芒柄花黄素对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的探究芒柄花黄素对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法芒柄花黄素联合放疗处理宫颈癌HeLa细胞为芒柄花黄素联合放疗组,单独放疗处理HeLa细胞为对照组,利用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验分别测定两组细胞的增殖抑制率和克隆形成能力,流式细胞仪和Western印迹分别检测细胞的凋亡率和细胞增殖相关蛋白Ki-67的表达情况。结果芒柄花黄素联合放疗组细胞增殖抑制率、凋亡率和细胞增殖相关蛋白Ki-67的表达量均明显高于对照组(P0.05),克隆形成率明显低于对照组(P0.05)。结论芒柄花黄素可以明显提高宫颈癌细胞的放疗敏感性,为芒柄花黄素应用于宫颈癌的放疗治疗提供了理论依据。     

亚硒酸钠调控AMPK/mTOR信号通路对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的探讨亚硒酸钠调控AMPK/mTOR信号通路对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法培养人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116,用1.25、2.5、5、10、20μmol/L的亚硒酸钠处理细胞48 h,CCK8试验检测不同浓度亚硒酸钠对细胞增殖的影响;10、20μmol/L的亚硒酸钠作用于人结直肠癌细胞株HT-29 12、24、48、72 h后,CCK8试验检测亚硒酸钠作用不同时间对细胞增殖的影响;10、20μmol/L的亚硒酸钠作用于人结直肠癌细胞株HT-29 48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率并用Western印迹检测蛋白表达。结果随着亚硒酸钠浓度的增加,人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116的抑制率增大,具有浓度依赖性,亚硒酸钠对人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116的IC50分别为(5.060±1.01)、(6.701±1.21)、(7.471±1.47)μmol/L,后期选择人结直肠癌细胞株HT-29为研究对象;10和20μmol/L的亚硒酸钠对细胞的抑制率在各个时间点都显著高于0 h抑制率(P<0.01),且随着时间的延长抑制率增加;10、20μmol/L的亚硒酸钠处理后细胞的凋亡率均显著高于0μmol/L,具有浓度依赖性(P<0.01),细胞中p-AMPK和Bax的蛋白表达显著高于0μmol/L组,p-mTOR和Bcl-2的蛋白表达显著低于0μmol/L组且具有浓度依赖性(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制人结直肠癌细胞株HT-29的增殖,促进细胞的凋亡,使Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升,可能与AMPK/mTOR信号通路调控有关。     

不同浓度芒柄花黄素对PC-3细胞增殖及ALDOA蛋白水平的影响

目的 探讨不同浓度芒柄花黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖及醛缩酶(ALDOA)蛋白水平的影响。方法 体外培养的PC-3细胞株分为4组，A组(无药物干预的PC-3细胞株)、B组(A组+20μmol/L芒柄花黄素)、C组(A组+40μmol/L芒柄花黄素)及D组(A组+80μmol/L芒柄花黄素),显微镜观察PC-3细胞株数目及形态改变；噻唑蓝(MTT)比色法检测PC-3细胞株生长；荧光Hoechst法检测PC-3细胞株凋亡程度；采用Western印迹及qRT-聚合酶链反应(PCR)检测时添加E组(D组+shRNA-ALDOA)分别检测ALDOA、蛋白激酶B(AKT)蛋白及mRNA相对表达。结果 A组：PC-3细胞呈现贴壁生长，呈现梭形生长，相邻细胞出现融合生长；B～D组：经多个浓度的芒柄花黄素干扰下细胞形态改变呈现圆形，体积减小，连片生长状态改变，出现脱落；PC-3细胞OD值在相同时间内，B组、C组和D组活性OD值均显著低于A组，B组、C组和D组之间随着芒柄花黄素浓度的不断增加而OD值降低，且组间相互比较具有明显差异(P<0.05);各组PC-3凋亡率均存在明显差异(P<0.0...     

