PI-88抑制人食管癌TE-13细胞Matrigel裸鼠移植瘤血管新生及其机制

目的:探讨通过Matrigel与肿瘤细胞混合接种的方法构建裸鼠人食管癌Matrigel移植瘤模型的可能性,进一步研究抗肿瘤制剂PI-88对于人食管癌Matrigel移植瘤生长及血管新生的影响。方法:将食管鳞癌细胞株TE-13悬液与Matrigel胶混合,接种8只裸鼠,构建人食管癌TE-13细胞Matrigel裸鼠移植瘤模型,将其随机分为PI-88治疗组和对照组。治疗组按照20 mg/kg剂量皮下注射PI-88,1次/d(PI-88配成1 mg/ml溶液);对照组按照20 ml/kg注射生理盐水,1次/d,均连续给药2周。第2、6、10、14天记录裸鼠肿瘤体积,第15天进行增强CT扫描观察肿瘤区域显影情况。免疫组化染色观察肿瘤组织中乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。结果:8只裸鼠均在接种当天形成移植瘤,成功构建TE-13细胞Matrigel裸鼠移植瘤模型。PI-88治疗第14天时,治疗组肿瘤体积明显小于对照组[(70.25±6.85)vs(143.13±17.18)mm3,P<0.05]。治疗第15天时,治疗组肿瘤区域CT值明显低于对照组(15.18±0.91vs 19.23±2.03,P<0.05)。治疗组肿瘤组织内HPSE与VEGF表达阳性细胞数显著低于对照组[HPSE:(28.70±6.39)vs(87.55±22.03)个,t=11.472,P<0.01;VEGF:(47.10±8.18)vs(94.40±14.47)个,t=12.727,P<0.01]。结论:Matrigel胶混合食管癌细胞接种裸鼠制备移植瘤方法可行,PI-88能够抑制人食管癌TE-13细胞Matrigel裸鼠移植瘤生长及血管新生,其作用机制可能与PI-88抑制移植瘤组织中HPSE和VEGF表达有关。     

乙酰肝素酶在食管鳞状细胞癌组织中的表达与意义

目的探讨乙酰肝素酶在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其与ESCC临床病理特征间的关系。方法应用RT-PCR和免疫组化方法检测55例ESCC术后组织标本及相应癌旁组织中乙酰肝素酶的表达,分析乙酰肝素酶表达与ESCC临床病理特征的关系。结果ESCC组织中存在乙酰肝素酶基因的表达,并定位于肿瘤细胞质和(或)细胞膜中。55例ESCC组织中有40例乙酰肝素酶基因mRNA表达阳性(40/55,72.7%),癌旁组织有19例表达阳性(19/55,34.5%),两组间差异有显著性(P<0.01)。免疫组化染色ESCC组织中乙酰肝素酶阳性率63.6%(35/55),癌旁组织阳性率21.8%(12/55),两组间差异有显著性(P<0.01)。乙酰肝素酶基因mRNA和蛋白质的检测均显示有淋巴结转移的癌组织乙酰肝素酶表达高于无淋巴结转移组,TNM分期Ⅲ~Ⅳa的癌组织表达高于Ⅰ~Ⅱ组,均有统计学意义。结论ESCC组织乙酰肝素酶基因及蛋白表达高于正常组织,并且与ESCC的转移和进展有密切关系。     

血卟啉衍生物对人食管鳞癌裸鼠移植瘤放射增敏的形态观察

我们用手术切除的人食管癌组织成功建立了人食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤株（ＨＥＣ２［１］），并证实血卟啉衍生物（ＨｅｍａｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎＯｅｒｉｖａｔｉｖｅＨＰＤ）对ＨＥＣ２的分次放射有增敏作用［２］。为了探讨ＨＰＤ对放射增敏作用的病理学基础，我们进...     

