HPLC法测定血浆中5-氟尿嘧啶水平

目的：建立快速测定人血浆中5-氟尿嘧啶（5-Fu）浓度的方法。方法：乙酸乙酯提取血浆中5-Fu，高压液相色谱法测定其浓度。色谱柱为YWGC18，流动相为0．03mol磷酸氢二钾（2．5：1），pH7．0，流速为1．0mL／min。紫外检测波长254nm。结果：分别在血浆低浓度（0．1μg／mL～5μg／mL）和高浓度（5μg/mL～40μg／mL）呈良好线性关系。5-Fu在5μg／mL、10μg／mL、40μg／mL、300μg／mL、500μg／mL5个浓度点日间平均回收率和RSD分别为95．2％、4．6％；90．5％、6．9％；95．9％、0．93％；107％、8．5％；106％、6．0％。结论：本方法快速、准确，适合于5-Fu临床用药浓度的观察及个体药代动力学研究。     

高效液相色谱手性固定相拆分酒石酸美托洛尔对映体条件的优化

目的：建立高效液相色谱手性固定相拆分酒石酸美托洛尔光学异构体的方法。方法：以正已烷、异丙醇和二乙胺为流动相，用Chiralcel OD-H手性固定相成功拆分了β1受体阻断药酒石酸美托洛尔对映体，并对流动相组成、柱温及流速等条件进行了优化。结果：优化的色谱条件为：正已烷-异丙醇-二乙胺（65：35：0．1，v／v／v）；柱温：25℃；流速：0．5mL／min，该条件下的分离因子为1.82．两对映体在5.005～260mg／L的浓度范围内，以药物浓度为纵坐标，峰面积为横坐标进行线性回归，r=0．9997。结论：该方法拆分及测定两对映体简单，可靠。     

盐酸左氧氟沙星胶囊含量及有关物质的HFLC测定

目的：建立HPLC法测定盐酸左氧氟沙星胶囊含量及有关物质的方法。方法：色谱柱：XB—C18（5μm,4．6×250mm）,流动相：甲醇-L-异亮氨酸溶液（L-异亮氨酸：1．31g,硫酸铜：1．25g,加水稀释至1000r．l）（15：85）。流速1．0ml·min^-1;检测波长293nm。结果：盐酸左氧氟沙星进样量在43—2150ng范围内,与峰面积具有良好的线性关系（r=0．9999）,平均回收率为100．50％,RSD=0．013％。检测限为：1．075ng。结论：本法简便、准确,重现性好,可用于测定盐酸左氧氟沙星胶囊含量及有关物质。     

HPLC—UV法检测人血浆中双氢可待因的浓度

目的建立人血浆双氢可待因检测的高效液相色谱方法。方法血浆经乙酸乙酯、正己烷萃取,以ZORBAX XDB-C18为色谱柱;流动相为乙腈-水-0．1％三氟乙酸（trifluoroacetic acid,TFA）,流速为1．0mL·min^-1;检测波长为230nm（0—5．0min）和210nm（5．0～6．2min）。结果双氢可待因浓度在2．5～100．0μg·L^-1范围内线性关系良好（r=0．9998）;定量下限为2．5μg·L^-1;高中低三个浓度的相对回收率分别为（101．48±5．87）％、（103．75±4．48）％和（100．06±2．51）％;日内相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）分别为5．79％、4．32％和2．51％,日间RSD分别为6．64％、4．05％和3．95％。结论本高效液相色谱紫外法准确可靠、简便快速,适用于人血浆双氢可待因浓度的测定及其药物代谢动力学研究。     