花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的机制。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,并分为:对照组、花青素组、奥沙利铂组、联合组;采用MTT法检测花青素、奥沙利铂单药及联合使用对人结肠癌HCT116细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测细胞生长情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用Western blot检测TGF-βsmad信号通路相关蛋白及增殖凋亡蛋白表达情况。结果 由MTT实验发现,花青素对人结肠癌HCT116细胞48 h的半数致死浓度(IC50)为100 g/L,奥沙利铂人结肠癌HCT116细胞48 h的IC50为0. 01 g/L,两者联合使用其半数致死浓度显著下降为60 g/L和0. 6 g/L。相比对照组,花青素组和奥沙利铂组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01);相比花青素组和奥沙利铂组,联合组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01)。结论 花青素协同奥沙利铂可以促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖,且作用效果显著优于使用单一药物,其作用机制可能是通过调节TGF-β/Smad信号通路实现。     

RNA干涉5-脂氧合酶基因表达对结直肠癌细胞生长抑制及ROS含量、NF-κB通路的影响

目的探讨RNA干扰5-脂氧合酶(LOX)基因表达对结直肠癌细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)含量和核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法参照LipofectamineTM2000产品说明书将干扰5-LOX表达的siRNA(si-5-LOX组)瞬时转染结直肠癌HCT116细胞,转染无意义的siRNA序列(阴性对照组,NC组)和仅加入脂质体(对照组)为对照组,Western印迹检测转染48 h后各组细胞中5-LOX及NF-κB信号通路p-IκBα和下游靶蛋白cyclinD1、Bcl-2的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;CCK8法分别于转染的24、48、72 h检测各组细胞活力。结果转染si-5-LOX的HCT116细胞5-LOX的蛋白表达显著低于对照组(P0.05);与NC组比较,si-5-LOX组在24、48、72 h的细胞活力均显著降低,在48 h的细胞凋亡率及ROS含量均显著升高,p-IκBα的蛋白表达显著升高,cyclinD 1、Bcl-2的蛋白表达均显著降低(均P0.05)。结论抑制结直肠癌细胞5-LOX的表达可降低细胞活力及诱导细胞凋亡,其机制可能与降低细胞内ROS含量和下调NF-κB信号通路有关。     

5-烷基间苯二酚诱导人结直肠癌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨5-烷基间苯二酚(5-alkylresorcinols,5ARs)诱导人结直肠癌细胞凋亡及与BCL2、Bax、PARP1和Caspase3表达的影响.方法体外细胞实验应用5AR s直接对HT29、HCT116进行干预诱导.利用倒置相差显微镜观察5ARs对HT29、HCT116干预后细胞形态的变化.CCK8法测定不同浓度5ARs诱导人HT29及HCT116抑制率.Annexin V-F ITC/P I流式细胞术检测5ARs诱导人HT29及HCT116凋亡.Western-blot检测分析不同浓度5ARs诱导HT29及HCT116后凋亡相关蛋白变化(BCL2、Bax、PARP1和Caspase3).结果5A R s可呈浓度依赖性地抑制H T 2 9及HCT116增殖(P0.05);5ARs可诱导HT29及HCT116凋亡,并可增强Bax、PARP1和Caspase3表达,抑制BCL2表达,并提高Bax/BCL2的比值比例(P0.05).结论5ARs可诱导HT29及HCT116凋亡,并且可能与激活Bax、PARP1和Caspase3表达及增加Bax/BCL2比值比例相关.     

