干扰素与维拉帕米逆转乳腺癌细胞耐药作用的研究

目的:研究α-干扰素与维拉帕米对体外培养的乳腺癌细胞多药耐药(MDR)的逆转作用。方法:以对药物敏感的人乳腺癌细胞系MCF-7和经阿霉素(ADM)诱导具有MDR表型的人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR为体外试验模型,分别单用及联用α-干扰素与维拉帕米对细胞系进行处理,MTT法检测各组细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞术定量检测细胞表面P-170的表达。结果:α-干扰素与维拉帕米联用后使乳腺癌细胞耐ADM的IC50降低为0.32μmol·L-1,优于二者单用(2.29、1.23μmol·L-1),逆转倍数升高到51.88(二者单用为7.25、13.49),P-170表达低于二者单用。结论:单独应用α-干扰素、维拉帕米均可达到部分逆转MCF-7/ADR对ADM的耐药作用,但二者联用效果更强。     

米尔贝逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药的作用

目的 探寻米尔贝类化合物尼莫克汀、米尔贝β1逆转人乳腺癌多药耐药细胞株(MCF-7/adr)多药耐药(multidrug resistance,MDR)的作用及机制.方法 采用MTT比色法测定细胞生长抑制率及耐药指数;高效液相色谱(HPLC)检测细胞内阿霉素(ADR)的积累变化;荧光分光光度仪检测罗丹明123(Rh123)在肿瘤细胞内的积累;通过RT-PCR与流式细胞仪检测MDR1基因与P-糖蛋白(P-gp)表达的变化.结果 5 μmol·L-1的尼莫克汀、米尔贝β1可明显增强MCF-7/adr对ADR的敏感性,增加细胞内ADR及Rh123的积累,且呈剂量依赖关系,不同程度降低MDR1和P-gp的表达.结论 尼莫克汀、米尔贝β1对MCF-7/adr的耐药有一定的逆转作用,且尼莫克汀效果好于米尔贝β1.     

蛇床子素对耐阿霉素人乳腺癌细胞耐药的逆转作用

目的:研究蛇床子素(Ost)对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株多药耐药(MDR)的逆转作用及其机制。方法:采用MTT比色法测定药物的细胞毒性,高效液相-紫外检测法检测细胞内ADR浓度。结果:Ost对MCF-7及MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,IC50值分别为(58.1±2.3)μmol.L-1和(59±5)μmol.L-1;在5~15μmol.L-1范围内,Ost可以不同程度地增强ADR对MCF-7细胞杀伤作用,与ADR联合用药降低ADR对MCF-7/ADR的IC50值,显著增加MCF-7/ADR细胞内ADR的积累。结论:Ost对人乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,而且Ost通过明显增加MCF-7/ADR细胞内ADR的浓度,逆转其阿霉素耐药性。     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率(IC50)分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

华蟾素对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素蓄积的影响

目的：测定华蟾素（cinobufacine,Cino）对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM内阿霉素（ADM）积累的影响,以探索Cino逆转MCF-7/ADM多药耐药（MDR）的可能机制。方法：MTT法检测CinoMDR的逆转作用,HPLC法检测Cino作用MCF-7/ADM后细胞内ADM的浓度的变化。结果：Cino15mg/L能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度（IC50）由38.14mg/L降至12.93mg/L,显著增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的浓度。结论：Cino能明显增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的含量,部分逆转MCF-7/ADM的MDR。     

人参皂苷Rh2逆转MCF-7/ADM多药耐药性的研究

目的观察人采用人参苷Rh2对逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADM的分子机制。方法采用MTT比色法对不同浓度下人参皂苷Rh2对MCF-7/ADM的阿霉素(ADM)以及氟尿嘧啶(Fu)耐药逆转指标检测,同时使用多功能酶标仪检测人参皂苷Rh2干预对细胞内罗丹明123荧光强度以反映其对细胞多药耐药蛋白P-gp活性的影响。结果经过人参皂苷Rh2的干预,MCF-7/ADM对ADM以及Fu两种临床常用化疗的敏感性增强。另外,人参皂苷Rh2还对细胞的罗丹明123外排有显著的浓度依赖性抑制作用。结论人参皂苷Rh2能够有效逆转MCF-7/ADM多药耐药性,其作用机制可能主要为抑制了细胞多药耐药蛋白P-gp的活性。     

华蟾素对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转作用

目的以耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM为对象,验证华蟾素(cinobufacine,Cino)能否逆转其对阿霉素(ADM)的耐药性。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,高效液相色谱法检测细胞内ADM的浓度,流式细胞术测定P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)的表达。结果Cino15mg·L-1能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度(IC50)由38.14mg·L-1降至12.93mg·L-1;能提高ADM在MCF-7/ADM细胞内的浓度,降低MCF-7/ADM细胞P-gp的表达。结论研究表明Cino能部分逆转MCF-7/ADM细胞的MDR,其机制与抑制P-gp的功能与表达,增加细胞内ADM的含量有关。     

