反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中熊去氧胆酸的方法学研究

目的建立测定熊去氧胆酸血药浓度的方法。方法采用高效液相色谱法联合固相萃取及衍生化法测定血浆中熊去氧胆酸含量,以胆酸为内标物,血浆样品和内标物利用C18固相萃取小柱富集,以2’-溴代-2’-萘乙酮和N,N-二异丙基乙胺为衍生化试剂,衍生化产物利用高效液相色谱法测定。结果熊去氧胆酸在2~60nmol/ml范围内线性关系良好,r=0.999 0。结论本方法准确可靠,灵敏度高,重复性好,可用于血浆中测定熊去氧胆酸的浓度。     

猪肉及其可食性组织中残留克伦特罗的GC/MS检测方法

目的 :建立猪肉及其可食性器官中克伦特罗的检测方法。方法 :肌肉或组织匀浆后经有机溶剂提取 ,提取液经碳 1 8小柱除去杂质 ,洗脱液在氮气下吹干后用MSTFA衍生化 ,衍生化液直接供GC/MS检测。结论 :利用此方法可以检测猪肉及其可食性器官中的克伦特罗 ,其检测限为 1ng/g。     

衍生化LC-MS/MS测定大鼠血浆中新型抗流感药物帕拉米韦及其在药代动力学研究中的应用

目的：建立灵敏、可靠的衍生化LC-MS/MS新方法测定大鼠血浆中帕拉米韦的浓度。方法：血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用盐酸（10mol/L）-甲醇（10：90,体积比）为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用LC-MS/MS。通过电喷雾电离源以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z343→284（帕拉米韦衍生物）和m/z299→152（内标Ro64-0802衍生物）。色谱分离采用ZorbaxRX-C8柱（2.1mm×150mm,5μm）,以乙腈-水-甲酸（30：70：0.1,体积比,0.2ml/min）为流动相。结果：测定帕拉米韦的线性范围为10～10000ng/ml,相关系数r2为0.9940,定量下限为10ng/ml,批内和批间RSD%分别在5.0%和7.1%以内,准确度控制在89.9%～106.1%。结论：本方法通过衍生化反应,使帕拉米韦保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高。该方法成功应用于帕拉米韦非临床和临床研究中。     

衍生化液质联用法测定大鼠血浆中丹皮酚的浓度

目的 建立灵敏、可靠的衍生化液质联用法测定大鼠血浆中丹皮酚的浓度.方法 血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用对甲苯磺酰肼为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用液质联用法.通过电喷雾电离源以选择离子监测方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 335(丹皮酚衍生物)和m/z 479(内标孕二烯酮衍生物).色谱分离采用...     

阴离子交换固相萃取GC-MS/MS方法检测鱼肉制品中的河豚毒素

目的建立高灵敏度的检测鱼肉制品中河豚毒素的阴离子交换固相萃取（SPE）气相色谱-串联质谱法。方法采用直接碱解的样品处理方法,将鱼肉制品中的河豚毒素转化为C9碱,经阴离子交换（SAX）固相萃取柱净化、双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）硅烷化衍生后,在气相色谱-串联质谱仪上以选择反应监测（SRM）模式进行检测。结果与结论在最优分析条件下,染毒的鱼肉样品中河豚毒素的线性范围为10～1000μg/kg,检测限为8μg/kg。该方法专属性强、灵敏度高,操作相对简便。     

液相色谱串联质谱法分析马尿中司坦唑醇代谢产物

目的:分析司坦唑醇在马尿中的主要代谢产物,并描述其主要代谢产物的浓度随时间变化曲线,为马尿中检测司坦唑醇提供参考。方法:收集服药前和单次口服司坦唑醇片剂后的马尿样本,经酶解和液液萃取后进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测,分析司坦唑醇在马尿中的代谢产物。结果:对服用司坦唑醇后的马尿进行分析,检出了药物原型和5种代谢产物;建立了司坦唑醇的4种代谢产物的浓度随时间变化曲线。结论:本实验对服用司坦唑醇马尿的代谢产物进行分析,但由于药物浓度低和杂质问题的影响,使得代谢产物的分析不够完善;4种代谢产物浓度随时间变化曲线对于马尿中检测司坦唑醇的代谢物的选择、检测窗口期具有一定的参考价值。     

