脲酶聚丙烯酰胺凝胶电泳活性区带染色方法的建立与应用

目的：建立聚丙烯酰胺凝胶电泳活性区带当色方法用于测定脲酶分子量和纯度鉴定。方法：建立十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PACE）梯度凝胶体系和电泳条件等,根据不同来源脲酶活性染色区带位置,鉴定出PAGE蛋白区带中脲酶区带位置,进一步测出脲酶的相对对分子量,结果：用新建立的SDS－PAGE脲酶活性区带染色方法,应用于不同来源的脲酶相对分子量测定和纯度鉴定,结果准确,重复性好,与凝胶过滤法测定分子量的结果相关性好,结论：我们建立的SDS－PACE脲酶活性区带染色方法,应用效果良好,有推广价值。     

灵芝多糖对小鼠T细胞IL—2IL—3mRNA表达的影响

目的：研究灵芝多糖GLB7对小鼠T细胞IL－2，IL－3mRNA表达的影响，进一步探讨灵芝多糖免疫调节作用的机制。方法：培养开始时加入不同浓度的GLB7（5，10，20，40mg.L^-1)，培养一定时间后，以RT－PCR和凝胶图像吸收度分析系统检测灵芝多糖（GLB7）与小鼠脾脏T细胞IL－2，IL－3 mRNA表达之间的量效关系。结果：GLB7能剂量依赖性增强静息IL－2和IL－3 mRNA的表达，分别于11h和20h达到高峰，而对活化的T细胞则不产生影响，此时培养上清中IL－2和IL－2活性与对照组比较亦有明显升高，并具有一定的剂量依赖关系。结论：灵芝多糖免疫增强和抗肿瘤作用的基础与其在转录水平促进T细胞中IL－2和IL－3 mRNA的表达有关。     

旁路活化补体激活内皮细胞表达趋化因子及其NF-kB调控作用的实验研究

目的 研究旁路活化补体在一定条件下直接激活内皮细胞表达趋化因子白介素（IL－8）、单核细胞趋化蛋白（MCP－1）、以及核转录因子kappaB(NF-kB)在其中的调控作用。方法 用酵母多糖活化人血清（ZAHS）直接作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞单层（HUVECS）：放射免疫法（RIA）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测IL－8和MCP－1的表达水平；凝胶电泳迁移率（EMSA）方法测定NF－kB的活化。结果：（1）ZAHS（1：30）能够诱导内皮细胞表达IL－8和MCP－1，但二者时相变化明显不同。IL－8从4小时开始即有明显上升；而MCP－1水平则从8小时才开始有显著增加。（2）ZAHS能够激活NF－kB,30分钟时即有活化，60分钟明显增加，120分钟达到高峰。NF－kB抑制剂PDTC（pyrrolidine dithiocarbamate,20μmol/L）预先处理HUVECS单层2小时，可以明显降低IL－8和MCP－1的表达（P＜0．05）。结论 旁路活化补体能直接在转录水平诱导人脐静脉内皮细胞表达IL－8和MCP－1，这一过程至少部分通过NF－kB的活化来调控。     

杀菌性/通透性增加蛋白模拟肽对内毒素致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：通过杀菌性／通透性增加蛋白（BPI）模拟肽（BNEP）拮抗内毒素（LPS），观察对血管内皮细胞分泌白细胞介素－6（IL－6），肿瘤坏死因子－α（INF－α）以及表达细胞间黏附分子－1（ICAM－1）的影响，探讨BNEP对LPS致血管内皮细胞损伤的保护作用。方法：采用体外培养的原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型，分别观察单纯应用LPS，BNEP以及不同剂量BNEP与LPS作用后各细胞因子的分泌表达，IL－6，TNF－α应用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定。ICAM－1采用生物素－抗生物素－过氧化物酶复合物（SABC）－cy3免疫荧光染色，激光共聚焦扫描显微镜下观察其表达情况，结果：LPS 10ng/ml可使IL－6分泌量显著增加；BNEP 60ug/ml即可显著降低10ng/ml LPS诱导的IL－6分泌，随BNEP浓度增加IL－6分泌量呈降低趋势，达240ug/ml时，IL－6分泌量与单纯应用BNEP组比较，差异无显著性意义（P＞0．05），BNEP 120ug/ml与LPS10ng/ml作用后，可使TNF－α分泌量降低94％，BNEP 240ug/ml可完全阻断TNF－α的分泌。激光共聚焦扫描显微镜观察结果显示，BNEP与LPS作用后，ICAM－1在细胞膜及细胞浆的表达明显减弱。结论：BNEP在阻断LPS对细胞的激活和损伤，减少炎症介质和细胞因子的过度释放中具有明显的保护作用。     

