益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。     

不同浓度益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及VEGF表达的影响

目的探讨不同浓度益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活力及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法将8只SD大鼠随机分为空白对照组4只、益气活血方组4只,纯化培养BMSCs,采集空白对照组(灌胃蒸馏水)、益气活血方组(灌胃益气活血方)大鼠血清;将BMSCs分为空白血清对照组、5%、10%、20%益气活血方血清组,分别以含10%空白血清及含5%、10%、20%益气活血方血清培养液干预培养BMSCs。MTT法检测BMSCs增殖活力,ELISA法检测培养BMSCs上清液VEGF水平。结果第2天、第4天、第6天,10%益气活血方血清组BMSCs去基线增殖率较5%益气活血方血清组与20%益气活血方血清组明显增加(P0.05或P0.01);第2天、第4天组间BMSCs上清VEGF水平比较,10%益气活血方血清组明显高于空白血清对照组、5%益气活血方血清组、20%益气活血方血清组(P0.01)。结论 10%益气活血方含药血清可明显提高BMSCs增殖能力,促进VEGF表达。     

中药对骨髓间充质干细胞增殖与分化影响的研究进展

通过分析国内外相关文献证明，中药可直接作用于体内的骨髓间质干细胞，可促进其增殖、分化，也可促进其存活与功能的建立。     

针刺穴位与筋膜对骨髓间充质干细胞定向分化的体外机制研究

目的：探讨针刺穴位与筋膜在治疗肝纤维化中的体外机制。方法：大鼠分为正常对照组、肝纤维化模型12周组、肝纤维化模型20周组、针刺穴位组和针刺筋膜组。采用HE染色和Mallory染色,光镜下观察各组大鼠肝脏石蜡切片标本,制备各组血清并检测血清中的血清甘油三酯（TG）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）,验证模型是否造模成功,针刺穴位组和针刺筋膜组是否有效,同时制备各组大鼠血清,对大鼠骨髓间充质干细胞进行干预,以肝细胞标志物白蛋白作为检测指标,采用免疫组化、ELISA法和免疫印迹法检测各组血清对大鼠骨髓间充质干细胞分化增殖是否具有影响。结果：HE染色和Mallory染色及血清学指标显示,造模12周后,大鼠肝脏出现了明显的纤维化和肝细胞的脂肪变,模型组血清中TG、HA、LN、PC-Ⅲ浓度明显高于其他各组。造模20周后,大鼠肝脏出现一定程度自愈,但效果明显差于两个治疗组。免疫组化法、ELISA法和免疫印迹法显示正常对照组血清干预的大鼠骨髓间充质干细胞无白蛋白表达,20周模型组、针刺穴位组和针刺筋膜组干预的大鼠骨髓间充质干细胞均有白蛋白表达。结论：正常对照组血清不能诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化;而20周模型组、针刺穴位组和针刺筋膜组大鼠血清可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化;这提示损伤及治疗均可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化。     

一贯煎促进骨髓间充质干细胞逆转肝纤维化的实验研究

目的：该研究观察骨髓间充质干细胞对肝纤维化的逆转作用,了解一贯煎对该过程的作用,阐释一贯煎逆转肝纤维化的机制。方法60只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组、一贯煎加骨髓间充质干细胞组,每组12只。除正常对照组外,均建立肝纤维化恢复模型,分离、培养和标记骨髓间充质干细胞,在CCl4停止注射后3天,骨髓间充质干细胞组每只动物经尾静脉注射5×10^6 mmol/L浓度1 mol骨髓间充质干细胞;一贯煎加骨髓间充质干细胞组每只大鼠尾静脉注射等量的骨髓间充质干细胞外,给予一贯煎浓缩液2 ml/200 g灌胃,每天1次。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0．25 mg/kg,每天1次。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。阳性对照组、正常对照组和模型组经尾静脉注射等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度（G）和纤维化程度（S）;荧光显微镜下示踪肝组织中骨髓间充质干细胞。结果（1）骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组较模型组和阳性组在改善肝功能、减轻炎症、逆转肝纤维化的作用较好,P〈0．05。一贯煎加骨髓间充质干细胞组较骨髓间充质干细胞组在改善肝功能、逆转纤维化的作用更明显,P〈0．05。（2）骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组骨髓间充质干细胞在肝脏分布面积较模型组增大,P〈0．05;一贯煎加骨髓间充质干细胞组较其他组差异显著,P〈0．05。结论骨髓间充质干细胞具有逆转肝纤维化的作用,一贯煎对该过程具有促进作用;一贯煎能够促进骨髓间充质干细胞募集到肝脏,从而发挥逆转肝纤维化的作用。     