基于串联杂合泛素结合结构域探针的多聚泛素化信号免疫组织化学检测技术研究

目的 提高串联杂合泛素结合结构域（ThUBD）探针检测甲醛固定石蜡包埋（FFPE）切片中多聚泛素化信号的灵敏度。方法 利用微波炉加热方法,采用不同盐离子种类和pH缓冲液进行抗原修复,在有无高浓度还原剂条件下,用ThUBD探针检测FFPE切片中的多聚泛素化信号。结果 在pH 9.5 EDTA缓冲液条件下,加入50 mmol/L DTT可检测到FFPE切片中明显的多聚泛素化信号。结论 pH 9.5 EDTA缓冲液中加50 mmol/L DTT有利于多聚泛素链的暴露与复原,显著提升ThUBD探针用于免疫组织化学检测的灵敏度。     

气相色谱-质谱法同时分析运动营养品中的大麻酚、大麻二酚和Δ9-四氢大麻酚

目的:建立气相色谱-质谱法同时分析运动营养品中大麻酚、大麻二酚和Δ9-四氢大麻酚的检测方法。方法:样品采用液液萃取,提取液经过正相固相萃取柱(Silica)纯化,洗脱液氮气吹干,N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺衍生化后,采用HP-1MS柱(17 m×0.2 mm i.d.×0.11 mm)色谱分离,程序升温,质谱检测,D3-Δ9-四氢大麻酚为内标。结果:大麻酚、大麻二酚和Δ9-四氢大麻酚的衍生化产物实现基线分离,三个定性特征离子的峰度比计算结果可以满足世界反兴奋剂机构(WADA)要求。该方法的检测限为1μg/kg,定量限为2μg/kg,在添加的高、中、低三种浓度的相对回收率分布在94%~119%之间。结论:该方法满足常规检测要求,样品前处理简单、快速、可靠。     

多种食源性致病菌的基因芯片检测技术

目的探讨随机PCR结合基因芯片技术用于多种食源性致病菌筛查检测的可行性。方法利用Clustal X和Oligo 6.0软件设计探针,进行生物信息学比对验证特异性,探针末端修饰后合成并制备基因芯片。使用锚定随机引物扩增细菌基因组DNA,偶联荧光染料的扩增产物与芯片杂交后扫描检测。对随机PCR及杂交反应等一系列检测条件进行优化。选取16种病原细菌进行芯片特异性验证,使用4种食源性致病菌DNA进行芯片灵敏度检测及重复性评价,制备细菌DNA混合样本和痢疾志贺菌模拟水污染样本对芯片检测效能进行初步考核。结果 9种食源性致病菌获得阳性结果,基因组DNA检测灵敏度102～103pg/μl,芯片重复性变异系数(CV)值<15%,混合样本检测与预期结果一致,最低可检测水样本中痢疾志贺菌的最低浓度为3.54×105cfu/ml。结论初步建立的基于随机引物PCR的基因芯片技术进行多种食源性致病菌检测的方法,为病原细菌高通量筛查检测提供了一种新的思路。     

固相萃取-气相色谱-串联质谱法检测粮食作物中的T-2与HT-2毒素

目的建立粮食作物中T-2与HT-2毒素的高灵敏度气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。方法染毒的粮食样品以柱淋洗方式用甲醇提取后,采用C18固相萃取柱净化富集,再经七氟丁酰咪唑衍生化后,在气相色谱-串联质谱仪上采用选择反应监测(SRM)模式进行检测。结果在染毒大米、小米、糯米和玉米样品中,T-2与HT-2毒素在0.5～100μg/kg范围内均呈现良好的线性关系。在最优分析条件下,两种毒素的最低检出限均在0.05～0.5μg/kg。在2、30、60μg/kg 3个加标浓度下,T-2与HT-2毒素的方法回收率均在47.2%～110.8%。结论该方法操作简便,灵敏度高,适用于各类粮食样品中T-2与HT-2毒素的检测。     

用液相色谱-串联质谱技术研究禁用物质氢氯噻嗪在人尿中的代谢情况

目的:使用液相色谱-串联质谱法研究口服利尿剂氢氯噻嗪(Hydrochlorothiazide)后,尿样中药物原形、其代谢物氯噻嗪(Chlorothiazide)和降解产物4-氨基-6-氯-1,3苯二磺酰氯(4-Amino-6-chlorobenzene-1,3-disulphonamide)的代谢规律和检测窗口期。方法:选取男女各1名年龄为26岁和27岁的健康志愿者,进行氢氯噻嗪人体受试实验,收集服药前的空白尿和服药后3天内的所有尿样,以及之后14天的晨尿。尿样经同等体积的5%醋酸铅水溶液沉淀蛋白质后,上清液用多反应离子监测模式(MRM)直接进行检测。结果:氢氯噻嗪、氯噻嗪和4-氨基-6-氯-1,3苯二磺酰氯的检测限分别为2.5、1和5 ng/ml;定量限分别为10、3和15 ng/ml;3种药物在低、中和高3个浓度的日内和日间精密度均小于10%;准确度均介于88%至110%之间;平均基质效应在75%~120%范围内。对受试者的尿样进行分析后,发现氢氯噻嗪原形的检测窗口期为7天,代谢物氯噻嗪的检测窗口期为3天,降解产物ACB的检出时间为13天。结论:该检测方法对氢氯噻嗪原形、其代谢物氯噻嗪和降解产物ACB具有前处理简单、灵敏度高、准确可靠和重现性好等特点。与之前的文献相比,3种禁用物质的检测窗口期都有不同程度的延长。     