IL—6基因在髓母细胞瘤中的表达

目的：研究髓母细胞瘤中IL－6基因表达与肿瘤发生和发展关系。方法：用地高辛标记IL－6cDNA探针原位杂交法检测IL－6mRNA在16例髓母细胞瘤和10例正常脑组织中的表达。结果：髓母细胞瘤表达率明显高于对照组,差异非常显著（P＜0．01）。表明IL－6mRNA表达与组织类型有关。结论：IL-6可能是促进髓母细胞瘤发生发展的重要因子之一。     

^60Co0γ辐射诱导下IL—6对人多发性骨髓瘤细胞株凋亡效应的实验研究

目的：研究白介素－6（IL－6）在^60Coγ辐射诱导人多发性骨髓瘤细胞株XG－6,XG－7调亡效应中的作用及其可能的分子生物学机理,方法：运用流式细胞仪技术（FACS）,DNA片段释放法和RT－PCR,观察了IL－6对细胞株XG－6,XG－7中Bcl-xl,Bax,mRNA相对表达的影响及其与辐射诱导的细胞凋亡率的相关性,结果：IL－6存在时,XG－6,XG－7细胞的Bcl-cL,mRNA表达在辐射后迅速上升,4h达最高峰后逐渐下降,24－48h恢复到照射前水平,不加IL－6的XG－6,XG－7细胞的Bcl-xL的表达在同样实验条件下降,24－48h恢复到照射前不平,不加IL－6的XG－6,XG－7细胞的Bcl-xL的表达在同样实验条件未检测到,而这2株细胞Bax mRNA的表达在照射后不同时间均低于相应的加IL－6组,但尚有明显的表达,对不加IL－6的细胞组,辐照后不同时间的凋率明显高于相应的加IL－6组（P＜0．05）,结论：IL－6可通过调节B cl-xL,Bax的表达及改变Bcl-xL/Bax二者比率,保护辐照诱导XG－6,XG－7的细胞凋亡。     

IL—6相关基因的克隆与鉴定

目的：克隆和鉴定IL－6作用相关基因将有助于揭示IL－6信号转导机制和发现新的信号分子,方法：以来源于IL－6处理和未处理的U937细胞mRNA的双链cDNA作为检测子和驱动子,进行cDNA代表性异分析,结果：分离了14个差异表达基因序列（EST）,反向RNA Nortghern杂交筛选到9个差异表达序列,经测序及序列分析,其中7个差异表达的EST代表在细胞生命活动或信号转导中有重要的作用的已知基因,2个EST代表与IL－6作用相关的新基因,Northern印迹和时间表达普进一步证明了P52和P31代表的新基因与IL－6作用的相关性,结论：上述结果提示这些差异cDNA序列可能与IL－6信号转号作用密切相关。     

