软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的 通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆（VD）的机制.方法 采用TUNEL法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率.结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧引起的PC12细胞的凋亡率,使Bcl-2蛋白的表达率明显增加,同时使Bax蛋白表达率明显降低.结论 软脉胶囊对VD具有治疗作用.     

醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞缺氧损伤的影响.方法采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,用Na2,S2O4产生缺氧损伤,观察PC12细胞形态学、m法细胞活力、乳酸脱氢酶LDH活性的变化.结果醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞的形态改变具有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性.结论醒脑启智胶囊药物血清能明显减轻PC12细胞的缺氧损伤,并呈现一定的剂量依赖关系.     

黑逍遥散含药血清对Aβ_(25～35)诱导阿尔茨海默病细胞模型的影响

目的观察黑逍遥散含药血清对由Aβ25~35片段毒性诱导的PC12细胞阿尔茨海默病(AD)模型凋亡的影响。方法利用细胞计数、MTT及流式细胞术测定观察黑逍遥散含药血清处理由Aβ片段诱导的PC12细胞活力、形态学及细胞凋亡的改变。结果黑逍遥散含药血清能增加Aβ25~35导致的升高PC12细胞的活力,降低LDH释放,流式细胞术分析显示,黑逍遥散含药血清能降低增加细胞凋亡率。结论黑逍遥散含药血清能升高PC12细胞的活力,降低LDH释放,对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。     

清心开窍方含药脑脊液对氯化钾所致PC12细胞损伤的保护机制

目的从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对氯化钾损伤的PC12细胞的保护作用。方法 SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g/kg),2次/d,连续3.5 d,制备清心开窍方含药脑脊液。采用PC12细胞和终浓度800 mmol/L的氨化钾共培养,造成神经细胞损伤模型。RTPCR方法检测Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平,四甲基原氮唑盐(MTT)法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响。结果清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方对氯化钾损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

丁苯酞诱导缺氧条件下NDUFA4L2蛋白的高表达并参与脑保护的机制

目的探索NDUFA4L2蛋白在缺氧环境下大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)中的表达及其与丁苯酞介导的脑保护作用机制的关系。方法以PC12细胞为载体,制作PC12细胞缺氧模型,观察不同缺氧时间段(0、6、12、18、24、48 h) PC12细胞形态变化,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)半定量分析不同缺氧时间段及不同浓度丁苯酞预处理后PC12细胞中NDUFA4L2蛋白的表达情况。结果 PC12细胞缺氧损伤、外形变化严重程度与缺氧时间有关; NDUFA4L2蛋白在PC12细胞缺氧24 h内Western blot定量检测呈高表达趋势,高表达程度与缺氧时间无相关性;丁苯酞预处理后,NDUFA4L2蛋白表达水平均较未预处理组显著增高,差异有统计学意义(P0. 05)。结论 NDUFA4L2蛋白在缺氧24 h内可能对PC12细胞损伤有保护作用;丁苯酞可能通过诱导NDUFA4L2蛋白表达起到脑保护作用。     

甘草苷对一氧化氮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的应用NO诱导PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨甘草苷对PC12细胞损伤的保护作用。方法甘草苷各剂量的PC12细胞用SNAP诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI检测PC12细胞凋亡率。结果与模型组相比,甘草苷可以使PC12细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞凋亡率。结论甘草苷对NO诱导的PC12细胞凋亡有明显保护作用。     

醒脑启智胶囊药物血清对缺氧诱导的PC12细胞凋亡及凋亡基因的影响

目的 探讨醒脑启智（XNQZ）胶囊药物血清对缺氧诱导的PCI2细胞凋亡及其相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法 采用血清药理学方法，体外培养PCI2细胞，以药物血清孵化后用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）缺氧诱导，观察PCI2细胞凋亡及bcl-2、bax表达的变化。结果 缺氧诱导后，PC12细胞的bax蛋白表达上调，使细胞凋亡趋势增强。XNQZ药物血清可使bcl-2基因表达量增加，bax基因表达量降低，细胞凋亡率下降。结论 XNQZ可通过调节bcl-2、bax表达，抑制细胞凋亡，提高细胞抗损伤和修复能力，以达到对抗神经元迟发性死亡，抑制智力减退的作用，并呈现一定的剂量依赖关系。     