实时荧光定量PCR法检测炭疽杆菌

为建立一种简便而特异的炭疽杆菌检测方法用作临床诊断工具，以nXO1持粒上的pag基因及pXO2质粒上的cap基因为靶合成特异引物，用DNA嵌入荧光染料SYBR Green I进行定量PCR扩增，在PCR后进行熔融曲线分析以确定得到的产物是否为目的产物，定量PCR条件优化结果为：引物浓度0．8umol/L,Mg^2 5.0mmol/L。该法检测炭疽的灵敏度达10^3拷贝，并能区分炭疽杆菌与其他蜡样杆菌，表明实时荧光定量PCR技术能够快速准确，特异地对炭疽进行定量分析。     

高效液相色谱法测定复方庆大霉素合剂中4种主要成分

目的：建立测定复方庆大霉素合剂中盐酸普鲁卡因、盐酸麻黄碱、对羟基苯甲酸乙酯和硫酸庆大霉素的高效液相色谱法。方法：前３ 种药物用反相色谱－ 波长和灵敏度切换法同时测定，硫酸庆大霉素用柱前衍生化色谱法测定。结果：质控结果显示药物浓度与峰高响应值线性关系良好，相关系数分别０－９９９５，０－９９７８，０－９９６６ 和０－９９９２；４ 种药物的加样回收率分别平均为９５－５±５－６％ ，９６－２±４－５％ ，９６－０±４－７％ ，９２－５±６－２％ ；日内ＲＳＤ 均＜ ６－０ ％ （ ｎ ＝５），连续测定５ｄ 的日间ＲＳＤ ＜ ７－２ ％（ ｎ ＝５），精密度和重现性良好。结论：该法适于作为药检室检测该合剂的方法     

基于多重PCR的呼吸道病毒纳米孔测序快速检测的方法学研究

目的 通过对多重PCR扩增条件的优化和纳米孔测序中病原微生物检测特异性及灵敏度的评价,建立一种由多重PCR和纳米孔测序技术相结合的检测技术体系,满足对呼吸道病毒现场快速检测鉴定的需求。方法 首先针对呼吸道病毒设计特异性引物,其次优化PCR扩增条件,建立快速测序体系,最后对不同浓度的病原体进行扩增与测序鉴定,评价检测体系的灵敏度。结果 优化后的多重PCR检测体系在退火温度为55℃、引物添加浓度为0.1μmol/L时,可同时检出25种呼吸道病毒,检测灵敏度可达1×10⁴拷贝/ml,整体检测时间在4 h以内。结论 该方法简单快捷,能够实时获取扩增片段的序列信息,特异性强,灵敏度较高,有望为呼吸道病原体的快速筛选和现场检测鉴定提供有力技术支撑。     

测定人尿液样品中微量沙林和梭曼降解产物的核磁共振 …

目的：测定人尿液样品中微量沙林和梭曼降解产物。方法：＾１Ｈ－ＮＭＲ和＾１９Ｆ－ＮＭＲ。结果和结论：创新建立了选择性双重自旋回波＾１Ｈ－ＮＭＲ和定量氟离子＾１９Ｆ－ＮＭＲ技术，并且利用它们互相补充选择性检测有关毒剂降解产物中烷基甲膦酸的特征甲基质子、氟离子及其含量。本方法具有简便、快速、灵敏等特点，尿液样品分析不需要分离、提取和衍生化，毒剂无损失。通过ＦＩＤ信号累加测定，烷基甲膦酸和氟离子的检测限可     