雷公藤甲素对人结肠癌HCT116细胞Bcl-2/Bax和活性Caspase 3表达的影响

目的研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对人结肠癌HCT116细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)/B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)和活性Caspase 3表达的影响,从而研究TP对结肠癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法用不同浓度的TP(5、10、20、30、40、80 nmol/L)和空白对照组(0 nmol/L)处理HCT116细胞24、48、72 h,用MTT法检测TP对结肠癌细胞增殖的抑制作用.流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白Bcl-2、Bax和Caspase 3、cleaved Caspase 3蛋白表达水平的变化.结果TP可显著抑制HCT116细胞的增殖,且细胞的存活率随着TP浓度和作用时间的增加而下降,呈浓度和时间效应.5、10、20、30、40 nmol/L浓度的TP分别作用HCT116细胞48 h,细胞凋亡率分别为4.25%、13.6%、34.4%、43.8%、44.5%,呈剂量依赖关系(P0.01).10、20、30、40 nmol/L TP处理T116细胞48h,随TP浓度的增加,Bcl-2的蛋白水平不断降低,Bax在细胞质的蛋白水平下降,而在线粒体的蛋白水平升高,呈剂量依赖关系;Caspase 3的蛋白水平不断降低,促进cleaved Caspase 3的蛋白水平升高,呈剂量依赖关系.结论TP可显著抑制HCT116细胞的增殖,可能通过抑制Bcl-2表达水平,促进cleaved Caspase3表达水平,使其诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡抵抗能力减弱.     

尤瑞克林对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中Bcl-2和Bax的表达及尤瑞克林的影响。 方法 48只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、生理盐水对照组和尤瑞克林治疗组。线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,缺血2h后再灌注,24 h后行神经功能评分,采用免疫组织化学法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察脑组织Bcl-2和Bax表达的变化。 结果 大鼠脑缺血再灌注损伤后,模型组和生理盐水对照组Bcl-2阳性细胞数和mRNA的表达分别为[(14.28±2.54)个/HP、0.551±0.068和（16.54±1.84）个/HP、0.585±0.084],比假手术组[(7.58±0.97)个/HP、0.324±0.042]增多(P＜0.05);模型组和生理盐水对照组Bax阳性细胞数和mRNA的表达分别为[(24.38±3.58)个/HP、0.540±0.076和(26.74±4.04)个/HP、0.527±0.065],比假手术组[（8.24±1.95）个/HP、0.309±0.037]增多(P＜0.05)。尤瑞克林干预后,Bcl-2阳性细胞数和mRNA的表达显著上调[(25.61±3.41)个/HP、0.791±0.096],Bax阳性细胞数和mRNA的表达下调[(18.54±2.38)个/HP、0.359±0.053],与模型组和生理盐水对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论尤瑞克林可上调脑组织中Bcl-2的表达,下调Bax的表达,从而抑制细胞凋亡,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

5种黄酮类化合物对凋亡心肌细胞Bcl-2家族蛋白表达的影响

目的 观察5种黄酮类化合物芦丁(RU)、二氢杨梅素(DMY)、陈皮素(HP)、大豆黄素(DA)、红花黄色素A(HYSA)对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的作用,探讨其与克山病的关系及可能的作用机制.方法 培养新生Wistar仔鼠心肌细胞,分为对照组、模型组、药物孵育组,用荧光染色法观察心肌细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法观察凋亡相关基因Bcl-2家族蛋白表达.结果 与模型组[(24.33±6.51)%]比较,RU[(13.95±3.80)%]、DA[(11.82±3.50)%]、HYSA[(12.33±3.78)%]能有效降低心肌细胞凋亡率(P＜0.05).5种黄酮类化合物能不同程度地上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,使Bcl-2/Bax比值增力口[RU(0.989±0.094)、DMY(0.931±0.280)、HP(0.980±0.095)、DA(1.049±0.092)、HYSA(1.031±0.039)],与模型组(0.490±0.046)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);而Bcl-xl表达无明显变化(P＞0.05).结论 RU、DMY、HP、DA、HYSA可以通过Bcl-2、Bax途径调节细胞凋亡过程,发挥抗氧化作用,抑制细胞凋亡,为克山病防治提供了一种思路.     