乙酰肝素酶与肿瘤转移

乙酰肝素酶是一种内源葡萄糖醛酸酶,与肿瘤转移密切相关,最近3家实验室独立地克隆出其基因,为研究肿瘤转移开辟了一个很有潜力的领域。随着有关乙酰肝素酶分子生物学特性、调节因素、抑制剂等方面研究的不断深入,乙酰肝素酶很可能成为抗癌药物的靶子。     

乙酰肝素酶与肿瘤转移研究进展

本文对乙酰肝素、乙酰肝素酶的结构、功能、基因定位、核苷酸序列及其对血管生成的影响，乙酰肝素酶在正常组织、肿瘤组织及转移癌组织中的表达和该酶参与肿瘤转移的机制等方面进行了详细综述。对用筛选乙酰肝素酶抑制剂的方法寻找抗肿瘤新药的最新进展及该领域研究取得的最新成果做了概述。旨在为肿瘤转移机制研究以及寻找治疗方法提供一些线索。     

Bcl-XL反义寡核苷酸对裸鼠人食管癌移植瘤抑制作用的研究

目的:探讨Bcl-XL反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠体内人食管癌移植瘤的抑制作用。方法:建立裸鼠体内人食管癌移植瘤动物模型,当移植瘤平均体积约为50mm3时,在裸鼠体内进行连续15d的Bcl-XLASODN治疗,观察人食管癌移植瘤的生长情况和组织形态学改变,应用RT-PCR和WesternBlot检测肿瘤组织中Bcl-XLmRNA和蛋白表达水平的改变以及凋亡的原位末端标记检测肿瘤的凋亡情况。结果:裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到明显抑制,治疗后,对照组、无关序列寡核苷酸(N-ODN)组和ASODN组的移植瘤体积分别为(1062.8±599.7)mm3、(853.0±327.9)mm3和(267.7±152.3)mm3,ASODN组与对照组及N-ODN组比较,具有显著性差异(P＜0.05)。同时,ASODN组的Bcl-XLmRNA及蛋白表达受到抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞显著增加(P＜0.05)。结论:Bcl-XLASODN可有效抑制裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长,为食管癌的基因治疗提供重要的理论依据。     

乙酰肝素酶与肿瘤转移研究进展

本文对乙酰肝素、乙酰肝素酶的结构、功能、基因定位、核苷酸序列及其对血管生成的影响,乙酰肝素酶在正常组织、肿瘤组织及转移癌组织中的表达和该酶参与肿瘤转移的机制等方面进行了详细综述.对用筛选乙酰肝素酶抑制剂的方法寻找抗肿瘤新药的最新进展及该领域研究取得的最新成果做了概述.旨在为肿瘤转移机制研究以及寻找治疗方法提供一些线索.     

乙酰肝素酶与肿瘤转移研究进展

乙酰肝素酶是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能切割细胞外基质中硫酸肝素蛋白多糖侧链的内源性糖苷酶。本文对乙酰肝素酶的结构、功能、分子特性、基因定位、核苷酸序列及其对血管生成的影响,在正常组织、肿瘤组织及转移癌组织中的表达和该酶参与肿瘤转移的机制等方面进行了综述。对用筛选乙酰肝素酶抑制剂的方法、寻找抗肿瘤新药的最新进展做了概述,旨在为肿瘤转移机制研究、寻找治疗方法提供一些线索。     

乙酰肝素酶--癌细胞浸润、转移的一个关键酶

癌症成为人类致命的疾病,不仅在于癌细胞的生长失去控制,更在于其具有转移能力,而转移癌细胞通常是真正的杀伤细胞.癌细胞的转移,即其进入血管以及再穿出血管进入其它组织,必须穿过细胞层以及环绕在细胞层外的稠密基质.细胞外基质和血管基底膜中含有大量硫酸类肝素,可以封阻癌细胞移动.乙酰肝素酶(heparanase, hpa)是一个关键胞外基质降解酶,它降解硫酸乙酰肝素和乙酰肝素蛋白聚糖上的聚糖侧链,在肿瘤浸润和转移中起重要作用.     