复方益智散对PC12细胞增殖和抗凋亡作用

目的观察复方益智散对体外培养PC12细胞增殖和抗活性氧(reactive oxygen species,ROS)氧化损伤作用。方法SD大鼠60只,随机分为对照组、复方益智散大、中、小剂量组和复方丹参片组,每组12只。通过血清药理学方法制备含药血清,以过氧化氢(H2O2)作为ROS,应用四氮唑蓝比色法、流式细胞术法和DNA凝胶电泳法观察复方益智散对正常生长PC12细胞的增殖和抗ROS凋亡损伤作用。结果复方益智散中剂量和高剂量组能显著提高正常生长PC12细胞的存活数(P<0.01);各剂量组均能有效对抗100μmol/L H2O2引起的细胞存活率下降和细胞凋亡率升高(P<0.01),减轻DNA片断化现象,复方益智散的抗凋亡效果好于复方丹参片。结论复方益智散具有良好的神经营养和神经保护作用,其机制可能与提高细胞的清除ROS能力和抗氧化酶活力有关。     

胰岛素抵抗通过增强氧化应激加重PC12细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的探究IR对PC12细胞缺氧/复氧损伤的影响,及抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对IR PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法采用100nmol/L胰岛素诱导PC12细胞产生IR,Na_2S_2O_4建立PC12细胞缺氧/复氧模型,CCK-8法检测细胞活力,葡萄糖氧化酶法检测培养液上清中葡萄糖含量并计算葡萄糖消耗量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,流式细胞术分别检测细胞凋亡和线粒体膜电位。结果高胰岛素可在不影响PC12细胞活力的情况下抑制胰岛素诱导的葡萄糖摄取(P0.05);在IR PC12细胞中,SOD活性较低,MDA水平较高(P0.05);IR可加重缺氧/复氧诱导的PC12细胞凋亡和线粒体膜电位去极化(P0.05);NAC可抵消IR诱导的上述作用(P0.05)。结论 IR可通过增强氧化应激加重PC12细胞缺氧/复氧损伤,而NAC可通过抑制氧化应激和稳定线粒体膜电位,减轻IR PC12细胞缺氧/复氧损伤。     

氧应激对线粒体呼吸链的影响及益心康的作用

目的　研究氧应激及益心康胶囊含药血清对大鼠心肌线粒体结构和功能的影响。方法　利用 Fe2 + /抗坏血酸损伤体系在体外攻击线粒体模型 ,观察对线粒体脂质过氧化、呼吸链细胞色素含量及复合物 活性的影响。结果　氧应激损伤可致线粒体脂质过氧化 ,呼吸链细胞色素明显丢失 ,复合物 活性降低。益心康和复方丹参片含药血清可使线粒体脂质过氧化程度减低 ,细胞色素含量增加 ,复合物 活性增加。结论　益心康含药血清具有保护氧应激状态下大鼠心肌线粒体结构和功能的作用     

软脉降脂胶囊对实验性高脂血症大鼠血脂及MDA、SOD、NO的影响

目的观察软脉降脂胶囊对食饵性高脂血症大鼠血脂及血清一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响.方法以高脂饲料喂饲大鼠建立高脂血症大鼠模型,随机分为空白组、模型组、软脉降脂胶囊组(A组)、洛伐他汀对照组(B组)、血脂康对照组(C组).空白组、模型组灌生理盐水,其他各组分别灌药,观察用药前后血脂、MDA、SOD、NO的变化.结果用药12周后,各灌药组的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)较模型组均明显降低(P＜0.05),A组降TG作用优于B组、C组(P＜0.05);并且A组有升高高密度脂蛋白(HDL)、降低MDA水平、提高SOD活力的作用,优于B组、C组(P＜0.05).结论软脉降脂胶囊能够调整脂质代谢、抗脂质过氧化、升高NO水平,从而保护血管内皮,抗动脉粥样硬化.     