含药血清对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

方法：对大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）体外培养、纯化，运用CD34、CD44、c—Kit进行免疫细胞化学法鉴定，并测定生长曲线，观察含药血清（木豆叶）对离体骨髓间充质干细胞（MSC）生长作用的影响。结果：所培养的细胞在表型表达和细胞形态上初步具备MSC特征，木豆叶血清组增长速度比空白对照组明显加快，并与剂量呈正比；证明含药血清能促进干细胞在体外增殖。结论：木豆叶含药血清对MSC有促进生长作用。     

益气养肝通络方治疗慢性乙肝肝纤维化40例疗效观察

目的 观察益气养肝通络方治疗慢性乙肝肝纤雏化疗效.方法选择我院中医科肝病门诊慢性乙 肝后肝纤雏化患者80例,采用数字表分配法随机分为对照组和治疗组各40例,对照组采用拉米夫定片及人参鳖甲煎丸口服,治疗组采用益气养肝通络方加减治疗.观察2组治疗前后血清肝纤维化指标、症状变化、肝功能情况.结果 治疗组总有效率为85%,对照...     

接骨散含药血清对骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化影响

目的:研究接骨散含药血清对体外培养骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:采用高、中、低剂量灌服大鼠制得接骨散含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清;采用贴壁筛选法培养大鼠骨髓间充质干细胞,并以3种不同浓度的含药血清干预第二代rBMSCs。MTT法检测细胞增殖情况;于干预后的第3天、6天、9天和12天分别测定细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、钙盐沉积量以及钙化结节数,并比较各组间差异。结果:中剂量接骨散含药血清强烈刺激细胞增殖活性并显著促进骨髓间充质干细胞成骨性分化,表现在该组的ALP活性、CFU-FALP、钙盐沉积量和钙化结节数显著高于对照组(P<0.05)。结论:接骨散含药血清具有促进rBMSCs增殖和成骨性分化活性。     

低氧环境下黄芪注射液对人骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的探讨低氧环境下黄芪注射液对人骨髓间充质干细胞(h MSCs)体外增殖的影响。方法将体外培养的h MSCs分成常氧组和低氧组,分别用0、25、50、100、150、200、300、400、500、600、1 000μg/m L的黄芪注射液干预48 h,采用倒置相差显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖情况。结果低氧环境下,25、50、100、150、200μg/m L的黄芪注射液均可明显促进h MSCs的增殖(P<0.01),其中50μg/m L黄芪注射液的增殖效果最显著(P<0.01),达600μg/m L时产生抑制作用;常氧环境下,黄芪注射液以300μg/m L对h MSCs的促增殖作用最为明显(P<0.01),25、50、100、150、200、600、1 000μg/m L黄芪注射液均抑制h MSCs的增殖。结论黄芪注射液在一定质量浓度下可促进体外培养的h MSCs的增殖。低氧环境下,低质量浓度促进其增殖;常氧环境下,低质量浓度抑制其增殖。     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

补肾生血药对顺铂损伤的小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的：观察补肾生血药对顺铂损伤的骨髓间充质干细胞（BMSC）的影响,探讨补肾生血改善化疗后骨髓抑制的机制。方法：将50只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、补肾生血药组,每组25只,分别制备补肾生血血清和空白血清,原代培养BALB/c小鼠BMSC,随机分组,CCK-8法确定顺铂和补肾生血血清干预浓度。干预48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,酶联免疫吸附试验法检测培养液中造血调控因子含量。结果：干预48 h后,骨髓细胞凋亡率明显增高（P<0.01）,补肾生血血清组G1期细胞比例显著降低（P<0.05）,S期细胞比例显著增加（P<0.05）,增殖期细胞比例明显增加（P<0.05）。补肾生血血清组骨髓细胞凋亡率明显降低（P<0.001）,G1期细胞比例显著降低（P<0.05）,增殖期细胞比例显著增加（P<0.05）,IL-3含量明显升高（P<0.01）,TNF-α、TGF-β、IFN-γ含量显著降低（均P<0.05）。结论：补肾生血药能减轻顺铂造成的BMSC凋亡,促进细胞进入增殖期,促进造血生长因子分泌,减少造血抑制因子分泌,提示该药对化疗后骨髓抑制具有一定的改善作用。     