乙酰肝素酶在恶性肿瘤的表达调控研究进展

乙酰肝素酶（heparanase，HPSE-1）是哺乳动物细胞分泌的一种内切糖苷酶，在恶性肿瘤的进展过程中发挥着重要作用。作为促进肿瘤进展的重要分子，HPSE-1表达调控机制的明确就显得尤为重要。全文旨在从正向和反向调控两个角度，就HPSE-1在恶性肿瘤中的表达调控机制作一综述。     

沉默PCAF基因抑制人肾上腺皮质癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 探讨靶向沉默肾上腺皮质癌SW13细胞PCAF基因表达对裸鼠移植瘤生长以及血管生成的抑制作用及其机制。方法 pLenti6.3-MiRNA-PCAF重组慢病毒及pLenti6.3-MiRNA-NC重组慢病毒分别感染SW13细胞,将感染后的两组细胞及未处理的SW13细胞分别接种于15只裸鼠腋下,构建裸鼠移植瘤模型,分为实验组、阴性对照组、空白对照组,并观察各组肿瘤生长情况。Western blot、荧光定量PCR检测移植瘤组织PCAF蛋白、mRNA表达水平,HE染色法观察各组移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测VEGF表达及微血管密度。结果 实验组小鼠的肿瘤体积较阴性对照组和空白对照组显著缩小,肿瘤抑制率分别为49.2%和52.9%;PCAF蛋白相对表达水平较阴性对照组下降58.4%,mRNA相对表达水平较阴性对照组下降74.3%;实验组与阴性对照组和空白对照组相比,瘤内VEGF蛋白表达明显下调;实验组微血管密度（19.4±4.2）与阴性对照组（42.7±6.5）和空白对照组（51.3±8.6）相比明显下降。结论 慢病毒介导的pLenti6.3-MiRNAPCAF能有效抑制肾上腺皮质癌细胞裸鼠移植瘤的生长及血管生成。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的:5-杂氮-2′-脱氧胞苷是DNA甲基转移酶抑制剂,能使因甲基化而失活的抑癌基因重新激活,进而抑制肿瘤的生长。本文观察了5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其抗肿瘤效应及可能的机理,寻找鼻咽癌治疗的新靶点。方法:用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理人鼻咽癌细胞,观察其对细胞生长的抑制及死亡相关蛋白激酶基因(death-associated proteinkinase,DAPK)甲基化情况。建立人鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况,并用RT-PCR和免疫组织化学技术检测DAPK基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:未经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理的CNE细胞中DAPKmRNA不表达。经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理后,不同药物浓度组的细胞中均有DAPKmRNA表达,且表达随浓度增高而增强。5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长均有明显的抑制作用,且能使失活的DAPK基因重新激活。药物作用4周后,用药组裸鼠体重(22.35±2.02)g与对照组(21.68±2.14)g之间无显著性差异(t=0.011,P>0.05),用药组肿瘤的体积(195.32±27.57)mm3较对照组(343.67±23.08)mm3明显减小,两者之间有显著性差异(t=10.11,P﹤0.01)。在鼻咽癌移植瘤中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为其使因甲基化而失活的抑癌基因DAPK再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。     

肝素酶抑制剂对食管癌移植瘤中uPA VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨肝素酶抑制剂硫酸多糖体内对裸鼠食管癌移植瘤中与肝素酶作用相关uPA、VEGF蛋白表达的影响.方法:硫酸多糖分组处理人食管癌EC9706细胞后,进行裸鼠体内成瘤实验,采用免疫组化SP法检测裸鼠食管癌移植瘤中uPA、VEGF的蛋白表达.结果:4种不同浓度的肝素酶抑制剂硫酸多糖对裸鼠食管癌移植瘤中uPA、VEGF蛋白表达均有明显的抑制作用,实验组间两两相比,差异无统计学意义(P＞0.05);与不加硫酸多糖的对照组两两相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:硫酸多糖可抑制裸鼠食管癌移植瘤中uPA、VEGF蛋白表达,说明硫酸多糖对肿瘤浸润、转移有一定的抑制作用.     