固相萃取-反相HPLC法同时快速测定血浆中4种氟喹诺酮类药物

目的 建立同时快速测定人血浆中4种氟喹诺酮类药物(氟罗沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星)的方法 .方法 采用C<,18>固相萃取小柱萃取血浆中的4种氟喹诺酮类药物.色谱柱为ODS-BP柱(5 μ,250 mm×4.6 mm),流动相为含1.31 g/L L-异亮氨酸和0.80 g/L CuSO<,4>的水溶液-甲醇(80:20,V:V),激发波长为280 nm,发射波长为504 nm,流速为0.8 ml/min. 结果 4种氟喹诺酮类药物可良好分离,分离度达到1.5以上.4种药物的线性范围均是0.1-20 μg/ml,r均大于0.997 5,氟罗沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星的最小检测限依次分别为50 ng/ml、1 ng/ml、100 ng/ml、100ng/ml,萃取回收率均高于87.97%,方法 回收率均在95.40%与101.82%之间,日内RSD均小于3.7%,日间RSD均小于1.5%. 结论 固相萃取-反相HPLC法简便,灵敏度高,准确度高,精密度好,可用于氟喹诺酮类药物的快速测定.     

HPLC法同时测定博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱的含量

目的 采用HPLC法同时检测博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱含量。方法采用Luna-C18色谱柱（150min&#215;4．6mm,5μm）,以0．1％磷酸加三乙胺缓冲溶液（pH3．5）-乙腈（78：22）为流动相,流速为0．8mL／min,柱温25℃,检测波长284nm。结果原阿片碱、别隐品碱含量测定方法的线性关系良好,线性范围和相关系数分别为4．2-52μg／mL（r=0．9994）,6．9-86μg／mL（r=0．9999）;平均回收率分别为99．2％、99．4％;RSD分别为0．9％、1．8％（n=6）。结论该方法操作简便、准确、灵敏度高,适合于博落回中原阿片碱、别隐品碱含量的同时测定．不同部位两种生物碱均存在一定的差异。     

HPLC法对不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

目的：建立补骨脂中主要成分含量的HPLC（高效液相色谱）测定方法。方法：色谱柱填料为：Kromasil C18（4．6×150mm）,流动相为甲醇-水（50：50）,检测波长为330nm,流速为1．0mL／min。结果：补骨脂素在4．8—20．16μg／mL（r=0．9996）范围内、异补骨脂素在4．55—19．11μg／mL（r=0．9999）范围内线性关系良好;补骨脂素与异补骨脂素平均回收率分别为103．59％（RSD=1．75）、99．28％（RSD=1．30）。结论：该方法准确、稳定、简单,可以作为补骨脂药材的质量控制方法。     

正相HPLC-MS/MS测定人血浆中多奈哌齐对映体浓度

目的建立正相高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人血浆中多奈哌齐(DN)对映体的方法,并进行方法学验证。方法采用正己烷∶异丙醇(98∶2,V/V)作为萃取剂进行样品浓集,选用CHIRALCEL OJ-H手性柱(250mm×4.6mm,5μm)作分析柱,流动相为正己烷∶正丙醇∶二乙胺=60∶40∶0.1(V∶V∶V),流速为0.5mL/min,柱温为38℃。以多反应监测(MRM)方式进行定量检测,利多卡因为内标,按内标法定量。结果左旋DN(S-DN)、右旋DN(R-DN)对映体的保留时间分别为15.56和18.41min。S-DN的线性范围为0.051～7.596ng/mL,R-DN的线性范围为0.049～7.404ng/mL,线性良好(r>0.99)。S-DN和R-DN的方法回收率分别为95.10%～103.70%、93.58%～98.00%;预处理回收率分别为58.42%～61.08%、53.24%～61.87%;日内精密度(RSD)分别为8.35%～11.28%、6.78%～11.58%;日间RSD分别为5.82%～9.02%、6.87%～9.19%。结论建立的正相HPLC-MS/MS测定人血浆多奈哌齐对映体血药浓度具有快速、简便、灵敏、准确等优点,适用于多奈哌齐对映体的人体药动学研究。     