白藜芦醇通过上调结肠癌HCT116细胞内凋亡相关分子表达促进细胞凋亡

目的探讨白藜芦醇影响结肠癌生物行为的机制。方法采用结肠癌HCT116细胞,采用体外CCK8实验观察白藜芦醇对结肠癌HCT116细胞增殖的影响;采用TUNEL凋亡实验观察白藜芦醇对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR及Western印迹检测与凋亡相关分子的表达。结果 CCK8实验结果显示,相比于未经白藜芦醇处理的结肠癌HCT116细胞,体外处理结肠癌HCT116 24 h后,随着白藜芦醇剂量(25、50、100μmol/L)的逐渐上调,结肠癌HCT116细胞的活力逐渐下调。TUNEL凋亡实验显示,相比于未经白藜芦醇处理的结肠癌HCT116细胞,白藜芦醇50μmol/L生理剂量可明显上调结肠癌HCT116细胞的凋亡染色率。实时定量PCR与Western印迹实验显示,在白藜芦醇生理剂量(50μmol/L)的处理下,相比于未经白藜芦醇处理的结肠癌HCT116细胞,凋亡相关基因Bax和Bad的表达均上调。结论白藜芦醇通过上调结肠癌HCT116细胞内凋亡相关分子表达促进细胞凋亡。     

吲哚美辛对结肠癌细胞CDK2、CDK4、P21WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的：非甾体类抗类药通过环氧合酶途径是抑制肿瘤的机制之一，是否还有其他途径抑制细胞增殖及诱导凋亡。探讨吲哚美辛抗肿瘤的作用机制。为其临床应用实验依据。方法：不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24h，通过Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、p21s^WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果：吲哚美辛降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2、CDK4及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达上，上调细胞周期依赖蛋白激酶抑制剂p21s^WAF1/CIP1蛋白，而对促凋亡蛋白Bax的表达无影响。结论：吲哚美辛通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白，上调p21s^WAF1/CIP1的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

敲低DR5表达对rmhTRAIL联合5-FU干预结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨敲低死亡受体5(DR5)表达对重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rmhTRAIL)联合5氟尿嘧啶(5-FU)抑制人结直肠癌(CRC)HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法 体外培养人CRC HCT116细胞,用DR5 shRNA质粒转染,构建敲低DR5的CRC HCT116/shRNA细胞系(HCT11...     

大花旋覆花素对体外Hep G2细胞增殖、凋亡和mTORC1信号通路的影响

目的 研究大花旋覆花素肿瘤细胞增殖、凋亡和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)信号通路的影响。方法 取Hep G2细胞,分组给予0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理48 h,采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western bloting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase3及mTORC1信号通路蛋白mTORC1和70S6K表达。结果 5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理组细胞增殖率分别为(89.56±8.11)%、(66.40±6.61)%和(41.78±5.79)%,均显著低于0μmol/L大花旋覆花素对照组【100.00±10.01)%,P<0.05】;细胞凋亡率分别为(14.75±1.34)%、(19.11±1.87)%和(27.45±1.99)%,均显著高于对照组【(7.01±0.89)%,P<0.05】;促凋亡蛋白Bax和Caspase3蛋白表达分别为(1.36±0.15)和(1.63±0.32)、(3.57±0.33)和(3.92±0.47)、(...     

脑出血病人神经元凋亡及Bcl-2、Bax表达与中风闭脱证的研究

目的观察脑出血病人血肿周围组织神经元凋亡和凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达及其与中风闭脱证的关系.方法采用TUNEL法、免疫组织化学法分别检测脑出血病人血肿周围组织凋亡神经元和Bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果血肿周围组织细胞凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡率呈负相关(P<0.01),Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2与细胞凋亡率呈正相关(P均<0.01).闭、脱证之间细胞凋亡率及Bcl -2、Bax蛋白阳性率、Bax/Bcl-2有统计学意义(P<0.05或P<0.01),脱证细胞凋亡率、Bax 、Bax/ Bcl-2大于闭证,Bcl-2小于闭证.结论细胞凋亡机制参与了脑出血后继发性神经元损伤.细胞凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达对中风闭脱证微观辨证有一定的帮助.     

