维那利酮对培养鸡胚心室肌细胞L－型钙通道电流的影响

采用细胞贴附式膜片钳技术，观察不同浓度维那利酮对培养鸡胚心室肌细胞Ｌ－型单个钙通道电流的影响，并比较了维那利酮与米力农二者对该电流作用的异同。结果显示：不同浓度的维那利酮可增加通道的可利用率２～３倍（Ｐ＜０．００１），并使通道的开放慨率分别增加２．２５（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）、３．０（２×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）和４．３（１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）倍；通道的平均开放时间常数和关闭时间常数在１０￣（－５）ｓｍｏ／Ｌ和２×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ时无显著改变，而在１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ组可稍延长其平均开放时间常数，缩短其平均关闭时间常数。维那利酮与同等浓度的米力农相比，二者对通道可利用率的增加程度一致，但对开放概率的增加前者比后者高出２倍。     

急性缺血对豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的　观察急性缺血对豚鼠心室肌细胞 L型钙通道电流 (ICa- L)的影响。　方法　采用膜片钳全细胞记录方法 ,分别于模拟急性缺血后 0 ,5 ,10 ,15和 2 0 m in记录 ICa- L。　结果　模拟急性缺血状态后豚鼠心室肌细胞ICa- L明显受抑 ,L钙电流峰值最大值较对照组下降 2 5 .6 5 %± 4 .13% (P<0 .0 5 ) ;但其最大活性电压和 ICa- L的 I- V曲线形态无明显改变。　结论　模拟急性缺血状态可明显抑制豚鼠心室肌细胞 L 型钙通道电流 ,但不影响最大活性电压和 ICa- L的 I- V曲线形态     

慢性低氧对大鼠膈肌细胞L型钙通道电流的影响

目的　研究慢性低氧对急性分离的大鼠膈肌细胞L型钙通道电流的影响。方法　采用标准的全细胞膜片钳 (wholecellpatchclamp)技术 ,记录并比较正常对照组与慢性低氧组大鼠单个膈肌细胞的膜电容 ,L型钙电流的峰值和电流 电压关系曲线。结果　正常对照组与慢性低氧组大鼠单个膈肌细胞的膜电容分别为 (15 0 0± 12 6 )pF和(174 0± 13 3)pF ,低氧组显著大于正常对照组 (P <0 0 5 ,n =6 ) ;L型钙电流的峰值分别为 (- 1 0 5± 0 19)nA和(- 0 97± 0 16 )nA ,两组之间无显著差异。当膜电位处于 - 2 0～ +40mV时 ,慢性低氧组大鼠单个膈肌细胞的L型钙电流密度 [(- 5 6± 0 8)pA/pF]较正常对照组 [(- 7 0± 1 4 )pA/pF]显著下降 (P <0 0 5 ,n =6 )。结论　慢性低氧能使大鼠单个膈肌细胞的膜电容增加 ,L型钙电流的幅度不变 ,因此L型钙电流密度下降。L型钙电流密度下降可能是慢性缺氧时膈肌发生疲劳的重要机制之一     

细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

【目的】观察细辛和细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响,探讨其抗心律失常的作用机制。【方法】连续给药7 d后制备大鼠含药血清,采用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞L型钙通道电流。【结果】细辛和细辛配伍附子含药血清均能增加大鼠心室肌L型钙通道电流,在0 m V钳制电压下,细辛含药血清使电流增加约(28.36±0.37)%,细辛配伍附子含药血清使电流增加(75.07±0.28)%。细辛含药血清使激活曲线、失活曲线左移,对恢复曲线无明显作用;细辛配伍附子含药血清使激活曲线、失活曲线左移,使失活后恢复时间延长。【结论】细辛配伍附子较单味细辛含药血清对心肌细胞L型钙通道的激活作用更强,表明药物配伍可增加疗效。     