HPLC—MS法测定克拉霉素浓度

目的建立快速、简便的HPLC—MS法测定人血浆中克拉霉素浓度的方法。方法以罗红霉素为内标,采用Shim—packODSC18柱（250mm×2．0mm5m）甲醇-水溶液（含0．1％甲酸）（60：40v／v）为流动相,流速0．2mL／min,柱温30℃。采用质谱电喷雾离子源正源（ESI＋）将样品离子化,选择性离子监涮（SIM）准分子离子峰。结果克拉霉素在0．025～6．4μg／ml范围内线性关系良好（r=0．999）,最低定量限为0．025μg／ml,提取回收率均大干85％,批内与批间RSD均小于15％。结论该方法简单,快速、灵敏度高、专属性强．可较好应用于临床克拉霉素血浆浓度检测。     

反相高效液相色谱法测定血浆中罗红霉素的含量

目的 建立血浆中罗红霉素（roxithromycin）含量测定方法。方法采用C18色谱柱,流动相为甲醇-0.05mol／L磷酸二氢铵溶液（氨水调pH为7.0）（75：25）,流速1.0mL／min,克拉霉素为内标．血浆样品碱化后用正己烷-二氯甲烷-异丙醇（65：32：3）提取浓集,在210nm波长处检测。结果 本方法在0．25～16μg／mL范围内线性关系良好（r=0．9998）．日内RSD＜5．6％．日间RSD＜9．3％,平均提取回收率为88.5%,平均方法回收率为99．2％。结论 该方法快速、准确,适用于罗红霉素的临床药动学研究和血药浓度检测。     

HPLC测定S-西酞普兰

目的 拆分西酞普兰(R，S-citalopram)对映异构体，建立S-西酞普兰的质量检测方法。方法 采用CHIROBIOTIC V手性柱，以甲醇-冰醋酸-三乙胺(100：0．1：0．1)为流动相，检测波长240nm，柱温20℃，流速1．0min/ml。结果 S、R型异构体获得完全分离，S-西酞普兰在10～150μg/ml范围内具有良好线性，(r=0．9991，n=5)。结论 该方法简便、准确，可作为S-西酞普兰含量测定及其R型异构体的含量监控方法。     

普萘洛尔在人肝细胞色素P450转基因细胞中的立体选择性测定

目的：建立一种手性色谱法，用于普萘洛尔经人肝细胞色素P450特基因细胞S9代谢的立体选择性研究。方法：以S—( )—普罗帕酮为内标，用柱前GITC手性衍生化反相高效液相色谱法测定普萘洛尔对映体在S9孵育液中的浓度。结果：5—(-)—普萘洛尔、内标及R—( )—普萘洛尔获基线分离。在5—500μmol/L／L范围内线性良好。定量限5μmol/L／L(22＝5，RSD＜10％)。S—(-)—和R—( )—普萘洛尔的平均回收率分别为98．7％和98．1％。日内、日间精密度均小于10％。经时孵育试验表明，普萘洛尔经CYP2Cl8有S—(-)—体优先代谢的立体选择性，而经CYP2C9有R—( )—体优先代谢的立体选择性。结论：该法简便、准确、重现性好、专属性强，可以用于普萘洛尔体外代谢的立体选择性研究。     