LC—MS／MS法测定人血浆中米非司酮浓度及其生物等效性评价

目的建立测定人血浆中米非司酮浓度的LC-MS/MS测定方法,并评价米非司酮的药动学特征及2种制剂的人体生物等效性。方法 24名女性健康受试者随机分成2组,分别交叉给予受试制剂和参比制剂,采用LC-MS/MS测定米非司酮的浓度。流动相为甲醇-20 mmol·L-1的醋酸铵水溶液（含0.2%甲酸）（12∶88）,柱温：35℃。质谱采用多反应监测模式,检测离子为米非司酮m/z 430.3→372.2,地西泮为m/z 285.1→193.1,评价米非司酮的药动学参数及2种制剂的人体生物等效性。结果人血浆中米非司酮片的最低定量限为10μg·L-1,在10～3000μg·L-1范围内线性关系良好,批内及批间精密度RSD均小于15%。受试制剂与参比制剂的各主要药动学参数：tmax分别为（0.88±0.27）和（0.81±0.42）h,Cmax分别为（1332±373.3）和（1479±388.3）μg·L-1,t 1/2分别为（25.7±8.0）和（25.9±10.0）h,用梯形法计算AUC（0～120h）分别为（16 410±4086）和（16 673±4458）μg·h·L-1;相对生物利用度为114.6%。结论对主要药动学参数进行比较,评价结果显示两种制剂生物等效。     

δ、κ、μ受体在创伤失血性休克大鼠细胞免疫抑制中的作用

目的 探讨何种阿片受体亚型介导了血浆β-内啡肽（β－endorphin,β-EP)在创伤失血性休克后免疫抑制中的作用。方法 采用体外实验，分别以δ、κ、μ受体高选择性拮抗剂naltrindole(NTI)、nor-binaltorphimine(Nor-BNI)和小剂量纳洛酮（naloxone,NAL,相对选择性μ受体拮抗剂）为工具药，作用于休克1h血浆处理的脾细胞，观察刀豆素A诱导的脾细胞增殖、白细胞介素－2（IL－2）分泌及白细胞介素－2受体（IL－2R）表达的变化。实验分休克血浆组（I组）、受体拮抗剂治疗组（Ⅱ组）、受体拮抗剂自身对照组（Ⅲ组）及基础对照组（Ⅳ组）。结果 Ⅱ组与I组相比，10μmol/L NAL（非选择性阿片受体拮抗剂）非常显著地增强脾细胞增殖功能、IL－2分泌和IL－2R表达（P＜0．01）；小剂量NAL（1－100nmol/L)对各项观察指标均无明显影响。NTI和Nor-BNI显著降低休克血浆对脾细胞增殖功能、IL－2的分泌及IL－2R表达的抑制（P＜0．05或P＜0．01）；但各项指标都仍然未恢复到正常水平（P＜0．01）。Ⅲ组与Ⅳ组相比，NTI抑制脾细胞增殖功能、IL－2的分泌和IL－2R的表达，其中1000nmol/L的NTI抑制效果较显著（P＜0．05）。Nor-BNI和NAL自身对照组对各指标均无显著影响。结论 创伤失血性休克后外周β－EP的可能主要通过与δ、κ受体结合发挥免疫抑制作用，未观察到与μ受体有关。     

白介素—10基因疗法延长异体皮肤移植存活期及其机理初探

目的：探讨成纤维细胞介导的IL－10基因疗法对异体皮肤移植存活期的影响与可能的机理。方法：小鼠腹腔内埋植高分泌IL－10的成纤维细胞，并移植异体鼠皮肤，观察排斥时间，测定受体鼠的淋巴细胞增殖反应、IFN－γ、IL－2、NK活性。结果：成纤维细胞介导的IL－10基因疗法显著延长异体皮肤移植的存活期，并降低小鼠淋巴细胞的增殖反应，减少IFN－γ、IL－2的产生及降低NK活性。结论：IL－10基因疗法可延长小鼠异体皮肤移植存活期，其机理与抑制机体的免疫效应因子有关。     

GC-PCI-MS/MS and LC-ESI-MS/MS databases for the detection of 104 psychotropic compounds (synthetic cannabinoids,synthetic cathinones,phenethylamine derivatives)