血管紧张素(1～7)防止血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡

目的 已有实验证实血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可诱导心肌细胞凋亡,本研究用血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]干预AngⅡ诱导培养的乳鼠心肌细胞,以观察Ang(1～7)对心肌细胞的保护机制.方法 分离出新生1～3 d内的SD乳鼠心肌细胞进行体外培养,4 d后将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ组和AngⅡ Ang(1～7)组行加药干预,加药2 d后用免疫细胞化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax基因蛋白含量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.结果 正常对照组细胞Bcl-2表达灰度值为(12.4±1.5),Bax表达灰度值为(6.9±1.9),细胞凋亡率为(3.1±1.4)%;AngⅡ组细胞Bcl-2表达灰度值为(7.4±1.2),Bax表达灰度值为(16.4±1.6),细胞凋亡率为(16.1±2.2)%;AngⅡ Ang(1～7)组细胞Bcl-2表达灰度值为(10.5±1.3),Bax表达灰度值为(11.1±2.2),细胞凋亡率为(8.6±2.4)%;各组间相互比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 Ang(1～7)可部分拮抗AngⅡ的作用,使心肌细胞Bax的表达减少,Bcl-2的表达增加,减少细胞凋亡率,起到细胞保护作用.     

浅蓝菌素联合吉西他滨对人胰腺癌细胞BxPC3增殖与凋亡的影响

目的 观察浅蓝菌素联合吉西他滨对胰腺癌细胞BxPC3生长抑制的协同作用,探讨其机制.方法 以10μg/ml浅蓝菌素、20μmol/L吉西他滨、10 μg/ml浅蓝菌素+20μg/L吉西他滨分别处理对数生长期的人胰腺癌BxPC3细胞48 h,以不经药物处理的细胞作为对照.应用CCK-8法检测各组细胞增殖,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 对照组、浅蓝菌素组、吉西他滨组、联合处理组48 h的生长抑制率分别为0、(51.28±1.84)％、(53.59±1.62)％、(84.57 ±1.01)％;细胞早期凋亡率为(0.83±0.31)％、(31.37±1.04)％、(38.33±0.75)％、(69.43±0.83)％;BxPC3细胞Bcl-2 mRNA表达量分别为0.67±0.01、0.44±0.01、0.36±0.08、0.27 ±0.07;Bax mRNA表达量为0.14±0.01、0.31±0.02、0.32±0.03、0.91±0.06;Bcl-2 mRNA/Bax mRNA比值为4.78±0.13、1.39±0.04、1.15±0.02、0.30±0.02;Bcl-2蛋白表达量分别为1.24±0.04、0.51±0.02、0.42±0.02、0.13±0.01;Bax蛋白表达量为0.20±0.05、0.47±0.01、0.54±0.01、1.21±0.03;Bcl-2/Bax比值为6.00±0.11、1.11±0.01、0.77±0.03、0.10±0.06.各处理组与对照组,联合处理组与单药处理组的差异均有统计学意义(P值均＜0.01).结论 浅蓝菌素与吉西他滨对人胰腺癌BxPC3细胞的生长抑制具有协同作用,其机制可能通过上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达,降低Bcl-2/Bax比值而促进细胞凋亡所致.     

唑来膦酸对人直肠癌COLO320细胞体外增殖和凋亡的影响

目的探讨唑来膦酸(Zoledronic acid,ZOL)对人直肠癌细胞株COLO320体外增殖和凋亡的影响,及其诱导凋亡可能的分子机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度ZOL作用不同时间对COLO320细胞增殖的影响,并计算半数致死量(IC50)及增殖抑制率;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析ZOL对细胞凋亡的影响;采用Western blotting和实时定量PCR(Real-Time PCR)检测ZOL作用直肠癌COLO320细胞72 h后相关凋亡基因Bad、Bcl-2、Bax和Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,ZOL处理组的直肠癌COLO320细胞增殖受到明显抑制,呈剂量和时间依赖性(P0.05),24、48、72和96 h的IC50分别是209.4、103.6、74.1、65.6μmol/L;且ZOL对COLO320细胞增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。FCM示不同浓度ZOL处理直肠癌COLO320细胞72 h后的凋亡率较对照组均有不同程度升高,但20μmol/L浓度组与对照组之间差异无统计学意义(P0.05),其余各组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。ZOL处理72 h后的COLO320细胞凋亡相关基因Bcl-2的表达水平下降,Bax、Bad、Caspase-9的表达升高。RT-PCR显示,Bcl-2 mRNA表达下调,Bax、Bad、Caspase-9 mRNA表达升高。结论 ZOL对人直肠癌COLO320细胞的增殖有抑制作用,对其凋亡有诱导作用。     

