HIV-1P24蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

目的制备HIV-1P24蛋白及单克隆抗体,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HIV感染。方法聚合酶链反应(PCR)扩增p24基因,并将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经E.coli表达并纯化HIV-1P24蛋白。以纯化P24蛋白抗原免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备能产生P24单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用Wes ternblot、ELISA技术对制备的单克隆抗体进行初步鉴定,建立检测P24蛋白含量的ELISA竞争法。结果原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达P24蛋白,从杂交瘤细胞中选取能稳定分泌P24单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用ELISA竞争法检测HIV-1阳性的血清中P24蛋白含量与病毒载量显著相关。结论 P24蛋白及特异性单克隆抗体成功制备,并建立了检测P24蛋白含量的ELISA竞争法。     

抗同型磺基丙氨酸单克隆抗体的制备和定性

用戊二醛将L-同型磺基丙氨酸(L-HCA)连接到牛血清白蛋白(BSA),形成L-HCA-BSA连接物.用L-HCA-BSA免疫小鼠后,收集脾淋巴细胞,并与骨髓瘤细胞融合.用含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核甙(HAT)培养基保留杂交细胞.用ELISA法筛选能够分泌与L-HCA-BSA产生免疫反应的杂交细胞.通过ELISA抗体系列稀释试验和抗体吸收试验,确定抗体特异性.结果表明,抗L-HCA单克隆抗体(McAb)2D4能特异地与L-HCA-BSA产生免疫反应.用L-HCA-BSA吸收L-HCA McAb,可明显降低或取消L-HCA抗体与L-HCA-BSA的免疫反应.结果提示L-HCAMcAb对L-HCA-BSA具有特异性,可用于免疫组织和细胞化学研究L-HCA在神经系统中的分布和定位.     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的：制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法：用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测。 结果：3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。3株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。 结论：抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。     

抗人脑源性神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (mAbs) against human brain-derived neurotrophic factor (BDNF). METHODS: BALB/C mice were immunized with purified BDNF protein in conjunction with acid-treated Salmonella (antigen:thallus=1:5), and mAbs were subsequently derived by hybridoma technique. RESULTS: Three hybridoma cell lines secreting anti-BDNF mAbs were obtained, designated as B1, B2 and 4D1 respectively and all categorized into IgG1 subtype. The titers of the mAbs in the ascitic fluid of the rats ranged from 1x10(6) to 1x10(5), and their relative affinities were B2>B1>4D1. CONCLUSION: mAbs against BDNF are successfully prepared, which can be instrumental for further study of the expression and distribution of BDNF in vivo, and the detection of BDNF produced by genetic engineering.     

B细胞杂交瘤技术制备抗同种特异T细胞膜抗原单克隆抗体

目的：为进一步分析ＴＣＶ免疫诱导同种免疫反应低下的机制。方法：采用Ｂ细胞杂交瘤技术获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果：两次的细胞融合中共得到１２株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞，为分析抗体在ＴＣＶ中的作用提供条件。结论：ＴＣＶ免疫可引起抗ＴＣＶ细胞抗体的产生，以同系免疫的方法得到的活化Ｂ细胞用于Ｂ细胞杂交生产单抗是可行的。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

人白细胞介素4单克隆抗体的研制及其鉴定

应用脾内免疫法免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,获得两株分泌IgG型抗人白细胞介素4单克隆抗体的杂交瘤细胞。用间接ELISA法可测出的抗原量100pg/ml;抗体的效价细胞培养基上清达1:16,腹水达1:1×10~(-5)。对E.coli表达的重组IL_4、商品化的IL_4及天然IL_4呈阳性反应,与E.coli蛋白及重组IL_1、IL_2、IL_3、IFNa及TNFa无交叉反应。     

抗人脑源性神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗人脑源性神经营养因子(BDNF)单克隆抗体。方法利用BDNF纯品与酸处理后的沙门氏菌菌体(抗原∶菌体为1∶5)混合免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。结果获得3株抗BDNF的单克隆抗体,分别命名为B1、B2和4D1,mAb的Ig亚类均为IgG1。ELISA间接法测定腹水mAb效价为1×10-6~1×10-5,各单抗相对亲和力结果为B2>B1>4D1。结论成功研制出抗人BDNF单克隆抗体,为进一步研究BDNF在体内组织的表达及分布提供了一种工具,并为基因工程制备BDNF提供了检测方法。     

金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定.方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定.结果:最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108 L·mol-1和1.968×1010 L·mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位.结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础.     

金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素（SEI）单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法：以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果：最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108L.mol^-1和1.968×1010L.mol^-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论：单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。     

细粒棘球绦虫囊液McAb的制备及鉴定

作者用人源包虫囊液抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞杂交,获得成功。融合率100％,抗体阳性率10.7％。经克隆化培养获得分泌抗人源细粒棘球绦虫抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞5株,其染色体数为99～108。经鉴定其中3株(1D_3、2D_6、4B_(10))是特异针对细粒棘球绦虫抗原决定簇的,均属IgG_1亚类;另外2株(4F_4、1D_1)则针对细粒棘球绦虫与其他几种寄生虫抗原的共同决定簇,它们分属IgM和IgG_1类免疫球蛋白。     

抗斯氏肺吸虫单克隆抗体的制备和检定

作者用斯氏肺吸虫成虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞杂交,获得成功。融合率64％,抗体阳性率19％。经克隆化获得分泌抗免疫用抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。对其中2E_5诱生的腹水进行了检测,显示腹水中含高效价特异性单克隆抗体;PAGE揭示一明显特异区带;并经检定,属IgG_1亚类。     