Designer psychotropic compounds continue to be a major problem in Japan and all around the world. Electron impact mass spectrometry (GC-EI-MS) and liquid chromatography with electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) data on these compounds have been widely reported. In this report, we present a detection method that has been rarely utilized to analyze these types of compounds, gas chromatography with positive chemical ionization and tandem mass spectrometry (GC-PCI-MS/MS). We report on the development of GC-PCI-MS/MS and LC-ESI-MS/MS databases of 104 psychotropic compounds, including 32 cannabinoid derivatives, 29 cathinone derivatives, 34 phenethylamine derivatives, and several other designer compounds. Using this database, we were able to detect 5 psychotropic compounds in an actual forensic autopsy case. If GC-PCI-MS/MS is used together with the more established methods of GC-EI-MS and LC-ESI-MS/MS, we believe the forensic toxicology community could be better prepared to deal with the challenges of these ever-changing compounds.     

电喷雾质谱技术在手性识别中的应用

本文综述了近年来电喷雾等软电离质谱技术用于手性识别的研究进展。其研究方法主要分为对映体标记法、离子—分子反应法以及动力学方法等3类。通过综述对质谱技术用于手性识别的不足之处以及未来主要发展趋势进行了讨论。     

Positive and negative ion mass spectrometry of antiepileptic hydantoins and their analogs

Summary Positive ion electron impact (PIEI), positive ion chemical ionization (PICI), and negative ion chemical ionization (NICI) mass spectra of seven compounds of hydantoins and their analogs are presented; their probable fragmentation modes are also presented. In the PIEI mode, intensities of molecular ions differed according to different compounds. Cleavage at outsides of both carbonyl groups was commonly observed for all compounds. In the PICI mode, all compounds showed [M+1]⁺ quasi-molecular ions constituting the base peaks. In the NICI mode, [M–1]^– quasi-molecular anions were the base peaks except for trimethadione and paramethadione. All negative spectra showed anions at m/z 42 due to [NCO]^–; these peaks seem useful for screening of antiepileptics. An extraction procedure for the antiepileptics from human urine or plasma, and their separation by gas chromatography (GC), are also presented to serve for their actual identification by GC/mass spectrometry.     

Positive and negative ion mass spectrometry of benzophenones,the acid-hydrolysis products of benzodiazepines

Summary Positive electron impact (EI), positive chemical ionization (CI), and negative CI mass spectra of 14 benzophenones are presented. In the positive EI mode, intense molecular peaks appeared for most compounds; some other peaks due to splitting at both sides of the carbonyl group also appeared. In the positive CI mode, [M+1]⁺ quasi-molecular ions together with [M+C₂H₅]⁺ peaks were observed for all compounds; some fragment peaks were common to those in the positive EI mode. In the negative CI mode, the spectra were much simpler than those in the positive EI or CI mode. In the 1 Torr negative CI mode, some spectra showed only single molecular anions; in the 0.01 Torr negative CI mode, halogen or nitro peaks appeared in addition to the molecular anions. An extraction procedure for benzophenones from human urine and plasma after heating in strong acid, and their separation by gas chromatography (GC) are also presented to serve for their actual identification by GC/mass spectrometry.     

血清蛋白质指纹谱对结直肠癌根治术后复发转移的诊断价值

目的应用血清蛋白质指纹谱筛选与结直肠癌根治术后复发转移相关的特异性蛋白标志物。方法收集结直肠癌根治术后经至少2年随访、明确有复发转移的141例患者手术前后的血清标本,以及无复发转移的109例患者手术前后的血清标本,应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测所有患者的血清蛋白质指纹谱,并采用化学发光法测定血清CEA含量。筛选出与术后复发转移相关的血清标志蛋白,应用ROC曲线评价其对结直肠癌根治术后复发转移的诊断效能并与CEA进行比较。结果分析显示,在根治术后出现复发转移的结直肠癌患者中,M/Z为7763的血清蛋白不仅在术前表达增高,在明确有复发转移时仍呈显著高表达。该蛋白预测复发转移的灵敏度为92.0%,特异度为83.9%,约登指数指数为0.759,而CEA预测复发转移的灵敏度为52.0%,特异度为82.3%,Youden指数0.343。结论M/Z为7763的血清蛋白可能是结直肠癌根治术后复发转移的特异性标志蛋白,有望用于术后复发转移的监测。     