养心通脉有效部位方对大鼠骨髓间充质干细胞作用蛋白组学的生物信息学分析

目的：对养心通脉有效部位方（apr-YTF）应用于骨髓间充质干细胞（BMSCs）的作用蛋白组学蛋白进行生物信息学分析。方法：根据核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）蛋白组学技术确定的apr-YTF对BMSCs作用靶点的差异蛋白,通过DAVID数据库搜索软件结合GO数据库搜索,进行注释和富集度分析,KEGG数据库进行信号转导通路分析;VISANT数据库检索蛋白质相互作用。结果：差异蛋白主要参与102种生物学过程、35种细胞组分、6种分子途径,差异蛋白主要参与3条信号转导通路,这些蛋白在3条信号转导通路上相互发生作用。结论：处于差异蛋白功能交互网中交叉点位置的Presenilin-1、Presenilin-2通过Notch信号通路,Syntaxin-4蛋白通过可溶性N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白附着蛋白（SNARE）信号通路,丝裂原活化蛋白激酶12（MAPK12）通过MAPK信号通路在apr-YTF诱导BMSCs向心肌分化过程中发挥重要作用,养心通脉有效部位方对骨髓间充质干细胞的作用是在多位点、多环节、多种生物学进程中发挥作用的,蛋白质组学生物信息学技术可以站在“整体观”的角度对中医药的作用机制作出预测,结合分子生物学验证是一条很好的中医药现代化途径。     

养心通脉有效部位方对MSCs向心肌样细胞分化的影响

目的观察养心通脉有效部位方对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞的诱导作用。方法体外培养大鼠MSCs,设养心通脉有效部位方(YTF)组、5-氮胞苷(5-aza)阳性对照组和低糖DMEM组,体外诱导分化心肌样细胞;用免疫细胞化学方法观测其心肌肌丝蛋白(Desmin)、肌球蛋白重链(MHC)的表达,用RT-PCR的方法检测心肌转录因子GATA-4 mRNA的表达。结果大鼠MSCs体外向心肌样细胞分化诱导后,在DMEM组中未发现Desmin和MHC阳性细胞;而YTF组和5-aza组的Desmin及MHC免疫组化染色均可见阳性免疫复合物,与DMEM组比较,YTF组和5-aza组Desmin、MHC、GATA-4 mRNA表达的相对光密度(IOD)值均明显提高(P<0.01,P<0.05),而且YTF组Desmin、MHC的IOD也明显高于5-aza组(P<0.05),但YTF组GATA-4 mRNA的IOD值与5-aza组比较无统计学差异。结论 YTF在体外可诱导MSCs向心肌样细胞分化。     

左归丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度左归丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度左归丸干预组,采用MTT比色法观察不同浓度左归丸水提液干预后BMSCs增殖的情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态以长梭形为主,呈集落样生长。体外培养的BMSCs免疫组织化学鉴定显示CD44,CD29呈阳性表达,CD34呈阴性表达。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药质量浓度2.5～4 g·L-1的左归丸水提液干预24 h后,干预组吸光度均明显增高(P<0.01),而与其他浓度相比1 g·L-1时左归丸水提液促进BMSCs增殖的作用最强。结论:所培养的大鼠骨髓基质细胞在细胞表型表达和细胞形态上具备BMSC特征。左归丸水提液在一定浓度范围内可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

补肾活血方动员骨髓干细胞治疗急性心肌梗死的临床观察

目的:研究旨在初步观察补肾活血方对急性心肌梗死患者骨髓干细胞的动员作用。方法:急性心肌梗死患者40例随机分为补肾活血组和对照组,每组各20例。除常规治疗外,补肾活血组每日加服中药汤剂补肾活血方,每日1剂,连用2周。分别在治疗前和治疗后第3,5,7,14天,分别以流式细胞仪测定外周血中CD3+4细胞百分比及彩色多普勒超声诊断仪测定左室结构和功能,观察指标为左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(LVEDs)、左室射血分数(LVEF)。结果:(1)补肾活血组和对照组治疗后CD3+4细胞百分比均逐步升高,于第5天达到高峰,两组比较存在显著性差异(P0.01)。至治疗后第14天时,对照组测值已明显降低,而补肾活血组测值仍维持于较高水平(P0.05)。(2)经治疗28天后,补肾活血组LVEF增至(60.88±3.17)%,与治疗后7天时所测得的(51.75±5.63)%比较,呈明显改善(P0.01);与对照组相比较,LVEF改善明显(P0.05)。补肾活血组LVEDd及LVEDs则分别由治疗7天后时测值(62.31±5.60)mm与(41.87±4.92)mm降低至治疗28天后测值(52.51±2.32)mm与(33.56±3.66)mm,前后比较均有显著性差异(分别为P0.01与P0.05);而对照组LVEDd及LVEDs治疗后7天与治疗后28天比较未见显著性差异(P0.05)。结论:本研究初步证实了心梗后存在自发的骨髓干细胞动员现象。补肾活血方有可能通过动员骨髓造血干细胞,达到提高外周血骨髓干细胞水平的作用,从而能缩小梗死面积,对心肌梗死后心功能的恢复具保护作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定及复方扶芳藤合剂含药血清对细胞增殖的影响

目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分化,采用流式细胞仪检测其表面标志物,分析其细胞周期,进行BMSCs鉴定;采用不同浓度(20%、10%和5%)的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对大鼠BMSCs进行干预,以CCK-8法检测其吸光度值,对比各组细胞生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。BMSCs成脂、成骨诱导后,油红O染色和茜素红染色均呈阳性。第3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD44表达分别为99.645%、99.677%、0.016%、0.133%;不同浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续干预7 d后,CCK-8法检测显示:20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清组,其1～7 d的吸光度均值均高于20%浓度的空白血清组(P<0.05);10%的含药血清组的吸光度均值在3～7 d,高于10%的空白血清组(P<...     