叶酸受体及二氢叶酸还原酶与人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的关系

目的以人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR及其敏感亲本系MCF-7为对象,探讨叶酸受体(FOLRα)及其下游基因二氢叶酸还原酶(DHFR)的表达与乳腺癌细胞多药耐药的关系。方法 MTT法测定阿霉素的细胞毒性作用及DHFR抑制剂对MCF-7/ADR细胞多药耐药的逆转作用;RT-PCR检测细胞FOLRα和DHFR mRNA的表达水平;免疫细胞化学检测FOLRα、P-gp的表达水平。结果 MCF-7细胞增殖速度快于MCF-7/ADR细胞,MCF-7细胞FOLRα mRNA转录水平较MCF-7/ADR细胞高,而MCF-7/ADR细胞DHFR mRNA较MCF-7细胞转录水平高;免疫细胞化学显示MCF-7细胞FOLRα的表达高于MCF-7/ADR细胞,而MCF-7/ADR细胞P-gp的表达较MCF-7细胞高;MCF-7/ADR对甲氨蝶啶无耐药性,甲氨蝶啶对MCF-7/ADR细胞多药耐药有逆转作用。结论 MCF-7/ADR细胞FOLRα的表达水平下调可能与细胞增殖水平有关,其下游基因DHFR表达水平与MCF-7/ADR细胞的MDR可能存在相关性。     

尼美舒利对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药逆转作用

目的：研究尼美舒利对人乳腺癌敏感细胞株MCF-7／S及多药耐药细胞株MCF-7／ADM的影响，初步探讨其逆转人乳腺癌耐药的机制。方法：用MTT比色法测定细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞内Rh123浓度和P-170、GST-π表达水平变化。结果：尼关舒利对MCS-7／S和MCF-7／ADM细胞的生长抑制呈明显时间剂量依赖关系。但尼关舒利对MCF-7／ADM细胞效应强度明显弱于MCF-7／S细胞。尼美舒利能提高MCF-7／ADM细胞内Rh123荧光强度，下调P-170和GST-π的水平（P〈0．05）。结论：尼美舒利对人乳腺癌MCF-7／ADM的耐药有一定逆转作用，作用机制可能与P-170和GST-π的水平下调有关。     

咯萘啶逆转肿瘤多药耐药及其作用机制

目的:利用mdr1~ 的人白血病和乳腺癌多药耐药(MDR)细胞系K562/A02和MCF-7/ADR研究咯萘啶(pyronaridine,PND)对MDR的逆转作用及其机制.方法:采用MTT法、荧光分光光度法、荧光显微镜法、流式细胞仪法和RT-PCR法分别测定PND单独或与阿霉素(DOX)合用,对肿瘤细胞的生长抑制、诱导凋亡、细胞内药物浓度、mdr1基因表达的影响.结果:PND对敏感及耐药细胞均具有生长抑制作用,半数抑制剂量(IC_(50))根据不同细胞在5.10-18.66μmol/L之间;低毒剂量PND显著增强DOX对耐药细胞的细胞毒和诱导凋亡作用,且增加DOX在耐药细胞内的蓄积及减少罗丹明(Rh123)的外排.RT-PCR结果显示,PND对mdr1基因无下调作用.结论:PND可作为第三代P-糖蛋白(P-gp)抑制剂,通过下调P-gp药物外排泵功能而产生强大的逆转MDR效应.     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素积累的影响

目的　研究甲基莲心碱 (Nef)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF 7/Adr内阿霉素 (ADM )积累的影响。方法　MTT法检测Nef对多药耐药性 (MDR)的逆转作用 ,高效液相色谱 (HPLC)法检测细胞内阿霉素浓度。结果　Nef能降低阿霉素对MCF 7/Adr细胞IC50 值 ,能提高MCF 7/Adr细胞内ADM的浓度。结论　Nef逆转MCF 7/Adr细胞多药耐药的机制与其增加多药耐药细胞内抗癌药物积累有关。     

钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺增强阿霉素杀伤MCF-7/ADR细胞的机制研究

目的研究钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)增强阿霉素诱导乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及其相关机制。方法用MTT法测定阿霉素、EBB单独及联合用药对阿霉素杀伤乳腺癌多药耐药细胞系(MCF-7/ADR)及其亲代细胞系(MCF-7)的作用的IC50值,用不同浓度EBB处理MCF-7/ADR细胞后用FACS法分析EBB对阿霉素诱导细胞凋亡及对mdr1mRNA和P-gp蛋白水平表达的影响,通过激光共聚焦显微镜观察EBB处理前后及用EBB预处理24和48h后MCF-7/ADR和MCF-7细胞内阿霉素浓度的改变。结果MTT结果显示EBB对MCF-7和MCF-7/ADR都具有抗肿瘤活性;EBB还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,MCF-7组两药相互作用指数(CDI)值为0.73,MCF-7/ADR组CDI值为0.49,其对耐药细胞的协同作用更为明显。随EBB剂量增加,低剂量阿霉素诱导MCF-7/ADR细胞凋亡增加而且P-gp蛋白表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,而且用EBB预处理MCF-7/ADR细胞24和48h后细胞内阿霉素和罗丹明浓度也逐渐提高。结论EBB是有效的肿瘤细胞化疗药物,它不但能直接抑制P-gp功能还具有下调P-gp蛋白表达的作用,从而有效逆转MCF-7/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对耐药细胞的杀伤作用。     

槐耳颗粒逆转人乳腺癌细胞MCF-7耐药的初步机制

目的研究槐耳颗粒逆转乳腺癌细胞株MCF-7耐药的初步机制。方法使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定敏感／耐药乳腺癌细胞MCF-7-S／A对单药阿霉素（ADM）和槐耳颗粒的药物毒性,耐药倍数和槐耳颗粒对MCF-7／A的耐药逆转倍数,分别采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和免疫组化SP法测定多药耐药基因mdr1、多药耐药相关蛋白基因MRP的mRNA和其相应的表达产物P-gp、MRP蛋白,在MCF-7／S及非细胞毒性剂量的槐耳颗粒处理前后MCF-7／A上的表达。结果非细胞毒性剂量（0．01mg／ml）的槐耳颗粒能显著降低ADM对MCF-7／A的IC50（5．06μm）,与逆转前MCF-7／A的IC50（25．8μm）,相比差异有统计学意义（P〈0．01）,其逆转倍数为5．1倍;0．01mg／ml的槐耳颗粒使MCF-7／A细胞的耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平均下调,与未加槐耳颗粒处理的对照组MCF-7／A相比有显著性差异（P〈0．01）。结论非细胞毒性剂量槐耳颗粒具有逆转MCF-7／A细胞耐药性的作用,逆转机制和其耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平下调相关,暗示槐耳颗粒是一种有潜力的耐药逆转剂。     

维拉帕米与加温对MCF-7/Adm细胞株多药耐药的实验研究

目的观察维拉帕米(Vrp)与加温对人乳腺癌细胞敏感株和耐药株耐药的逆转作用和协同作用。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为对照,以人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm为研究对象,观察阿霉素(Adm)浓度为3μg.ml-1、37℃~43℃条件下,分别加入不同浓度的Vrp(0~5μmol.L-1)时,MCF-7与MCF-7/Adm亚细胞内阿霉素的荧光强度、温度、浓度分别与荧光强度间的变化趋势。结果MCF-7/Adm细胞对于阿霉素的敏感性明显低于MCF-7细胞,MCF-7组的亚细胞内阿霉素荧光强度较高,细胞凋亡率亦高;MCF-7/Adm随温度和Vrp浓度的增加,Adm荧光强度向胞核增加,细胞凋亡率也增加。结论加温联合耐药逆转剂Vrp能协同增强Vrp对MCF-7/Adm的耐药逆转作用。     

维拉帕米与加温对MCF-7/Adm细胞株多药耐药的实验研究

目的观察维拉帕米(Vrp)与加温对人乳腺癌细胞敏感株和耐药株耐药的逆转作用和协同作用。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为对照,以人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm为研究对象,观察阿霉素(Adm)浓度为3μg.ml-1、37℃~43℃条件下,分别加入不同浓度的Vrp(0~5μmol.L-1)时,MCF-7与MCF-7/Adm亚细胞内阿霉素的荧光强度、温度、浓度分别与荧光强度间的变化趋势。结果MCF-7/Adm细胞对于阿霉素的敏感性明显低于MCF-7细胞,MCF-7组的亚细胞内阿霉素荧光强度较高,细胞凋亡率亦高;MCF-7/Adm随温度和Vrp浓度的增加,Adm荧光强度向胞核增加,细胞凋亡率也增加。结论加温联合耐药逆转剂Vrp能协同增强Vrp对MCF-7/Adm的耐药逆转作用。     

人乳腺癌耐药细胞株中GCS表达及其与P-gp的关系

目的 探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及其与p-糖蛋白(P-gp)的关系.方法 采用MTT法检测阿霉素对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr和敏感株MCF-7的抑制率和半数抑制浓度(IC50);用浓度为5、10和20μmol/L的GCS抑制剂(PDMP)预处理MCF-7/ADR 24 h和48 h后检测IC50;用流式细胞检测术检测MCF-7及PDMP预处理MCF-7/ADR 前后GCS蛋白、P-gp的表达和细胞中ADM的荧光强度,结果MCF-7/Adr对MCF-7的耐药倍数为22.69倍,PDMP作用后阿霉素对MCF-7/Adr的抑制率升高.IC50下降(P<0.05);MCF-7/Adr 中 GCS和P-gp的表达均高于MCF-7;PDMP使MCF-7/Adr中GCS表达下降(P<0.05),对P-gp表达无明显影响(P>0.05).PDMP可使阿霉崇在MCF-7内潴留增多,结论GICS可能参与肿瘤耐约的发生过程,并在MCF-7/Adr多药耐药中起重要作用;PDMP能影响P-gp功能,GCS与 P-gp有一定关系.     