生物质谱技术应用及进展

生物质谱因其高灵敏度、高准确度、快速、易于自动化等特点,在生命科学领域的应用和研究日益广泛。该文这了近年来生物质谱在蛋白质、核酸、糖类、药物代谢以及微生物检验等方面的应用及进展。     

生物组织的基质辅助激光解吸电离质谱成像新进展

基质辅助激光解吸电离质谱成像技术分析组织切片已成为临床质谱学的一个新领域。该技术通过研究生物组织产生的“二维离子密度图像”，可以快速评估完整组织中蛋白质、药物及其代谢产物的空间分布。利用质谱成像技术研究阿尔茨海默病、神经胶质瘤、肺癌和前列腺癌等组织取得一定进展，本文对质谱成像原理、方法学及相关应用进行了综述。     

应用SELDI-TOF-MS技术初步建立结直肠癌区域淋巴转移分类树模型

目的寻找血清中与结直肠癌淋巴结转移相关的特异性生物标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测结直肠癌患者血清的蛋白质谱,利用配套软件进行蛋白质峰值鉴定、聚类并建立分类树模型。70例伴区域淋巴结转移的结直肠癌患者和75例年龄、性别匹配,无区域淋巴结转移的结直肠癌患者作为训练组,通过软件分析得到分类树模型,以35例伴区域淋巴结转移的结直肠癌患者和30例年龄、性别匹配,无区域淋巴结转移的结直肠癌患者作为测试组进行独立样本的双盲验证。结果共识别出46种组间差异蛋白,其中由质荷比(M/Z)为3104、3781、5867、7970、9290五种蛋白构成的分类树模型可以有效鉴别结直肠癌患者伴或不伴区域淋巴结转移,灵敏度和特异度分别为94.3%(66/70)和100.0%(75/75),经双盲验证其灵敏度、特异度、阳性预测值分别为91.4%(32/35)、96.7%(29/30)、97.0%(32/33)。结论所建立的分类树模型可以准确鉴别结直肠癌患者伴或不伴区域淋巴结转移,对结直肠癌的术前筛查有重要价值。     

大鼠血浆中活性寡肽RX 31的HPLC-MS/MS定量分析方法研究

目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定大鼠血浆中活性寡肽RX31的浓度。方法血浆样品经甲醇蛋白沉淀后,以0.1%甲酸-甲醇为流动相梯度洗脱,CapcellMGⅢCl8柱分离。采用电喷雾电离源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z640.3→m/z623.3（RX31）和m/z596.1→m/z287.1（内标,RX20）。结果在本实验条件下,血浆中RX31的线性范围为3.91～500ng/ml,定量下限为3.91ng/ml,日内、日间精密度（相对标准差,RSD）均小于12%,准确度（相对误差,RE）在-11%～5%。结论该法快速、灵敏、准确,可用于RX31的药代动力学研究。     

胃癌血清蛋白质谱的差异性研究

目的对比胃癌患者手术前后与正常人血清蛋白质谱的差异,筛选出诊断胃癌的特异性蛋白标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术和CM10蛋白质芯片,对22例胃癌患者和18名正常人的血清蛋白质谱进行检测。结果通过对胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析,发现由5个蛋白质峰组成的生物标记物可将胃癌术前患者与正常人准确分组。结论建立胃癌的血清蛋白质谱,为胃癌蛋白质组学研究奠定一定的基础．建立了以8961．2404M／Z、3947．264M／Z、5919．7541M／Z、4103．348M／Z、8711．0363M/Z5个蛋白质峰组成的生物标记物检测胃癌。