艾滋病病毒抗体和梅毒螺旋体抗体快速诊断试剂临床应用评价

目的　对目前常用的快速诊断试剂卡 (DIGFA)检测梅毒螺旋体抗体 (抗 TP)和艾滋病病毒抗体 (抗 HIV1/2 )的技术参数进行评估。方法　对多份质控血清和 5 863份患者血清或血浆分别采用三个厂家的DIGFA试卡和酶免疫法 (EIA)进行检测 ,以EIA技术检测结果为参照对DIGFA检测试卡的灵敏度、特异性、检测效能和物理性能等参数进行评价。结果　多份质控血清抗 TP和抗 HIV1/2DIGFA试卡检测特异性均为 10 0 % ;抗 TP、抗 HIVI1/2DIGFA试卡检测的灵敏度分别为 80 .0 0 %和 93 .3 3 % ;检测效率分别为 88.44 %和 96.97%。 5 863份患者血清 (血浆 )的抗 TP和抗 HIV1/2DIGFA试卡检测特异性分别为 99.86%和 99.76% ;灵敏度分别为 5 0 .94%和 77.78% ;检测效率分别为99.42 %和 99.69%。结论　DIGFA试卡检测灵敏度比较低 ,花费成本较大。该技术适合急诊病人的初步筛选 ,不适合献血员筛选试验。如果应用到街头 (采血车 )献血员快速筛选 ,必须和EIA技术联合应用。     

7种立克次体甄别检测基因芯片方法的建立

目的：建立一种能同时检测7种立克次体的化学发光基因芯片法。方法根据NCBI公开发表的7种立克次体的序列设计引物和探针,制备立克次体甄别检测基因芯片。利用多重不对称PCR法扩增立克次体靶基因片段,标记的产物与基因芯片上的探针杂交,经清洗、化学发光显色后进行结果分析。在优化的多重PCR体系、杂交反应和化学发光检测条件下,评价芯片的特异性、灵敏度、重复性。用实时荧光PCR法与芯片法分别检测莫氏立克次体梯度稀释的核酸,比较两种方法的灵敏度。制备双盲模拟样本,进一步评价芯片方法的准确性。结果该研究共筛选出1对通用引物、4对特异性引物和1条立克次体属通用探针、9条特异性检测探针。该芯片检测质粒DNA的灵敏度为1．5×102～3×103拷贝／反应,检测模拟样本的灵敏度为103～104拷贝／μl。实时荧光PCR法与芯片法检测结果一致,实时荧光PCR法比芯片法灵敏度高10倍。双盲模拟样本检测符合率为100％。结论成功建立了可同时检测7种立克次体的化学发光基因芯片检测方法,为立克次体病的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的高通量检测手段。     

HPLC-MS法检测大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及一种羟基代谢产物

目的应用HPLC-MS技术,建立高灵敏度的大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及其一种羟基化代谢产物的分析方法。方法以XDB-C18色谱柱（4.6 mm×50 mm,1.8μm）分离,以5 mmol·L-1的乙酸铵水溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱,以玉米赤霉酮为内标,在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。结果 T-2毒素、3＇-OH-T-2分别在5~5000 nmol·L-1、25~5000 nmol·L-1的浓度范围内具有良好的线性。检测限分别为2、5 nmol·L-1,定量限分别为5、25 nmol·L-1,回收率介于72.6%~125.8%。结论方法学验证表明本方法快速、重复性好、灵敏度高,已成功应用于T-2毒素羟基化产物制备的监测。     

腹泻病毒化学发光基因芯片检测方法的建立和验证

目的 建立一种化学发光基因芯片检测方法,实现7种腹泻病毒,A组轮状病毒、B组轮状病毒、Ⅰ型诺如病毒、Ⅱ型诺如病毒、札如病毒、星状病毒和肠道腺病毒的快速、准确检测.方法 选择7种病毒特异性基因的保守区,设计引物与探针,制备寡核苷酸基因芯片.将多重实时荧光PCR(RT-PCR)扩增产物与带有特异性探针的芯片杂交,经洗涤、化学发光检测后进行结果分析.在优化的RT-PCR体系、杂交条件和化学发光检测条件下,评价芯片的灵敏度、重复性和特异性.结果 研制的基因芯片具有良好的特异性和灵敏度,检测体外转录RNA参考品的最低检测限为3×103拷贝/反应,检测临床样本的灵敏度为95.2％、特异性为92.1％、符合率为95.1％.结论 建立了一种基于化学发光基因芯片的腹泻病毒检测方法,此法能快速、灵敏、特异地检测和鉴别7种腹泻病毒,具有较好的应用前景.     

梭菌属神经毒素的基因鉴定与分型

目的:建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法:根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列,综合应用多种生物学软件与在线分析平台,设计特异性及通用检测引物,对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增,验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论:设计了针对A,B,E,F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物,以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物(BonAB-P01/P02,BonB-P01/P02,BonE-P01/P02,BonF-P01/P02,TET-P01/P02,TY-P01/P02)。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验,检测特异性良好,没有交叉反应;通用扩增结果显示均得到1 100 bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到(1~3)×103个菌。该检测方法特异性强,灵敏度高,可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。