shRNA对人白血病K562/ADM细胞多药耐药性的逆转观察

目的 探讨利用RNA干扰(RNAi)技术来逆转人白血病K562/ADM细胞多药耐药能力的可行性.方法 设计两条针对MDR1基因的发夹状RNA (shRNA),并将其分别构建在pGenSil-1质粒中;然后将这两条shRNA分别转染K562/ADM.利用罗丹明外排法、荧光定量PCR来检测这两条shRNA对K562/ADM的多药耐药性的逆转作用.结果 在稳定转染的细胞中可以观察到不同程度的多药耐药(MDR)逆转现象.在两个稳定转染的克隆中,MDR现象被完全逆转.结论 本研究显示可以利用shRNA逆转K562/ADM细胞的多药耐药问题.     

功劳木中异汉防己碱对P-糖蛋白介导的人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转作用

本文探讨了异汉防己碱对P-糖蛋白(P-gp)介导的人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转作用。首先以RT-PCR和免疫组化方法分别从RNA和蛋白水平检测MCF-7/DOX细胞P-gp表达情况，以明确MCF-7/DOX细胞的耐药特征；然后采用MTT法检测异汉防己碱的内在细胞毒性及其对阿霉素(DOX)的增敏作用，并以RF(reversal fold)值评价其逆转效果；同时应用流式细胞仪(FCM)对细胞内DOX的蓄积量进行了分析；再以免疫组化方法检测异汉防己碱对MCF-7/DOX细胞P-gp表达水平的影响；最后采用罗丹明蓄积和外排试验检测了异汉防己碱对P-gp功能的影响。整个试验以维拉帕米作为阳性对照。实验结果表明：MCF-7/DOX细胞是具有多药耐药表型且P-gp表达阳性的细胞株；无毒剂量异汉防己碱可明显增强DOX对MCF-7/DOX细胞的细胞毒性(RF=3.89)，明显高于维拉帕米(RF=2.54)的逆转活性(P<0.05)，但其几乎不影响DOX对MCF-7细胞的抑制作用；异汉防己碱对MCF-7/DOX细胞P-gp表达水平无明显影响，但其可有效抑制P-gp的药物外排功能。因此，异汉防己碱可有效逆转P-gp介导的人乳腺癌细胞的多药耐药性，它可能成为有效多药耐药逆转剂的候选药物。     

冬凌草甲素逆转SGC7901/ADR细胞的多药耐药性及其机制

目的 观察冬凌草甲素(Ori)对胃癌细胞株SGC7901/ADR多药耐药性的逆转及其作用机制.方法 用MTT法检测Ori的非细胞毒浓度及对SGC7901/ADR细胞株阿霉素敏感性的影响;免疫荧光法检测Ori对SGC7901/ADR细胞p-糖蛋白(P-gp)活性及表达的影响;RT-PCR法检测Ori对细胞MDR1基因转录的影响.结果 用Ori无毒剂量处理细胞后,细胞对阿霉素的逆转倍数为4.53,MDR1基因的转录降低了0.78,P-gp的表达率降低了18.83％.结论 Ori能逆转SGC7901/ADR细胞的多药耐药性,其机制为降低MDR1基因的转录和下调P-gp的表达.     

野木瓜果实总皂苷对BEL-7402/5 FU细胞多药耐药性的逆转作用

目的 研究野木瓜果实总皂苷对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5 FU多药耐药(MDR)的逆转作用,并初步探讨其耐药逆转机制.方法 采用MTT法测定5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)和野木瓜果实总皂苷对BEL-7402细胞、BEL-7402/5 FU细胞的毒性及野木瓜果实总皂苷逆转MDR的效果;利用蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果 BEL-7402/5 FU细胞对5-FU、ADM、MMC的耐药指数分别为21.71,2.73,2.11;野木瓜果实总皂苷能有效抑制BEL-7402/5 FU细胞增殖,无细胞毒性剂量为5,10 μg/mL,逆转耐药倍数分别为1.36、1.93;野木瓜果实总皂苷联合5-FU作用BEL-7402/5 FU细胞,可降低P-gp蛋白表达.结论 野木瓜果实总皂苷能部分逆转BEL-7402/5 FU细胞MDR,其机制可能是通过下调P-gp的表达而实现的.