股骨头坏死愈胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的保护作用

目的:观察股骨头坏死愈胶囊含药血清对体外大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的保护作用。方法:在体外分离、筛选、培养大鼠BMSCs细胞,制备0.36,0.72,1.44 g·kg-1灌胃处理得到的股骨头坏死愈胶囊含药血清作用后,选择第3代大鼠BMSCs,实验分为空白组(加入不含大鼠血清的培养液),正常组(加入体积分数为20%正常大鼠血清培养液),模型组(加入体积分数为20%正常大鼠血清培养液和全反式维甲酸诱导细胞凋亡)和中药血清低、中、高剂量组(培养过程中分别加入对应剂量、体积分数为20%的股骨头坏死愈胶囊含药血清培养液和全反式维甲酸诱导细胞凋亡),共6组,MTT法检测各组细胞相对存活率,流式细胞仪检测各组细胞周期,进行比较。结果:与正常组比较,模型组,中药血清低、中、高剂量组相对存活率下降,细胞周期中G1期比例上升,G2及S期比例下降,差异有显著性意义(P0.01)。与模型组比较,中药血清低、中、高剂量组相对存活率上升,G1期比例减少,G2及S期比例增加,且随着中药剂量增加而差值明显,差异有显著性意义(P0.01)。结论:股骨头坏死愈胶囊含药血清可提高大鼠BMSCs的存活率,对全反式维甲酸所致的细胞凋亡有保护作用。     

中药麦冬对骨髓间充质干细胞分化心肌样细胞的诱导作用研究

目的研究为证明浙麦冬可能具有MSCs诱导作用,且其补心阴作用与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,MSCs)转化率成正比。且阐明浙麦冬对MSCs的诱导作用和机制。方法(1)流式细胞仪鉴定大鼠骨髓MSCs的表面标记分子CD73,CD90,CD45,CD34,观察药物对SD大鼠MSCs诱导分化心肌样细胞形态结构的影响。(2)免疫荧光法检测浙麦冬对SD大鼠MSCs诱导分化心肌样细胞中CTnI和CX43蛋白表达情况。(3)qPCR法检测MSCs诱导分化心肌样细胞中NKx 2.5,GATA4和β-MHC mRNA表达情况。结果(1)与空白对照组比较,给药组的心肌样细胞中肌钙蛋白I(CTnI)和连接蛋白43(CX43)的表达量明显增加,而且呈现剂量依赖性和培养时间依赖性。(2)与空白对照组比较,给药组的心肌样细胞中NKx 2.5,GATA4和β-MHC mRNA相对表达量明显增加,而且呈现剂量依赖性和培养时间依赖性。(3)与空白对照组比较,给药组的MSCs中在1周左右存活的部分细胞体积逐渐增大,呈球状、棒状或长梭形;2周以后细胞间出现连接,排列方向渐趋一致。结论补心阴中药浙麦冬能诱导MSCs分化形成心肌样细胞,而且呈现剂量依赖性。     

黄芪多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的特性

目的观察黄芪多糖对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞、脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化特性的影响,为开发有效而又低毒的分化诱导剂提供依据。方法采用全骨髓贴壁筛选法分离、纯化无特定病原体级Wistar大鼠BMSCs。用噻唑蓝(MTT)法筛选出黄芪多糖的合适浓度,取F3代细胞,采用随机数字表法分为对照组和诱导组(神经诱导、成脂诱导、成骨诱导、软骨诱导),采用甲苯胺蓝染色、油红O染色、茜素红染色检测神经细胞、脂肪细胞、软骨细胞表面特异性标记物。用Western Blot技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脂蛋白酯酶(LPL)、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅱ。分析黄芪多糖对F3代BMSCs向神经、脂肪、软骨和骨的诱导分化作用。结果 MTT显示,在1 g/L黄芪多糖诱导48 h下细胞增殖明显,甲苯胺蓝染色阳性,而油红O、茜素红染色阴性。Western Blot法检测显示NSE为阳性表达,LPL、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅱ均为阴性表达。结论黄芪多糖可诱导大鼠BMSCs定向分化为神经细胞,而未向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化。