人参三醇组皂甙对大鼠心室肌细胞L型、T型、B型钙通道的阻滞作用

分离Wistar大鼠乳鼠的心室肌细胞,向培养基中分别加入人参三醇组皂甙300μg/ml,钙通道阻滞剂异博定37.5μg/ml或钙通道激动剂BAY K 8644 5μmol/L。用斑片钳的连细胞电压钳法,记录加药前后L、T、B三型钙通道的单通道活动。确证了人参三醇组皂甙的钙通道阻滞作用,并揭示其作用机理在于使钙通道的开放时间缩短与开放概率减少。     

去甲肾上腺素与异丙肾上腺素对大鼠心室肌细胞L型钙通道电流作用的比较

目的比较去甲肾上腺素与异丙肾上腺素对大鼠心室肌细胞L型钙电流的作用强度,分析其可能的机制。方法采用膜片钳全细胞式的记录方法,观察去甲肾上腺素与异丙肾上腺素对L型钙电流幅度及电流-电压关系曲线的影响。结果异丙肾上腺素对L型钙电流的增加作用能部分地被去甲肾上腺素所抑制。结论（1）α1肾上腺素受体具有对抗p肾上腺素受体过度兴奋的作用,或／和（2）异丙肾上腺素对心脏晶肾上腺素受体的作用强于去甲肾上腺素。      

内皮素1对豚鼠心室肌细胞正常和急性缺血状态L型钙通道电流的影响

目的 探讨内皮素1（ET－1）对正常和急性缺血状态下豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流（Ica-L）的影响。方法 应用全细胞膜片钳技术记录豚鼠心室肌细胞单一Ica-L。结果 5，10，50nmol/L的ET－1分别使正常状态心室肌细胞Ica-L的峰值明显增加（均P＜0．05）；但在模拟缺血低氧条件下ET－1对Ica-L的峰值和最大激活电位无明显影响。结论 ET－1对正常豚鼠心室肌细胞Ica-L有明显的浓度依赖性增强作用；在急性缺血条件下该增强作用消失。     

乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流的影响

【目的】观察乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流（ICa,L）的影响。【方法】采用蛋白酶消化的成年兔单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICa,L的作用。【结果】（1）乙醇抑制ICa,L峰值，24mmol／L和240mmol／L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICa,L的电流一电压（I—V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。【结论】致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICa,L具有明显抑制作用。可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。     

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的:研究白藜芦醇对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响. 方法:采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度白藜芦醇作用前后对ICa-L的影响. 结果:①白藜芦醇呈浓度依赖性阻断ICa-L,但对激活电位、峰电位、反转电位均没有影响;②白藜芦醇使ICa-L稳态激活曲线右移,V1/2由对照的(-18.97±4.08) mV变为(-15.97±4.13) mV (n=7,P=0.02),κ由(3.64±0.56)变为(3.82±0.60)(n=7,P=0.67);③对失活曲线无影响,不改变ICa-L失活特性;④白藜芦醇使ICa-L失活后再恢复时间常数τ缩短,从(98.50±9.00) ms变为(54.53±4.27) ms(n=6,P=0.000). 结论:白藜芦醇对ICa-L有阻断作用,主要作用于钙通道激活和恢复过程.     

姜黄素对大鼠心室肌细胞快钠流和L型钙流的影响

目的：研究姜黄素对大鼠心室肌细胞快钠流（INa）和L型钙流（ICa-L）的影响。方法：采用急性酶解分离法获得大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录快钠流（INa）和L型钙流（ICa-L）,观察50μmol/L姜黄素对INa和ICa-L的影响。结果：50μmol/L姜黄素对INa和ICa-L的抑制率分别是71.9%±6.3%（P〈0.01）和-1.7%±13.1%（P〉0.05）。它使INa电流密度-电压曲线上移,但不改变激活电位和反转电位,对ICa-L的电流密度-电压曲线无明显影响。结论：50μmol/L姜黄素对大鼠心室肌细胞INa有较强抑制作用,对ICa-L无明显影响。     