蛇床子素通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导K562细胞凋亡和增殖抑制

目的:研究蛇床子素对人慢性髓系白血病细胞K562增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:培养髓系白血病细胞K562,分别用不同浓度的蛇床子素处理(0、5、10、20μg/ml)。细胞培养48h后,利用MTT法检测K562细胞增殖;流式检测K562细胞凋亡;Western blot法检测PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2和Cleavage-Caspase3表达。结果:蛇床子素可以呈浓度依赖性的诱导K562细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论:蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导K562细胞增殖抑制和凋亡。     

错配修复基因MLH1激活p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的结肠癌细胞凋亡

临床和流行病学研究显示雌激素替代治疗可降低绝经后妇女的结直肠癌发生风险。前期研究发现雌激素能上调结肠癌细胞的错配修复(MMR)基因MLH1表达,在MLH1基因缺失的结肠癌细胞中再表达MLH1能明显增强雌激素诱导的细胞凋亡。目的:探讨MLH1参与雌激素诱导结肠癌细胞凋亡所涉及的信号通路以及p53及其相关基因在此凋亡通路中的作用。方法:以含人野生型MLH1(hMLH1)全长cDNA的质粒转染MLH1基因缺失的人结肠癌细胞株HCT116。以转染空质粒的HCT1 16细胞作为对照,在有或无雌激素作用的条件下,采用电泳法检测凋亡DNA Ladder,蛋白质印迹法检测p53等凋亡相关蛋白表达。结果:转染hMLH1后,10~(-8)mol/L雌二醇(E_2)能明显诱导HCT116细胞凋亡。转染hMLH1并经E_2处理的HCT116细胞(D组)与经E_2处理但未转染hMLH1的HCT116细胞(B组)相比,其caspase-3、caspase-9、p53、Bax、胞质细胞色素C蛋白表达均显著增强,D组上述蛋白表达亦均高于转染hMLH1但未经E_2处理的HCT116细胞(C组)。结论:MMR基因MLH1主要通过激活p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的人结肠癌细胞株HCT116凋亡。     

miRNA-1236通过靶向FOXO3a调控结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨miRNA-1236对结直肠癌细胞增殖的作用及其相关机制。 方法通过实时定量PCR检测转染miR-1236后miRNA-1236的表达,使用CCK-8以及克隆形成方法检测转染miRNA-1236后HCT116细胞的活性,ki67方法检测转染miRNA-1236后HCT116细胞增殖能力的变化,生物信息方法筛选miR-1236的潜在靶基因FOXO3a。Luciferase报告检测miRNA-1236与FOXO3a的结合位点,通过实时定量PCR方法检测转染miRNA-1236后FOXO3a基因的变化;通过免疫组化的方法检测结直肠癌患者组织中FOXO3a的表达,通过western blot检测低表达miRNA-1236后HCT116细胞中FOXO3a、PCNA以及Bax蛋白的变化。通过TCGA数据库检测FOXO3a基因在结直肠癌患者癌-癌旁,不同肿瘤阶段与不同性别中的表达。 结果本研究发现高表达miRNA-1236后HCT116细胞活性相对于阴性对照组明显增加,而低表达miRNA-1236后活性降低。低表达miRNA-1236后HCT116细胞增殖能力相对于阴性对照组明显降低。生物信息学预测miR-1236与FOXO3a有潜在的结合位点。采用Western blot以及逆转录实时定量PCR验证,过表达miRNA-1236后FOXO3a表达相对于阴性对照组明显降低,而低表达miRNA-1236后,FOXO3a表达明显升高,同时luciferase结果显示,FOXO3a是miRNA-1236的靶基因。并且,FOXO3a在结直肠癌症组织中明显降低。 结论miR-1236通过靶向FOXO3a的表达调节结直肠癌细胞HCT116增殖,同时为miR-1236成为诊断、预防以及治疗结直肠癌的生物学标记物提供理论基础。