抗人Hb单克隆抗体的制备与鉴定

用超声波快速乳化人Ｈｂ，作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞经离心ＰＥＧ法融合，微波ＥＬＩＳＡ筛选阳性克隆，获得三株分泌针对人Ｈｂ不同抗原位点的单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别命名为Ｈｂ２６４、Ｈｂ２１０和Ｈｂ２３８。其中Ｈｂ２６４能特异识别人Ｈｂ的β链而不与动物Ｈｂ交叉反应；解离常数Ｋｂ为１．６×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，ＩｇＧ＿（２ａ）。Ｈｂ２１０能结合人Ｈｂ的α链，可被猪Ｈｂ抑制，但亲合力低１００倍；Ｋｄ（人Ｈｂ）为２．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ；Ｋｄ（猪Ｈｂ）为３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ｂ）。Ｈｂ２３８是两个脾细胞与一个Ｓｐ２／０细胞融合而成的三体瘤（ｔｒｉｏｍａ）；染色体１３２条；Ｈｂ２３８单克隆抗体可同人Ｈｂ的α和β链结合，Ｋｄ（人Ｈｂ）为８．９×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ａ）；经分析鉴定，Ｈｂ２３８是针对人Ｈｂα和β链的双特异性抗体。本方法对免疫学隐血检测、法医学鉴定和双特异抗体的研制有一定意义。     

电鳐乙酰胆碱酯酶单克隆抗体识别的抗原决定簇

制备还原并烷基化乙酰胆碱酯酶，以酶联免疫吸附试验观察ＡＣｈＥ单克隆抗体与天然ＡＣｈＥ及还原烷基化ＡＣｈＥ的抗原抗体反应，结果显示，１４种抗天然ＡＣｈＥ单克隆抗体中有１３种识别顺序型抗原决定簇，只有一种识别构象型抗原决策簇。     

抗促卵泡刺激素单克隆抗体的制备及其免疫特异性研究

用杂交瘤技术制备了4株抗羊垂体促卵泡刺激素(FSH)的单克隆抗体。经琼脂双向扩散法鉴定,其中3株为IgG_(2a),1株为IgM。竞争性抗体结合试验表明这4株单克隆抗体分别针对FSH分子上3个不同的抗原决定簇。交叉反应试验的结果表明抗体1A_1和4C_1为分别作用于FSH分子α及β亚单位上抗原决定簇的抗体。     

抗黑色素瘤单克隆抗体的制备

本文用鼠骨髓细胞系NS_1与用黑色素瘤细胞系Cal_1,Cal_(32),Cal_(52),免疫的鼠脾细胞融合制备抗黑色素瘤单克隆抗体。通过使用淋巴细胞分离液MSL和在脾被膜上扎孔,用注射器注入GKN溶液使脾细胞冲出的方法制取脾细胞,使杂交瘤细胞融合率明显提高,并获两株分泌抗黑色素瘤单克隆抗体IgG_1的SM_(167)和SM_(230)细胞株。     

抗—BudR单克隆抗体制备及特性鉴定

用碘化还原法将溴脱氧尿嘧啶(BudR)与牛r—球蛋白(BGG)偶联作为抗原(BudR—BGG)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(653)进行融合,经放射免疫分析法(RIA)筛选和克隆化后,获得四株阳性杂交瘤Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4、Ⅰ_3F_(11)和Ⅱ_1H_7。杂交瘤细胞分别腹腔注射BALB/c小鼠,其中三株(Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4和Ⅱ_1H_7)获得腹水,纯化抗体并对其特性进行鉴定,三株单抗均可与BudR、IudR反应,而不与CdR、TdR及FudR反应,具有较高的特异性。     

HCG特异的10株单克隆抗体的研制

用杂交瘤技术获得１０株ＨＣＧ特异的单克隆抗体（简称单抗）。其中，２６ＡＧ只与全ＨＣＧ反应而不与ＨＣＧ－α或ＨＣＧ－β反应，其余９株与全ＨＣＧ和ＨＣＧ－β反应而不与ＨＣＧ－α反应。放射免疫试验（ＲＩＡ）表明这１０株单抗与ＬＨ及ＦＳＨ无明显的交叉反应。３０ＡＧ及３４ＡＧ与１３５Ｉ－ＨＣＧ的结合可被标准ＨＣＧ抑制，这两株单抗与ＨＣＧ的亲和力均约２×１０９Ｌ／Ｍ。１０株单抗均耐反复６次冻融，除３３ＡＧ外都还耐５６℃３０分钟热灭活。单抗Ｉｇ类别．９株都是ＩｇＧ１，只３０ＡＧ是ＩｇＧ２ｂ。     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研究及其初步应用

在用人A型红细胞悬液免疫的Balb/c小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合屡遭失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株,即为:3B_2、3H_2、8C_3细胞株。3株抗人A型红细胞单克隆抗体3B_2、3H_2、8C_3血清学检验和应用结果表明:3株单抗均可作为血型诊断试剂,可用以取代人源标准血清。     

抗蝮蛇毒磷酸二酯酶单克隆抗体的制备及鉴定

从蝮蛇毒中提取磷酸二酯酶,用此酶免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Fo融合,以间接ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液和小鼠腹水中的特异性抗体,其效价分别为1∶128和1∶51 200.抗原阻断试验结果表明,此抗体对蛇毒磷酸二酯酶具有特异性.该杂交瘤细胞株定为G_8,该株单抗属鼠IgG_(2a)亚型,经体外持续培养6个月,其分泌抗体性能稳定.