左西孟旦对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞钙瞬变信号的影响

目的:研究心肌细胞衰竭过程中钙瞬变信号的变化及左西孟旦(levosimendan,LeV)对其影响?方法:培养Sprague Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞48 h后,分为对照组?去甲肾上腺素(NE)组?NE+LeV1(0.1 μmol/L)诱导组和NE+LeV2(1 μmol/L)诱导组?NE组以去甲肾上腺素10 μmmol/L诱导;NE+LeV1组先用NE诱导,再以LeV 0.1 μmol/L干预;NE+LeV2组先用NE诱导,再以LeV 1 μmol/L干预?用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载心肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞钙瞬变信号变化以及心肌细胞的搏动频率?结果:① 与对照组相比,NE组心室肌细胞钙波分散?传导减慢?同步性较差,细胞搏动频率较快(26.7 ± 4.3 vs. 11.6 ± 3.6,P < 0.01)?收缩期钙瞬变峰值下降(128.37 ± 65.44 vs. 155.33 ± 61.77,P < 0.05)?达峰时间(Ttp,0.413 ± 0.324 vs. 0.212 ± 0.050,P < 0.01)?衰减时间(Tau,1.162 ± 0.524 vs. 0.722 ± 0.169,P < 0.01)均延长,钙瞬变幅度(60.80 ± 39.88 vs. 75.41 ± 36.52,P > 0.05)?谷值(67.57 ± 42.59 vs. 79.92 ± 38.05,P > 0.05)变化不大;② LeV处理后,钙波传导均匀同步,心肌细胞搏动频率及钙瞬变的峰值?幅度?谷值较NE组无明显变化,NE+LeV1组和NE+LeV2组Ttp分别为 (0.212 ± 0.044?0.205 ± 0.062)?Tau分别为(0.735 ± 0.269?0.753 ± 0.152)均较NE组缩短(P < 0.01);③NE+LeV1与 NE+LeV2两组相比,钙瞬变峰值和谷值?钙瞬变幅度?Ttp和Tau差别无统计学意义?结论:心肌细胞衰竭过程中钙瞬变减弱变慢?同步性较差;LeV通过增加钙瞬变速度?改善钙瞬变传导形式,发挥正性肌力作用?     

白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流密度的影响

目的:观察白藜三醇(RES)对培养的豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)密度的影响.方法:分离成年豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度RES孵育心室肌细胞不同时间的ICa-L密度.结果:①培养72 h时,RES 30 μmol/L和100μmol/L使ICa-L密度分别下降13%和27%,呈现浓度依赖性抑制趋势,且RES 100 μmol/L组与对照组比较有统计学差异(P<0.05);②RES 10 μmol/L,30 μmol/L和100μmol/L对ICa-L密度呈现时间依赖性抑制趋势.且RES 100 μmol/L在24 h和72 h之间有统计学差异(P<0.05);结论:白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流呈现浓度和时间依赖性抑制趋势.     

甲基黄酮醇胺对大鼠心室肌细胞钙电流的影响

采用胶原酶Ｂ急性分离大鼠心室肌细胞。利用膜片钳技术,观察甲基黄酮醇胺对心肌细胞膜钙离子通道的影响。结果表明：甲基黄酮醇胺１ 、１０ 和５０ μｍｏｌ／Ｌ可剂量依赖性地抑制大鼠心室肌细胞膜钙离子电流,表明甲基黄酮醇胺有钙拮抗作用。     

非去极化停搏液对缺血再灌注心肌细胞L-型钙通道的影响

目的探讨非去极化停搏液（non-depolarizing solution,NDP）对缺血再灌注心肌细胞L-型钙通道（ICa-L）的影响。方法实验分为对照（Con）组、缺血再灌注（I／R）组和非去极化停搏液（NDP）组。选择培养18-48h的sD乳鼠心肌细胞用于实验。Con组细胞不经过缺血再灌注处理;VR组细胞经模拟缺血缺氧3h、再灌注1h处理;NDP组在模拟I／R过程中,加NDP液于细胞培养基中进行干预。用全细胞膜片钳技术检测ICa-L的电流强度和门控特性。结果与对照组相比,I／R组ICa-L的峰值电流密度明显降低[（-9．0±3．8）pA／pFvs（-15．1±8．8）pA／pF,P〈0．05],电流-电压曲线（I-V曲线）上移,翻转电位绝对值减小,稳态激活曲线和失活曲线左移,恢复曲线右移。与I/R组相比,NDP组ICa-L的峰值电流密度升高[（-11．4±6．7）pA／pFvs（-9．0±3．8）pA／pF,P〈0．05],I-V曲线下移,翻转电位绝对值增大,稳态激活曲线和失活曲线右移,恢复曲线左移。结论NDP液可减轻心肌细胞I／R损伤对ICa-L通道的抑制作用和门控特性的改变,有利于保护心肌收缩和舒张功能、减少心律失常的发生。     