环维黄杨星D对PC12谷氨酸损伤的保护作用的实验研究

目的:探讨环维黄杨星D(CBV-D)对PC12细胞谷氨酸(Glu)损伤模型的影响.方法:用Glu复制PC12细胞兴奋性氨基酸损伤模型,通过MTT染色和乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定来研究CBV-D对PC12细胞的保护作用.结果:CBV-D抑制Glu造成的损伤,降低LDH的漏出.结论:CBV-D对兴奋性氨基酸引起PC12细胞损伤具有保护作用.     

益心康含药血清对氧应激致大鼠心肌线粒体呼吸链酶损伤的保护作用

目的研究氧应激对大鼠心肌线粒体呼吸链酶活性的影响及中药复方益心康胶囊(H303)含药血清对损伤的保护作用。方法 利用氧应激损伤体系(Fe2+/VitC)与大鼠心肌线粒体共同孵育30min,观察对线粒体呼吸链酶-琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)的影响。结果 大鼠心肌线粒体氧应激后,可致SDH及CCO活性明显降低。H303含药血清可使损伤明显减轻,表现为明显增强上述两种酶的活性。结论 H303含药血清对氧应激造成的线粒体呼吸链关键酶活性的降低具有保护作用。     

软脂酸对EA.hy926细胞一氧化氮合成的影响及六味地黄丸的干预效应

目的研究软脂酸(PA)对EA.hy926内皮细胞一氧化氮(NO)合成和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达的影响及六味地黄丸(LWDHP)含药血清的干预作用。方法将培养的EA.hy926细胞分组,采用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(NAPDH)依赖性硝酸盐还原酶法测定细胞裂解上清液NO含量;RT-PCR及Western印迹检测细胞内eNOS mRNA和蛋白的表达。结果 PA损伤的细胞裂解液中NO含量减少,与正常对照组比较差异显著(P<0.01)。2.5%LWDHP含药血清组NO含量进一步减少,5%、10%LWDHP含药血清组及二甲双胍(MET)组均能显著增加细胞裂解液中NO含量,与PA组比较有差异显著(P<0.01),但三者之间互相比较无显著性差异(P>0.05)。同时PA组细胞内eNOS mRNA和蛋白的表达显著减少(P<0.01),LWDHP和MET组细胞内eNOS mRNA和蛋白表达量增加(P<0.01)。结论 LWDHP含药血清能够刺激PA损伤的EA.hy926细胞eNOS mRNA和蛋白的表达,从而有效促进NO的合成,发挥其保护作用。     

银丹心脑通胶囊对缺氧复氧心肌细胞损伤的抗氧化作用

目的 评价银丹心脑通胶囊对心肌细胞的抗氧化保护作用.方法 对培养的乳鼠心肌细胞造成缺氧/复氧损伤模型,比较正常对照组、缺氧/复氧损伤组、银丹心脑通各组培养液中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和一氧化氮(NO)含量.结果 缺氧/复氧损伤模型组CAT和GSH-Px活性较正常对照组明显降低(P<0.01),NO含量显著升高(P<0.01);而银丹心脑通中、高剂量组CAT、GSH-Px较缺氧/复氧损伤模型组明显升高(P<0.05或P<0.01).结论 银丹心脑通对缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制与增强细胞抗氧化作用,减轻自由基和脂质过氟化物导致的细胞膜损伤有关.     

自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧过程中的表达及其意义

目的 探讨自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧(OGD)过程中的表达及其意义.方法 将PC12 细胞分为正常对照组、缺糖缺氧1、4和12 h组.MTT法检测细胞存活率,Western印迹法检测各组PC12细胞中BECN1、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 与正常对照组相比,OGD 1及4 h组PC12细胞存活率下降(均P<0.05),BECN1蛋白表达升高,且Bcl-2/Bax比值升高;而与缺糖缺氧1和4 h组相比,OGD 12 h组细胞存活率明显下降(P<0.01),BECN1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值亦明显降低.结论 自噬蛋白BECN1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax参与了PC12细胞OGD损伤过程.在OGD早期,自噬起主要作用,并对OGD PC12细胞起一定的保护作用,随着OGD时间的延长,凋亡在其中占主导地位,促进凋亡蛋白表达,引起PC12细胞的死亡.     

