捷的检测手段.     

胃肠道间质瘤CD117、CD34和DOG1免疫组化染色的最适修复方法

正免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色是一种通过利用已知抗原或抗体来特异性标记待测组织中蛋白的方法,是目前病理诊断中不可或缺的重要手段。胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是一种常发生于胃肠道的间叶源性肿瘤~([1])。近年来发现,联合应用CD117、CD34和DOG1等一系列抗体的免疫组化检测,在GIST的诊     

重庆地区孕前育龄妇女风疹病毒和弓形虫感染调查研究

目的调查重庆市孕前育龄妇女风疹病毒和弓形虫IgM和IgG抗体感染阳性率,为计划生育孕前门诊、遗传和优生咨询门诊指导优生,降低先天畸形儿出生率提供理论依据。方法随机抽样重庆地区1509例16-49岁孕前育龄妇女人群,采集血清标本,采用ELISA法进行风疹病毒和弓形虫特异性IgM和IgG抗体的检测。结果风疹病毒IgM阳性率0.46%,风疹病毒IgG阳性率75.21%,弓形虫IgG阳性率14.78%,弓形虫IgM阳性率0.27%。结论风疹病毒和弓形虫是造成胎儿先天畸形的原因之一,建议每一位妇女在孕前都应检测风疹病毒抗体和弓形虫抗体,以降低宫内感染率和先天畸形儿出生率,提高出生人口素质。     

用酶联聚乙二醇沉淀分析(ELIPEGA)检测抗血吸虫抗体

假使酶标记抗原在某一PEG浓度下沉淀量极少,而其与相应抗体结合的免疫复合物则沉淀量相对较多,则有可能作为一种特异性抗体测定的方法。我们将此设想试用于抗血吸虫抗体的检测。 将酶标记成虫和虫卵抗原用NS稀释至1:200或1:400,取50微升加入待测血清50微升中,于37℃作用2小时,再加入5.5％PEG溶液(配于0.1M硼砂缓冲液,pH8.4)0.9毫升,于4℃左右过     

酶联免疫吸附法同时检测血清中的HIV和HCV抗体

用酶联免疫吸附试验检测病毒抗体 ,多为对单一抗体的检测 ,我们将人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ 1 2 )和丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)抗原包被于同一载体 ,同时检测这两种病毒的抗体 ,取得了与单测法基本一致的效果。ＨＩＶ 1 2抗原和ＨＣＶ抗原为加拿大Ｙｅｓ生物技术研究有限公司产品 ;ＨＩＶ酶联免疫检测试剂盒批号 96 0 5 15 ,ＨＣＶ酶联免疫诊断试剂盒批号 96 0 72 3,均为厦门新创科技有限公司产品。ＨＩＶ和ＨＣＶ抗体阴、阳性国家参照品由卫生部药品生物制品检定所制备 ,批号分别为 96 0 1、96 0 4。 112 0份血清样品取自山东医科大学附属医院…