大蒜素对胃癌细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用

 目的　观察大蒜素对胃癌细胞株及移植瘤的作用 ,初步探讨抗癌机制。方法　采用MTT法观察不同质量浓度及作用不同时间大蒜素对胃癌 SGC- 790 1及 MGC- 80 3细胞的影响 ;流式细胞术分析 1 0 0 mg&#8226; L-1大蒜素分别作用 4h和 8h后两种肿瘤细胞增殖周期的变化 ;荷胃癌SGC- 790 1裸鼠模型随机分成 4组 ,每组 4只 ,分别于荷瘤 7d和 1 4d用 2 0 g/L的大蒜素 0 .1 m L和PBS0 .1 m L对瘤体进行局部注射治疗 ,每隔 2 d一次 ,共 3次 ,观察瘤体增殖及裸鼠生存状况的变化。结果　不同质量浓度梯度大蒜素对两种肿瘤细胞皆有一定的杀伤 ,大蒜素质量浓度为 80 0 mg&#8226; L-1及 1 0 0 0 mg&#8226;L-1时 ,对 SGC- 790 1细胞的抑制率分别为 65.5% ,68.6% (P<0 .0 1 ,vs5- FU)。大蒜素对 MGC- 80 3细胞的抑制作用较明显 ,质量浓度为 40 0 mg&#8226;L-1,80 0 mg&#8226; L-1及 1 0 0 0 mg&#8226;L-1时 ,抑制率分别为 67.5% ,75.3%和 79.5% .     

依西美坦联合多烯紫衫醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤抑制作用的实验研究

目的：探讨第三代芳香化酶抑制剂依西美坦和多烯紫衫醇单独及联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其相应机制。方法：将处于对数生长期的人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞接种于裸鼠皮下, 建立裸鼠的移植瘤动物模型, 将荷瘤裸鼠随机分为4组, 每组5只, 依西美坦和多烯紫衫醇分别单独及联合处理裸鼠移植瘤模型3周, 对照组予以生理盐水3周,计算各组移植瘤体积、 抑瘤率及裸鼠体重情况, 肿瘤组织标本进行HE染色病理检查, 并用TUNEL法 （脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法） 检测细胞凋亡情况。结果： 依西美坦组、 多烯紫衫醇组的抑瘤率分别为25.59%和27.41%, 联合用药组的抑瘤率则为47.09%, 联合用药组与单独用药组及对照组比较差异均有统计学意义 （P<0.05）; TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为 （40.14±3.44） %, 明显高于单独用药组 ［依西美坦组 （30.92±2.95） %、 多烯紫衫醇组 （32.65±2.72） %］ 和对照组 （13.52±1.42） %, 差异有统计学意义 （P<0.05）。结论： 依西美坦、 多烯紫衫醇均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长, 两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著。     

人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤模型建立及其应用研究

将人食管癌手术标本直接移植于裸小鼠，建立了人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤（Eca910709），其光镜和电镜形态与原发瘤相似。移植瘤中检测到人Alu序列，证明其来源于人体。应用Eca910709，用平阳霉素（BLMA5）对其进行治疗，按15mg／kg腹腔注射给药，经重复实验，抑瘤率为58％-70％（P＜0．01），说明BLMA5对Eca910709有明显的抑瘤作用。经三个疗程治疗，Eca910709即对BLMA5产生耐药，表现在抑瘤从70％（P＜0．01）递减为34％（P＜0．05）和6％（P＞0.05）。给药剂量增加至30mg/kg，BLMA5对已耐药的Eca910709再次显示一定的抑瘤作用（抑瘤率为44％，P＜0．01）。     