苯磺酸左旋氨氯地平血药浓度的LC-MS/MS法测定及其人体内手性转化可能性考察

目的 建立LC-MS/MS法测定人血浆中左旋氨氯地平血药浓度并进行体内手性转化可能性考察。 方法 以氯氮为内标, 采用CHIRAL-AGP柱(150.0 mm×4.0 mm, 5 μm)对氨氯地平消旋体进行分离手性对映体, 流动相为10 mmol/L乙酸铵缓冲液(pH 4.38)-异丙醇(982, V/V);选择固相萃取法提取10例健康男性受试者单次口服苯磺酸左旋氨氯地平片2.5 mg 后的血浆样品, 大气压化学电离源(APCI)结合正离子MRM扫描分析测定人体内S-(-)-氨氯地平浓度, 其中氨氯地平和内标离子对分别是m/z 409.0→237.9和m/z 300.0→282.0。 结果 S-(-)-/R-(+)-氨氯地平对映体血药浓度在0.103 1~20.62 μg/L范围内线性关系良好(r=0.999 8, r=0.999 7), 绝对回收率大于70.0%, 相对回收率均在85.0%~115.0% 范围内, 日内和日间RSD均小于15.0%。10例健康男性受试者单剂量口服苯磺酸左旋氨氯地平片2.5 mg后体内不同时间点血浆样品均未检测到R-(+)-氨氯地平对映体, S-(-)-氨氯地平在健康男性受试者体内的药代动力学参数t1/2为(42.77±8.08) h, Cmax为(3.06±0.51) μg/L, tmax为(6.3±1.0) h, MRT为(69.25±8.04) h, AUC0-144为(176.20±31.89) h·μg·L-1, AUC0-∞为(197.92±37.54) h·μg·L-1。 结论 本方法 选择性强, 灵敏度高, 无杂质干扰, 精密度好, 成功地应用于苯磺酸左旋氨氯地平人体药代动力学分析, 并证实S-(-)-氨氯地平对映体在健康男性受试者体内未发现其手性转化。     

非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法的建立

目的：建立适用于体外细胞模型的OATP1B1手性底物非索非那定柱前手性衍生化分析方法,为测定细胞中非索非那定对映体提供分析手段。方法：选择R-(+)-苯乙基异氰酸酯作为手性衍生化试剂,与非索非那定生成氨基甲酸酯衍生物,应用液相色谱-串联质谱法确定对映体衍生物色谱峰,通过反相高效液相色谱法实现对映体的分离分析。结果：在建立的手性分离条件下,成功实现非索非那定对映体分离分析,非索非那定两个对映体衍生物在25 ~100 ng/ml浓度范围内线性关系良好 (R²=0.9992, 0.9989),日内、日间精密度均小于10%。结论：本实验建立的非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法灵敏、准确,可用于体外细胞模型中盐酸非索非那定立体选择性分析。     

牛血清白蛋白手性柱直接拆分亚叶酸钙消旋体

目的:建立牛血清白蛋白手性柱直接拆分亚叶酸钙消旋体的方法.方法:采用高效液相色谱法,使用EC 150/4 RESOLVOSIL BSA-7 (150 mm×4 mm) 手性色谱柱,0.20 mol/L、pH 5.0磷酸盐缓冲液为流动相,对亚叶酸钙消旋体进行拆分,考察了流动相缓冲液浓度、pH值以及柱温对拆分效果的影响.结果:流动相的缓冲液浓度、pH和柱温对亚叶酸钙对映体的容量因子k′,以及分离度Rs,均有较大影响.左旋亚叶酸钙和右旋亚叶酸钙分别在18.5 min和22.6 min出峰,分离度Rs＝1.49.结论:用本方法可以成功拆分亚叶酸钙对映体.     

HPLC-MS/MS法测定血浆中华法林对映异构体浓度

目的 建立高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定人血浆中华法林对映异构体的浓度。方法 以乙酸乙酯为萃取剂,采用MS Chiral? MS-OD(50×2.1 mm, 3 μm)为手性柱,流动相为甲醇∶水∶甲酸=85∶15∶0.05,流速为0.18 mL/min。采用负离子模式,电喷雾离子源（ESI）,以萘普生为内标定量,华法林和内标的检测离子对质荷比分别为（m/z）307.2→160.9和（m/z）228.9→185.1。结果 R-华法林批内精密度,其相对标准偏差(RSD)为3.2%~5.8%,批间RSD为2.5%~5.1%;方法回收率(96.1±5.6)%~(105.4±4.7)%,提取回收率80.7%~84.4%,内标基质效应校准后的基质效应RSD<10%;S-华法林批内精密度RSD为3.7%~5.2%,批间RSD为3.2%~4.8%;方法回收率(98.3±5.1)%~(103.7±3.8)%,提取回收率81.3%~84.6%,内标基质效应校准后的基质效应RSD<10%。最低定量限均为0.1 μg/mL。结论 本文建立的方法准确、灵敏、可靠,可用于人血浆中华法林对映体的拆分和血药浓度的测定。     