亚硒酸钠预处理对Aβ损伤PC12细胞的保护性作用

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ)对PC12细胞的氧化损伤以及亚硒酸钠的保护作用。方法将PC12细胞分为正常对照组、亚硒酸钠预处理组、亚硒酸钠预处理后损伤组、损伤组,观察细胞形态、用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡,测定各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果 Aβ抑制PC12细胞的分裂增殖,经过Aβ作用24 h的PC12细胞,其GSH-Px活性下降,MDA含量升高;一定浓度亚硒酸钠预处理可有效地减轻Aβ引起的PC12细胞损伤,与Aβ损伤组相比亚硒酸钠预处理后Aβ损伤组的细胞存活率增加、凋亡下降、GSH-Px活性增高、LDH漏出率、MDA含量下降。结论亚硒酸钠对Aβ引起的PC12细胞氧化损伤具有明显的保护作用。     

胰岛素对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究胰岛素对谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型的保护作用。方法 PC12细胞培养，建立谷氨酸诱导损伤的细胞模型，采用MTT法和二乙酸荧光素染色法(fluorescein diacetate，FDA)检测细胞活力，Hoechst 33258 DNA染色法和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡。结果 谷氨酸可以诱导PC12细胞凋亡，50、100、200 mU／L胰岛素抗细胞凋亡作用不明显，400mU／L可以明显抑制PC12细胞凋亡。结论 胰岛素具有一定的神经保护、抗凋亡作用。     

玉竹单体化合物对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的观察从中药玉竹中提取的单体化合物4’,5,7-三羟基-6-甲基-8-甲氧基-高异黄酮(以下简称高异黄酮)和N-反式阿魏酸酪酰胺(以下简称阿魏酸酪酰胺)对PC12神经细胞氧化损伤的保护作用。方法将化合物预处理PC12细胞24 h后,分别应用H2O2和Na2S2O4造成细胞氧自由基损伤和缺氧损伤,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察各组细胞的存活率。结果高异黄酮浓度为1×10-4和2×10-5mol/L时,阿魏酸酪酰胺浓度为1×10-4、2×10-5、4×10-6和8×10-7mol/L时对PC12细胞氧自由基损伤具有明显保护作用,细胞存活率较模型组明显升高(P<0.01或<0.05);高异黄酮浓度为1×10-4mol/L时,阿魏酸酪酰胺浓度为1×10-4、2×10-5mol/L时对PC12细胞缺氧损伤具有较好的保护作用,细胞存活率与模型组比较有统计学差异(P均<0.05)。结论玉竹单体化合物高异黄酮和阿魏酸酪酰胺对PC12神经细胞氧化损伤具有较好的保护作用。     

大黄酚对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤分化株细胞缺氧损伤的保护作用

目的观察大黄酚对缺氧引起的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤分化株（PC12）细胞损伤的保护作用。方法培养PC12细胞,采用自制的密闭三气培养箱建立缺氧所致的PC12细胞损伤模型,根据不同条件,分为对照组、模型组、大黄酚组（包括1μg/ml组和5μg/ml组）。于缺氧处理前及处理后1、2、6、12、24h,每个时间点取6个复孔。采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测PC12细胞增殖活性,高倍显微镜下观察PC12细胞核形态,测定各组上清液中超氧化物歧化酶（SOD）含量,免疫组化法测定各组线虫抗凋亡基因的人类同源基因表达蛋白（BCL-2）的表达,实时定量PCR测定p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和含半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）mRNA的表达。结果①缺氧处理后12 h,MTT法测定大黄酚1μg/ml组的细胞活力高于模型组;缺氧处理24 h,大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组的细胞活力均高于模型组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。②从缺氧处理后1 h开始,大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组的SOD值高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）。③从缺氧后2 h开始,大黄酚1μg/ml组和5μg/ml的BCL-2阳性率均高于模型组。④从缺氧处理2h开始,模型组p38MAPK mRNA表达量高于大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组,差异有统计学意义（P〈0.05）。从缺氧处理6 h开始,模型组Caspase-3mRNA表达量高于大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组,差异有统计学意义（P〈0.05）。⑤缺氧处理后12、24 h,模型组细胞的细胞核皱缩、形态不清,内见颗粒样物质形成增多;大黄酚组的细胞核形态较清楚,少见颗粒样物质形成。结论大黄酚可以减轻缺氧所致PC12细胞的损伤,对PC12细胞有保护作用。