TL对人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用及抑制血管生成的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对人胰腺癌细胞SW1990移植瘤的生长及新生血管生成的抑制作用。方法：通过人胰腺癌裸鼠皮下移植实验，观察不同剂量TL对移植瘤生长抑制作用；应用免疫组化和RT-PCR研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化，计算肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果：各实验组（TL0．125、0．25和0．5mg·^-1kg·day^-1）抑瘤率分别达到66．16％、78．14％和89．92％，与对照组相比，肿瘤生长明显受抑，并具有剂量和时间依赖性。对照组和各实验纽瘤组织MVD分别为36．25±8．64、22．75±6．67、17．65±7．11和9．87±3．34（P〈0．01）；TL抑制移植瘤VEGF基因和蛋白表达．且VEGF基因下调与MVD的减少具有相关性（r=0．7424，P〈0．01）．结论：TL具有显著的抗胰腺癌移植瘤作用．其机制可能与抑制肿瘤新生血管生成有关。     

shRNA 介导Ku80 基因沉默对食管癌细胞及 裸鼠移植瘤生长的抑制作用

 目的　利用shRNA 抑制Ku80 蛋白表达来研究Ku80 对食管癌细胞和裸鼠移植瘤生长的影响。 方法　采用RNA 干扰技术,构建shRNA2Ku80 载体。用Western blot 和RT2PCR 方法证实RNA 干扰 的有效性和可行性。用MTT 法、克隆形成实验和体内抑瘤实验来研究shRNA 抑制Ku80 表达对食管 癌细胞和裸鼠移植瘤生长的影响。用流式分析法来研究shRNA 抑制Ku80 表达对细胞周期和凋亡的 影响。结果　成功构建了shRNA2Ku80 载体。shRNA 抑制Ku80 表达在体内外抑制食管癌细胞的生 长。shRNA 抑制Ku80 表达使细胞周期阻滞于G2 / M 期,促进射线引起的凋亡。结论　Ku80 在食管癌 的发生、发展中起作用,shRNA 抑制Ku80 表达有望成为肿瘤基因治疗的靶点。     

沉默STAT3基因对人食管癌EC1细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建STAT3靶向短发夹RNA（shRNA）质粒,研究其对人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性。方法构建STAT3的siRNA真核表达载体pSUPER-EGFP-STAT3,稳定表达该质粒的细胞为实验组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测STAT3mRNA和蛋白变化。结果裸鼠体内实验显示,实验组肿瘤增长受到明显抑制;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明实验组STAT3mRNA和蛋白表达下调。结论shRNA沉默STAT3基因能抑制人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调STAT3mRNA和蛋白的表达,为食管癌的基因治疗提供了新的靶点,开辟了新的思路。     

COX-2选择性抑制剂塞来昔布对裸鼠荷人子宫内膜腺癌的抑制作用

 目的 探讨环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌的治疗作用及其机制。 方法 建立人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞裸鼠荷瘤模型,待成瘤后随机分为对照组与实验组,对照组予生理盐水口服2周,实验组分别予塞来昔布4mg/d和2mg/d口服2周。从治疗开始每3天计算瘤体积一次,描绘肿瘤生长曲线,治疗结束后处死裸鼠剥除瘤组织,计算抑瘤率,采用RT-PCR法测定移植瘤组织COX-2 mRNA的表达、免疫组化法测定COX-2蛋白的表达和微血管密度（MVD）。 结果 塞来昔布对裸鼠皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,且随着药物浓度的增加,抑瘤作用逐渐增强（抑瘤率分别为 32.4％和48.6％）,RT-PCR结果显示移植瘤组织COX-2 mRNA的表达逐渐减弱,免疫组化结果显示移植瘤组织 COX 2蛋白的表达及微血管密度（MVD）逐渐减少,实验组与对照组之间及各实验组之间的差异均有统计学意义（P <0.05）,COX-2蛋白的表达与MVD数量呈正相关（r系数为0.921,P<0.01）。 结论 COX-2选择性抑制剂塞来昔布能够抑制裸鼠荷人子 宫内膜腺癌的生长,其机制可能与降低COX 2的表达、减少微血管的生成有关。