Extraction and determination of trace amounts of chlorpromazine in biological fluids using magnetic solid phase extraction followed by HPLC

A simple, rapid and sensitive method termed as magnetic solid phase extraction (MSPE) combined with high-performance liquid chromatography-ultraviolet detector (HPLC-UV) has been proposed for the determination of trace amounts of chlorpromazine (CPZ) in water, urine and plasma samples. The separation and determination was performed on a C18 column under the optimal chromatographic conditions. Several factors influencing the extraction efficiency of CPZ, such as pH, surfactant and adsorbent amounts, ionic strength, extraction time, sample volume and desorption conditions, were studied and optimized. Under the optimal MSPE conditions, the extraction percentage of CPZ was 74%, 27% and 16% in water, urine and plasma samples, respectively. The limits of detection (LODs) of the proposed approach were 0.1, 5.0 and 10 ng/mL in water, urine and plasma samples, respectively. The relative standard deviations (RSDs) based on five replicate determinations at 10 ng/mL level of CPZ was 1.2%. Good linear behaviors over the investigated concentration ranges (0.25–300 ng/mL) with good coefficient of determination, R²>0.9998, were obtained. Good spike recoveries with relative errors less than 9.0% were obtained when applying the proposed method to water, urine and plasma samples.     

Highly sensitive trivalent copper chelate–luminol chemiluminescence system for capillary electrophoresis chiral separation and determination of ofloxacin enantiomers in urine samples

A simple, fast and sensitive capillary electrophoresis (CE) strategy combined with chemiluminescence (CL) detection for analysis of ofloxacin (OF) enantiomers was established in the present work. Sulfonated β-cyclodextrin (β-CD) was used as the chiral additive being added into the running buffer of luminol–diperiodatocuprate (III) (K₅[Cu(HIO₆)₂], DPC) chemiluminescence system. Under the optimum conditions, the proposed method was successfully applied to separation and analysis of OF enantiomers with the detection limits (S/N=3) of 8.0 nM and 7.0 nM for levofloxacin and dextrofloxacin, respectively. The linear ranges were both 0.010–100 μM. The method was utilized for analyzing OF in urine; the results obtained were satisfactory and recoveries were 89.5–110.8%, which demonstrated the reliability of this method. This approach can also be further extended to analyze different commercial OF medicines.     

牛血清白蛋白手性毛细管整体柱的分离性能

以牛血清白蛋白为手性选择器,基于甲基丙烯酸酯整体柱表面所带环氧基团具有较强反应活性的特征,采用一步法将牛血清白蛋白直接键合到其表面上,制备成牛血清白蛋白手性固定相毛细管整体柱。在毛细管电色谱模式下,进行柱分离性能研究。在-5 kV的分离电压、214 nm紫外检测波长、5 s进样时间、10 mmol/L磷酸盐流动相分离条件下,成功拆分了4种对映体和手性药物华法令,分析时间均小于15 min,分离度大于1.90,最大达到8.81。     

高效液相色谱法同时测定功能食品中6种违禁成分

目的 建立同时测定功能食品中去甲伪麻黄碱、伪麻黄碱、安非拉酮、士的宁、芬氟拉明和西地那非的高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)。 方法 样品经2%甲酸-水超声提取,强阳离子交换(SCX)固相萃取净化,0.05 mol/L磷酸二氢钾(pH3.0)-乙腈为流动相,C₁₈柱分离。色谱峰保留时间结合峰内光谱比较定性,外标标准曲线法定量。 结果 以本方法建立的6种化合物标准曲线线性相关系数均大于0.999,日内相对标准差为6.25%~8.19%,日间相对标准差为6.61%~10.8%,平均加标回收率为80.5%~110.0%,检出限为15.9~66.5 μg/kg。 结论 本研究建立的方法简便、灵敏度和检出限符合功能食品中违禁成分检测、分析成本低,可用于不同剂型功能食品中6种违禁添加成分的测定。