外源性磷脂酸对心室肌细胞钙电流的作用

目的：观察外源性磷脂酸（PA）对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响。方法：Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为： 正常对照组,PA 0.01、0.1和1.0 μmol·L^-13个剂量组,百日咳毒素（PTX）0.1 mg·L^-1+PA 1.0 μmol·L^-1组,蛋白激酶C(PKC)阻断剂H-7 2 μmol·L^-1+PA 10　μmol·L^-1组。应用全细胞电压钳方法分别记录各组心室肌细胞Ca²⁺电流。结果：外源性PA 0.01、 0.1 和1 mmol·L^-1分别使豚鼠心 室肌细胞L-型钙电流（L-I_Ca）由给药前的（288.70±28.33）、（290.83±25.12）和 （279.54±31.22）pA增加到给药后的（304.10±28.31）（P>0.05）、（349.80±30.13）(P<0.01)和（388.10±28.12）pA(P<0.001);加入G-蛋白耦联受体阻断剂PTX和PKC阻断剂H-7后,PA对²⁺通道电流的作用与给药前比较差异无显著性。结论：外源性PA可增加豚鼠心室肌细胞的L-I_Ca电流,其作用机制是通过膜受体-G蛋白-PKC通路发挥作用。     

通络药物对心肌细胞钠钙离子通道的影响

目的观察通络药物参松养心胶囊提取干粉溶液对单个豚鼠J0室肌细胞膜钠通道电流（INa）、L型钙通道电流（ICa,L）的影响。方法用钙外液将参松养心胶囊干粉配制成不同浓度（1％、0．5％、0．25％）。用酶解法分离单个心室肌细胞,并用全细胞膜片钳记录技术记录电流。结果当药物浓度0．5％时,可以使INA峰值电流密度从（27．2±5．4）pA／pF降至（14．9±2．8）pA／pF,平均抑制率为44．8％±7．7％（n=5,P〈0．05）;药物浓度为1％,0．5％,0．25％时,分别对ICa,L的峰值电流密度的抑制率为50．7％±5．6％,44．8％±6．5％,和19．2％±1．1％,（n=5,P〈0．05）。药物可以使INA、ICa,L的电流密度-电压曲线上移,但均不改变其激活、峰值和反转电位。结论参松养心胶囊提取干粉溶液对,INA、ICa,L具有阻滞作用,这可能是其抗心律失常和心肌保护作用药理机制的一部分。     

新生大鼠心肌细胞分离、纯化及培养方法的改进

目的应用酶消化法消化心室肌组织,培养心肌细胞,探索获得高存活率和高纯度心肌细胞的培养条件,为生理学和药理学研究提供细胞模型。方法胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ联合消化新生大鼠心室肌组织,控制消化时间和消化温度;用差速贴壁法和化学抑制法纯化心肌细胞进行体外培养。荧光显微镜观察心肌细胞形态学变化;流式细胞仪检测肌钙蛋白Ⅰ的表达;Fluo-3/AM进行细胞质内游离钙离子染色。结果培养的心肌细胞4 h后开始贴壁生长,24 h后有少数单个细胞出现自发性节律性搏动,之后连接成片,细胞簇同步收缩,细胞形态、结构完整;肌钙蛋白Ⅰ阳性率为91%;所有心肌细胞细胞质内钙离子染色阳性,荧光强度随细胞搏动呈强弱周期性变化。结论应用酶消化法可简单快捷地获得大量活力好、纯度高的心肌细胞,为心血管相关研究提供良好的实验模型。